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减毒日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠血清IgG水平动态及其被动转移保护力研究
以紫外线照射减毒血吸虫尾蚴免疫动物已证明可获得较高的保护力,尤其是重复免疫更可使免疫小鼠获得更高的保护力[1];人们普遍认为其诱导的保护性机制可能是细胞免疫与体液免疫共同作用的结果[2-3] ,本文以紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠,动态观察IgG抗体水平并将免疫小鼠血清转移至另一组小鼠体内测定保护力,以同种品系来源的血清抗体来进一步探讨抗体在血吸虫保护性免疫机制中的作用.
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幽门螺杆菌融合蛋白UreB-Omp11在大肠杆菌中的表达与纯化
近年来,研究者发现了多种Hp的有效保护性抗原成分,UreB、Omp、Hsp、NAP等,其中尿素酶、外膜蛋白等是人们研究的焦点.但它们单独免疫动物时,获得的免疫保护效果均不理想,为克服单一抗原分子诱导的免疫保护水平偏低的问题,本研究用重叠延伸PCR法将H.pylori郑州分离株MELHP27的ureB与omp11两个基因进行融合,中间加入弹性蛋白连接肽编码序列为接头,并通过设计合适的酶切位点,将融合蛋白插入原核表达载体pMAL-c2X中,使其融合表达,为Hp多价抗原基因工程疫苗的研究奠定基础.
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普氏立克次体120 kDa表面抗原N端和C端重组蛋白的免疫原性研究
将普氏立克次体全细胞抗原和120kDa表面蛋白的N端和C端重组蛋白进行纯化,将纯化后的重组蛋白分别免疫小鼠和家兔.酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫动物血清特异性IgG,发现N端和C端重组蛋白均能有效地诱导小鼠和家兔产生较高水平的特异性IgG,C端重组蛋白刺激小鼠和家兔产生的特异性IgG水平比N端重组蛋白刺激后的特异性IgG水平高.对免疫动物的脾脏细胞作体外淋巴细胞增殖试验发现N端和C端重组蛋白均能诱导较高水平的脾淋巴细胞增殖.对免疫小鼠作足垫肿胀试验,C端重组蛋白比N端重组蛋白诱导更明显的特异性迟发型变态反应.采用RT-PCR方法检测全细胞抗原免疫小鼠脾淋巴细胞被不同抗原刺激后的细胞因子的表达,发现两个重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞均表达了IFN-γ和IL-2两种细胞因子,说明它们可以促使THO细胞向TH1细胞分化.本研究结果证明120kDa表面蛋白的N端和C端重组蛋白均具有良好的特异性体液免疫和细胞免疫原性,可以作为流行性斑疹伤寒亚单位疫苗的候选蛋白.
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热休克蛋白70肿瘤疫苗的研究进展
热休克蛋白(HSP)与免疫治疗的关系是近年来的研究热点之一.许多研究结果证实,从肿瘤组织提取HSP后免疫动物,可以诱导特异的抗肿瘤细胞CTL(cyto-toxicityT lymphocyte)反应,产生强大的杀瘤效应.HSP广泛存在于各种原核和真核细胞中.在正常生长条件下,各种细胞中HSP占细胞总蛋白含量的5%~10%,当细胞处于高温和应激情况时,HSP表达明显增高.人类各种肿瘤细胞比其相应的正常组织表达更高水平的HSP.HSP在各种属中高度保守,并与一些基本的细胞功能,如蛋白质转运、折叠和装配有关,又叫分子伴侣(molecular chaperone).根据分子量大小和氨基酸同源性可将HSP分为4组,即HSP90家族、HSP70家族、HSP60家族和低分子量HSP家族.不同的HSP存在于细胞的不同区域,因此在协助蛋白多肽的运送过程中,往往有多个HSP参与,形成一条级联传递路线.Udono H等[1]比较了Meth A瘤来源的gp96、HSP90、HSP70的免疫原性,认为gp96、HSP70的免疫原性比较高,而HSP90的免疫原性只是它们的10%.本文主要综述HSP70与肿瘤免疫的研究进展.1 HSP70的结构与作用机理
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血浆纤维蛋白原的免疫比浊法
纤维蛋白原(Fbog)的测定越来越被临床重视,因纤维蛋白原的高低与多种疾病有关,成为重要的检测项目,但目前测定纤维蛋白原的方法都不甚理想.我们用山东3V集团公司生产的免疫比浊法纤维蛋白原试剂盒较为满意,该法操作简单、迅速、敏感性高、特异性强、不受高浓度甘油三酯、球蛋白、抗坏血酸等干扰,上机手工均可,易于推广应用.现介绍如下.1 原理将纤维蛋白原作为抗质免疫动物,制成单克隆抗体,该抗体与人血浆中的纤维蛋白原在液相中相遇,立即形成抗原——抗体复合物,形成一定浊度.该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比,测定标准及标本的吸光度,即可求出其含量.
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牙周炎疫苗
国外学者[1、2、3]将各牙周炎疫苗研究深入到分子水平.以悉生大鼠(gnotobioticrat)作牙周炎模型,证明了分子量为43000的牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivilis,Pg)菌毛蛋白免疫动物能够防止牙槽骨吸收;用福尔马林处理后的Pg全细胞亦能防止由结扎诱导的猴牙槽骨吸收[1].口腔中少数微生物毒性较强,与牙周炎发生,发展密切相关,使牙周免疫防治成为可能.文章就牙周炎疫苗的相关研究现状作一简单综述.
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破伤风类毒素 CD4+T细胞表位 P2增强重组轮状病毒ΔVP8*亚单位疫苗的免疫原性
目前市面上的口服活轮状病毒疫苗Rotarix ?和RotaTeq ?疫苗,在发达国家非常有效。然而,此类疫苗的免疫原性和疗效在一些发展中国家较低。我们以前报道,在肌注免疫动物中细菌表达轮状病毒ΔVP8*亚单位疫苗候选物,具P[8]、P[4]或P[6],能特异性引发高滴度的病毒中和抗体。值得注意的是,发现P [8]ΔVP8*疫苗诱导产生的抗体既中和同型P [8]又中和异型P [4]轮状病毒毒株。为了进一步改善其疫苗的潜力,将破伤风类毒素的通用的CD4(+)T 细胞表位P2引入到P [8]或P[6]ΔVP8*。在大肠杆菌中表达所得到的重组融合蛋白具有高溶解性和高收率。在豚鼠中肌肉注射P2-P [8]ΔVP8*疫苗或P2-P [6]ΔVP8*疫苗的两种剂量(10或20微克/剂量)并加磷酸铝佐剂引起显著高的几何均值的同源性中和抗体滴度大于无P2的疫苗。有趣的是,3种剂量的P2-P [8]ΔVP8*疫苗持续在豚鼠中诱发至少6个月高水平的中和抗体应答。此外,在无菌仔猪攻击研究中,使用有毒力的人轮状病毒Wa (G1P[8])菌株口服累积腹泻评分发现3种肌内注射剂量的(50微克/剂)具有磷酸铝佐剂的P2-P[8]ΔVP8*疫苗显著的延迟腹泻的发作和显著减少腹泻的持续时间。事先服用P2-P [8]ΔVP8*疫苗可产生血清病毒中和抗体和VP4特异性的IgG抗体,服用后在猪身上可以产生高滴度的抗体和系统性的肠道病毒特异性的产γ干扰素的CD4(+) T细胞免疫应答。两种亚单位疫苗在双价配方制剂中使用可能对全世界有重要影响的G型提供抗原覆盖。