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应用引物延伸预扩增方法对地中海贫血进行植入前遗传学诊断的初步研究
植入前遗传学诊断(PGD)由于可检测的材料仅1~2个卵裂球细胞,很难进行一个基因的多种突变或多位点基因改变的基因分析.引物延伸预扩增(PEP)是随机扩增单细胞全基因组的有效方法,有望解决这个问题.我们在本研究中探讨PEP在地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血,地贫)PGD中的应用.
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我国首例“设计婴儿”脐血救姐姐
她为啥叫"设计婴儿"?这是因为她的到来是经过医护人员精心"设计"的,她的母亲通过试管婴儿技术孕育了12个胚胎,医护人员通过遗传学诊断技术挑选出不携带地中海贫血基因,同时又与前一个小孩的白细胞抗原系统即具有造血功能的系统匹配相符的胚胎植入其母亲体内.2012年7月,一个特殊的女婴在中山大学第一附属医院呱呱坠地.她,是我国首例成功地通过植入前遗传学诊断技术诞生的β-地中海贫血结合白细胞抗原系统配型单胎.她一出生就身负重任,不仅圆了父母多年的心愿,更是给自己的姐姐——一名14岁的重症地贫患者带来了生的希望.
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世界首例无癌婴儿诞生记
你想生一个什么样的孩子?大眼睛、黑头发、高鼻梁,或者希望他永远不生病?如今这些可以通过一种名为"植入前基因诊断"的高瑞医学技术设计出来.2009年1月9日,世界首例通过该技术设计的永远不会得癌症的女婴在伦敦诞生,成为人类生育医学的里程碑,同时也是对现有生育伦理学的挑战,围绕这个无癌宝宝,英国上下一片争议……
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流程管理在辅助生殖技术中心的实施
辅助生殖技术是近20年发展起来的具有较大发展潜力的一门新技术,包括:人工授精、体外授精、胚胎移植、单精子卵细胞质内显微注射、植入前遗传学诊断等.近年来随着分子生物学技术进步,对生殖护理提出更高的要求.我院生殖中心2001年10月成立以来,逐步实施了流程管理,取得了较好的成效.现介绍如下.
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46例应用血管封堵器病人的临床观察与护理
Angio-seal经皮血管封堵器是一种用于血管封闭的新型止血装置.我科于2005年10月-2006年3月采用该装置对46例冠状动脉造影及经皮冠状动脉介入治疗(PCI)病人股动脉穿刺点进行止血处理,并在其植入前后采取相应的护理措施,取得满意效果.现报告如下.
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晶体玻璃体切除联合前囊前人工晶体植入术
对于玻璃体疾病合并晶体混浊,尤其是后囊膜混浊、破裂的病人,如外伤,玻璃体切除硅油填充术后等,往往需要玻璃体晶体联合手术.传统手术方法是:经平坦部行晶体切除,玻璃体切除或硅油取出,再行睫状沟缝线固定人工晶体或戴镜矫正视力.但前者术后并发症较多,后者患者有诸多不便,故我们尝试了手术中保留晶体前囊膜,植入前囊前人工晶体,取得了较好效果,现报告如下:
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超早孕妇女血中早孕因子/chaperone10预示胚胎的存活
早孕因子(EPF )/chaperone10是妊娠早期分泌的具有免疫抑制作用和生长因子作用的蛋白质,在授精12~48 h后就可利用玫瑰花结抑制实验(RIA)在妊娠血清中检测到。EPF早是由Mor‐t o n等[1]在1974年描述,产生于授精后植入前,存在于妊娠早期。已经从人、猪、牛[2]、羊、红鹿等[3]哺乳动物妊娠血清和妊娠妇女子宫颈黏液中检测出了EPF活性。我们报道了可以从滋养细胞肿瘤患者体内测出EPF 活性。
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成人干细胞移植治疗心力衰竭
研究人员首次显示,一个人自己的细胞可用来取代已死亡的心肌,以“修复”衰竭的心脏。法国的一组研究人员在AHA的2000年学术年会上报告了对一例72岁男性病人施行该疗法的结果。他们在对该病人施行冠脉搭桥术时,将细胞用注射的方法植入心脏受损部位。这种“细胞补片”来自该病人大腿部的骨骼肌成肌细胞。植入前将成肌细胞放在实验室的培养皿中培养2周。术后1个月,该病人的射血分数改善。影像学检查显示,在梗死部植入的细胞正在收缩,并有代谢活性。
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应用荧光原位杂交技术对胚胎植入前行21-三体检查的研究
目的避免移植染色体异常胚胎及提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的质量。方法应用DSCR Cosmid DNA特异性探针,借助于荧光原位杂交技术对20对35岁以上行IVF助孕夫妇的植入前胚胎进行21-三体检查。结果在20对夫妇中10对夫妇的胚胎成功地进行了植入前胚胎21-三体检查,其中8对夫妇的胚胎被证明为正常,给予常规移植。移植的8例胚胎中2例妊娠,其中1例流产,另1例正在妊娠中;2对夫妇的胚胎被检查出21-三体,未给予移植。结论在行IVF助孕的高龄妇女中,进行胚胎植入前21-三体检查是必要的。
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人类卵母细胞冻存的临床应用
人类成熟卵母细胞是体内大的细胞,直径约120μm左右.与精子和植入前4~8细胞阶段胚胎相比,冻融过程对卵母细胞更容易造成损伤.自1948年利用甘油作冷冻保护剂冻存牛精子获得成功后,直至1972年冻融小鼠胚胎才获子代出生.1983年,人类第一例冻融胚胎"试管婴儿"诞生.迄今在辅助生殖技术中冻存人类精子及植入前胚胎已广为应用,而冻存人类卵母细胞的研究及临床应用则缓慢得多.虽然,1986年Chen[1]首先采用与冻融人类胚胎基本相同的慢冻方法获得世界首例由冻卵而出生的婴儿,但由于冻融卵母细胞受精率低下,直至1995年卵母细胞胞浆内单精子注射技术(ICSI)应用于冻融后卵母细胞,随后才陆续有较多经冻卵出生婴儿的报道.但经慢冻快融卵母细胞出生婴儿迄今也不足100例.1999年,澳大利亚学者Kuleshova等[2]首先报道应用乙二醇作细胞内冷冻保护剂,开放麦管作支架快速冻融人卵母细胞获得1例赠卵"试管婴儿"活婴分娩,提示了玻璃化快速冷冻技术在冻存人卵母细胞可能的应用前景及其优越性,至今,相关全世界报道已有近20例左右.祖国大陆于去年开始有经玻璃化方法冻卵后出生婴儿的报道.本文将就卵母细胞冻融的损伤及应用前景作一简要回顾.
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植入前遗传学诊断
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)作为产前诊断的一种更早期的形式,为不愿接受终止妊娠的遗传病高危夫妇提供了可供选择的手段.PGD是指从体外受精的胚胎取部分细胞进行基因检测,排除致病基因的胚胎后才移植,不仅可防止遗传病的发生,而且避免选择性流产和多次流产可能造成的创伤以及伦理道德观念的冲突,还可缩短由于选择性流产需要恢复的妊娠间隔时间.
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自体巩膜条脉络膜上腔植入治疗顽固性青光眼
自1969年Moiteno发明青少眼引流植入物以来,顽固性青光眼的治疗有了突破性进展.以此为基础,又出现许多引流植入物,但毕竟都属异物,或植入前房,或植入结膜下,远期效果难以估计.我们采用自体巩膜条脉络膜腔植入治疗顽固性青光眼,效果良好.
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层粘连蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达
层粘连蛋白(Laminin LN)是细胞外基质中重要的大分子非胶原糖蛋白,由座落于基膜上的上皮细胞、内皮细胞及被基膜包绕的肌细胞、垂体细胞合成并分泌贮存于基质中.研究表明,LN与细胞膜表面受体结合后可产生多种生物学作用,如介导上皮细胞生长、增殖、分化,促进细胞粘附、辅展、移动,并在肿瘤细胞转移过程中起重要作用.有人曾用间接免疫荧光方法对小鼠早期胚胎进行研究,发现LN在桑椹胚和内细胞团及其滋养层均有较强的阳性反应,在外胚层与内胚层之间的细胞外基质中可见LN呈条带状荧光.但有关胚泡植入前后子宫内膜中LN的变化研究报道较少.本实验用免疫组化ABC法,对小鼠子宫内膜腔上皮基膜和腺上皮基膜中LN的表达进行观察,探讨在胚泡植入前后子宫内膜中LN的变化及其作用.
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毛囊单位保存于0℃和4℃林格液时的活性比较
毛发移植是个费时的手术,术中一般要求将移植物包括头皮和分离好的移植体(现多使用毛囊单位)在植入前暂时在较低的温度保存(1~4℃),以降低其体外代谢,提高移植后的成活率[1].
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冠状动脉支架植入前后及术后半年99Tcm-MIBI心肌断层显像定量分析
冠状动脉(简称冠脉)内支架植入术可用于治疗冠心病 (CAD),但远期再狭窄率高达10%~30%,且90%发生于植入后半年内[1,2]。用无创伤定量检查技术进行术前病例筛选、术后疗效评价和远期效果随访很有必要。本研究在冠脉内支架植入术前、术后1周和术后半年分别做静息、潘生丁负荷99Tcm-甲氧基异丁基异腈(MIBI)心肌断层显像[3,4],并进行定量分析研究、与冠脉造影结果对照,以 探讨SPECT的临床价值。 对象与方法 1.研究对象。 51例CAD患者,男43例,女8例, 年龄34~79岁,平均(58.69±9.72)岁,其中急性心肌梗死15例,陈旧性心肌梗死8例,CAD心肌缺血28例。累及病变血管58支,分别为左前降支32支 (55.77%),右冠状动脉18支 (31.10%),左回旋支8支 (13.79%),其中7例为双支病变,病变血管直径平均(3.10±0.54) mm,病变血管面积(7.72±2.87) mm2,病变血管狭窄直径百分比(76.16±18.95)%, 病变血管狭窄面积百分比(90.37±10.47)%, 均植入冠脉支架。 2.方法。采用Sopha Gammatoma II SPECT仪,平均注入99Tcm-MIBI 740 MBq,对冠脉支架植入前后1周 (51例),植入后半年 (21例) 分别做静息、潘生丁负荷 (按体重0.56 mg/kg) SPECT检查,共计172人次。其中:术前静息SPECT 50例、潘生丁负荷23例;术后1周静息SPECT 45例、潘生丁负荷25例;术后半年静息SPECT 21例,潘生丁负荷8例,采用四片定量求积分析法[5]。取左心室长轴图像,从左心室基底到心尖部将其横断为4个相同厚度的短轴片断,取同一患者植入支架前后不同时间自身对照,以术前灌注缺损大值和术后改善为明显的同一部位、同一断层进行对比。在左心室短轴片断上定出左心室中心,以此向外每 6°引出1条射线,共60条,用计算机自动勾划术前术后灌注缺损程度和灌注缺损范围(面积),并以不同颜色确定边界,计算每条射线的平均计数,以其中高平均计数射线为100%,其他射线计数与之相比,进行归一化,求出60条射线的放射性比值,以此为纵坐标,心室弧度为横坐标,绘出圆周剖面曲线坐标图,患者曲线在纵坐标轴上<80%为心肌血流灌注异常(灌注缺损>20%);在横坐标轴上,心肌灌注缺损面积>20%为异常。同一患者在同一部位、同一断层上,术前术后各操作10次,进行定量分析,所得结果进行统计学处理,其变异系数为6%。
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螺旋CT三维重建成像技术在气道支架植入中的应用
支架植入治疗气道严重狭窄近年来得到广泛应用,支架植入前对气道狭窄状况的全面了解必不可少[1].一般情况下均通过普通螺旋CT和纤维支气管镜(简称纤支镜)来提供诊疗依据,但普通螺旋CT不能显示完整的立体构象;而有些情况下(如气道出血或狭窄严重)无法采用纤支镜作详尽检查,使此类患者支架植入出现困难.我们对气道严重狭窄患者术前作螺旋CT三维重建成像,辅助支架植入,取得良好的疗效,现报道如下.
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后房型人工晶状体前房内植入继发青光眼1例
患者,女,53岁,农民.因白内障人工晶状体植入术后胀痛6个月,于2002年5月16日入院.患者2001年11月,因右眼渐进性视物不清,右某县级医院确诊为"老年性白内障",予以手术治疗,术中后囊膜破裂,玻璃体脱出,不能正常植入后房型人工晶状体,错误地将后房型人工晶状体植入前房,术后5天出院.出院后1个月,患者右眼持续胀痛,予以"乙酰唑胺0.25,每日3次,0.5%噻吗心胺眼水点眼,每日2次",用药后能暂时缓解疼痛.近日眼胀痛加剧,时有恶心,当地医院予以"20%甘露醇250ml加压静滴",胀痛能暂时缓解.辗转治疗数家医院,病情无好转,求诊于我院.
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表皮生长因子及其受体对人类早期胚胎发育的影响
人类早期胚胎发育是指从受精卵形成到第八周末胚体形成的发育过程,包括受精卵卵裂,胚泡形成和植入,胚层形成和胚体形成等几个连续的发育阶段,这段时期是胚胎发育变化剧烈的时期,容易受到体内外环境的影响,对后期胎儿的正常发育具有决定性作用,表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)是母体环境中的胚胎营养因子,大量实验证实,在人的子宫内膜、蜕膜、植入前胚胎、滋养层细胞等生殖组织中存在EGF和/或EGF受体,EGF可以通过自分泌旁分泌和内分泌途径,单独或通过细胞因子网络,参与内膜准备、胚胎发育、植入过程、妊娠维持、胎盘激素的合成与分泌等生理过程的调节,EGF/EGFR的异常可能引起流产、胚胎发育迟缓等疾病.本文就EGF及其受体对人类早期胚胎发育的影响作一综述.
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人类卵母细胞及植入前胚胎中母性效应基因Mater mRNA的表达
目的:了解母性效应基因Mater表达与人类卵母细胞及早期胚胎发育不同阶段的关系.方法:用巢式逆转录多聚酶链式反应(single cell nested RT-PCR)方法检测人类卵子和植入前各阶段胚胎的母性效应基因Mater mRNA的表达.结果:Mater在人类卵母细胞GV、M Ⅰ、MⅡ都有表达,植入前胚胎1、2、4、6细胞期表达量逐渐下降,到8细胞期、囊胚、孵出囊胚期均未检测到Mater mRNA表达.结论:人类卵母细胞和植入前胚胎Mater基因的表达量随发育时间的改变而变化,对卵子生长和胚胎发育有重要意义,与母性效应基因在小鼠等其他哺乳动物中的表达模式相似.
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小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶-1 mRNA的降调节作用
目的:探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶I (Dnmt1)mRNA表达的影响.方法:采用免疫组织化学方法检测Dnmt1在小鼠输卵管的组织学定位;Real-time RT-PCR检测正常妊娠和假孕小鼠在胚胎2细胞期、4细胞期和8细胞期时,输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平的变化.结果:Dnmt1主要表达在小鼠输卵管的上皮细胞层;妊娠组小鼠各期输卵管上皮细胞Dnmt1 mRNA表达水平均显著低于同期假孕组(P<0.05).结论:小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1mRNA表达具有降调节作用,胚胎可能通过此作用间接调控输卵管上皮某些基因的表达.