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具抑菌活性的血红蛋白片段研究进展
血红蛋白除在红细胞中表达外,也在其他多种细胞中表达.血红蛋白是一多功能蛋白,其中的抗菌功能受到学术界的高度重视.在生理状态下如女性月经期或病理状态下如子宫内膜或其他器官出血,血红蛋白及其片段有着重要和独特的生物学意义.
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Ⅰ型单纯疱疹病毒UL12基因在大肠杆菌BL21和Rosetta菌中的差异表达
目的 构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV -1)的UL12基因原核重组表达质粒pET32a - ULI2,比较重组表达质粒pET32a -UL12在E.coli BL21和E.coli Rosetta表达产量与生物学活性.方法 使用PCR的方法扩增出HSV -1的UL12基因,克隆至原核表达质粒pET32a(+),构建出重组质粒pET32a - UL12,分别转化E.coli BL21和E coli Rosetta菌.经SDS - PAGE鉴定分析目的蛋白的表达差异,并比较在两种菌中目的蛋白的活性.结果 重组质粒pET32a - UL12在E.coli BL21和E.coli Rosetta的包涵体中均表达出了碱性核酸酶融合蛋白,E.coli Rosetta中表达的碱性核酸酶融合蛋白表达量较大,而E.coliBL21中表达的碱性核酸酶活性更高.结论 成功构建了表达出了具有较高活性的HSV -1碱性核酸酶融合蛋白,为进一步研究抗HSV -1药物奠定了基础.
关键词: HSV -1碱性核酸酶 克隆 原核表达 生物学活性 -
小单孢菌FIM99468产生的弹性蛋白酶抑制剂Ⅰ.菌种分类、发酵、提取和生物学活性
在筛选弹性蛋白酶抑制剂过程中,从福建省永泰青云山土壤中分离到放线菌FIM99468,经分类鉴定为佛罗里达小单孢菌,定名为Micromonospora floridensis FIM99468.经发酵、提取,产生的次级代谢产物Fw99468能够抑制弹性蛋白酶,半数抑制浓度IC50为3.4×10-6mol/L.
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SIPI-96-886菌株活性代谢产物的研究
利用酵母筛选系统筛选免疫抑制剂得到了阳性菌株SIPI-96-886.从菌株SIPI-96-886代谢产物中分离出化合物SIPI-886-C2,并对这个化合物进行了结构分析,通过光谱分析鉴定了其结构.生物活性研究表明化合物SIPI-886-C2有免疫抑制活性和一定的抗真菌活性,还有抗肿瘤活性.
关键词: 免疫抑制剂 SIPI-886-C2 结构鉴别 生物学活性 -
米尔贝霉素的产生菌、理化性质、生物学活性及应用研究进展
米尔贝霉素(Milbemycins)是一系列在结构上非常类似的十六元环大环内酯类抗生素,可由几种链霉菌产生,具有强烈的杀虫和杀螨等生物学活性.自1967年发现首个米尔贝霉素类化合物以来,大量结构类似的其他化合物被报道.国际上已有多个米尔贝霉素类药品实现了商业化,被广泛地用作兽医药物或作物保护农药.主要综述了米尔贝霉素的产生菌,理化性质、生物学活性及应用.
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寡霉素的研究进展
寡霉素抗生素组合物是一类二十六元环大环内酯类抗生素,具有强烈的抗肿瘤、抗真菌、呼吸抑制作用及杀虫等生物学活性,被广泛应用于科学研究当中.本文对寡霉素的生物学活性、产生菌及生物合成的研究进展进行了综述.
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慢性支气管炎患者的白介素4的变化探讨
白细胞介素(白介素)是具有广泛生物学活性的小分子多肽.白介素4(1L-4)是肥大细胞的生长因子.为了探讨其在慢性支气管炎(慢支炎)急性期、缓解期中的变化意义而进行以下研究.
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小剂量阿糖胞苷与重组人白血病抑制因子联合诱导HL-60细胞凋亡的作用
白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一类具有广泛生物学活性的细胞因子,对胚胎发育、神经细胞再生、关节软骨代谢、肿瘤细胞增殖等方面均有影响[1-3].阿糖胞苷(Cytosinearabinoside,Ara-c)是治疗白血病的重要药物.有研究认为,化疗药物是否能够有效地诱导白血病细胞凋亡是判断急性髓系白血病(AML)患者化疗敏感性的重要指标[4].资料显示,小剂量Ara-c及rh-LIF单用均可诱导细胞凋亡[5,6].近,小剂量Ara-c与其它药物联合治疗白血病获得较好疗效[7,8].本文报道rh-LIF和Ara-c联合诱导HL-60凋亡的作用.
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食管鳞癌上皮细胞间质转化对NK细胞活化及其生物学作用的研究
目的 探讨食管鳞癌上皮细胞间质化(EMT)对自然杀伤(NK)细胞生物学活性的影响.方法 通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞;根据共培养不同的条件培养基分为RPMI 1640正常培养基刺激-NK组(NC组)、EC9706细胞上清液刺激-NK组(EC9706组)与KYSE150细胞上清液刺激-NK组(KYSE150组),将不同的条件培养基加入NK细胞共培养72 h,流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达.10 ng/mL转化生长因子-β(TGF-β)处理KYSE150细胞株7d诱导EMT化后,收集KYSE150 EMT和KYSE150上清液,分别与NK细胞共培养,72 h后以流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达、CD107a脱颗粒能力、靶细胞K562杀伤效应、NK细胞增殖及凋亡.结果 6株细胞系中筛选出2株EMT化和4株非EMT化的食管鳞癌细胞株,从中各选出一株(EC9706和KYSE150)用于后续实验;NK细胞负性筛选达到90%以上的纯度,T细胞<1%.不同的食管鳞癌细胞上清液刺激后,3组NK细胞表面活化型、抑制型受体,效应分子结果显示:与NC组和KYSE150组比较,EC9706组活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,颗粒酶释放均降低(P<0.05);抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加(P<0.05);NKP46、CD226、CD16表达和穿孔素释放在3组间差异无统计学意义.与KYSE150上清刺激比较,KYSE150 EMT上清刺激后,NK细胞活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,穿孔素释放均降低;CD107a脱颗粒作用、靶细胞K562杀伤效应均减弱,NK细胞Ki67增殖指数下降(P<0.05);抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加(P<0.05);NKP46、CD226、CD16表达,颗粒酶释放及NK细胞凋亡在两组间差异无统计学意义.结论 食管鳞癌细胞EMT化可能通过抑制NK细胞活化、减少NK细胞杀伤效应分子的分泌来降低NK细胞杀伤效应,从机体免疫监视中逃逸.
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小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化
目的 构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定.方法 将优化后的小鼠IL-4 cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a (+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体.经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白.对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性.结果 经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功.诱导得到的包涵体用3 mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7 mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性.纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移.结论 成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件.
关键词: 重组小鼠白细胞介素-4 蛋白纯化 生物学活性 -
齐墩果酸的药理作用机制及其在龋病治疗中的研究进展
1 概述齐墩果酸(oleanolic acid,OA)别名士当归酸,是广泛存在于各种食物、药用草本植物等植物中的一种五环三萜类化合物,能够从1620多种植物分离出来[1-3],主要存在于夏枯草、女贞、油橄榄、连翘、木瓜等植物中[4].其大部分以游离酸或糖苷的形式存在,分子式为C30H48O3,结构式见图1[5].作为一种天然药物,OA的毒性很低并且具有多种生物学活性,如抗病毒、消炎、抗氧化、增强免疫和抑制免疫(免疫双向调解作用)、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、护肾、抗艾滋病毒等,是治疗急性黄胆型肝炎和慢性病毒性肝炎较为理想的药物.
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TGF-β引发的上皮间质转化与肿瘤侵袭转移的关系
近年来研究发现,上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition、EMT)是肿瘤浸润、转移的重要机制.转化生长因子-9茁(TGF-9茁)是一种具有多功能生物学活性的细胞因子,已有研究发现TGF-9茁在诱发EMT中起关键作用.
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Apigenin对肿瘤的抑制作用及其机制研究进展
Apigenin是一种黄酮类化合物,广泛存在于蔬菜、水果、花生、大豆、茶叶和葡萄酒等日常饮食中,其化学名为4',5,7-三羟基黄酮,属黄酮类化合物.近几年的实验研究发现,Apigenin不仅具有抗炎、抗氧化、抗变态反应等多种生物学活性和药理作用,而且还可以抑制多种肿瘤的发生与发展.
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TGF-β在青光眼滤过性手术后滤泡瘢痕化中的作用
1 TGF-β的概念及生物学特性1.1概念及种类TGF-β(转化生长因子-β)是一个具有多种功能的多肽类生长因子超家族,TGF-β属活化素、抑制素和骨形态发生蛋白等结构相关的多肽类族.目前发现TGF-β家族有5种亚型,在哺乳动物体内有三种亚型,即TGF-β1~3.TGF-β4存在于小鸡软骨细胞,TGF-β5是从蛙卵的cDNA文库中克隆而来.具有生物学活性的TGF-β是由含390-412氨基酸残基的非活性前体经酶解产生.TGF-β基因家族共编码4种蛋白,即TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3和TGF-β5.哺乳动物的TGF-β1和TGF-β4是异体同构体[1].在人体中只存在TGF-β1、2、3三种亚型,分布于全身,三种亚型功能相似,作用效果呈剂量依赖性.
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西妥昔单抗等联合治疗结直肠癌患者的护理
结直肠癌是常见的恶性肿瘤,手术是其主要治疗手段,但术后复发转移率50%左右[1],治疗上常用弗尿嘧啶(5-FU)/亚叶酸钙(CF)或奥沙利铂等进行化疗.西妥昔单抗联合伊立替康、CF、5-FU为治疗晚期结直肠癌较新的方案,其目的在于大限度抑制细胞增殖并诱导其凋亡,降低肿瘤细胞的生物学活性,提高患者的生存率和生活质量.
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HSP65-MUC1融合蛋白中试生产工艺的优化及生物学活性检测方法的鉴定
目的 优化HSP65-MUC1融合蛋白的中试生产工艺,并建立稳定的生物学活性检测方法.方法 通过发酵技术获得大量表达HSP65-MUC1的大肠杆菌,高压均质机破菌获得上清液,经不同浓度的饱和硫酸铵、疏水层析、离子交换层析三步纯化后,以期获得高纯度、高质量的融合蛋白HSP65-MUC 1;利用流式细胞仪检测HSP65-MUC1作用后,人外周血来源的树突状细胞(DC)表达CD86分子的能力.结果 含有pET28a-HSP65-MUC1重组质粒的大肠杆菌BL21 (DE3)能有效表达目的蛋白,10 g发酵菌体经饱和硫酸铵沉淀、phenyl sepharose FF层析柱和Q FF离子交换层析柱纯化后,可获得413.7 mg、纯度高达96%的目的蛋白;同时与阴性对照相比(10.13%±0.89%),纯化的HSP65-MUC1能显著提高DC细胞表面CD86分子的表达(29.98%±1.02%).结论 HSP65-MUC1的中试生产工艺得到了有效的优化,同时鉴定了其生物学活性,从而为临床研究提供基础.
关键词: HSP65-MUC1 中试生产工艺 生物学活性 方法 -
胶质细胞源性神经营养因子在炎症性肠病中的作用
胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)是近年来才被发现且被证明有多种生物学活性的一种神经营养因子,作为治疗神经系统疾病的药物,在治疗帕金森病(PD)和肌萎缩侧索硬化症(ALS)等疾病取得了可喜的成果,但其作用并不仅限于此.研究发现GDNF在炎症性肠病(IBD)中具有维持肠粘膜完整性,抗肠上皮细胞凋亡,促肠上皮细胞增生的功能,可能在炎症性肠病的发生发展中起重要作用.虽然目前大多限于基础研究,但已经取得了一定的成果,可以预见GDNF将会有很好的临床应用前景,可能为炎症性肠病的临床治疗提供新的治疗思路.对此,本文作一简要综述.
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瘦素与呼吸系统的关系
leptin是肥胖基因(ob基因)的表达产物,由脂肪细胞产生的一种由167个氨基酸组成的蛋白质,leptin具有广泛的生物学活性,并与许多呼吸道疾病密切相关.本文就近年来有关leptin与呼吸系统的研究作一综述.
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蛇毒类凝血酶生物学活性的研究
类凝血酶(TLE)属于胰蛋白酶家族中的丝氨酸蛋白酶,具有精氨酸酯酶活性,能够直接作用于纤维蛋白原(fibrinogen,FIB),水解释放血纤肽A(fibrinopeptide A,FPA)或B(FPB),导致纤维蛋白的单体首尾聚合而凝固,所以被称为类凝血酶.具有抗凝、促纤溶、抗血小板聚集、保护内皮细胞、减轻脑水肿、改善血流变、保护缺血再灌注神经组织、止血等生物学活性,笔者综述其生物学活性.
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钙网蛋白片段cDNA克隆、蛋白表达及免疫学活性研究
目的:研究钙网蛋白(CRT)发挥免疫生物学活性的主要功能区域.方法:采用PCR法从CRT基因cDNA全长中扩增第150-230位编码氨基酸所对应的核苷酸序列片段,利用分子生物学方法构建原核重组表达质粒,采用大肠杆菌表达系统进行原核表达;通过亲和纯化得到目的蛋白,分析目的蛋白特性;并通过体内、体外实验对蛋白的免疫学活性进行分析.结果:成功构建了表达CRT150-230片段(rCRT/150-230)的原核表达质粒,并从细菌裂解液上清中纯化得到目的蛋白,蛋白单体通过分子间二硫键形成二聚体,天然状态下形成多聚体;体外研究表明rCRT/150-230促进小鼠脾细胞的分裂,活化巨噬细胞产生一氧化氮(N0),诱导人外周血单个核细胞产生TNF-α;体内研究表明,rCRT/150-230刺激小鼠产生高滴度抗体,该特异性抗体能识别rCRT/150-230与rCRT.结论:rCRT/150-230蛋白具有与rCRT相似的免疫活性,因此推测该蛋白片段是全长CRT发挥免疫学活性的区域.