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贲门癌蛋白质组与病理分化程度的研究
目的:筛选贲门癌相关肿瘤标志.方法:IMAC3芯片及SELDI-TOF技术检测河南省林州市食管/贲门癌高发区47例贲门癌患者(贲门癌组)和50名健康人(对照组)血清标本,并对32例高、中分化腺癌(高分化组)和15例低分化腺癌(低分化组)及健康人(对照组)作了对比分析.结果:以M5908.48、M7943.64和M8938.70蛋白质组成的决策树模型对贲门癌组和对照组进行分析,测试的准确率、敏感度和特异度分别为77.3%、85.1%和70.0%.差异有统计学意义的蛋白中,相对分子质量为4 211.29、5 334.13、5 966.63、5 903.14、11 735.71、5 922.70、7 932.54、7 758.66、9 287.40和6 109.99,上调组蛋白质中,9/10相对含量在3组中比较为:对照组＜高分化组＜低分化组;相对分子质量为8 992.89、8 158.48、8 924.27、4 495.96、9 434.40、5 099.02、6 661.72、6 222.12和6 960.60下调组蛋白质中,6/9为:对照组＞低分化组＞高分化组.结论:5 908.48、7 943.64和8 938.70蛋白质组成的决策树模型可以对贲门癌进行诊断,具有较高的敏感度和特异性;上调组蛋白质在血清中的相对含量与分化程度呈负相关,下调组蛋白质与肿瘤的分化程度也明显相关.
关键词： 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 贲门 蛋白质组学 -
食管与贲门双源癌蛋白质指纹模型的建立及肿瘤标志的筛选
目的:建立食管与贲门双源癌的蛋白质组指纹诊断模型,筛选食管贲门双源癌相关蛋白,为建立食管贲门双源癌肿瘤标志提供理论基础.方法:采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)技术对19例食管贲门双源癌(双源癌组)和50位健康人(对照组)的血清进行蛋白质组的对比研究.根据差异性蛋白质的质核比(相对分子质量)从SWISS-PROT蛋白质数据库中筛选并确定相关候选蛋白和基因.并通过RT-PCR方法进一步分析这些关键候选基因在食管贲门双源癌组织中表达变化特征.结果:以相对分子质量2.866 21×103、5.103 30×103、6.597 65×103、7.931 55×103、9.311 96×103和4.113 99×103的6种蛋白质组成的决策树模型对双源癌组诊断的准确率、敏感度和特异度分别为78.26%、73.68%和80%.相对分子质量为5.340 52×103和5.921 32×103的蛋白质查询结果为COX7c及Beta-defensin-1-2-3,在双源癌的食管癌组织和贲门癌组织的阳性率分别为60%(3/5)、60%(3/5)、60%(3/5)和40%(2/5),对照组食管和贲门正常上皮组织均为阴性.结论:以相对分子质量2.866 21×103、5.103 30×103、6.597 65×103、7.931 55×103、9.311 96×103和4.113 99×103的6种蛋白质组成的决策树模型,可作为食管贲门双源癌的蛋白诊断模型,COX7c及Beta-defensin-1-2-3与食管贲门双源癌密切相关,为食管贲门双源癌肿瘤标志筛选提供重要线索.
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双向凝胶电泳飞行时间质谱技术筛选食管癌相关蛋白
目的:建立分辨率高和重复性好的人食管癌组织及其癌旁正常上皮组织的双向凝胶电泳分析方法,并筛选食管癌相关蛋白质.方法:选取10例食管癌及其癌旁正常上皮组织,提取总蛋白质进行双向凝胶电泳分析,并采用Blue silver法染色.凝胶图像分析后,对差异蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析.结果:在所鉴定的6个差异蛋白质在中,磷酸丙糖异构酶1、锰超氧化物歧化酶和热休克蛋白27在食管癌组织中表达上调,而鳞状细胞癌抗原1、细胞角蛋白4和膜联蛋白Ⅰ在食管癌中表达下调.结论:所鉴定的这些差异蛋白将为阐明食管癌发生机制提供线索,也为寻找食管癌潜在标志奠定理论基础.
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人胃癌原发灶与淋巴结转移灶的差异蛋白质组学研究
目的：利用比较蛋白质组学技术识别并鉴定胃癌原发灶与淋巴结转移灶中的差异表达蛋白质，筛选特异性的转移相关蛋白，探讨胃癌淋巴结转移的分子机制。方法将前期应用二维差异凝胶电泳技术（DIGE）获取人胃癌原发灶及转移灶差异蛋白表达图谱进行分析获得的11个差异表达蛋白质，运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定，得到相应的肽质量指纹图（PMF），然后搜索数据库鉴定出部分蛋白质。利用免疫组织化学技术检测HSP 70在胃癌中的表达水平。结果对11个差异蛋白质点进行PMF分析后，通过Mascot软件查询鉴定出其中5个蛋白质点（HSP70的8同种型2变异体、2个伴侣蛋白、亮氨酸氨肽酶、预测假想蛋白XP_515584）。 HSP70、伴侣蛋白、亮氨酸氨肽酶的表达在原发癌灶中明显升高。免疫组织化学检测示HSP 70的表达水平随着胃癌恶性程度的增加及淋巴结的转移逐渐增加，与蛋白质组学的分析结果一致。结论人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中腺癌细胞的差异蛋白表达图谱相似，说明两者癌细胞的来源、分化程度相对一致，仅有少数蛋白质的质和量发生了明显变化，参与了淋巴结转移。其涉及细胞生理活动的各方面，与肿瘤的发生、发展等密切相关。 HSP70参与了胃癌的发生发展，其表达水平与胃癌有无淋巴结转移及恶性程度有密切关系。
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表面增强激光解吸电离飞行时间质谱蛋白质芯片筛查肺癌血清相关蛋白质及其临床意义
目的 探讨用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛查肺癌血清特异性蛋白质的临床意义.方法 应用CM-10蛋白质芯片对肺鳞状细胞癌38例,肺腺癌30例,健康对照组50例的血清样品进行蛋白质指纹图谱测定,其中34例肺癌患者进行术前和术后对比检测,用BioMarker Wizard及BioMarker pattern system分析软件对所得的数据进行处理并建立诊断模型.结果 共检测到167个蛋白质峰,筛选出2个肺癌特异蛋白质峰[质荷比(M/Z)分别为6 010、5 330]建立了诊断模型.模型的原始判别敏感度为100％,特异度为100％.交叉验证敏感度为98％,特异度为96％.肺癌术前和术后有9个差异蛋白质(P＜0.05),转移和无转移肺癌患者血清有8个差异蛋白质(P＜0.05).结论 SELDI技术在肺癌的诊断中具有较高的敏感性和特异性,可能成为一种有效的筛查手段.
关键词： 肺肿瘤 肿瘤标志 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
晚期胃癌危重患者预警蛋白质指纹不同表达时伴随指纹的分析
目的 分析晚期胃癌危重患者预警蛋白质(LGT)指纹不同表达及演变状态下,其伴随指纹的分布特点,构建其指纹库.方法 采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术、CMl0蛋白质芯片技术对入院接受手术的81例晚期胃癌患者,术前及术后1年各检测1次LCT指纹表达,根据两次检测情况分组,A组:IGT指纹由阴性向阳性演变组(25例);B组:LGT指纹由阳性向阴性演变组(15例);C组:LGT指纹持续阴性组(29例);D组:LGT指纹持续阳性组(12例).另选择12例肿瘤患者血清样本,间隔1周各检测1次,再选择5例肿瘤患者取前后2 d血清各榆测1次,以此作为影响凶素对照组.采用Biomarker Wizard 3.1软件比较LGT不同表达及演变状态下差异蛋白质组指纹的差异.结果 去除对照组中影响指纹后,A组:质荷比(M/Z)11473、11821、11664、11409、11552和11947上调.无下调的指纹.B组:M/Z878、861、874、917和3264 上调,M/Z6523、11509、11669、11413、11351和6483下调.C组和D组无有统计学意义的差异蛋白质指纹.结论 SELDI-TOF-MS技术榆测晚期胃癌患者血清捕获的M/Z 11473、11821、11664、11409、11552和11947蛋白质指纹上调,可视为晚期胃癌患者LGT指纹由阴性向阳性演变时LGT蛋白质指纹亚型;M/Z 11509、11669、11413、11351蛋白质指纹下调可视为胃癌患者LGT指纹由阳性向阴性演变时LGT蛋白质指纹亚型;M/Z 878、861、874、917和3264蛋白质指纹上调,M/Z 6523和6483蛋白质指纹下调,可视为胃癌患者LGT指纹由阳性向阴性演变时伴随的相关蛋白质组指纹;而当晚期胃癌患者LGT指纹持续阴性或者持续阳性时无相关的差异蛋白质指纹.
关键词： 胃肿瘤 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 蛋白质指纹 -
蛋白质芯片技术应用于肝癌诊断的初步研究
目的 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱( SELDI-TOF-MS)技术和蛋白质芯片从肝癌患者血清中筛选可用于肝癌诊断的标志蛋白质.方法 运用SELDI-TOF-MS技术及CM10蛋白质芯片检测46例原发性肝癌患者和64名健康人血清,获得蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件选出肝癌患者与健康人血清中的表达差异蛋白质,评价其灵敏度、特异度和诊断效能,确定佳标志蛋白质.结果 肝癌组与健康对照组血清中有16个蛋白质的表达差异在2倍以上,并且差异有统计学意义(P＜0.05).其中质荷比为6845.70的蛋白诊断效能高,其灵敏度为89.1％(41/46),特异度87.5％(56/64),且该蛋白质与肿瘤大小有相关性(r=-0.363,P＜0.05).经数据库搜索该蛋白质很可能是免疫球蛋白重链可变区片段.结论 应用SELDI-TOF-MS技术诊断肝癌,具有灵敏度高,特异性好,快速简便的优点,质荷比为6845.70的蛋白质可能是肝癌患者血清中的特异性标志物.
关键词： 肝肿瘤 诊断 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 -
食管鳞状细胞癌淋巴结转移与血清蛋白指纹图谱的相关性研究
目的 分析食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清蛋白表达谱的改变;比较有无淋巴结转移(LM)的患者血清蛋白指纹图谱,筛选与LM相关的蛋白峰.方法 术前收集64例ESCC患者和60名性别、年龄相匹配的健康成年人的血清.采用弱阳离子交换型(WCX-2)蛋白芯片为检查介质,经SELDI-TOF-MS测定蛋白指纹图谱.行有癌和无癌的对照研究;ESCC患者组内分别按性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、浸润程度和有无LM分别进行对照,得到蛋白指纹图谱并用Biomarker Wizard软件分析比较.结果 在质量/电荷(m/z)0～50000范围内,ESCC与健康成年人血清检测出120个蛋白峰,其中31个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05);不同浸润程度分组对比,T1与T3、T4比较有1个m/z是4174的差异蛋白峰(P<0.05);有无LM组间,3个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05),m/z分别为3970、4174、和4277.其中m/z为4174的蛋白峰是浸润组和LM组所共有的;年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小分组未发现差异蛋白峰.结论 ESCC患者组和健康成年人组比较,血清蛋白有显著差异;ESCC浸润程度的不同和有无LM血清蛋白指纹存在一定差异,但远较ESCC与健康成年人之间差异小;浸润程度严重和LM在血清蛋白指纹中存在着一定的共性.
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SELDI技术预测恶性肿瘤患者化疗后血糖变化的临床研究
目的 应用弱阳离子芯片结合表面增强飞行时问质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选与恶性肿瘤化疗后血糖变化情况、相关的血清蛋白质组指纹并建立预测模型.方法 应用SELDI-TOF-MS、CM10蛋白质芯片技术检测182例恶性肿瘤患者化疗前血清样本的蛋白质谱,经过2年随访按化疗后的血糖情况分为血糖正常组(136例)、糖耐量异常组(27例)和糖尿病组(19例),利用Biomarker Wizard 软件回顾性地分析比较各组间化疗前的血清蛋白质指纹图潜,Biomarker Pattern软件建市预测模型.结果 M/Z为5298和9608的两个蛋白质组成的诊断模型可将患者在化疗前准确分为糖尿病组与糖耐量异常组,灵敏度和特异度分别为81.481%(22/27)和100.00%(17/17),准确度为88.64%(39/44);M/Z为10324、2761和4084的3个蛋向质组成的诊断模型可将糖尿病组与血糖正常组准确分组,灵敏度和特异度分别为62.35%(53/85)和88.24%(15/17),准确度为66.67%(68/102);M/Z为5895、6010、6099、3930、5430和2495的6个蛋白质组成的诊断模型可将糖耐异常组与血糖正常组准确分组,灵敏度和特异度分别为77.65%(66/85)和96.30%(26/27),准确度为82.14%(92/112).结论 SELDI-TOF-MS技术筛选出恶性肿瘤化疗后3组血糖情况的化疗前的蛋白质指纹,建立血糖正常组、糖耐量异常组和糖尿病组的诊断模型,用于肿瘤患者化疗后血糖变化的早期预测.
关键词： 肿瘤 血糖 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
表面增强激光解析电离技术筛选吉非替尼治疗非小细胞肺癌优势患者的验证报告
目的 进行吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)优势患者血清蛋白质指纹验证.方法 选取服用吉非替尼治疗1个月以上并已知疗效的NSCLC患者27例,按实体瘤疗效评价标准分为完全缓解+部分缓解(CR+PR)、稳定(SD)、进展(PD)三种疗效患者.所有患者在服用吉非替尼前均行表面增强激光解析电离(SELDI)检查,以M/Z:8693±50H+为筛选依据,根据其丰度分成优势患者组(丰度≤10%)10例,劣势患者组(丰度≥30%)7例,疑似组A(丰度:11%～15%)5例,疑似组B(丰度:16%～29%)5例.分析四组中,每组CR+PR、sD及PD患者的比例.结果 优势患者组中,CR+PR患者占9/10,SD患者占1/10,PD患者为0;劣势患者组中.CR+PR患者占1/7,SD患者占1/7,PD患者占5/7;疑似组A中,CR+PR患者占3/5,sD、PD患者各占1/5;疑似组B中,CR+PR患者占3/5,SD、PD患者各占1/5.结论 经SELDI检测,蛋白质指纹图谱符合M/Z:8693±50H+丰度≤10%可以作为吉非替尼治疗NSCLC优势患者的筛选指标.
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表面增强激光解吸技术预测胃癌术后转移复发的临床研究
目的 应用表面增强激光解吸(SELDI)技术筛选胃癌术后转移相关的血清蛋白质组指纹并建立预测模型.方法 应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测60例胃癌根治术后患者和26名健康对照血清样本的蛋白质谱,经过2年随访分为转移组(22例)和无转移组(38例),利用Biomarker Wizard软件比较各组间的血清蛋白质指纹图谱,Biomarker Pattern软件建立预测模型.结果 术后转移患者和健康对照相比有74个蛋白质峰差异有统计学意义,术后无转移患者和健康对照相比有69个蛋白质峰差异有统计学意义,术后转移患者和无转移患者相比有14个蛋白质峰有显著性差异,质荷比(m/z)为4768和8841的两个蛋白质组成的诊断模型可将无转移胃癌患者与转移胃癌患者准确的分组,在学习模式下,灵敏度和特异度分别为95.46%(21/22),86.84%(33/38),准确度为90%(54/60).在测试模式下,灵敏度和特异度分别为81.82%(18/22)和84.21%(32/38),准确度为83.33%(50/60).结论 SELDI-TOF-MS技术可筛选出胃癌转移复发相关的蛋白质组指纹,在m/z为4768和8841的两个蛋白质峰建立的决策树模型可用于对术后胃癌患者转移、复发的早期预测.
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蛋白质飞行质谱技术在原发性肝癌诊断中的应用
目的 研究原发性肝癌患者与健康人血清蛋白质表达的差异性,寻找对原发性肝癌更有效的肿瘤诊断标志物.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术榆测50例原发性肝癌患者、50名健康对照者血清中的蛋白质谱,寻找有意义的蛋白质谱.同时采用双抗体夹心法检测血清甲胎蛋白(AFP).结果 原发性肝癌患者血清4个蛋白质峰与健康对照组比较差异有统计学意义.分别为:3354.71,8825.80(高表达),4345.08,13 715.01(低表达).从中筛选出质荷比(M/Z)分别为3354.71、8825.80差别显著的蛋白质峰,使用这两个蛋白质峰作为原发性肝癌的诊断模式,其灵敏度、特异度分别为90%(45/50),94%(47/50).100例患者中,AFP阳性27例,灵敏度为54%(27/50),特异度为100%(30/30).结论 SELDI-TOF-MS蛋门质芯片技术在原发性肝癌的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志的筛选中具有一定的价值,灵敏度和特异度较高,操作简单,正确诊断指数(r=83)优于AFP(r=53).
关键词： 肝肿瘤 蛋白质组学 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 -
散发性肌萎缩侧索硬化单核苷酸多态位点质谱分型及疾病易患性关联分析
目的 肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是由上、下运动神经元进行性丢失引起的一种致死性疾病,散发性ALS(SALS)近90%,目前认为是一种复杂性疾病.已有数个ALS全基因组关联分析研究先后报道了若干与增加ALS发病风险相关的单核苷酸多态(SNP)位点,但亚洲人资料较少.我们将筛查与增加中国人SALS致病风险相关的SNP.方法 提取样本外周血基因组DNA,进行病例组和对照组年龄、性别匹配,质谱法分型筛选出的SNP位点并进行关联分析.结果 完成86例SALS患者与94名对照者rs6700125、rs10260404、rs1942239、rs2279812、rs2405657、rs558889、rs6922711、rs9351470等8个SNP位点的基因分型,统计分析后两组差异无统计学意义.合并Cronin等研究数据后rs1942239(邻近基因GALNT1)的P值减小(由1.48×10-4减少为9.07×10-5),关联性增强.rs558889的病例组基因频率偏离Hardy-Weinberg平衡,可能存在关联.结论 rs1942239和rs558889两个SNP可能与增加中国人SALS致病风险相关,与rs1942239邻近的GALNT1基因和rs558889附近的ANK1基因值得进一步研究.
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颅脑创伤后亚低温脑保护的蛋白质组研究
目的 本研究应用差异蛋白质组学技术,探讨亚低温和常温条件下,创伤性颅脑损伤大鼠海马组织蛋白质的表达变化.方法 采用侧方液压冲击装置,建立大鼠中度脑损伤模型,亚低温组(n=3)于伤后维持体温(33±0.5)℃持续3h,常温组(n=3)始终维持体温(37±0.5)℃.取大鼠海马组织,通过差异荧光双向凝胶电泳、分离蛋白,获得二维的蛋白质分离图谱,然后通过胶内酶切、抽提酶解肽段、基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析差异的蛋白质点,鉴定出变化的蛋白质.结果 通过DeCyder5.0(GE Healthcare)软件分析报告发现差异1.5倍以上的蛋白点17个(P＜0.05).通过对这些蛋白考染点进行质谱鉴定,鉴定出14个蛋白质,2个为同一种蛋白,实际差异蛋白数为13个.分别是细胞骨架蛋白、介导能量代谢的酶类、参与核酸合成、氧化应激反应的蛋白质、神经突触功能蛋白、细胞内信号传递蛋白及未知蛋白.结论 脑损伤后亚低温及常温条件下,大鼠海马组织蛋白质存在表达差异,鉴定出的差异蛋白质可能与亚低温保护效应的潜在作用机制有关.
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脑创伤早期血清差异蛋白筛选与诊断
目的 应用表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorptionionization time-of-fight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术筛选重型颅脑创伤(severe traumatic brain injury,sTBI)患者早期血清差异表达蛋白,初步建立sTBI患者早期血清蛋白诊断指纹图谱.方法 获取临床收住院早期未接受药物干预治疗的重型颅脑创伤患者(GCS 3～8分)与健康体检者血清样本,根据从创伤到入住院时间间隔将病人血清分为≤1h、1-3 h和＞3-8 h组,分别混合各组血清样本取消个体差异,利用弱阳离子芯片CM10经质谱分析血清中差异表达蛋白,根据检测结果初步分析建立sTBI病人早期血清蛋白诊断指纹图谱.结果 样品血清中共获得71个有效蛋白质峰,有7个峰与对照组比较有差异,其中m/z 4210、m/z 7116和m/z 7320在3组病人中均显著升高(P＜0.05);m/z 4977和m/z 8719在3组中均显著降低(P＜0.05);m/z 4679的升高出现在1-3 h和＞3-8 h组;m/z 9431的升高只出现＞3-8h 组.结论 应用SELDI-TOF-MS技术可寻找到多种血清差异蛋白表达,这些蛋白可能参与sTBI患者早期分子病理事件,它们的发现将会为临床药物筛选和(或)新药物开发提供重要参考.
关键词： 颅脑损伤 蛋白质组 光谱法 质量 基质辅助激光解析电离 -
近红外线乳腺扫描诊断88例乳腺癌临床分析
乳腺癌患者88例均用近红外线乳腺扫描进行病理组织学诊断,分析其对乳腺癌诊断的临床价值.
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甲状腺乳头状癌与转移淋巴结组织蛋白质组学差异表达分析
目的 比较甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)与转移淋巴结(lymph node,LN)组织差异表达的蛋白质,筛选与PTC淋巴结转移的相关蛋白并初步探讨其转移机制.方法 利用固相PH梯度双相凝胶电泳技术,分离PTC以及LN组织的总蛋白,建立PTC与LN组织的蛋白表达谱.用Image Master 2D Elite5.0图像分析软件,比较两种组织间蛋白表达差异,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱,对差异蛋白进行鉴定.结果 通过图像分析发现32个差异蛋白点,经质谱鉴定出膜突蛋白、锰-超氧化物岐化酶、半乳凝素-3等7种蛋白在LN中过表达.结论 PTC与LN组织间存在差异表达蛋白,这些蛋白可能通过影响肿瘤细胞的结构与代谢以及肿瘤细胞的侵袭、转移等不同的途径参与了PTC淋巴结转移的发生与发展.
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飞行时间质谱检测技术在非综合征型耳聋基因检测中的应用
目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser DesorptionIonization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术检测非综合征型耳聋患者突变基因,并用直接测序法进行验证,评估MALDI-TOF-MS在临床耳聋基因检测中的可行性.方法 采集454例非综合征型耳聋患者的外周血,提取基因组DNA,采用MALDI-TOF-MS检测常见的4个耳聋致病基因的20个位点,包括GJB2(35delG、167delT、176_191de116、235delC、299_300delAT),GJB3 (538C→T、547G→A),SLC26A4 (281C→T、589G→A、IVS7-2A→G、1174A→T、1226G→A、1229C→T、IVS15+5G→A、1975G→C、2027T→A、2162C→T、2168A→G),线粒体12S rRNA(1494C→T、1555A→G).同时应用直接测序法对上述20个位点进行检测,以验证MALDI-TOF MS的准确性.结果 454例耳聋患者中共检出166例存在致聋突变(36.56％).其中GJB2基因突变96例(21.15％),GJB3基因突变4例(0.88％),SLC26A4基因突变64例(14.10％),线粒体12S rRNA基因突变3例(0.66％).直接测序法结果与MALDI-TOF-MS结果一致,两者符合率达100％.结论 针对中国人群常见耳聋相关基因热点突变设计的MALDI-TOF-MS对非综合征型耳聋患者的突变检出率较高,与传统常用基因检测方法相比,具有检测位点多、覆盖率高、准确、高通量、低成本等特点,能够满足临床对常见耳聋基因检测的要求.
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青光眼患者血清抗视网膜抗原的抗体轮廓质谱分析
目的 比较原发性开角型青光眼(POAG)患者与正常对照(CTRL)者间的抗体轮廓差异.方法 病例对照研究.将44例POAG患者与48例CTRL者的血清分别加入到含有预洗Dyna珠-G蛋白的反应管中,以捕获人免疫球蛋白G(IgG)抗体,形成的IgG-G蛋白复合体用来捕获目标抗原(匀质化牛视网膜组织).经洗提后获得的抗原蛋白通过"表面增强激光解吸附-电离-飞行时间-质谱"仪进行检测.采用Proteomic software project统计学软件,对两组质谱数据连同受检者年龄和性别等参数,自动进行t检验和初步多变量判别分析;随后采用Statistica version 8.0统计学软件,进行包括抗原蛋白质谱数据、蛋白质芯片类型和激光解吸附-电离能量等的多变量判别分析.结果 CTRL组的平均质谱强度为4244.427±4721.115,POAG组为4049.864±4083.819,两组间差异有统计学意义(F=1.340,P<0.01);在POAG患者中,出现了部分高调节免疫反应,但主要表现为低调节免疫反应.结论 在POAG患者与CTRL者之间存在明显的抗体轮廓差异,在POAG组中出现的低调节免疫反应表明部分患者可能与"异常免疫"有关.(中华眼科杂志,2009,45:625-630)
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兔晶状体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究
目的探讨双向电泳和质谱鉴定在晶状体蛋白质组特性研究中的价值,为白内障的防治提供新的有效途径.方法采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向凝胶电泳方法对兔龄为3个月的新西兰兔透明晶状体蛋白质进行分离,使用ImageMaster 2D Elite 3.01图像分析软件分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对主要的高丰度晶状体蛋白质进行鉴定. 结果双向电泳图谱显示,在250 μg兔晶状体中蛋白质分布在等电点(PI)为pH值 5～9、相对分子质量为14 000～94 000的区域内;而高丰度晶状体蛋白质的相对分子质量为14 000～40 000.图像分析软件定量检出180个蛋白质斑点的近似PI、相对分子质量及蛋白质相对含量,质谱鉴定得到其中16个高丰度晶状体蛋白质的种类.结论双向电泳和质谱鉴定可有效分离和分析晶状体蛋白质组的特性,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径,为白内障的防治带来了新的前景.
