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ACEI、ARB阻止糖尿病肾病发展的机制
糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)三大微血管并发症之一,也是导致终末期肾脏疾病(ESRD)的一个常见病因,患者若不适当治疗,肾小球滤过率(GRF)将以每年10～14ml/min的速度下降,常在5～10年内发展至终末期肾功能衰竭,其进展速度约为其他类型肾病的14倍.DN的基本病理特征已形成共识,早期表现为肾小球"三高"、肾小球肥大,继而肾小球系膜区细胞外基质(ECM)增生,肾小管间质纤维化,后导致肾小球硬化、肾功能衰竭.对DN发病机制的研究目前已达分子水平.近年来对血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、血肾张素受体拮抗剂(ARB)类药物阻止DN发展的研究较多,本文就近期研究结果作一综述.
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肾小管间质纤维化实验动物模型的制备方法
近年来,大量临床和动物实验证明,各种原因导致的慢性肾功能衰竭与肾小管间质纤维化的关系较与肾小球损伤的关系更为密切[1].为此,有关肾小管间质纤维化(tubulointerstitial fibrosis, TIF)的研究成为近年来肾脏病学界的热点课题[2].笔者介绍一种方法简单、成功率高、病变稳定的TIF动物模型.
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肾小管间质纤维化中成纤维细胞的转化生长因子β1及其Ⅰ型受体蛋白及基因表达检测
目的:研究腺嘌呤致大鼠肾小管间质纤维化模型的肾组织成纤维细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体的表达.方法:腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,由模型肾组织培养肾间质成纤维细胞,应用免疫组化、逆转录PCR分别检测TGF-β1及其Ⅰ型受体蛋白及mRNA的表达.结果:成纤维细胞TGF-β1、TGF-β1 I 型受体免疫组化阳性;逆转录PCR可见294bp的TGF-β1及345bp的TGF-β1的Ⅰ型受体mRNA特异扩增带.结论:在肾小管间质纤维化进程中,肾间质成纤维细胞是TGF-β1的一个来源,而且也是其效应细胞,从而在TGF-β1的作用下出现增生和合成细胞外基质的效应.
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新型PPARγ 激动剂CMHX008对高脂饮食诱发的糖尿病肾病的改善作用
目的 探寻新型PPARγ激动剂CMHX008对高脂饮食诱发的糖尿病小鼠肾脏功能的影响.方法 采用高脂饮食诱发的2型糖尿病小鼠为模型,随机分为:高脂空白组(HV组)、罗格列酮组(HR组)、CMHX008组(HC组),低脂饮食喂养的小鼠给予等量溶媒作为低脂空白组(LV组).收集小鼠尿液和血清,行全自动生化分析检测;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织形态;天狼星红和Masson染色显示肾脏胶原纤维的沉积;实时荧光定量PCR检测肾小管上皮细胞表型转化相关标志物mRNA的相对表达量.结果 HR组和HC组的尿蛋白/肌酐、HC组血尿素氮和血肌酐浓度较HV组减少;HE染色发现,HR和HC组肾小管损伤较HV组明显改善;天狼星红及Masson染色显示,HR组和HC组肾脏纤维化较HV组明显减少;qPCR结果显示,HR组和HC组α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原、纤连蛋白mRNA表达较HV组明显下调,E-钙黏蛋白mRNA表达明显上调.结论 长期高脂饮食诱发的糖尿病小鼠肾脏受损,同时给予CMHX008能明显减弱肾脏的纤维化,改善肾功能的损伤.
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AG490对肾小管上皮细胞转分化影响的实验研究
目的 探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在白介素-1β(interleukin-1β IL-1β)诱导的高糖培养的人肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为高糖对照组(30 mmol·L-1);高糖(30 mmol·L-1)+IL-1β(5 μg·L-1)组;高糖(30 mmol·L-1)+IL-1β(5 μg·L-1)+AG490(10 μmol·L-1)组.分别于处理后24、48、72 h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)水平.结果 IL-1β能使高糖培养的人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β刺激的同时加入AG490干预能减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用,并使CK-18的表达回升.结论 炎症因子IL-1β能促进高糖培养的HKC发生表型转化,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断IL-1β的该作用.
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UUO大鼠肾脏CNP表达特点及其对ECM代谢的调控效应
目的 观察C型利钠肽(CNP)在单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾脏的表达特点和对细胞外基质(ECM)代谢的调控作用.方法 健康雄性8周龄Wistar大鼠24只,随机分为UUO组和假手术组并建立模型,于术后1 d和3个月处死大鼠,检测尿蛋白浓度和血清学指标,HE染色观察肾组织形态学变化,免疫组化法、荧光实时定量PCR法检测肾组织CNP、胶原IV(Col-IV)、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制因子(TIMP-1)的表达情况.结果 术后3个月,与假手术组比较,UUO组大鼠血浆白蛋白降低,肌酐、尿素氮、尿蛋白均升高(P<0.05);CNP、MMP-9、MMP-2蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05);Col-IV、TIMP-1蛋白及mRNA表达均上调(P<0.05).结论 CNP表达减少可能是引发ECM代谢失衡,终导致肾小管间质纤维化的重要原因.
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熊果酸对阿霉素肾病小鼠肾脏病变的影响
目的 研究熊果酸(ursolic acid,UA)对小鼠阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy,ADN)的影响,探讨其可能的机制.方法 40只Balb/c小鼠,随机分为正常对照组(Normal组),阿霉素肾病组(ADN组),低剂量熊果酸组(LU+ADN组),高剂量熊果酸组(HU+ADN组).单次注射阿霉素创建阿霉素肾病模型,以熊果酸为干预因素,测定尿蛋白总量,苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏病变情况,免疫组织化学法检测TGF-β1在肾小管间质中的表达.结果 1)小鼠24 h尿蛋白总量:ADN组小鼠较Normal组显著升高(P<0.05),HU+ADN组较ADN组显著下降(P<0.05).2)HE染色:ADN组出现显著的肾小管上皮细胞肿胀,管腔扩张等病变.与ADN组相比,HU+ADN组肾小管间质病变较轻.3)免疫组化染色半定量分析:①与Normal组比,ADN组肾间质表达TGF-β1显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).②与ADN组比,LU+ADN组TGF-β1表达差异无统计学意义(P>0.05);HU+ADN组小鼠TGF-β1表达显著下降,两组差异具有统计学意义(P<0.05).结论 高剂量熊果酸(50 mg/kg)可以减少阿霉素肾病小鼠的尿蛋白,抑制阿霉素肾病小鼠肾小管间质TGF-β1蛋白的表达,发挥肾脏保护作用.
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miR-155调控Wnt/β-catenin信号通路与IgAN肾小管间质纤维化的关系
目的:检测miR-155在IgA肾病(IgAN)中的表达,探讨其与患者临床病理参数的相关性及可能作用机制.方法:应用实时荧光定量PCR检测肾活检组织中miR-155的表达水平;利用脂质体介导miR-155 mimics瞬时转染人肾近曲小管上皮细胞(HK-2),通过RT-PCR和Western blot检测β-catenin、snail、fibronectin、E-cadherin的表达情况.结果:miR-155在IgAN组肾活检组织中的表达水平显著高于对照组(P＜0.01);肾活检组织中miR-155表达量与肾小管间质纤维化呈正相关关系,与肾小球滤过率呈负相关关系;体外细胞实验显示,上调miR-155表达可激活Wnt/β-catenin信号通路,间质表型标志物fibronectin表达升高,而上皮表型标志物E-cadherin表达下降.结论:miR-155的表达上调与IgAN肾小管间质纤维化密切相关,其可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路参与IgAN的进展.
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ILK在白蛋白诱导人HK-2细胞转分化中的表达和意义
目的 探讨整合素连接激酶(ILK)在白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化(TMET)过程中的表达及其意义.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞随机分为4组:1)空白对照组.仅加入DMEM/F12培养基培养细胞.2)白蛋白诱导组.加入含人纯化白蛋白的培养液,白蛋白终浓度为5cg·L-1(以下白蛋白终浓度为此浓度).3)转化生长因子-β1(TGF-β1)中和抗体对照组.加入含TGF-β1中和抗体的培养液,TGF-β1中和抗体终浓度为5 μg·L-1(以下TGF-β1中和抗体终浓度为此浓度).4)TGF-β1拮抗组.在加入人纯化白蛋白 15 min 前加入TGF-β1中和抗体.观察4组细胞形态的变化.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TGF-β1、ILK、纤维连接蛋白(FN)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)omRNA表达水平.结果空白对照组0、12、24和48 h时TGF-β1、ILK、E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达水平与TGF-β1中和抗体对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).白蛋白诱导组、TGF-β1拮抗组12、24和48 h时TGF-β1、ILK、E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达水平均明显高于同组0 h时、空白对照组和TGF-β1中和抗体对照组(均P＜0.05);TGF-β1拮抗组12、24和48 h时TGF-β1、ILK和FN mRNA表达水平均显著低于白蛋白诱导组(均P＜0.01),24、48 h时E-cadherin、α-SMA mRNA表达水平均显著低于白蛋白诱导组(均P＜0.01).相关性分析结果显示,ILK mRNA表达与TGF-β1、α-SMA和FN mRNA表达均呈正相关(r=0.944、0.974和0.989,均P＜0.01).结论白蛋白可以诱导HK-2细胞发生转分化,ILK在其中发挥促进作用.
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BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 观察骨形态发生蛋白(BMP)-7对油酸(OA)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用.方法 应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2.分别用不同浓度BMP-7(0、1、5、10、50 ng/ml)和一定浓度的OA(400 μmol/L)共刺激体外培养的HK-2 48 h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子(TGF)-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白(SMA)mRNA的表达变化.结果 BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2 中TGF-β1和α-SMA mRNA的表达(P＜0.01).结论 BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化.
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基质金属蛋白酶-9及组织抑制剂-1与肾小管间质纤维化
肾小管间质纤维化(TIF)是所有慢性肾脏疾病(CKD)进展到终末期肾病(ESRD)的共同途径,其主要病理特征为肾间质成纤维细胞的增生和细胞外基质(如Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白) 的过度积聚.
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糖尿病肾病的治疗进展
糖尿病肾病(DN)是糖尿病主要并发症,以早期肾小球高滤过、肾小球肥大,晚期肾小球系膜区细胞外基质增生、肾小管间质纤维化为特征.DN在1型糖尿病患者中占30%～40%,2型糖尿病中占20%～30%.在许多国家,DN是导致慢性肾衰的首因,我国也有这种趋势.因此,采取有效措施,防止糖尿病出现肾脏并发症至终末期肾病至关重要.
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水飞蓟素对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用
水飞蓟植物被作为一种传统药物预防肝脏纤维化广泛用于临床.肝纤维化的发生机制主要为肝脏中细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)合成与降解失衡,导致细胞外基质在肝脏内过度沉积[1].肝脏纤维化和肾脏间质纤维化的发生机理基本相似,但目前尚未见水飞蓟素用于预防肾小管间质纤维化(Tubulointersfitial fibrosis,TIF)的报道.
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肾脏纤维化能逆转吗?
肾脏纤维化是各符种肾脏疾病进展到慢性肾衰竭的共同途径和主要病理基础,其发生机制复杂,如何逆转而不是单单地预防肾脏纤维化是目前研究的热点,现就肾脏纤维化的形成、分子发病机制、逆转的研究进展进行简要概述.
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肾小管间质纤维化发病机SU的研究进展
肾小管问质纤维化(TIF)是各种原因引起的慢性肾脏疾病进行性进展的共同途径,也足这些患者预后的决定性因素.其主要病理特征是炎性细胞浸润、肾间质成纤维细胞大量增殖、细胞外基质在肾间质的过度沉积及肾单位的进行性丢失,TIF的本质是慢性进行性炎症过程.研究表明,肾小管上皮/内皮间充质细胞的转分化、物理因素以及多种化学因子的共间作用,在诱导、促进TIF过程中发挥重要作用.现就近年来关于TIF的发生、发展及主要的影响因素方面的进展作一概述.
关键词： 肾小管间质纤维化 细胞外基质 上皮/内皮间充质细胞转分化 成纤维细胞 -
肾小管间质纤维化大鼠肾脏转化生长因子-β1和纤溶酶原激活物抑制剂-1的定量分析
目的 观察肾小管间质纤维化(TIF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA及其蛋白的定量表达,探讨TGF-β1、PAI-1在TIF中的作用及二者之间的相互影响机制.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术(SOR)组和单侧输尿管梗阻手术(UUO)组.输尿管结扎后剪断制备UUO模型.分别于手术后第7、14、21天,每组各处死10只大鼠,留取手术侧.肾脏标本,采用病理、实时定量PCR、Western blotting等方法动态观察二组大鼠第7、14、21天梗阻侧肾脏组织学变化和TGF-β、PAI-1在梗阻侧肾脏中的表达情况.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.HE、Masson染色结果:SOR组术后第7、14、21天.肾脏未见纤维化改变.UUO组术后第7天肾小管上皮细胞宅泡变性,肾间质炎性反应细胞浸润,术后第14天肾脏纤维化程度加重,术后第21天呈重度纤维化.2.术后第7天开始UUO组TGF-β1 mRNA和蛋白表达量显著高于SOR组(P<0.05,0.01);术后第14天开始UUO组PAI-1 mRNA和蛋白表达量显著高于SOR组(P<0.05,0.01).3.相关性分析:肾小管间质损害与TGF-β1、PAI-1蛋白表达量均呈显著正相关(r=0.975 P<0.01;r=0.801 P<0.05);肾脏TGF-β1表达量与PAI-1呈显著正相关(r=0.937 P<0.01).结论 TGF-β1、PAI-1足肾间质纤维化形成促进因素之一.TGF-β1诱导PAI-1过度表达,PAI-1是TGF-β1的下游靶基因之一,PAI-1也可影响TGF-β1的表达,二者共同促进肾脏纤维化形成.
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转化生长因子-β与肾脏固有细胞表型转分化
转化生长因子-β(TGF-β)是诱导肾脏固有细胞向肌纤维母细胞(MFb)转分化的重要效应分子.MFb通过大量表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞外基质(ECM)而参与肾小管间质纤维化(TIF)及肾小球硬化(GS).适时阻断这些进程有望成为治疗增殖性肾脏疾病的新靶点.
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PAX2在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化中的作用
目的 通过检测PAX2和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织中的表达,探讨PAX2在肾小管间质纤维化中的作用机制.方法 雄性6周龄Wistar大鼠48只随机分为模型组和对照组,每组各24只.模型组在无菌条件下于左侧背部肋下切口行左侧输尿管结扎术,对照组只探及肾包膜,不结扎输尿管.于造模第7、14、21、28天各处死大鼠6只,取其左侧肾脏组织行HE和Masson染色检测肾脏病理改变,计算肾小管间质纤维化指数.采用实时荧光定量PCR检测其肾组织PAX2 mRNA表达,免疫组织化学方法 检测其肾脏组织PAX2及α-SMA蛋白表达.结果 1.病理结果 显示:对照组各时间点肾小管及间质均无明显变化.随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾小管间质纤维化指数逐渐增高(Pa<0.01).2.对照组大鼠肾组织仅有少量PAX2 mRNA表达,而模型组第7天表达增高,随着梗阻时间的延长,PAX2 mRNA表达逐渐增高,于第28天达高,与对照组各时间点比较,PAX2 mRNA表达有显著性差异(Pa<0.01).3.模型组大鼠肾小管上皮细胞PAX2的蛋白表达及肾间质α-SMA的蛋白表达于第7天均增高,随梗阻时间的延长,PAX2蛋白表达及α-SMA表达逐渐增高,于第28天高,与对照组各个时间点比较有显著性差异(Pa<0.01).4.模型组大鼠肾小管上皮细胞PAX2蛋白表达与肾间质α-SMA表达呈显著正相关(r=0.880 P<0.05),PAX2蛋白及α-SMA的表达均与肾小管间质纤维化指数均呈显著正相关(r=0.886,0.918 Pa<0.05).结论 PAX2可能参与UUO大鼠模型肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,使间质中肌成纤维细胞的数量增多,引起细胞外基质积聚增加,导致了肾小管间质纤维化的发生发展.
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水飞蓟素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化的干预作用
目的 通过单侧输尿管梗阻(UUO)诱导肾小管间质纤维化(TIF)大鼠模型,探讨水飞蓟素对Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在小管间质中表达变化的影响.方法 SD大鼠72只随机分为假手术组、模型组、水飞蓟素治疗组(治疗组),各24只.模型组和治疗组采用左侧输尿管结扎术造成UUO,假手术组游离左侧输尿管而不结扎作为对照.治疗组术前24 h开始予水飞蓟素灌胃[30 mg/(kg·d),1次/d].模型组与假手组同一时间予等量9 g/L盐水灌胃.各组分别于实验第7、14、21天各处死动物8只,光镜下评价各组大鼠,TIF病理积分,免疫组织化学法检测各组肾组织中TGF-β1和Col Ⅲ表达.结果 1.治疗组第7、14、21天肾小管间质病理改变均明显轻于模型组(Pa＜0.05),但重于假手术组(Pa＜0.01);2.免疫组织化学显示治疗组肾脏TGF-β1和ColⅢ表达均明显低于模型组,却高于假手术组(Pa＜0.01).3.模型组大鼠在14、21 d时TGF-β1和ColⅢ的表达量与小管间质损伤积分呈正相关(r=0.781,0.762 Pa＜0.01).结论 水飞蓟素可能通过抑制TGF-β1过度表达,使肾间质ColⅢ沉积减少而起到保护肾脏的作用.
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肾小管间质纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9/金属蛋白酶组织抑制因子-1的表达
目的 观察肾小管间质纤维化(TIF)大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达,探讨MMP-9、TIMP-1在TIF中的作用.方法 选用SD大鼠48只.随机分为假手术组和模型组,制备单侧输尿管梗阻(UUO)模型.采用病理及免疫组织化学等方法动态观察组大鼠d7、d14、d21梗阻侧肾脏的组织学变化和MMP-9、TIMP-1在梗阻肾小管间质中表达情况.结果 各时间点假手术组TIMP-1表达量低于模型组(Pa＜0.01),MMP-9/TIMP-1表达量比值均高于模型组(Pa＜0.01).各时间点肾小管间质损害与TIMP-1表达量呈正相关(r＝0.901 P＜0.01),与MMP-9/TIMP-1比值呈负相关(r＝-0.937 P＜0.01).结论 TIMP-1可能是肾间质纤维化形成促进因素之一,并参与纤维化形成的全过程.MMP-9/TIMP-1失衡参与TIF的发生机制.
关键词： 肾小管间质纤维化 基质金属蛋白酶 金属蛋白酶类组织抑制剂 大鼠
