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磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在肝纤维化发生及治疗中的作用研究进展
肝纤维化是常见的肝脏病理变化,是慢性肝损伤发展为肝硬化或肝癌的重要过渡阶段,有效控制肝纤维化是防治晚期肝病的主要途径.第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路能够有效调控肝纤维化进程,是肝纤维化发生的重要分子机制,也是防治肝纤维化的重要调控靶点.本文对PTEN/PI3K/AKT信号通路在肝纤维化中的作用机制及以该通路为靶点的抗肝纤维化药物研究进行综述.
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黄柏酮对大鼠自体移植静脉桥术后内膜增生的抑制作用及其机制
目的 探讨黄柏酮对大鼠自体移植静脉桥术后内膜增生的抑制作用及其可能作用机制.方法 选取42只雄性SD大鼠,构建自体静脉移植模型后将其随机分为实验组和对照组,每组21只,实验组给予黄柏酮15 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组注射等量生理盐水,在术后0、2、4周分别取移植术后的大鼠静脉桥,观察大鼠静脉桥组织形态,测量新生内膜厚度,检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平和蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平.结果 术后2周和4周时,对照组平滑肌细胞大量增殖,内皮细胞排列欠规则,实验组移植静脉桥平滑肌细胞增殖少于对照组;实验组静脉桥新生内膜厚度薄于对照组(P<0.05),PCNA蛋白表达水平和Akt磷酸化水平低于对照组(P<0.05).结论 黄柏酮可能通过降低Akt磷酸化水平来抑制平滑肌细胞增殖,从而减轻静脉桥内膜增生.
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石仙桃多糖对哮喘大鼠肺部炎症、细胞外信号调节酶和蛋白激酶B表达水平的影响
目的 探讨石仙桃多糖(PCLP)对哮喘大鼠肺部炎症细胞外信号调节酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白表达水平的影响.方法 将48只大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组、PCLP组各12只.除正常组外,其他3组建立哮喘大鼠模型.建模第16天,地塞米松组、PCLP组分别给予地塞米松及PCLP灌胃,正常组、哮喘模型组给予生理盐水灌胃,干预28 d后取4组大鼠肺泡灌洗液进行细胞分类及计数,观察大鼠肺组织病理情况,比较4组大鼠ERK1/2、 磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平.结果 其他3组大鼠肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数均高于正常组(均P<0.05).地塞米松组和PCLP组的肺泡灌洗液中白细胞数和嗜酸性粒细胞数低于哮喘模型组(均P<0.05).地塞米松组和PCLP组大鼠肺组织炎症症状轻于哮喘模型组.PCLP组和地塞米松组肺组织中ERK1/2和p-Akt蛋白表达水平均低于哮喘模型组(均P<0.05).结论 PCLP可以减轻哮喘大鼠肺部炎症,机制可能是其抑制ERK1/2的磷酸化和降低p-Akt蛋白表达从而抑制气道平滑肌细胞增殖.
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套细胞淋巴瘤中PI3K/Akt信号通路与细胞凋亡、侵袭的相关性
目的:研究套细胞淋巴瘤中PI3K/Akt信号通路与细胞凋亡、侵袭的相关性.方法:选择在本院诊断为套细胞性淋巴瘤的38例患者作为研究的MCL组,同期在第四军医大学附属西京医院诊断为淋巴结反应性增生的55例患者作为研究的对照组,采集淋巴结组织,检测p-PI3K、p-AKT的蛋白表达量以及凋亡基因、侵袭基因的mRNA表达量.结果:MCL组患者淋巴结中p-PI3K、p-AKT的蛋白表达量以及SOX11、cyclinD1、TNFAIP3、XIAP、PCNA、MMP2、MMP7、MMP9、VEGF的mRNA表达量均显著高于对照组,TNFAIP3的mRNA表达量均显著低于对照组;p-PI3K高表达的MCL淋巴结中SOX11、cyclinD1、XIAP、PCNA、MMP2、MMP7、MMP9、VEGF的mRNA表达量均显著高于p-PI3K低表达的MCL淋巴结,TNFAIP3的mRNA表达量均显著低于p-PI3K低表达的MCL淋巴结.结论:套细胞淋巴瘤中PI3K/Akt信号通路的激活与肿瘤细胞凋亡障碍、侵袭增强密切相关.
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白藜芦醇改善糖尿病大鼠糖脂代谢的作用及机制的初步探讨
目的:研究白藜芦醇对糖尿病大鼠糖脂代谢作用及机制.方法:高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)联合诱导制备糖尿病大鼠模型,并随机分组为正常对照组、模型组、白藜芦醇组和吡格列酮组,每组8只,给予相应的药物治疗8周.实验结束后比较各组空腹血糖值(FBG)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肝糖原含量,检测抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化;采用Western bolot方法检查肝脏组织中葡萄糖激酶(GCK),phosphorylated-、total-Akt,phosphorylated、total-GSK-3β蛋白的表达.HE染色方法观察肝脏组织病理形态.结果:与模型组比较,白藜芦醇能显著改善糖脂代谢,增加肝脏肝糖原含量,Akt的磷酸化水平、葡萄糖激酶的表达增加,并抑制糖尿病大鼠GSK-3β的磷酸化水平.HE染色观察,与模型组比较肝脏脂肪变性及损伤明显减轻.结论:白藜芦醇具有明显的调节糖脂代谢的作用,其作用机制与其提高机体抗氧化活性,激活Akt信号通路,改善肝脏病理损伤相关联.
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PI3K/AKT/mTOR信号通路及其相关抑制剂在急性髓系白血病中的作用
目前已经发现有多种信号通路参与急性髓系白血病的生长、增殖及凋亡，PI3K/AKT/mTOR信号通路是其中比较重要的一种。本文就PI3K/AKT/mTOR信号通路的组成、调控以及其相关抑制剂在AML中的研究现状进行阐述，并简要介绍其应用前景。
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CTRP3对糖尿病视网膜病变患者血视网膜内屏障的保护作用及机制研究
目的 分析肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)对糖尿病视网膜病变(DR)患者血视网膜内屏障保护作用及相关机制.方法 选取人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)进行培养与传代,取2～3代内细胞建立血视网膜内屏障(iBRB)体外模型,随机数字表法分为高糖高脂组、对照组2、CTRP3组和CTRP3+高糖高脂组,X-CELLigence监测CTRP3对于高糖高脂培养iBRB模型渗透性,选取7代内的HRMECs原代细胞,随机数字表法分为CTRP330 min组、CTRP315 min组和对照组1(EGM培养基),采用WesternBlotting法检测CTRP3对各组HRMECs细胞内腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)以及HRMECs细胞内Occludin、Claudin5、ZO-1及Claudin1表达的影响.结果 对照组2细胞内Cell Inder值当作标准1.00±0.00,高糖高脂组细胞内Cell Inder值为66.10±2.47,明显升高,与高糖高脂组对比,CTRP3+高糖高脂组细胞内Cell Inder值为85.13±2.51,明显上升,差异均有统计学意义(P<0.05);CTRP330 min组HRMECs内pAMPK/AMPK表达量为0.43±0.10,与对照组的10.18±0.08对比,显著上升,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CTRP3对DR患者iBRB有保护作用,其机制可能为经过AMPK/Claudin5、Occludin路径抑制高糖高脂所诱导iBRB功能损伤.
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亚硒酸钠抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导白血病细胞HL-60凋亡的机制研究
目的 探究亚硒酸钠诱导白血病细胞HL-60凋亡的信号通路及其对信号通路的影响.方法 应用不同浓度的亚硒酸钠处理白血病细胞HL-60,或者应用亚硒酸钠按照不同的时间点处理白血病细胞HL-60,使用流式细胞仪检测亚硒酸钠对HL-60细胞凋亡的影响.应用10μmol/L亚硒酸钠处理HL-60细胞,Western blot检测p-PI3K、总PI3K、p-AKT、总AKT、p-mTOR和总mTOR的表达情况.在过表达PI3K的HL-60细胞中应用10μmol/L亚硒酸钠处理白血病细胞HL-60,流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot检测p-PI3K、总PI3K、p-AKT、总AKT、p-mTOR和总mTOR的表达变化.同时以加蒸馏水处理的HL-60细胞为空白对照组.结果 与空白对照组凋亡比例(0.045±0.0013)相比,10μmol/L及20μmol/L亚硒酸钠处理组可有效诱导白血病细胞HL-60凋亡[凋亡比例分别为(0.254±0.0016)和(0.435±0.0021)],差异均有统计学意义(P＜0.05).此外与10μmol/L的亚硒酸钠处理0 h组相比[凋亡比例(0.055±0.0011)],10μmol/L亚硒酸钠作用24 h、48 h、72 h后,HL-60细胞的凋亡显著[凋亡比例分别为(0.179±0.0018)、(0.384±0.0023)和(0.535±0.0034)],差异均有统计学意义(P＜0.05).亚硒酸钠处理细胞能下调PI3K、AKT、mTOR的磷酸化水平,但对总的PI3K、AKT以及mTOR的表达没有影响.在过表达PI3K的细胞中, AKT、mTOR表达上调,而亚硒酸钠可逆转过表达PI3K导致的PI3K/AKT/mTOR信号通路的过度激活.过表达PI3K使细胞凋亡被抑制,而亚硒酸钠可诱导过表达PI3K的细胞凋亡增加.结论 亚硒酸钠可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,诱导白血病细胞HL-60凋亡.
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坦索罗辛对前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响
目的：研究坦索罗辛对前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响。方法：以0（空白对照组）、12.5、25、50μmol/L坦索罗辛（坦索罗辛低、中、高浓度组）作用于PC-3细胞48 h后，通过MTT法检测细胞活力，Hoechst 33258染色检测细胞凋亡率，Western blot法检测核糖体Bax、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）蛋白表达及蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、S6蛋白激酶（p70S6K）、4E结合蛋白1（4E-BP1）的磷酸化水平。结果：与空白对照组比较，坦索罗辛低、中、高浓度组PC-3细胞活力和Akt、p70S6K、4E-BP1磷酸化水平均降低，Bax蛋白表达水平升高（P＜0.05或P＜0.01）；坦索罗辛中、高浓度组PC-3细胞的凋亡率升高，Bcl-2蛋白表达和mTOR磷酸化水平降低（P＜0.01），上述效果均呈浓度依赖性。结论：坦索罗辛能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并诱导其凋亡，其机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路激活有关。
关键词： 坦索罗辛 前列腺癌PC-3细胞 增殖 凋亡 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
褐藻素诱导人宫颈癌HeLa细胞的自噬作用机制研究
目的：研究褐藻素诱导人宫颈癌HeLa细胞的自噬作用机制。方法：1、10、20、40、80μmol/L褐藻素培养HeLa细胞48 h后，MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0（空白对照）、10、20、40μmol/L褐藻素培养HeLa细胞48 h后，流式细胞仪测定细胞周期与凋亡率；通过吖啶橙染色与Lyso-Tracker Red染色、HeLa-GFP-LC3细胞测试法在荧光显微镜下观察细胞自噬状态；Western blot法检测细胞自噬流量与相关蛋白的表达。结果：10、20、40、80μmol/L褐藻素培养细胞48 h后对细胞生长有明显抑制作用。10、20、40μmol/L褐藻素培养细胞48 h后可将细胞阻滞于G0/G1期，但对细胞凋亡无明显影响；40μmol/L褐藻素培养细胞48 h后细胞自噬程度加重；与空白对照比较，40μmol/L褐藻素可促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ以及Beclin-1、PTEN、p21的表达，但抑制p-Akt、p-p70S6K、p-mTOR、Cyclin D1、CDKZ表达。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol/L）预处理可逆转褐藻素诱导的HeLa细胞自噬作用；U0126可部分逆转褐藻素诱导的HeLa细胞自噬作用。结论：褐藻素可通过抑制Akt信号通路以及激活MEK/ERK信号通路诱导HeLa细胞自噬。
关键词： 褐藻素 细胞周期 自噬 蛋白激酶B MEK/ERK信号通路 人宫颈癌HeLa细胞 -
大黄素和黄芩苷联用对急性胰腺炎模型大鼠Akt/Nrf2通路的影响研究
目的:研究大黄素和黄芩苷联用对急性胰腺炎(AP)模型大鼠的改善作用和机制.方法:将70只大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄素组(250 mg/kg)、黄芩苷组(250 mg/kg)、奥曲肽组(阳性对照,10μg/kg)、N-乙酰半胱氨酸组(阳性对照,180 mg/kg)和大黄素+黄芩苷组(125 mg/kg大黄素+125 mg/kg黄芩苷),每组10只.除假手术组外,其余各组大鼠均复制AP模型,造模成功后静脉注射给予相应药物.在给药后3、6、12、24 h,测定各组大鼠血清中淀粉酶、脂肪酶水平;在给药24 h后,检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、髓过氧化物酶(MPO)和胰腺组织中半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)水平,并采用Western blot法检测各组大鼠胰腺组织中蛋白激酶B(Akt)磷酸化和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平.另取40只大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄素+黄芩苷组(125 mg/kg大黄素+125 mg/kg黄芩苷)和大黄素+黄芩苷+LY294002(Akt特异性抑制剂)组(125 mg/kg大黄素+125 mg/kg黄芩苷+100 mg/kg LY294002),每组10只,进行机制验证实验.同法造模、给药,24 h后检测大鼠胰腺组织中Akt磷酸化和Nrf2蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,从给药后3 h开始,模型组大鼠血清中淀粉酶、脂肪酶水平即显著升高(P<0.01);给药后24 h,大鼠血清中MDA、MPO和胰腺组织中Caspase-3水平均显著升高(P<0.01),血清中SOD、GSH和胰腺组织中Akt磷酸化及Nrf2蛋白表达水平均显著降低(P<0.01).与模型组比较,从给药后6 h开始,各给药组大鼠血清中淀粉酶和脂肪酶水平均显著降低(P<0.01);给药24 h后,各组大鼠血清中MDA、MPO和胰腺组织中Caspase-3水平均显著降低(P<0.01),血清中SOD、GSH和胰腺组织中Akt磷酸化及Nrf2蛋白表达水平均显著升高(P<0.01).机制验证实验中,与大黄素+黄芩苷组比较,大黄素+黄芩苷+LY294002组大鼠胰腺组织中Akt磷酸化及Nrf2蛋白表达水平均显著降低(P<0.01).结论:大黄素和黄芩苷联用对AP模型大鼠具有一定的改善作用,其机制可能与促进Akt磷酸化以上调Nrf2蛋白表达,并促进其下游抗氧化酶的表达,从而降低体内氧化应激水平有关.
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芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤模型小鼠的肾保护作用及其机制研究
目的:研究芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤(RIRI)模型小鼠的肾保护作用及其机制.方法:将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、芬戈莫德组(1 mg/kg)和芬戈莫德+wortmannin组[芬戈莫德1 mg/kg+磷脂酰肌醇3-激酶(PISK)特异性阻滞药wortmannin 1.4 mg/kg],每组15只.除假手术组外,其余3组小鼠均建立RIRI模型,术前24 h一次性经尾静脉注射相应的药物.再灌注24h后收集每组小鼠血清,使用全自动生化分析仪测量各组小鼠血清中血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平;光镜下观察肾组织病理变化;Western blot法检测肾组织中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达.结果:与假手术组比较,模型组小鼠血清中Scr和BUN水平明显升高(P＜0.01);肾组织出现病理性改变,肾小管上皮细胞坏死,炎性细胞浸润;肾组织中ICAM-1和MCP-1蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),p-Akt蛋白表达水平轻微升高(P＞0.05).与模型组比较,芬戈莫德组小鼠除肾组织中p-Akt蛋白表达水平明显升高(P＜0.01)外,其余指标均明显改善(P＜0.01).与芬戈莫德组比较,芬戈莫德+wortmannin组小鼠的上述指标变化均逆转(P＜0.05或P＜0.01).结论:芬戈莫德能减轻RIRI模型小鼠的肾损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关.
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姜黄素对非通气侧肺损伤模型大鼠单肺通气的改善作用研究
目的 基于PI3K-Akt-HIF-1α信号通路,探讨姜黄素对非通气侧肺损伤模型大鼠单肺通气的改善作用.方法 将100只SD大鼠随机分为正常对照(等体积0.9％氯化钠溶液)组、模型(等体积0.9％氯化钠溶液)组与姜黄素高、中、低剂量(20,10,5 mg/kg)组.模型组与姜黄素高、中、低剂量组大鼠予以单肺通气建模,各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续7d.进行湿肺质量/体质量及肺损伤评分;以聚合酶链反应(PCR)测定大鼠脑组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达水平;以酶联免疫吸附(ELISA)法测定PI3K、Akt、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织中PI3K、Akt mRNA及蛋白表达水平均显著降低,HIF-1αmRNA及蛋白表达水平,湿肺质量/体质量,肺损伤评分,VEGF,IL-6,TNF-α蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素高、中、低剂量组大鼠肺组织中PI3K、Akt mRNA及蛋白表达水平均显著升高,HIF-1αmRNA及蛋白表达水平,湿肺质量/体质量,肺损伤评分,VEGF,IL-6,TNF-α蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论 姜黄素能明显改善非通气侧肺损伤模型大鼠的单肺通气情况,其机制与姜黄素通过PI3K-Akt信号传导通路抑制HIF-1αmRNA及蛋白表达水平,进而抑制VEGF,IL-6,TNF-α蛋白表达水平有关.
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代谢相关通路在人肺癌细胞系A549原位移植瘤模型中的表达
目的:近年来,代谢与肿瘤发病的病因学研究已经成为热点,同时肺癌仍居恶性肿瘤发病率和死亡率榜首,本研究拟构建一个稳定易操作的肺癌原位移植瘤模型,并初步探讨代谢相关通路在该原位移植瘤模型中的表达.方法:选取雄性6～8周龄BABUc裸鼠10只,优化麻醉用药及手术操作步骤,经气管移植5×106个细胞的A549肺癌细胞成瘤,观察移植瘤形成率、形成部位、大体形态、增殖分化程度.另取4只相同条件裸鼠进行手术空白对照.同时检测代谢相关通路蛋白STAT3、AKT和mTOR的表达情况等.结果:手术佳麻醉条件为75 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射;改进操作后经气管移植的小鼠肺癌形成率为80.0％;肿瘤形成以右肺上叶居多,呈明显腺癌结构,分化程度较低,移植瘤组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达高于肺组织,呈高表达状态.肿瘤负荷肺组织代谢相关通路蛋白信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB即AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平即pSTAT3/STAT3、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值均高于正常肺组织,差异具有统计学意义(t=-4.381,-4.462,-4.951;P=0.041,0.011,0.038).结论:通过改良经气管移植手术方式,可以构建一种操作简单、低成本、高效稳定的A549细胞肺癌移植瘤模型;代谢相关通路在肺癌的发生发展中也发挥了一定作用.
关键词： 肺癌 A549 原位移植 信号传导与转录激活因子3 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
髓样分化因子促进卵巢癌细胞耐药性的机制研究
目的 探讨髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)参与调节卵巢癌细胞耐药性的具体机制.方法 在卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol中采用特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)抑制MyD88的表达,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况以及细胞在紫杉醇处理后的存活情况.Western blot检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)以及多药耐药蛋白(multidrug resistance 1,MDRl)的表达情况.进一步在A2780/Taxol细胞中通过LY294002抑制PKB/Akt信号通路,通过小干扰RNA抑制MDR1的表达,CCK-8试剂盒检测细胞在紫杉醇处理后的存活情况.结果 在A2780/Taxol细胞株中抑制MyD88的表达,细胞的增殖速度明显低于对照组(P＜0.05).A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐药性也明显降低,半数抑制浓度(IC50)降低至对照组的50％(P＜0.01),且p-Akt、XIAP和MDR1在药物刺激下的升高也被明显抑制.同时抑制p-Akt通路的活性或抑制MDR1的表达后A2780/Taxol细胞的耐药性也出现明显下降,IC50分别降低至对照组的80％和50％,且差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MyD88蛋白通过调节PKB/Akt信号通路、XIAP抗凋亡蛋白以及MDR1的表达参与卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性.通过抑制MyD88可望改善卵巢癌治疗中的耐药现状.
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结缔组织生长因子通过PI3K/PKB抑制人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡
目的 探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是否具有抑制人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic sear fibroblast,HSF)凋亡的作用及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路(PI3K/PKB)是否介导该效应.方法 体外培养HSF,实验分3组:①空白对照组,②CTGF刺激组(10 ng/ml),③PI3K抑制剂LY294002(10 μmol/L)预处理后CTGF刺激组(LY294002组).应用免疫印迹技术检测30 min后蛋白激酶B的活化情况,应用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 和空白对照组相比,CTGF组细胞凋亡指数下降,蛋白激酶B的活化水平升高,具有统计学差异(P＜0.05);LY294002组细胞凋亡指数上升,蛋白激酶B的活化水平没有升高,与CTGF组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论 CTGF能够抑制HSF凋亡,PI3K/PKB介导该效应.
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Foxg1抑制肝癌细胞血管形成及其机制
目的 通过干扰和过表达肝癌细胞中的Foxg1,探讨Foxg1对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)血管生成能力的影响及其机制.方法 实验分为Hep3B干扰组、Hep3B对照组、Huh7过表达组和Huh7对照组,提取各组细胞条件培养基(conditional medium,CM);通过Transwell实验、管腔形成实验观察各组CM对HUVEC的迁移及管腔形成的影响;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在各组肝癌细胞中的mRNA及蛋白水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组CM内VEGFA浓度;采用Western blot检测4组肝癌细胞AKT1、p-AKT1的蛋白水平.结果 Hep3B干扰组较Hep3B对照组CM的作用下,HUVEC细胞的迁移数显著增多(P＜0.01),Huh7过表达组较Huh7对照组CM的作用下,HUVEC细胞迁移数显著减少(P＜0.01);Hep3B干扰组CM的作用下,HUVEC细胞管腔形成数多于Hep3B对照组CM(P＜0.01),而Huh7过表达组CM的作用下,HUVEC细胞管腔形成数少于Huh7对照组CM(P＜0.01);Hep3B干扰组较Hep3B对照组VEGFA水平上调,Huh7过表达组较Huh7对照组VEGFA水平下调;Hep3B干扰组CM较Hep3B对照组CM的VEGFA水平上调,Huh7过表达组CM较Huh7对照组CM的VEGFA水平下调(P＜0.01);Hep3B干扰组较Hep3B对照组AKT1磷酸化水平升高,Huh7过表达组较Huh7对照组AKT1磷酸化水平降低.结论 Foxg1抑制肝癌血管生成的过程可能是通过抑制PI3K/Akt通路的激活下调VEGFA的表达来实现的.
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斯钙素1激活PI3K/Akt/eNOS通路促进内皮祖细胞增殖和迁移
目的 研究斯钙素1(stanniocalcin 1,STC1)对内皮祖细胞(endothelial precusor cells, EPCs)增殖和迁移的影响并探讨其机制.方法 密度梯度离心法分离、培养后,采用荧光双染法鉴定SD大鼠脾源性EPCs.不同浓度人重组斯钙素1(recombinant human stanniocalcin 1,rhSTC 1)处理EPCs,结合siRNA技术干扰EPCs STC1表达,检测EPCs增殖能力及迁移能力的变化;观察STC1对蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及其磷酸化水平的影响;然后观察使用磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)特异性抑制剂LY294002和eNOS特异性抑制剂L-NAME预处理的EPCs对rhSTC1的反应.结果 荧光双染法鉴定EPCs阳性率约为88.5％;外源性给予rhSTC1呈浓度依赖性的促进EPCs增殖与迁移;而干扰内源性STC1的表达,则抑制其增殖与迁移;外源性给予rhSTC1增加EPCs中Akt和eNOS的磷酸化水平,而运用PI3K抑制剂(LY294002)和eNOS抑制剂(L-NAME)分别处理EPCs后,rhSTC1诱导的EPCs增殖与迁移能力明显降低.结论 STC1通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路,增强EPCs增殖、迁移能力,为损伤血管的修复提供了新的靶点.
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姜黄素对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨中药姜黄素对膀胱癌细胞(T24)增殖及凋亡的影响及可能机制.方法 以培养的T24细胞为研究对象,姜黄素组加入终浓度为1、10、100 μmol/L的姜黄素,对照组不加姜黄素,12、24、48 h后观察 T24 细胞的形态变化,分别用MTT法、TUNEL染色、RT-PCR、免疫印迹及图像分析技术检测各组细胞生长、凋亡发生、AKT1蛋白及转录水平、caspase 3蛋白含量的变化.结果 姜黄素组T24细胞生长抑制率显著上升,细胞凋亡发生显著升高,AKT1蛋白活性水平降低,转录水平无显著变化,caspase 3蛋白含量显著升高.结论 姜黄素能抑制T24细胞的生长并促进其凋亡,其发生与其抑制T24细胞PKB/AKT信号通路有关.
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宫颈病变中PI3K-Akt信号通路的表达与HPV感染关系的研究
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路在宫颈鳞癌(SCC)发生、发展中的意义及与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系.方法 采用免疫组化方法检测PI3K、Akt蛋白在80例SCC,36例宫颈上皮内瘤变(CIN),12例慢性宫颈炎症中的表达；治疗前均采用聚合酶链反应(PCR)方法检测HPV-DNA感染.结果 SCC组中PI3K、Akt蛋白阳性表达率显著高于CIN组和慢性宫颈炎症组(P＜0.05),SCC中PI3K、Akt蛋白的阳性表达均与临床分期密切相关(P＜0.05)；PI3K、Akt在SCC中的表达存在相关关系(P＜0 05)；116例CIN和SCC中,PI3K-Akt在HPV阳性组的表达率均显著高于HPV阴性组(P＜0 05).结论 PI3K、Akt在SCC发生、发展中起重要作用；两者与HPV感染密切相关.
