人精子荧光原位杂交技术与男性不育

研究人类精子染色体非整倍体是当今生殖医学领域的又一热点.早在1978年人们就用去透明带的仓鼠卵做精子穿透试验,进行精子非整倍体的研究,此项研究方法学复杂,不适合大样本量研究.近十年来应用荧光原位杂交(fluores-cence in situ hybridization,FISH)技术可以对成千上万条精子进行检测,大大促进了精子非整倍体的研究.这项技术已用于许多男性不育的非整倍体率的研究.初的研究使用单色探针,其缺陷是不能区分精子染色体二体和二倍体.双色FISH就可鉴别二体和二倍体精子,近来的研究采用多色FISH,同时对精子的多条染色体进行非整倍体的研究,能够更全面地了解非整倍体率与男性不育的关系.

用肽核酸快速检验、鉴定和计数瓶装水中的铜绿假单胞菌

Stender H.等人在2000年11月美国出版的《微生物方法杂志》上，介绍了一种新的同时检测、鉴定和计数铜绿假单胞菌的CISH (Chemiluminescent in situ hybridization)方法，该方法已经研究成功。这种检验方法用一个工作日就可以完成上述工作。用大豆过氧化酶标记的肽核酸(Peptide nucleic acid,PNA)为探针结合铜绿假单胞菌的种特异性rRNA，单个的铜绿假单胞菌菌落标记5小时后，可直接在滤膜上找到。每种微生物的过氧化酶作用物都会发光，这个现象可以通过胶片或数码相机系统看到。每一个光点都是一个铜绿假单胞菌。通过对28株铜绿假单胞菌和17株其他菌包括种属关系非常相近的菌的实验证实，该方法的灵敏度和特异性均为100%。而且，铜绿假单胞菌可通过发光点进行计数。作者认为PNA CISH发光法与传统的薄膜过滤技术相比，PNA探针特异性技术使实验结果又快又准确。(王晓玲供稿　郑云雁校)

Objective: To explore the strengthening of acupuncture analgesic mechanism on the level of β-endorphin and proopimelanocortin mRNA expression in the arcuate nucleus of hypothalamus in rats following electroacupuncture(EA) combined with melatonin (MEL). Methods: Integrated optical density (IOD) was measured by ABC immuno-histochemical and in situ hybridization technique with computerized image processing. The rat's brain was coronally sectioned after combination of EA and MEL. Results: IOD of β-endorphin-like immunopositive substance in rat's brain was lowered significantly, which was measured after MEL (60 mg/kg) was injected intraperitoneally and followed by EA 30 min later for 30 min, and the IOD of cerebral POMC mRNA positive substance increased significantly 10 hrs later. Conclusion:The mechanism of MEL in enhancing EA analgesic effect might be related with the release and synthesis of β-endorphin

胃癌中Her-2/neu过表达与基因扩增及其意义

Her-2/neu基因编码的相对分子质量185 000的蛋白质(P185)能加速细胞运动,促进癌细胞转移.已证实有Her-2/neu基因扩增的乳腺癌患者(约占乳腺癌患者25%)手术后易复发,生存期短并对常用的化疗药物如环磷酰胺、5-氟尿嘧啶等不敏感[1,2].本项研究的目的是通过双色荧光原位杂交(dual color fluorescence in situ hybridization,FISH)技术和免疫组织化学技术检测各类型胃癌细胞中Her-2/neu基因数量及蛋白表达并探讨其临床意义.

比较基因组杂交应用于结直肠癌检测中的质量控制

比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)是在染色体荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)基础上发展起来的一种新的分子细胞遗传学技术,与其他肿瘤细胞遗传学方法相比,主要的优点是无需制备肿瘤细胞的中期分裂象,对肿瘤标本没有限制,只要能得到少量基因组DNA的标本如新鲜或冻存的或石蜡包埋的癌组织、癌细胞系均可用来分析,且只经一次实验便可得到整个基因组的扩增和丢失的情况[1].

细胞和细胞核微阵列的制作及其应用

组织微阵列(TMA)又称组织芯片(tissue chip) 技术[1].基于其优点,新近学者们考虑能否将细胞也同样制成相似的阵列进行研究.我们利用打过孔的石蜡为模具,将培养悬浮的细胞和从石蜡包埋组织中提取的细胞核制成细胞和细胞核的微阵列,并将其用于荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)、mRNA原位杂交、免疫细胞化学基因蛋白的检测,证明其效果良好,具有组织微阵列的优点.

荧光原位杂交检测精子细胞膨胀成功的改良方法

近些年,在研究精子非整倍体与流产、畸形、不育及环境化学物质对人类生殖功能等影响时,荧光原位杂交(FISH)方法因适合大量间期核精子的检测得到广泛应用.因为精细胞变形成蝌蚪状时,核组蛋白被精蛋白替代,DNA以一种特殊方式被压缩、凝聚,正常情况下很难实现杂交,因此DNA去凝聚是精子杂交前期处理的关键步骤.

显色原位杂交技术在乳腺癌HER-2/neu原癌基因检测上的应用及意义

对于检测常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中HER-2/neu原癌基因的核苷酸序列技术方法而言,荧光原位杂交法(FISH)一直是公认比较敏感和经典的检测方法[1-3].而显色原位杂交法(chromogenic in situ hybridization,CISH)作为一种核酸原位分子杂交技术方法,也可用于常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中的HER-2/neu原癌基因的检测[4,5].

AIM To determine the role of Helicobacter pylori in altering gastric mucin synthesis and define how thprocess relates to H. pylori-related diseases.METHODS Analyses of human gastric tissues using immunohistochemistry and in situ hybridizatiodocument the role of H. pylori in altering the composition and distribution of gastric mucins.RESULTS These data indicate a decrease in the product of the MUC5 (MUC5AC) gene and aberraexpression of MUC6 in the surface epithelium of H. pylori-infected patients. A normal pattern was restorby H. pylori eradication. Inhibition of mucin synthesis including MUC5AC and MUCl mucins by H. pvlohas been established in vitro using biochemical and Western blot analyses. This effect is not due to inhibitiof glycosylation, but results from inhibition of synthesis of mucin core structures. In vitro experiments usiinhibitors of mucin synthesis indicate that cell surface mucins decrease adhesion of H. pylori to gastepithelial cells.CONCLUSION Inhibition of mucin synthesis by H. pylori in vivo can disrupt the protective mucous layand facilitate bacterial adhesion, which may lead to increased inflammation in thc gastric epithelium.

肝门胆管癌细胞染色体畸变的检测及意义

我们用肝门胆管癌组织新鲜标本和胆管癌细胞系(QBC939)进行染色体制片,荧光原位杂交(flurescence in situ hybridization,FISH)分析,研究肝门胆管癌瘤细胞染色体变化,报告如下.

应用间期荧光原位杂交技术探讨cyclin D1 基因在乳腺癌中的扩增

本研究将用间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization，FISH)技术研究cyclin D1基因在乳腺癌中的变化，为乳腺癌的术后治疗与预后评估提供新的生物学信息。 1．材料与方法：（1）试验材料:选取40例经手术切除治疗而病理诊断为乳腺癌的肿瘤组织，按国际TNM分期法(UICC 1988年)临床上属Ⅰ、Ⅱ期患者20例,Ⅲ、Ⅳ期患者20例。（2）细胞悬液的制备:制备单个细胞悬液，在杂交前2～4 d，将单细胞悬液滴在经处理过的玻片上，自然风干备用。(3)探针的制备：Cyclin D1探针购自Vysis公司(Fluoro-phore直接标记，呈红色)。(4)间期荧光原位杂交检测方法:玻片用100 μl RNA酶(100 μg/ml)37 ℃消化1 h，于70%甲酰胺2×SSC中(73±1)℃变性5 min后脱水，风干；同时将探针混合液(Lysis 杂交Buffer 7 μl，探针1 μl，2 μl纯净水)置(73±1)℃水浴箱内变性5 min，然后将变性探针混合液加于变性的细胞玻片上，封闭，置37 ℃温箱杂交过夜。将盖玻片取下，放入45 ℃ 50% 2×SSC甲酰胺内10 min共3次，然后再放入2×SSC液中洗10 min，后在室温放入加入0.1% NP-40的2×SSC内洗5 min和1 min（室温）凉干，加4′,6-二联脒-2-吲哚苯(DAPI)补染，在荧光显微镜下观看结果。（5）观察结果分析标准：在荧光显微镜下，选取肿瘤细胞分析，观察细胞核内荧光杂交信号并计数。每例计数100～200个细胞核。信号4～10为轻度扩增，10以上为

荧光原位杂交技术用于1;12染色体平衡易位携带者胚胎植入前遗传诊断一例分析

染色体异常已成为不孕、不育的主要原因之一.染色体平衡易位患者因其具有完整的遗传物质,故往往表型正常,但在生殖细胞发生减数分裂时可产生多种不平衡配子而导致反复自然流产、死胎、死产、新生儿死亡、畸形或智力低下的后代.胚胎植入前遗传诊断(preimplantatation genetic diagnosis,PGD)通过选择正常的胚胎植入,从而降低流产风险,获得健康的后代.本例应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术,成功对1例1;12染色体平衡易位的患者进行PGD.现报道如下.

多色探针荧光原位杂交技术用于诊断羊水细胞染色体异常

应用羊水细胞进行产前诊断,已广泛应用于临床.用间期细胞行原位杂交是检测染色体异常的新技术[1].我们应用双色X/Y计数探针,多色X/Y、13、18、21探针荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,对妊娠12～22周孕妇行羊膜腔穿刺抽取羊水细胞,诊断染色体非整倍体和胎儿性别,现将结果报道如下.

荧光原位杂交技术在产前诊断中应用的专家共识

目前，G显带的染色体核型分析技术仍然是细胞遗传学产前诊断的“金标准”，但该技术具有细胞培养耗时长以及耗费人力的局限性。随着分子细胞遗传学的发展，新的实验方法不断出现，并逐步走向临床，目前，在临床工作中已开展的有荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）、荧光定量PCR（QF-PCR）、多重连接探针扩增技术（multiplex ligation dependent probe amplification, MLPA）、产前液相芯片技术（BACs-on-Beads, BoBs）等技术。这些分子遗传学诊断技术无需细胞培养，分析周期短，可以快速检出胎儿常见的染色体非整倍体异常，显示出高通量、快速、易于大规模开展的优势，对于解决当前以细胞遗传学核型分析为主流技术的产前诊断技术服务能力不足、诊断周期长等问题具有重要的现实意义。FISH技术是利用荧光标记的特异性寡核苷酸片段作为探针，与染色体、细胞或组织中的核酸按照碱基互补配对原则进行杂交，通过荧光系统检测，对待测DNA进行定性或相对定位分析。相对于传统的核型分析技术， FISH技术具有快速及特异性高的优点。更由于其直观性，成为众多遗传学诊断技术的有效验证方法，具有广阔的应用前景。

多色探针荧光原位杂交技术用于染色体疾病的诊断

荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术是近几年来由细胞遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合而产生的一种新技术，克服了使用单一细胞遗传学技术的局限性，故在产前诊断、基因定位、肿瘤细胞学、临床遗传病检测等领域中显示出重要应用价值［1，2］。我们将多色探针FISH用于染色体疾病的诊断，取得了良好效果，现报告如下。

荧光原位杂交技术分析足月小样儿染色体畸变一例

患儿男,足月小样儿,胎龄40周,出生体重2200 g,头围28cm,身长45cm.患儿呈现小颅、扁平脸、宽额,小眼且睑裂狭小,耳小低位,小鼻.鼻梁较低且鼻根宽大.全身体格检查未发现明显异常,超声检查未见内脏异常,初步怀疑患儿可能存在染色体异常.染色体核型分析显示患儿父亲为46,XY,t(10;15)(q25;q26),为表型正常的相互易位携带者;患儿母亲为46,XX,核型正常;患儿核型为46,XY,-15.+der(15)t(10;15)(q25;q26)pat.为了寻找染色体易位断点,选择位于10q24的RP11-170O19探针和位于10q26.2的RP11-31A20探针进行荧光原位杂交(nuorescence in situ hybridization,FISH)分析.结果显示RP11-170O19探针与两条10号染色体的长臂均有杂交,RP11-31A20探针除与两条10号染色体的长臂均有杂交外,还与衍生的15号染色体长臂有杂交.

BACs-on-Beads：一种快速可靠的产前诊断技术

传统的细胞遗传学分析方法主要为体外细胞培养及染色体核型分析，可以准确检测出染色体非整倍体以及染色体倒位、易位、大于5 Mb的重复和缺失等结构异常[1]，但完成该过程需7~10 d，时间较长。随着分子遗传学技术的发展，定量荧光聚合酶链反应（quantitative fluorescence polymerase chain reaction，QF-PCR）、多重连接依赖的探针扩增（multiplex ligation-dependent probe amplifi-cation，MLPA）、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）等技术可进行快速非整倍体筛查（rapid aneuploidy testing，RAT）[1-3]。但目前这些RAT技术只针对13、18和21号染色体以及性染色体的非整倍体检测，若要检测其他染色体异常，需要进行额外操作，增加了检测成本和时间[2-5]。染色体微阵列分析（chromosomal microarray analysis，CMA）技术分为基于微阵列的比较基因组杂交（array-based comparative genomic hybridization，aCGH）技术和单核苷酸多态性微阵列（single nucleotide polymorphism array，SNP array）技术两大类，采用比较基因组杂交的方法可检测染色体微缺失和微重复[6-9]，但成本相对昂贵，且检测结果可能出现临床意义不明的拷贝数变异（copy number variant，CNV）[6,8]。

急性淋巴细胞性白血病患儿dic(8;9)(p11;q11) 染色体继发t(9;22)(q34;q11)核型异常一例

t(9;22)(q34;q11)是急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia ,ALL)中常见的原发性核型改变,其作为继发性核型异常则较少见.近来我们发现一例dic(8;9)(p11;q11)继发t(9;22)(q34;q11) 的ALL,并对其进行了间期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)的研究,证实了dic(8;9)和bcr/abl融合基因的存在.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其基因产物为p210bcr/abl,现报告如下.

婴幼儿急性白血病混合谱系白血病基因重排的研究

涉及11q23的染色体异常是造血系统肿瘤中常见的改变,可见于40%～70%的婴幼儿急性白血病(infant acute leukemia, IAL).分子水平研究揭示,此异常导致位于11q23的混合谱系白血病(mixed lineage leukemia, MLL)基因发生重排,包括易位、缺失和重复.本研究联合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)和多重逆转录聚合酶链反应(multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction, multiplex RT-PCR),对IAL中的MLL基因重排进行检测,以探讨MLL基因重排和IAL的关系,报告如下.

MicroRNA-124 (miR-124) is abundantly expressed in neurons in the mammalian central ner-vous system, and plays critical roles in the regulation of gene expression during embryonic neurogenesis and postnatal neural differentiation. However, the expression proifle of miR-124 after spinal cord injury and the underlying regulatory mechanisms are not well understood. In the present study, we examined the expression of miR-124 in mouse brain and spinal cord after spinal cord injury usingin situ hybridization. Furthermore, the expression of miR-124 was examined with quantitative RT-PCR at 1, 3 and 7 days after spinal cord injury. The miR-124 expression in neurons at the site of injury was evaluated by in situ hybridization combined with NeuN immunohistochemical staining. The miR-124 was mainly expressed in neurons through-out the brain and spinal cord. The expression of miR-124 in neurons significantly decreased within 7 days after spinal cord injury. Some of the neurons in the peri-lesion area were NeuN+/miR-124?. Moreover, the neurons distal to the peri-lesion site were NeuN+/miR-124+. These ifndings indicate that miR-124 expression in neurons is reduced after spinal cord injury, and may relfect the severity of spinal cord injury.