浙江大学学报（医学版）杂志
Journal of Zhejiang University(Medical Sciences) 절강대학학보（의학판）
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人端粒重复序列结合因子基因组和假基因研究
目的:确定人端粒重复序列结合因子(TERF1)的基因组结构和假基因的定位与结构.方法:利用GenBank等生物信息学资源,NCBI提供的BLAST及其他相关的生物信息学工具(Sequencher,DNA Strider和Autoassembler等),确定TERF1基因组和假基因的定位与结构,并用PCR和测序证实.结果:定位在8q13上的TERF1基因组由10个外显子构成.它有4个假基因分别分布在第13、18、21和X染色体上(ΨTERF1-13、ΨTERF1-18、ΨTERF1-21和ΨTERF1-X),其结构均与TERF1 mRNA相似,但缺少部分外显子.ΨTERF1-13、ΨTERF1-18和ΨTERF1-21的周边序列之间存在长度至少60 kb的同源片段.结论:TERF1基因组含10个外显子,它有4个加工过的假基因分布在第13、18、21和X染色体上.大片段同源序列属近期重复片段中的染色体间倍增.
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氟伏沙明的合成工艺改进
目的:改进氟伏沙明的合成方法.方法:以对三氟甲基苯甲腈为原料,经格氏反应和水解制成5-甲氧基-4′-三氟甲基苯基戊酮,再经肟化制成5-甲氧基-4′-三氟甲基-O-(2-胺乙基)戊酮肟,后与马来酸成盐制得氟伏沙明.结果:合成产物总收率达36.16%,其结构经核磁共振谱确证.结论:此改进的合成路线是可行的.
关键词： 氟伏沙明/化学合成 -
重叠区扩增基因拼接法在构建膜锚定金黄色葡萄球菌肠毒素A融合基因上的应用
目的:将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶(hPLAP-1)C末端信号肽序列进行拼接,形成融合基因.方法:利用重叠区扩增基因拼接法,分别扩增hPLAP-1 C末端信号肽序列和SEA基因序列.然后,将二段基因拼接并与pGEM-T克隆载体连接,酶切和测序鉴定.结果:成功扩增出hPLAP-1 C末端信号肽序列131 bp和SEA基因序列796 bp;经测序证实,二段基因序列成功拼接(901 bp).结论:重叠区扩增基因拼接法能将SEA基因与hPLAP-1C末端信号肽序列拼接,形成融合基因.
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脑源性神经营养因子在急性感染性脑损伤脑组织中的表达
目的:观察急性感染性脑损伤脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达.方法:建立3周龄大鼠急性细菌性感染性脑损伤模型和正常对照模型,分别在大鼠脑池中注入肺炎链球菌菌悬液50 μl和生理盐水50 μl,于接种后24 h进行免疫组化染色、原位杂交,观察皮层、海马BDNF的表达.结果:感染后24 h,皮层和海马神经元损失;原位杂交显示脑组织中BDNF mRNA表达明显增加.皮层和海马阳性杂交信号试验组均强于对照组,分别为(0.1194±0.0294 vs 0.0662±0.0118)A,(0.1608±0.0185 vs 0.0680±0.0095)A(P<0.01).免疫组化皮层和海马BDNF阳性染色颗粒试验组多于对照组,分别为(177.04±43.66 vs 79.79±7.23)mm2,(81.78±37.47 vs 42.98±20.44)mm2(P<0.01).试验组在软脑膜下、蛛网膜下腔、脑室及脑实质炎性病灶内,渗出的中性粒细胞和巨噬细胞有高表达BDNF mRNA和BDNF蛋白,对照组未见炎性渗出.结论:急性炎症性脑损伤后,BDNF mRNA和BDNF表达增强,提示BDNF可能构成内源性的神经保护机制,炎性细胞表达BDNF mRNA和BDNF,可能是炎症反应的一部分.
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蓝/黄自动化视野检测原发性开角型青光眼
目的:探讨蓝/黄(B/Y)自动化视野在早期开角型青光眼(POAG)患者视敏度检测中的敏感性和应用价值.方法:以Humphry-750视野机对31例(45 眼)早期POAG患者作常规白色(W/W)视野和蓝/黄视野(B/Y)检测.结果:B/Y视野出现的光敏度异常下降点数较W/W视野多(B/Y视野为11.5778±5.4334, W/W视野为10.8667±5.3326,t=2.973,P<0.01).B/Y视野的GHT指标的异常程度比W/W视野明显(χ2=7.111,P<0.01),其中两种视野GHT均为临界或异常者30例,均正常者6例,B/Y视野GHT临界或异常而W/W视野正常者9例,W/W视野GHT临界或异常的病例B/Y视野GHT均有异常.W/W和B/Y视野的MD指标两组间差异无显著性(χ2=3.273,P>0.05).结论:B/Y视野检查在检测早期POAG中较W/W视野灵敏度高.
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我国汉族正常人群内皮型一氧化氮合酶基因G894T突变的观察
目的:探讨我国汉族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T突变的分布特点.方法:应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性分析,研究了108名我国汉族正常人群eNOS基因G894T突变分布情况.结果:我国汉族正常人群eNOS基因G894T突变的GG、GT、TT基因型频率分别为0.9095、0.0883和0.0021;与国外其他种族人群比较,我国汉族正常人群GT+TT基因型频率低于日本人、英国白种人(P均<0.05).结论:我国汉族正常人群eNOS基因G894T突变的基因型分布不同于国外其他种族,以GG基因型分布频率较高,而GT+TT基因型低于日本人和英国白种人.
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早产儿骨转化及早期补钙对骨转化的影响
目的:动态观测早产儿骨转化生化标志物血骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(AKP)、Ⅰ型胶原羧基端肽(ICTP)的变化及早期补钙对它们及血钙(Ca)、尿Ca、血磷(P)、尿P的影响.方法:对40例早产儿分补钙组(20例,出生早期给予10%葡萄糖酸钙4 ml/kg.d-1静脉输注)与对照组(20例),在出生24 h及11日龄,分别用ELISA法、放射免疫法及全自动生化分析仪测定血清OC、ICTP、Ca、P、AKP浓度和尿Ca、P及肌酐值.同时以22例正常足月儿和早产儿对照.结果:出生24 h,早产儿血AKP、ICTP分别为(214.35±67.06)IU、(62.88±4.07)μg/L高于足月儿[(147.86±44.87)IU、(57.36±6.34)μg/L,P<0.01];ICTP与胎龄及出生体重呈负相关(r=-0.528、-0.614,P<0.01);OC为(648.77±238.89)nmol/L低于足月儿[(851.68±238.69)nmol/L,P<0.01],而且与胎龄、出生体重呈正相关(r=0.359、0.376,P<0.05、<0.01).出生11日龄,早产儿对照组OC为(947.25±335.47)nmol/L,高达足月儿[(941.65±297.28)nmol/L],而ICTP[(65.44±6.24)μg/L]始终高于足月儿[(57.10±3.48)μg/L];补钙组OC及ICTP分别为(844.59±267.24)nmol/L、(65.94±5.96)μg/L与对照组[(947.25±335.47)nmol/L、(65.44±6.24)μg/L]比较差异无显著性(P<0.01),AKP补钙组高于对照组[(246.00±66.64 vs 206.53±53.90)IU,P<0.01],尿Ca补钙组高于对照组[(0.179±0.156 vs 0.065±0.033)mmol/kg,P<0.01], 尿P补钙组低于对照组[(0.005±0.005 vs 0.136±0.151)mmol/kg,P<0.01];血Ca升高[(2.04±0.40 vs 2.34±0.19)mmol/L,P<0.01],血P降低[(2.47±1.53 vs 1.45±0.52)mmol/L,P<0.01].结论:早产儿与足月儿比较存在高骨转化;早期单纯补钙不能增加骨蛋白合成及减少骨胶原的裂解,但可提高血Ca、尿Ca,降低血P、尿P.
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荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立
目的:建立荷人卵巢癌细胞株SKOV3严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)动物模型.方法:SCID鼠腹腔注射人SKOV3卵巢癌细胞1×107个/只,饲养在无特定病原体环境中,观察其生物学特性.结果:实验组3只SCID小鼠腹腔内均见肿瘤生长,并形成以横膈、肠系膜、肝周、腹膜为主的转移灶,其中1只肺部有镜下转移灶.移植后肿瘤细胞在形态、生长、分泌CA125功能方面均与原细胞株保持一致.结论:建立的荷人SKOV3卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型能较好地模拟人卵巢癌腹腔播散的生物学特征.
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顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究
目的:研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株(OS-732)细胞毒性的影响,探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理.方法:OS-732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、43℃热疗+顺铂联合作用各1 h,采用体外细胞毒性试验(MTT法)、流式细胞仪(FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响,以及诱导细胞凋亡的情况.结果:41℃、43℃、45℃热疗对OS-732细胞株有明显的细胞毒性作用.在37℃恒温条件下,细胞株单独与不同浓度的顺铂作用1 h,随着顺铂浓度的升高,其细胞毒性作用明显增加.43℃热疗+顺铂共同作用1 h,其细胞毒性作用进一步增加,细胞毒性指数高达72.37%;FCM分析显示对细胞周期有明显的影响,S期细胞比例明显增加,G2与M期细胞比例明显减少.43℃热疗、43℃热疗+顺铂联合作用各1 h均出现凋亡细胞峰(亚G1峰),细胞凋亡比例高达56.47%;透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化.结论:顺铂热化疗有明显的增强OS-732细胞株的细胞毒性作用.43℃热疗、43℃热疗+顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡.43℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一.
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稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应
目的:建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞.方法:将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切,并亚克隆到哺乳动物细胞表达载体pREP9中.再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10,用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定.改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2,用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2 mRNA表达作了分析,并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验.结果:与HepG2细胞相比,HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA,能增强AFB1的细胞毒作用.结论:建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系,可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究.
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苯并[a]芘诱导的FL细胞锌指蛋白等表达的改变
目的:观察苯并[a]芘诱发的细胞应答反应,探讨苯并[a]芘引发的基因突变和致癌机制.方法:应用双向凝胶电泳与相应软件分析苯并[a]芘处理后细胞内蛋白质的表达谱,MALDI-TOF(matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight)质谱结合数据库检索鉴定差异表达的蛋白斑点.结果:细胞经苯并[a]芘处理后,可引起广泛的蛋白质表达的改变,其中以锌指蛋白和一些参与转录调控的蛋白多见.结论:这些表达改变的锌指蛋白和转录调控因子参与了苯并[a]芘诱发细胞的应答反应,提示可能参与苯并[a]芘引发的基因突变和肿瘤形成.
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低浓度MNNG诱发FL细胞应答反应的蛋白质组学研究
目的:研究低浓度甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对人羊膜FL细胞蛋白质表达谱的影响,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制.方法:FL细胞分别用MNNG和DMSO(溶剂对照)处理后,提取细胞总蛋白,用双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,银染染色后用相应的分析软件分析数字化的凝胶图像,找出在MNNG处理后表达有差异的蛋白斑点,用基质辅助的激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定.结果:在MNNG处理后有60多个蛋白斑点出现质和量的变化,其中18个蛋白斑点只能在MNNG处理的细胞中检测到,13个蛋白斑点则在MNNG处理后消失;同时检测到30个蛋白斑点在表达量上有显著变化,其中16个点表达升高,14个点则表达降低.通过数据库的检索,初步的鉴定了一批结构和功能各异的蛋白.结论:在低浓度烷化剂攻击后,FL细胞中的蛋白表达谱发生了显著的变化.
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POLH基因反义阻断细胞系的建立及POLH在MNNG引起的非定标性突变中的作用
目的:通过建立POLΗ反义阻断细胞系FL-POLΗ-,研究POLΗ的功能.方法:将POLΗ基因的1473～2131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体pMAMneo-amp-中,将重组表达质粒转染FL细胞,G418筛选,获得POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系FL-POLΗ-.采用穿梭质粒pZ189介导的突变实验,观察在POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和MNNG引起的诱发突变频率.结果:成功建立细胞系FL-POLΗ-.穿梭质粒pZ189在FL-POLΗ-细胞中复制后,其SupF tRNA基因的自发突变频率为13.5×10-4,而对照细胞FL和FL-M分别为4.9×10-4和3.7×10-4 .同时,质粒在接触过MNNG的FL-POLΗ-细胞中复制,其SupF tRNA基因的非定标性突变频率不发生.结论:POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用,且参与哺乳动物细胞中MNNG引起的非定标性突变.
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低浓度MNNG激活转录因子
目的:为了进一步研究N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)引起的非定标性突变的发生机制,观察了低浓度MNNG对转录因子NF-κB、CREB、AP-1和c-Myc的影响.方法:采用分泌型碱性磷酸酶报告基因和瞬时转染实验检测转录因子活性.结果:经0.2 μmol/L MNNG处理后,转录因子CREB活性是溶剂对照组的1.4倍(P<0.05),AP-1和NF-κB活性均为溶剂对照组的1.3倍(P<0.05);而c-Myc的活性在对照组和MNNG处理组都较低.结论:低浓度MNNG可以激活转录因子AP-1、CREB和NF-κB,对c-Myc则无明显激活作用,提示一些转录因子的激活可能参与了MNNG引起的非定标性突变发生过程.
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低浓度MNNG诱发非DNA损伤依赖的细胞信号通路
目的:研究基因组DNA损伤与细胞信号通路激活的关系以及低浓度N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对细胞膜表面受体的影响.方法:采用ELISA法来检测蛋白激酶A(PKA)的活性,不连续梯度密度离心法完成细胞脱核,以及免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察细胞表面受体聚集情况.结果:0.2 μmol/L MNNG能在脱核细胞中引起PKA活性升高2.3倍,并可在5 min内引起vero细胞表面生长因子受体和肿瘤坏死因子α受体的聚集;在脱核细胞中,表面受体聚集现象与在完整细胞中一样.结论:低浓度MNNG对PKA的激活和诱导细胞表面受体聚集均不依赖于基因组DNA的损伤,表明细胞信号转导通路的起源可能位于细胞膜或者细胞质中.
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人REV3基因启动子区的克隆和生物信息学分析及其对MNNG的反应
目的:了解人REV3基因对化学致癌物N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱发转录上调的机制.方法:根据BLAST序列比对、启动子和转录因子结合部位预测软件,对人REV3基因促进子区进行生物信息学分析;用巢式PCR技术克隆了人REV3基因启动子区;用瞬时转染二重荧光素酶报道基因系统检测人REV3启动子对化学致癌物MNNG的反应.结果:生物信息学分析显示,人REV3基因启动子区位于6号染色体PAC克隆RP3-415N12,假设的启动子区有启动子序列、富含CpG岛和包括AP-1/c-Jun/c-Fos、AP-2、STAT、CREBP和NF-κB等的转录因子识别部位.将启动子区2 582 bp的片段插入荧光素酶报道基因载体pGL3-Basic中,构建了重组体质粒pGL3-2582.瞬时转染检测显示,该假设的启动子区确有启动子功能,对MNNG发生反应.结论:成功地克隆了人REV3基因启动子区,并证明其对MNNG发生反应.提示当细胞处于基因毒应激状态下可在转录水平调节REV3基因.
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涂层支架的研究进展
经皮冠状动脉内气囊血管成形术后常产生支架内再狭窄的问题,目前采用不同涂层技术研制各种涂层支架以对抗支架内再狭窄.
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腹腔镜肾上腺切除术38例治疗体会
目的:评估腹腔镜肾上腺切除术疗效.方法:施行腹腔镜肾上腺切除术38例(经腹腔33例,经腹膜后 5例).男17例,女21例,平均年龄46岁.病变包括醛固酮症、皮质醇症、嗜铬细胞瘤、无功能肿瘤等.肿瘤平均直径3.1 cm.结果:手术成功37例.平均手术时间157 min.平均术后住院4.7 d.并发症包括改开放手术 1例、腹腔内血肿 1例和皮下气肿 6例.术后平均随访10.3个月,疗效良好.结论:腹腔镜肾上腺切除术式安全、有效、创伤小,可成为治疗肾上腺良性肿瘤的标准方法.
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不同静脉麻醉药物对心瓣膜置换术患者IL-6、IL-8、IL-10的影响
目的:观察咪唑安定和异丙酚对体外循环(CPB)心瓣膜置换术围术期IL-6、IL-8、IL-10的影响.方法:将20例择期行CPB心瓣膜置换术的风湿性心脏病患者随机分为咪唑安定组(M组)和异丙酚组(P组),每组10例.麻醉诱导M组用咪唑安定0.06～0.10 mg/kg,P组用异丙酚1.00～1.50 mg/kg静注,其余均用东莨菪碱、芬太尼、维库溴铵、利多卡因诱导,麻醉维持除用芬太尼、维库溴铵间断静注外,M组分次追加咪唑安定0.04～0.1 mg/kg,P组静注异丙酚3～5 mg/kg*h-1.分别在麻醉前(T1)、腔静脉插管时(T2)、主动脉阻断后30 min(T3)、主动脉开放后10 min(T4)、1 h(T5)、2 h(T6)、4 h(T7)、24 h(T8)从桡动脉采血,测定hct、IL-6、IL-8、IL-10.结果:与T1相比,3组患者T4～T7外周血IL-6、IL-8、IL-10明显升高(P＜0.01),分别于T5、T6、T5达峰值;P组T7时IL-8值明显低于同时点的M组(P＜0.05);而T4～T6时IL-10则显著高于同时点的M组(P＜0.05或P＜0.01).结论:与咪唑安定麻醉相比,异丙酚麻醉能减轻CPB心瓣膜置换术患者围术期IL-8反应和增加IL-10释放.
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入院心电图对急性前壁心肌梗死时左前降支近段急性闭塞的预测
目的:评价入院心电图在急性前壁心肌梗死时预测左前降支(LAD)近段急性闭塞的价值.方法:回顾性分析37例急性前壁心肌梗死并行急诊PTCA或入院2周内行冠脉造影患者的入院心电图和冠脉造影结果.结果:LAD近段急性闭塞组下壁导联ST段压低幅度和aVL导联ST段抬高幅度均较LAD中远段急性闭塞组明显(P<0.01).Ⅲ导联ST段压低和aVL导联ST段抬高经单因素线性回归分析呈负相关(r=-0.80,P=0.001).下壁导联ST段压低和aVL导联ST段抬高对LAD近段急性闭塞的特异性高于敏感性.结论:急性前壁心肌梗死时入院心电图的下壁ST段压低和aVL导联ST段抬高提示左前降支在第一对角支分叉近侧段的急性闭塞.
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多瑞吉用于妇科术后镇痛的临床研究
目的:评价多瑞吉用于妇科术后镇痛的安全性和有效性.方法:将45例行子宫次全切除的患者随机分成3组,T组粘贴多瑞吉(25 μg/h),C组按需肌注度冷丁2 mg/kg,E组采用硬膜外患者自控镇痛.术后2、4、12、24、48 h进行模糊视觉疼痛评分(VAS)法评分,监测患者的心率、呼吸、血压及脉搏氧饱和度,并记录副反应.结果:T组无1例加用度冷丁,T组和E 组术后2、12和24 h的VAS分值均明显低于C组(P<0.05).T组的呼吸频率偏慢(P<0.05).T组恶心呕吐的发生率明显高于其它两组(P<0.05).结论:多瑞吉用于妇科患者术后镇痛,持续、有效,使用方便,但在使用期间要密切注意呼吸频率.
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化学诱变剂诱发基因非定标性突变的分子机理研究
应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系,证明化学诱变剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中(非定标性突变),并有突变谱特征和突变好发的序列特异性.它的发生在于化学诱变剂诱发的基因表达改变.应用mRNA差异显示和反义核酸技术分离到2个基因表达序列标识,阻断其相关基因表达,可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变.应用蛋白质组学技术发现有60多个蛋白质斑点在MNNG处理后发生了显著变化,根据肽质指纹图对其中大部分蛋白作了鉴定,发现了很多新的参与应答的蛋白质.用体外DNA复制技术证明,其发生基础是化学诱变剂引发细胞DNA复制保真度的下降,而细胞错配修复功能未发现异常,但DNA聚合酶酶谱发生改变.用反义核酸技术,证明POL ζ、POL κ和POL η可能参与非定标性突变形成.其发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活,提示细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生.研究还证明调节POL β表达的cAMP-PKA-CREB通路在MNNG处理后激活;MNNG还可诱发细胞表面受体的聚簇,但其发生并不依赖于MNNG对基因组DNA 的损伤作用.提出了哺乳细胞非定标性突变形成分子机制的工作假说.
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原发性下丘脑淋巴瘤一例
原发性中枢神经系统淋巴瘤(primary central nervous system lymphoma, PCNSL)临床上较少见,仅占中枢神经系统肿瘤的0.3%～1.5%[1],而位于下丘脑的则更罕见,本院于2002年10月收治1例,经手术及病理证实,现报道如下.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
