hβ-CGRP预孵育对H2O2致心肌细胞内游离钙离子浓度增加的影响

目的 研究人降钙素基因相关肽(hβ-CGRP)预孵育对过氧化氢(H2O2)致培养乳鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度增加的影响.方法 采用离子荧光数字成像技术,分别测定在有钙和无钙环境中细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i).结果 H2O2(0.3、0.5、1.0 mmo/L)于10 min内呈浓度依赖性地引起细胞内游离钙离子浓度的增加(P＜0.01),但在有钙或无钙条件下增加幅度的差异无显著性意义(P＞0.05).hβ-CGRP(1、10、100 nmol/L)预孵育对静息状态细胞内钙离子浓度无明显影响(P＞0.05),但能够呈剂量依赖性使H2O2引起的细胞内游离钙离子浓度的增加幅度降低(P＜0.05),且在有钙环境和无钙环境中,其抑制作用差异无显著性意义(P＞0.05).结论 hβ-CGRP预孵育能抑制H2O2引起的细胞内钙的增加,这可能与抑制胞内钙库的释放有关.

10 人丙型肝炎病毒NS5A蛋白通过改变细胞内钙离子水平介导氧化刺激而激活STAT3和NF-κB

体外冲击波碎石术对肾细胞内钙水平和肾细胞凋亡的影响

三七皂甙治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究

目的探讨三七皂甙对脑细胞的保护作用.方法用新型钙染色剂Indo-1/Am检测缺氧缺血性脑病(HIE)患儿三七皂甙治疗前后细胞内钙变化,观察三七皂甙对细胞内钙超载的拮抗作用.将HIE患儿分为治疗组24例,对照组18例,同时设正常对照10例.在传统治疗的基础上,治疗组加用三七皂甙5～8 d,分别于入院时、治疗后 24 h、72 h 检测各组红细胞内游离钙(RBC[Ca2+]i)的浓度变化.结果 HIE治疗组及对照组RBC[Ca2+]i较正常足月儿升高,差异有非常显著性意义(P<0.01),HIE治疗组与HIE对照组比较,RBC[Ca2+]i在治疗前无明显差异(P>0.05),治疗后随着缺氧缺血状态的改善,检测 48 h、72 h RBC[Ca2+]i,治疗组RBC[Ca2+]i明显下降,差异有显著性意义(P<0.01),HIE治疗组自身比较,RBC[Ca2+]i在治疗 72 h 后明显下降,差异有显著性意义[(2.619±0.175) vs (2.358±0.280);P<0.01].治疗组中枢性呼吸衰竭、循环不良、胃肠功能紊乱治疗的有效率分别为 100.0%(5/5)、83.3%(20/24)、91.7%(22/24),对照组有效率分别为 20.0%(1/5)、33.3%(6/18)、16.7%(3/18),(P<0.01).结论三七皂甙能缓解细胞内钙超载,保护脑组织,改善临床症状.

邻苯二甲酸正丁酯净化白血病细胞的作用机制

目的:探讨邻苯二甲酸正丁酯通用诱导细胞凋亡来净化白血病细胞的机制.方法:用Fura-2AM方法检测邻苯二甲酸正丁酯(DBP)对白血病细胞内游离钙离子浓度的影响,用免疫组化方法检测DBP对白血病细胞c-myc和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:DBP可引起白血病细胞内钙重新分布,促进细胞外钙离子内流,升高细胞内游离钙([Ca2+]i),并下调白血病细胞c-myc和Bcl-2蛋白的表达.结论:DBP可能通过提升白血病细胞内钙离子水平启动凋亡且下调c-myc与Bcl-2蛋白表达、促进凋亡来发挥净化白血病细胞作用.

滨蒿内酯对豚鼠肥大细胞释放组胺、类胰蛋白酶及细胞内钙的影响

目的 滨蒿内酯(Soparone,Sco)通过松弛气道平滑肌、清除气道氧自由基、抑制气道炎症等多种途径起到抗炎平喘作用,该实验基于前期所做的研究工作,进一步探讨了Sco对肥大细胞(mast cells,MCs)脱颗粒及其炎症介质的释放作用的影响及可能的调控途径.方法 不同浓度的Sco(10-5、10-6和10-7 mol/L)分别作用于正常及致敏MCs,并设立正常及致敏MCs的溶剂对照组(control,asthra),比较各组MCs脱颗粒百分数、类胰蛋白酶活力、组胺释放率及MCs细胞内钙([Ca2+]i)的变化.结果 1×10-5和1×10-6 mol/L Sco组MCs脱颗粒百分数分别为(39.10±2.81)％和(11.40±2.37)％,明显低于asthma组的(78.90±4.12)％(P＜0.05),且以上Sco.组MCs的组胺和类胰蛋白酶释放亦较asthma组显著减少(P＜0.05)；在无细胞外钙条件下,不同浓度的Sco(10-5、10-6和10-7mol/L)对正常MCs [Ca2+]i的影响分别为(-12.1±2.2)％、(-6.1±2.4)％和(2.1±0.7)％,对致敏MCs[Ca2+]i的影响分别为(-75.6±2.2)％、(-33.9±2.5)％和(-4.0±0.02)％,相同浓度Sco.对正常组和致敏组MCs[Ca2+]i的降低作用的组间差异有显著性(P＜0.05).结论 Sco.可剂量依赖性抑制豚鼠MCs脱颗粒从而抑制MCs组胺及类胰蛋白酶的释放；Sco.能够抑制豚鼠正常MCs以及致敏MCs[Ca2+]i水平.

甲强龙对出血性休克大白鼠的影响

目的研究甲强龙(甲泼尼龙)对出血性休克大白鼠的影响并探讨其机制.方法大白鼠经动脉放血,造成失血性休克模型,随后用自体血和生理盐水从静脉回输,进行复苏.复苏前大白鼠随机分成三组:假休克组,休克组和甲强龙治疗组.结果复苏后72 h,休克组的生存率降至20%,而甲强龙治疗组的生存率达80%,差异显著(P＜0.01).复苏后18h器官病理取材,H-E染色,光镜下显示:休克组大白鼠的心、肺、肾、肝组织出现不同程度水肿、细胞变性、间质炎性细胞浸润等.甲强龙治疗组大白鼠的上述脏器的病理改变明显减轻.复苏后18 h,CK、Cr、ALT、AST、ALKP检测,休克组明显升高,而甲强龙治疗组只有轻度增高,差异非常显著(P＜0.01).复苏后2 h,肝脏枯否细胞用LPS刺激后,休克组的细胞内Ca2+浓度和TNF-α产量明显增高,而甲强龙治疗组轻度增高,差异显著(P＜0.01).结论甲强龙可以通过抑制kupffer细胞内Ca2+升高和激活,阻止TNF-α的过度产生,降低机体系统性炎症反应程度,终减轻出血性休克大白鼠脏器的损伤和降低死亡率.

青风藤醇提液及其有效成分防治吗啡戒断症状的实验研究

目的:观察青风藤醇提液及其有效成分青藤碱对吗啡成瘾后催促戒断症状、单胺类神经递质及吗啡依赖神经细胞内Ca2+的影响,研究青风藤和青藤碱的吗啡依赖戒断症状作用并探讨其机制.方法:通过吗啡依赖豚鼠离体回肠实验及吗啡依赖小鼠催促戒断实验,观察青风藤醇提液及青藤碱预先作用对吗啡依赖豚鼠离体回肠及吗啡依赖小鼠戒断症状的影响.以剂量递增法形成吗啡依赖大鼠模型,采用Rf5000双波长荧光测定法观察青风藤醇提液及青藤碱对吗啡依赖大鼠下丘脑单胺类神经递质去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的影响.建立吗啡依赖神经细胞模型,Fluo-3着染细胞后,应用流式细胞仪测定青风藤醇提液及青藤碱对神经细胞内Ca2+浓度的影响.结果:青风藤醇提液及青藤碱均能不同程度地抑制吗啡依赖豚鼠回肠的戒断性收缩反应,作用呈剂量依赖性,能显著抑制吗啡依赖小鼠的戒断反应,降低吗啡依赖大鼠戒断后骤增的单胺类神经递质.青风藤醇提液及青藤碱能使神经细胞内Ca2+浓度显著升高,抑制纳洛酮催促戒断引起的吗啡依赖神经细胞内Ca2+降低.结论:青风藤醇提液及青藤碱对吗啡依赖戒断症状具有一定治疗作用,其作用机理可能是抑制单胺类神经递质释放和调节细胞内Ca2+浓度.

PTH、细胞内钙和 CaSR 在心肌损伤中的“三角关系”

甲状旁腺激素（ parathyroid hormone ， PTH ）是甲状旁腺细胞分泌的调控机体钙磷代谢的重要激素。近年来，PTH对于心肌的毒性作用开始受到人们关注。钙敏感受体（ calcium－sensing receptor ， CaSR ）是G蛋白偶联家族成员之一，可以感受细胞外钙浓度的细微变化，并通过多种途径调节细胞内钙浓度，进而控制PTH的分泌。 CaSR在心肌细胞、肾小管上皮细胞和甲状旁腺细胞等广为表达。细胞内钙作为第二信使，参与细胞的多种功能，诸如兴奋－收缩偶联、受精等过程。高浓度的PTH、细胞内钙和高表达的CaSR，均与心肌细胞的损伤息息相关。

失血性休克后血管低反应期血管平滑肌细胞内钙与钙通道变化及其阿片受体的调控作用

目的:失血性休克后血管低反应性与血管平滑肌细胞内钙及钙通道变化的关系及其阿片受体的调控作用.方法:按以前我们报导的方法复制大鼠失血性休克及用急性酶分离法分离肠系膜动脉2-3级分支的血管平滑肌单个细胞,将细胞悬液滴加在涂有多聚赖氨酸的盖玻片上使细胞贴壁,用"全细胞”(whole-cell)膜片钳记录Ca2+通道电流.使用Fluo-3-AM为一种脂溶性钙荧光指示剂,通过共聚焦显微镜激光扫描系统检测血管平滑肌细胞[Ca2+ ]i变化.结果:1. 失血性休克血管低反应期(休克后2.5 h)大鼠肠系膜动脉平滑肌Ca2+通道活动呈抑制状态,Ca2+电流密度显著减小,Ca2+内流减少,通道开放表现低水平模式. 2.非特异性阿片受体阻断剂naloxone及δ、κ、μ阿片受体阻断剂naltrindole,Nor-BNI ,B-FNA均可以明显加强休克血管低反应期内Ca2+通道活动,使Ca2+电流密度显著增大,Ca2+ 内流增加.3.PKC阻断剂H7抑制PKC活性后各阿片受体阻断剂的上列作用显著减弱,甚至不出现增加钙通道活动的影响.证明阿片受体阻断剂的该作用是通过激活PKC信号分子引起的.4.naltrindole,N or-BNI,B-FNA及NE均可增加正常大鼠血管平滑肌[Ca2+]i,部分[Ca2+ ]i升高也表现为钙振荡现象.5.休克后3 h,给予上列药物升高血管平滑肌[Ca2+ ]i的作用也存在,但与正常动物相比,明显减弱.6.将naltrindole,Nor-BNI,B-FNA分别与NE伍用于失血性休克 3 h后的血管平滑肌,它们都能明显加强NE所致的[Ca2+]i增高,即有明显的协同作用.结论:失血性休克失代偿期Ca2+通道活动抑制,从而导致Ca2+ 转运功能障碍,这些病理变化可能与阿片受体激动有关,即阿片受体通过抑制VSMCs中的Ca2+通道活性而介导休克血管低反应性的发生.因而将阿片受体阻断剂与血管活性药物伍用,是减轻血管低反应性的有效措施之一.

缺血、谷氨酸和γ-氨基丁酸对人少突胶质细胞瘤细胞内钙的影响

DCM大鼠心室肌组织肌浆网钙泵与IP3受体表达的变化

目的:心肌病心室再构(remodeling)与细胞内钙失调控密切相关,本研究在DCM大鼠模型的基础上观察了SERCA活性、SERCA2和IP3-I受体表达的变化与DCM早期心肌再构的关系,并对ACEI和β-受体阻滞剂对以上两种受体基因表达的影响及可能机制做一分析.方法:高血压、糖尿病合并心肌病大鼠动物模型制备,采用本实验室改良的p-NPP法测定SERCA活力.半定量RT-PCR结合放射自显影测定SERCA2、IP3-I mRNA水平.结果:模型组心脏指数(LV/BW)显著高于正常对照组,提示有心肌肥厚形成,应用培多普利治疗后心脏指数回降至接近正常对照组,而康可治疗改变不明显.DCM大鼠左室心肌组织SERCA活力较正常对照组有极显著降低(P＜0.001).DCM模型组SERCA2表达较正常对照组有所降低,尤其结合动物资料按LV/BW分组,LV/BW＞2.0组SERCA2表达较LV/BW＜2.0组有显著降低(P＜0.05).培多普利与康可治疗对SERCA2表达无显著改变.IP3-I受体表达DCM模型组较正常组显著增高,LV/BW＞2.0组较LV/BW＜2.0组也有显著降低(P＜0.05),培多普利与康可治疗可逆转IP3-I受体表达的上调(P＜0.05).结论:心肌病大鼠心肌组织肥厚早期阶段SERCA活力和表达均显著下降,IP3-1型受体基因表达上调以代偿因SERCA下调造成的心肌收缩功能下降;培多普利(ACEI)和康可(β-受体阻滞剂)对SERCA表达的下调无影响,但可逆转IP3-I型受体表达的上调;ACEI对心肌肥厚的形态学改变有明显的逆转作用.

参麦注射液对急性缺氧-复氧心肌细胞凋亡的影响

目的:观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法:采用出生3天的Wastar大鼠,原代培养心肌细胞.实验分为3组:(1)正常组:心肌细胞不做任何处理,按正常条件培养(含10%胎牛血清的低糖DMEN培养液,青霉素100U/L,链霉素100 mg/L,37℃、5%CO2、91%湿度环境培养).(2)缺氧-复氧组:将心肌细胞进行缺氧-复氧处理.(3)参麦注射液组:心肌细胞复氧同时加入5 mL/L(1g/L)参麦注射液15 min.模型使用化学缺氧法,将Na2S2O4加入无糖、无氧的D-Hank's液中,制成缺氧溶液(pH 7.0-7.4),替换正常培养液使心肌细胞缺氧5min,再将缺氧液换成正常含血清培养液孵育15 min模拟再给氧,复制心肌细胞急性缺氧-复氧(anoxia-reoxygenation,A/R)模型.然后以Annexin V-FITC/PI双染色法,用流式细胞仪检测细胞早期凋亡百分率;激光扫描共聚焦显微镜观察Fluo-3负载的心肌细胞内钙离子水平的变化.

下丘脑－垂体－性腺轴在FKBP12．6缺失介导的性别差异性心肌肥大发生发展过程中的作用及其分子机制

目的：我们的前期研究发现，敲除FKBP12．6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12．6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法：手术摘除FKBP12．6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响；放射性免疫检测法（RIA）和ELISA法检测FKBP12．6敲除小鼠17β－estradiol （E2）、testosterone （T）、LHβ和FSHβ分泌变化情况；建立垂体神经元LβT2 FKBP12．6shRNA载体稳定干扰细胞系，采用Fluo3－AM荧光探针检测［ Ca2＋］ i；real－time PCR检测LHβ、FSHβ、calci－neurin（CaN）等mRNA表达变化；分离胞浆胞核蛋白，Western blot法检测CaN、MCIP1．4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果：摘除雄性FKBP12．6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生；FKBP12．6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化；血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调，表明敲除小鼠性腺轴调控增强；LβT2 FKBP12．6干扰后［ Ca2＋］ i 显著上升；性腺轴相关基因LHβ、SF－1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1．4、SERCA2的mRNA表达显著上调；胞浆中CaN和MCIP1．4蛋白水平上调；NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论：FKBP12．6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调，激活CaN／NFAT3通路，进而促进LHβ和FSHβ转录，导致下丘脑－垂体－性腺轴激活，从而诱发性别差异性心肌肥大。

LPS刺激后细胞内静态游离钙浓度[Ca2+]i升高

目的:前文已报道,Mφ细胞RAW264.7在LPS预处理后诱导了致敏和耐受,提示LPS预处理引起细胞内参与反应的信号转导分子或效应分子发生了某种变化.已知[Ca2+]i在白细胞活化中的重要性以及静态[Ca2+]i与Mφ反应性有密切关系,因此我们推测LPS预处理可能引起了静态[Ca2+]i的变化.方法:RAW264.7细胞培养条件见;细胞在置有载玻片的6孔板中完全贴壁后,LPS10ng/mL作用18 h,取玻片,Fura-2负载,测细胞内钙.结果及讨论:8批实验结果中,有7批LPS预处理后,[Ca2+]i均明显升高如下表所示:

高血压病患者脉压与细胞内胞浆游离钙、左心功能的关系

目的研究高血压患者脉压与细胞内钙,左心功能的关系.方法对58例高血压患者分别应用动态血压检测仪检测24 h动态血压及Fura-2荧光光谱法测定淋巴细胞内胞浆游离钙浓度,超声心动图测量左室收缩,舒张功能.根据脉压将病人分为两组:①脉压大组(n=32),平均脉压65 mmHg;②脉压小组(n=26),平均脉压≤65 mmHg.结果脉压与细胞内胞浆游离钙浓度呈正相关(P＜0.001).与EF斜率及E/A比值呈明显负相关(P＜0.05及P＜0.01),与收缩功能指标(EF%)无相关关系.结论高血压患者脉压大者,细胞内钙浓度增高,对心脏的损害亦更明显.

U50488对大鼠离体心心律及心肌细胞内游离钙的影响

观察选择性Kappa(κ)阿片受体激动剂U50488对大鼠离体心心律及心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的作用.结果显示:U50488可诱发心律失常并增加静息心肌细胞[Ca2+]i,U50488诱发心律失常及增加心肌细胞[Ca2+]i的作用可被选择性κ阿片受体拮抗剂Nor-binaltorphimine(Nor-BNI)及选择性磷酯酶C抑制剂U73122、新霉素及链霉素所阻断.表明心脏κ阿片受体激活所致的心律失常是由于磷酸肌醇信号传导通路激活引起心肌细胞[Ca2+]i增多所致.

Ghrelin对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:研究Ghrelin对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)内游离钙离子浓度的影响,并揭示Ghrelin血管活性的调节机制.方法:组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs,Western blot验证生长激素促泌素受体(GHS-R1a)在VSMCs中的表达.钙荧光染料furo-2 AM标记VSMCs,高速钙离子成像分析系统检测Ghrelin对静息状态胞内钙荧光强度(FI)的影响,并观察Ghrelin对KCl和AngⅡ增强胞内钙FI作用的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536和GHS-R1a拮抗剂(D-Lys3)-GHRP-6对Ghrelin作用的影响.结果:GHS-R1a在VSMCs内有表达.Ghrelin本身对VSMCs内钙FI无作用,也不能抑制KCl引起的VSMCs内钙FI升高,但可抑制AngⅡ引起的VSMCs内钙FI升高,而这种抑制作用可被Sq22536和GHS-R1a逆转.结论:Ghrelin可抑制由AngⅡ引起的大鼠主动脉VSMCs胞内钙离子的升高,机制可能和激活cAMP/PKA信号通路有关.

1,25(OH)2D3对骨代谢的影响

维生素D代谢物1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]是体内生物活性强的维生素D活性形式,通过对成骨细胞和破骨细胞的作用,参与骨形成和骨吸收的代谢调节.维生素D受体(VDR)是一种核受体超家族的成员,其主要介导维生素D对靶细胞的生物效用.VDR不仅分布于与骨、钙代谢有关的小肠、肾和骨等组织,还存在于脑、肝、皮肤、牙齿等器官;同时促进其对钙、磷的吸收.1,25(OH)2D3与受体结合激活基因组时先由维生素D结合蛋白(DBP)将其转运到各靶器官组织,与靶器官及组织中的VDR结合,再与视黄醛X受体(RXR)形成杂二聚体,后与维生素D反应元件(VDRE)结合,对靶基因的转录和翻译进行调控,且只调节含有VDRE的基因,进而实现其生物学功能.1,25(OH)2D3亦介导快速反应,其反应时间仅几秒钟.如肠细胞、破骨细胞、甲状旁腺组织及胰岛β细胞均有这种快速反应.它通过与膜表面受体相互作用,刺激蛋白激酶C,进而使细胞内钙浓度升高,然后刺激丝裂原活化的蛋白激酶(MAP)引起基因效应.VDR功能本质上反映了1,25(OH)2D3的功能,其不仅存在于成骨细胞,而且也存在于破骨细胞[1].位于骨组织上的VDR作用是双向的,成骨细胞上的VDR可调节而位于破骨细胞上的VDR,可抑制其增殖亦可促进其分化.从而对骨的合成和分解代谢起着双向调节作用,而该双向作用的取向则取决于维生素D的含量.正常的骨再建过程依赖于骨吸收和骨形成过程的动态平衡,而这一过程又分别与破骨细胞和成骨细胞的功能密切相关.

护心卫士

目前,绞股蓝总皂甙对心血管系统的药理作用已得到肯定,因此,它作为新药已经正式上市.众所周知,休克、心脏骤停、心肌梗死后,如果恢复血液供给,会因为自由基的增加、细胞内钙的含量异常增多、微血管损伤和白细胞的作用,造成缺血组织的进一步损伤.