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血清支链和芳香族氨基酸同位素稀释质谱检测法的建立和应用研究
目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)同时测定血清五种支链和芳香族氨基酸(即缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸)的方法,分析其与糖尿病及心血管病危险因素的关系.方法 采用同位素标记被测物作内标,沉淀蛋白后LC/MS/MS分离检测,标准曲线定量;对不同水平血清样本进行五次重复分析,每次每种血清重复分析3份,以考察方法的精密度;测定血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率.收集2010年10～12月111例健康志愿者空腹静脉血,离心分离血清,测定血清支链和芳香族氨基酸及传统危险因素指标水平,进行相关性分析.结果 五种氨基酸在该试验条件下分离良好,分析时间约4 min;测定不同血清水平的批内变异系数(CV)为1.56%(1.07%～2.02%),总CV为2.03%(1.14%～3.01%);多次试验的加样回收率范围为98.34%～103.25%.测定111例健康人血清支链和芳香族氨基酸水平与体重指数、空腹血糖、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇酯化速率、肌酐、尿酸、载脂蛋白CII和CIII以及超敏C反应蛋白显著正相关(t=0.000 02～0.046,P值均<0.05);与高密度脂蛋白胆固醇显著负相关(t=0.000 5～0.048,P值均<0.05).结论 该研究建立了简便精密的ID-LC/MS/MS测定血清支链和芳香族氨基酸的方法,有望在糖尿病和心血管病危险分析中发挥作用.
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慢性充血性心力衰竭患者血浆BCAAs水平的临床研究
目的:探讨研究慢性充血性心力衰竭(CHF)患者血浆支链氨基酸(BCAAs)水平的变化,及其与氨基末端脑钠尿肽前体(NT-pro-BNP)和左室射血分数(LVEF)的相关性.方法:共纳入168例诊断为CHF患者作为病例组,同时随机选择同期体检的41例健康成年人作为对照组.采用ELISA方法测定空腹血浆BCAAs水平、NT-pro-BNP,超声心动图检测LVEF值.比较两组血浆BCAAs水平及其与NT-pro-BNP、LVEF的关系.结果:两组受试者基线资料无明显差异;CHF患者血浆BCAA水平、LVEF均低于对照组,血浆NT-pro-BNP高于对照组(P＜0.01);随着NYHA分级增加,NT-pro-BNP逐渐升高,LVEF逐渐降低(P＜0.01),而BCAAs水平无明显变化;Spearson偏相关分析显示经性别、年龄、收缩压、舒张压、体质量指数校正后,CHF组BCAAs水平与NT-pro-BNP呈负相关(r=-0.168,P＜0.05),而与LVEF无关(r=0.069,P＞0.05).结论:CHF患者血浆BCAAs水平明显低于正常对照组,与NT-pro-BNP水平呈负相关.
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支链氨基酸促进高脂诱导的小鼠肝脏胰岛素抵抗
目的 探讨支链氨基酸(Branched chain amino acids,BCAA)对高脂诱导胰岛素抵抗的影响.方法 将60只野生C57BL/6J小鼠随机分成4组,分别给予正常饮食+普通饮水(ND)组,正常饮食+含50 g/L BCAA饮水(ND/BCAA)组,高脂饮食(HD)组,高脂饮食+含50 g/L BCAA饮水(HD/BCAA)组,喂养18周,仔细观察小鼠生活状态并每周记录小鼠体质量,18周后进行葡萄糖耐量(IPGTT)和胰岛素耐量(ITT)实验,检测小鼠血清BCAA和胰岛素水平,Western blot检测小鼠肝脏胰岛素信号通路关键分子IRS1及其磷酸化水平[p-IRS1(ser307)]、AKT及其磷酸化水平[p-AKT(ser473)].结果 ①BCAA抑制高脂诱导的小鼠体质量增加,表现为HD/BCAA组小鼠体质量增长比HD组缓慢(P＜0.05,P＜0.01);ND/BCAA组和ND组体质量增长无明显差异;②与ND组相比,ND/BCAA组小鼠血清BCAA浓度无明显升高,HD组血清BCAA水平升高(P＜0.05);与HD组相比,HD/BCAA组血清BCAA浓度进一步升高(P＜0.05);③与ND组相比,ND/BCAA组小鼠血清胰岛素、IPGTT和ITT均无明显改变;与HD组相比,HD/BCAA组血清胰岛素水平更高,IPGTT和ITT均明显受损(P＜0.05);④Western blot检测显示:ND组和ND/BCAA组小鼠肝脏p-IRS1(ser307)和p-AKT(ser473)水平无明显改变;与ND组相比,HD组小鼠p-IRS1(ser307)上调(P＜0.05),IRS1、p-AKT(ser473)均下调(P ＜0.05,P＜0.01);与HD组相比,HD/BCAA组小鼠肝脏p-IRS1(ser307)进一步上调(P＜0.05),p-AKT(ser473)水平进一步下调(P＜0.01).结论 正常饮食单纯补充BCAA不影响小鼠肝脏胰岛素敏感性,BCAA能够促进高脂诱导的小鼠肝脏胰岛素抵抗.
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脂联素通过AMPK调节HepG2细胞中支链氨基酸的代谢
目的:探讨脂联素(APN)对HepG2细胞支链氨基酸(BCAA)分解代谢的影响及其作用机制.方法:将培养的HepG2细胞系随机分为对照组、APN组、APN+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C,CpC)组(APN+ CpC)组和AMPK激动剂(AICAR)组.用Western blot检测AMPK、P-AMPK、BCKD E1α(BCAA分解代谢过程中的关键酶,磷酸化时为失活状态)及P-BCKD E1α蛋白的表达,用ELISA方法检测培养HepG2细胞上清中BCAA的含量.结果:与对照组相比,APN组和AICAR组均可以显著上调细胞P-AMPK的水平(P＜0.05,P＜0.01),显著降低细胞p-BCKD E1α及上清中BCAA的水平(P ＜0.05,P＜0.01).与APN组比较,APN+ CpC组,其细胞内PAMPK水平显著下降(P＜0.01),P-BCKD E1α及上清中BCAA的水平明显上升(分别为P＜0.05及P＜0.01).结论:APN可显著促进HepG2细胞BCAA的分解代谢,其作用机制与AMPK磷酸化作用的上调相关.
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富含支链氨基酸和谷氨酰胺的营养配方对贲门癌术后早期机体免疫功能的影响
目的:探讨富含支链氨基酸和谷氨酰胺的肠外营养(PN)配方对贲门癌患者术后机体免疫功能的影响.方法:选择贲门癌行根治性全胃/近端胃切除术患者54例,随机分成两组,两组患者均从术后第1日分别接受等热量、等氮量的常规PN(对照组)和富含支链氨基酸和谷氨酰胺的PN(研究组)支持治疗,并于术晨、术后第1、8天测定血液C3、IgA、IgM、IgG、TNF-α、IL-6水平和CD33+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞百分率,并检测红细胞免疫功能.结果:术后8 d后研究组血清补体C3、IgA、IgG、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞的恢复程度与对照组差异有显著性.红细胞C3b受体花环率(RCR)和肿瘤红细胞花环率(TRR)研究组患者的红细胞免疫功能高于对照组,差异有统计学意义.而两组间血清TNF-α、IL-6水平并无明显差异.结论:与常规PN对比,富含支链氨基酸和谷氨酰胺的强化PN能改善贲门癌患者术后免疫功能.
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丙酸血症的临床和颅脑 MRI 表现
丙酸血症(propionic acidemia,PA)是支链氨基酸和偶数链脂肪酸代谢异常的一种较常见的有机酸血症,属常染色体隐性遗传病,由丙酰辅酶 A 羧化酶活性缺乏,导致体内丙酸及其代谢产物前体异常蓄积,而出现一系列生化异常、神经系统和其他脏器损害症状[1-3]。本病的发病率低,据报道,德国为1︰277000,意大利为1︰165000[3]。近年来,随着串联质谱和气相色谱、质谱技术的应用及普及,国内外对该病临床方面的报道越来越多,而影像学方面的研究仍旧比较欠缺,本研究意在通过总结4例临床确诊的患儿临床表现,着重对颅脑 MRI表现及1例治疗后 MRI 随访资料进行回顾性分析研究,总结PA 的影像学特点,为临床治疗及预后判断提供更多有效信息。1 资料与方法
丙酸血症(propionic acidemia,PA)是支链氨基酸和偶数链脂肪酸代谢异常的一种较常见的有机酸血症,属常染色体隐性遗传病,由丙酰辅酶 A 羧化酶活性缺乏,导致体内丙酸及其代谢产物前体异常蓄积,而出现一系列生化异常、神经系统和其他脏器损害症状[1-3]。本病的发病率低,据报道,德国为1︰277000,意大利为1︰165000[3]。近年来,随着串联质谱和气相色谱、质谱技术的应用及普及,国内外对该病临床方面的报道越来越多,而影像学方面的研究仍旧比较欠缺,本研究意在通过总结4例临床确诊的患儿临床表现,着重对颅脑 MRI表现及1例治疗后 MRI 随访资料进行回顾性分析研究,总结PA 的影像学特点,为临床治疗及预后判断提供更多有效信息。 -
血浆支链氨基酸水平对慢性心力衰竭患者预后的影响
目的 探讨不同血浆支链氨基酸(BCAAs)水平对慢性心力衰竭(CHF)患者预后的影响.方法 168例CHF患者初次入院后测定血浆BCAAs水平,并行超声心动图及组织多普勒检查.根据血浆BCAAs水平分为高BCAAs组(BCAAs＞ 366μmol/L,n=126)和低BCAAs组(BCAAs≤366μmol/L,n=42).对两组患者的一般临床资料、心脏超声指标及2年内心血管事件发生率进行比分析;再按随访2年内是否发生心血管事件分为事件组和非事件组,对相关数据进行统计学分析.结果 低BCAAs组和高BCAAs组在左心室射血分数(LVEF)存在显著差异[(40.23±6.96)％和(45.96±7.05)％(P＜0.01)].低BCAAs组和高BCAAs组在总心血管事件发生率[57.14％和22.22％(P＜0.01)]和心源性病死率存在显著差异[16.67％和7.14％(P＜0.01)].非事件组和事件组的BCAAs水平存在显著差异[(497.45±117.56) μmol/L和(405.78±102.54) μmol/L(P ＜0.01)].事件组BCAAs水平与组织多普勒心肌做功指数(TDI-Tei)呈负相关(r=-0.421,P＜0.001),与LVEF呈正相关(r=0.281,P＜0.001).多因素logistic回归分析显示NT-pro-BNP、Hs-CRP、LVEF、TDI-Tei、BCAAs、β受体阻滞剂的应用是心血管事件发生的独立影响因素.Kaplan-Meier生存分析显示高BCAAs组心血管事件发生率曲线显著低于低BCAAs组(Log-rank检验;x2=12.39,P＜0.001).结论 血浆BCAAs水平是CHF患者的独立影响因素,能有效预测CHF患者的临床预后.
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胆系感染的中西医结合治疗
1 急性胆囊炎、胆管炎对于急性胆囊炎、胆管炎的治疗,除坏疽性胆囊炎,严重化脓性胆管炎外,一般不考虑紧急手术.大多数病例经内科治疗后情况可改善,内科保守治疗一般为卧床休息,禁食,静脉补液,保证热量供应及水、电解质平衡,并根据血培养及药敏结果选择抗生素.根据经验,由于胆道系统感染多为革兰氏阴性杆菌感染,敏在培养结果回报之前,常选用氨苄青霉素和氨基糖甙类抗生素联合应用,但目前由于耐药菌株的广泛增多,也可根据情况选用头孢菌素,尤其对于年老体虚,病情较重者,应考虑及时给予足量、敏感、有力的抗菌素治疗(如头孢噻肟钠2g,静脉点滴,每日2～3次或头孢曲松钠2g,静脉点滴,每日1～2次)以防病情进一步恶化.同时,由于胆道系统感染多混合有厌氧菌感染,所以一般常加用甲硝唑或替硝唑联合应用(如甲硝唑0.5g,静点,每日3次),近年来研究表明,大剂量维生素C既可中和内毒素,又可减少血液中氧自由基的产生,从而减轻细胞的损伤,因此在补液的同时可考虑给予维生素C静脉点滴(如维生素C3g人5%葡萄糖液500ml中静点).对于黄疽患者,可根据情况考虑静点葡醛内酯0.2g,每日1次及支链氨基酸250m1静点,每日1次.在病情缓解后,建议早期手术.
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支链氨基酸对创伤患者代谢及预后影响的Meta分析
目的 系统评价支链氨基酸对创伤患者代谢及预后的影响,为临床治疗提供循证参考.方法 通过计算机网上检索Medline、Cochrane、EMbase、CNKI、万方以及维普数据库,收集支链氨基酸对创伤患者代谢及预后影响的随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),对纳入研究进行质量评价和提取后,采用Rev Man 5.3 统计软件对同质性结果进行合并分析.结果 共纳入13项符合标准的随机对照试验相关文献,合计656例患者.Meta分析显示,与平衡氨基酸相比,创伤患者术后给予支链氨基酸能更好地改善氮平衡[MD=7.24,95％CI(5.16,9.32),P＜0.01],提高总蛋白水平[MD=1.06,95％CI(0.21,1.90),P=0.01]和白蛋白水平[MD=1.90,95％CI(1.27,2.54),P＜0.01],减少术后并发症[OR=0.32,95％CI(0.15,0.68),P＜0.01].结论 支链氨基酸对创伤患者代谢有着积极的作用,但对预后的影响有待进一步研究证实.
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中药外用治疗晚期肝癌31例
我院外用中药贴敷治疗肝癌晚期,结合西药保肝、抗感染等,对缓解病情,稳定病情效果较好,现介绍如下.1临床资料31例均经肝超声、肝功能、CT、火箭电泳、放免定量证实为肝癌,影像检查均有实性占位病变,属晚期肝癌.其中原发性肝癌27例,转移性肝癌4例;男25例,女6例;年龄35～45岁10例,46～55岁1 3例,56～68岁8例.实验室检查:ALT》40u12例,血清白蛋白≤30g28例,HBsAg阳性者24例.腹水29例,肝区痛26例,食欲差31例,腹胀30例,大便于结10例,黄疸5例,发热6例,牙龈出血2例.2治疗方法方用甘遂、甘草、炮山甲、大黄、细辛等量,为细末用醋调敷脐部及包块部位,每日调敷时间不得低于8小时,同时给病人以能量、支链氨基酸静脉滴入,以调整病人的正气,用青霉素抗感染.腹水重者用速尿60mg加50%葡萄糖静脉推注.每日1次,用3天后停用.发热出血、大便干结者外用药加重大黄用量,上述治疗15天为一疗程.
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GC/MS衍生化测定精浆中游离支链氨基酸和果糖
目的 建立人精浆中支链氨基酸和果糖的气相质谱衍生化分析方法.方法 精液样本液化离心后,按精子活率的临床标准分为正常组和非正常组,经TMS微波衍生化,GC/MS分析两组支链氨基酸、果糖衍生物含量差异.结果 正常组与非正常组的缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸在相对含量上均有一定差异.正常组3种氨基酸相对含量高于非正常组.果糖分析观察到同样的特征,正常组相对含量高于非正常组.结论 精子活率低的精浆样本仍可检出支链氨基酸和果糖,其差异有助于无精子、少精子精斑的法医学鉴别.
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肿瘤免疫营养治疗：在挑战与争议中前行（详见光盘）
免疫营养治疗不再是一种单纯给予营养物质的技术，而是调节免疫、代谢和炎症过程的针对性的营养治疗，可以认为它是一种“药物”的干预，因此，其可能为肿瘤治疗开启新的大门。免疫营养治疗素通常包括核苷酸、ω-3多不饱和脂肪酸、氨基酸（谷氨酰胺、精氨酸、支链氨基酸、牛磺酸）、维生素、矿物质、益生菌、膳食纤维等。
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恶性肿瘤能量营养素代谢治疗新思维（详见光盘）
众所周知，恶性肿瘤患者机体内由于大量炎性因子的作用导致能量营养素代谢异常，包括：①糖代谢异常：机体发生胰岛素抵抗，导致肿瘤患者血糖升高，同时肿瘤细胞代谢过程中，糖酵解是其唯一获能方式，导致体内产生大量乳酸；②蛋白质代谢异常：骨骼肌及内脏蛋白大量分解、消耗，导致机体呈现负氮平衡、低蛋白血症、骨骼肌萎缩等；③脂肪代谢异常：脂肪组织分解增加，体脂储存下降，血浆游离脂肪酸浓度升高等。这些代谢异常导致肿瘤患者体重进行性下降，呈恶液质状态。近些年来，如何通过外源性给予营养素来逆转这种异常代谢状态从而影响肿瘤转归，干预抗肿瘤治疗成为肿瘤内科医师研究的新思路，即营养代谢治疗。常见的营养素有ω-3脂肪酸、谷氨酰胺、支链氨基酸包括亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸等，它们在减少肿瘤炎性因子释放，降低胰岛素抵抗，促进蛋白质合成，保护肠黏膜屏障等方面均发挥着重要作用。研究发现，正确运用营养治疗可以改善机体代谢状态，提高患者生存质量，延长生存期，为放化疗的顺利实施提供保障。营养素治疗同时，恰当应用胰岛素和重组生长激素，有效减少肿瘤负荷，准确认知与处置胃肠道功能障碍，准确、及时、有效地给予减症治疗等均为逆转肿瘤机体异常代谢状态提供有利条件。总而言之，营养代谢治疗已经成为肿瘤治疗学重要组成部分，正推动着肿瘤内科发生巨大变化。
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含乳清蛋白的支链氨基酸型肠内营养剂对肝硬化患者营养状况及肝功能的影响
目的：探讨添加特殊营养成分的肠内营养制剂对肝硬化患者营养状况及肝功能的影响。方法：参照2006年欧洲肠内肠外营养学会（ESPEN）肝病肠内营养指南，选取每天总热量摄入低于推荐值的肝硬化患者60例，随机分成治疗组（常规饮食基础上口服添加乳清蛋白的支链氨基酸型肠内营养剂）30例，对照组（常规饮食组）30例。分别治疗3月和6月测定患者的上臂围（UAC）、三头肌皮褶厚度（TSF），检测总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）和总胆红素（TBil），并记录随访期内两组发生部分肝硬化并发症的情况。组间比较采用独立样本t检验和Χ2检验。结果：入组前及治疗后3月时，各项相关指标差异无统计学意义。第6月时，治疗组UAC、TSF、TP、ALB、PA均高于对照组。PA在两组差异无统计学意义，其他差异均有统计学意义。UAC为（27.33±2.26比25.45±3.25，t=2.57,P=0.01）、TSF为（17.07±1.03比16.41±0.92，t=2.60, P=0.01）、TP（60.99±2.39比59.39±2.16，t=2.74, P=0.01）、ALB（34.51±2.27比32.58±3.28，t=2.65, P=0.01）、PA（104.65±27.55比99.53±24.86，t=0.76,P=0.45）、TBil（31.08±2.89比33.31±4.42，t=2.31, P=0.02）。随访期内治疗组肝性脑病和感染的发生较对照组显著减少（Χ2=4.71， P=0.03；Χ2=5.10，P=0.02；），而两组中消化道出血和肝肾综合征差异无统计学意义。结论：添加乳清蛋白的支链氨基酸型肠内营养剂能有效改善肝硬化患者营养状况及肝功能，减少部分肝硬化并发症的发生。
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支链氨基酸在肝病营养治疗中的应用
肝脏是代谢的主要器官,因此,在肝病患者中往往合并有不同程度、不同类型的营养不良,而营养不良会使患者机体免疫力及代偿能力下降,不利于肝病治疗.既往研究证实,支链氨基酸除了为机体提供蛋白合成的材料外,对治疗肝病也起到较重要作用.本文通过查阅大量文献,对近年来支链氨基酸在肝病营养治疗中的应用情况作一综述.
