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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在真菌快速鉴定中的应用
真菌是广泛分布于自然界的真核生物，对人类具有致病性的约300种。不同种真菌的生长特性、临床特点及耐药性不同。真菌生长缓慢，传统的培养鉴定方法所需时间较长，且日益多样化的真菌，使鉴定难度不断增加，这些均限制了临床的早期诊断和针对性治疗。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS）是一种新兴的诊断技术，可以通过直接检测生物标志物（蛋白）来鉴定病毒、细菌、分枝杆菌等，具有操作简便、快速、准确率高、成本低的特点。本文对MALDI-TOF MS在真菌鉴定中的应用进行综述，发现其对酵母样真菌的正确鉴定率可达到94%以上，丝状真菌正确鉴定率也可达到89%，可满足临床实验室鉴定真菌的需求。
关键词： 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 真菌 感染 -
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在感染性疾病病原及耐药检测中的应用
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术作为蛋白质组学分析方法，具有高通量、高敏感度、操作简单、快速获得结果、可自建数据库等特点。该技术应用于感染性疾病病原鉴定及耐药检测，对临床感染患者的及时诊治意义重大。本文通过介绍该技术对菌种、无菌部位等各类标本的病原微生物进行快速鉴定及耐药检测的研究现状，探讨其面临的挑战和应用前景。
关键词： 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 细菌学技术 传染病 -
大肠癌组织体内激光诱发荧光光谱分析
目的探讨体内大肠癌与相应正常组织激光诱发荧光(LIF)光谱的规律.方法大肠癌患者21例,癌组织与相应正常组织进行LIF光谱检测,同时对每一检测部位取材进行病理组织学检查.结果有18例患者(85.7%)癌组织与正常组织的LIF光谱在强度和形状上不同,选择F1(FI400/FI530,FI指荧光强度),F2(主峰强度),F3(主峰波长)3个参数进行比较,癌组织分别为0.57±0.23,3192±1526,465.41±1.24;相应非癌组织分别为1.49±0.36,8998±4701,461.06±0.92,二者F1,F2和F3差异显著(P＜0.01). 诊断大肠癌的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为85.7%,76.2%,78.3%和84.2%.结论体内大肠癌与相应正常组织的LIF光谱存在明显差异,为进一步临床应用提供了依据.
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龟分枝杆菌培养滤液蛋白质组生物质谱分析
目的 描述龟分枝杆菌蛋白质分泌活动,为其致病性及检测方法研究提供依据.方法 采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)捕获并应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDFTOF-MS)技术,检测11株龟分枝杆菌临床分离株及ATCC19977参考株培养7d的Middlebrook 7H9培养滤液蛋白和Middlebrook 7 H9培养液蛋白,描述性分析龟分枝杆菌培养滤液蛋白质组.结果 相对Middlebrook 7H9培养液,在11株龟分枝杆菌7d的Middlebrook 7 H9培养滤液检测到49～101种差异蛋白,相对分子质量为1101～3953,丰度水平为84～7238相对强度(用质谱峰面积计算).其中32种差异蛋白在11株中均有表达,相对分子质量为1108～3953,丰度水平为98～7231相对强度.结论 龟分枝杆菌在体外生长过程中可分泌多种小分子蛋白质,其特性和作用有待进一步研究.
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结核病患者与健康人血清蛋白质谱的比较研究
目的 比较结核病患者与健康人血清蛋白质谱,寻找结核病相关特异血清蛋白质,以期发现新型结核病血清学诊断标志物.方法 应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX)和表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对包括54例菌阳肺结核(菌阳组)、45例菌阴肺结核(菌阴组)、18例肺外结核(肺外组)共117例结核病患者(结核组)及62例健康对照者(对照组)进行了血清蛋白质谱检测,并应用ClinProTools分析软件进行分析,找出差异蛋白质.结果 菌阳组-对照组、菌阴组-对照组、肺外组-对照组和结核组-对照组间分别存在19、14、26和30个差异血清蛋白质,其中分别有11、9、15和15个蛋白质在患者血清中表达上调；相对分子质量分别为1060、1944、2081和3954的4个血清蛋白质为各患者组与对照组间共同存在的差异血清蛋白质,其中相对分子质量为1060的蛋白质在患者血清中表达下调.结论 结核病患者与健康人之间血清蛋白质谱存在差异,有望通过血清蛋白质谱的比较分析,寻找到结核病相关特异血清蛋白质而发现新型结核病血清学诊断标志物.但尚需大样本量、多对照系的进一步研究予以确证.
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表面增强激光解析电离飞行时间质谱法筛选肺癌患者血清和肺泡灌洗液中标志蛋白的研究
目的 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选肺癌患者血清和BALF中的差异性表达蛋白,探讨是否可作为诊断肺癌的肿瘤标志物.方法 应用SELDI-TOF-MS技术通过弱阳离子交换蛋白芯片(WCX-2芯片)分别检测35例肺癌和18例肺部良性病变患者血清和BALF中的蛋白质质谱图,用Biomarker Pattern软件分析肺癌的差异蛋白并初步建立诊断模型,通过盲筛进一步验证诊断模型.结果 在肺癌患者血清中发现5个高表达的蛋白质波峰,选用其中质荷比为5639的差异蛋白波峰建立分类树模型,其诊断的敏感度为80%(28/35),特异度为78%(14/18).盲法验证的敏感度为85%(17/20),特异度为90%(9/10),粗符合率为87%(26/30),Youden指数为0.7.在肺癌患者BALF中发现8个高表达蛋白质波峰,选用其中质荷比为7976和11 809的差异蛋白波峰建立分类树模型,其诊断的敏感度为86%(30/35),特异度为72%(13/18).盲法验证的敏感度为90%(18/20),特异度为90%(9/1O),粗符合率为90%(27/30),Youden指数为0.8.平行试验结果显示两者联合应用时诊断肺癌的敏感度、准确率及特异度均为100%,具有互补作用.结论SELDI-TOF-MS技术可筛选出肺癌患者血清和BALF中差异性表达蛋白,作为一种肿瘤标志物,其诊断敏感度高,特异度好,尤其是BALF中差异性表达蛋白的测定可能具有较好的临床应用前景.
关键词： 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 肺肿瘤 蛋白 -
胃液固有荧光光谱对胃癌诊断价值的初步研究
目的显示胃癌患者及非癌患者胃液固有荧光光谱的荧光强度的差异,以期用于胃癌的筛查及诊断.方法收集202例各种胃内疾病患者的胃液,经1∶10稀释后,检测激发波长为288 nm,发射波长范围为300～800 nm的固有荧光光谱.用CART V2.0统计软件建立判别模型,计算先验概率与后验概率.结果各种胃内疾病患者的胃液固有荧光光谱均有3个峰(发射波长分别为320～360 nm、576 nm及670～690 nm),胃癌患者的第一荧光峰(发射波长为320～360 nm)的强度(P1FI)较其他胃内良性疾病患者明显增强.以P1FI≥111.80作为判别指标,用于胃癌诊断的先验概率的敏感度为91.4%,特异度为83.2%,准确度为84.7%.其后验概率的敏感度为85.7 %,特异度为82.6%,准确度为83.1 %.结论胃液固有荧光光谱有希望成为一种胃癌的诊断和筛查方法.
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术直接鉴定血流感染病原菌的效果评价
目的：利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF MS）技术建立血流感染病原菌快速、准确的鉴定方法。方法连续收集苏州大学附属第二医院检验科2015年1至7月血培养仪阳性报警血培养瓶266个，抽吸血培养瓶中血液至血清分离胶管，采用差速离心法富集细菌，利用MALDI-TOF MS对富集后的菌液进行快速鉴定，并与传统培养24～48 h后形成的菌落终鉴定结果进行比较。结果266个阳性血培养样本中，260个为单菌株血流感染，6个为混合菌感染。在260例单菌株所致血流感染中，菌株的属、种鉴定符合率分别为98．8％（257／260）和96．2％（250／260）。其中，140株革兰阴性菌属、种鉴定符合率分别为99．3％（139／140）和97．9％（137／140）；120株革兰阳性菌属、种鉴定符合率分别为98．3％（118／120）和94．2％（113／120）。6例混合菌感染未得到鉴定结果。结论本研究利用MALDI-TOF MS对差速离心富集后的菌液进行直接鉴定，有效缩短了检测时间，而且鉴定准确率高，为血流感染的快速诊断提供了有力的检测手段。
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两种MALDI-TOF质谱仪对临床分离细菌鉴定结果的比较
目的：比较并评价两种商业化MALDI-TOF MS系统--Bruker Biotyper和Vitek-MS在临床常规实验室细菌鉴定中的应用。方法收集沈阳军区总医院2011年1月至2013年6月临床分离的细菌共238株（包括40个菌属和81个菌种）。按照本实验室临床菌株年分离率，将其分为临床常见菌（149株）和不常见菌（89株）。同时采用两种MALDI-TOF-MS系统对上述菌株进行鉴定，结果与Vitek2 compact常规生化鉴定进行比较，对3种方法检测结果不一致菌株用16 S rDNA测序确认。结果本研究238株细菌中，Bruker Biotyper和Vitek-MS属的正确鉴定率分别为95%和90%，种的正确鉴定率分别为91%和87%，无鉴定结果的菌株分别为11株和21株。在149株常见细菌中，Bruker Biotype属和种的正确鉴定率分别为98%和96%，Vitek- MS属和种的正确鉴定率分别为97%和95%。89株不常见细菌中， Bruker Biotype和Vitek-MS属的正确鉴定率分别为90%和79%，种的正确鉴定率分别为83%和73%，无鉴定结果的菌株分别为8株和16株。结论 Bruker Biotype属的正确鉴定率高于Vitek-MS；两者种的鉴定水平相似。对不常见细菌，Bruker Biotype属的正确鉴定率高于Vitek-MS。两种质谱仪数据库都有进一步完善的空间。
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大鼠急性脊髓牵张损伤相关蛋白质的筛选和鉴定
目的 筛选并鉴定与大鼠急性脊髓牵张损伤相关的蛋白质.方法 SD大鼠10只随机分为2组:假手术组(Sham组)和脊髓牵张损伤组(tractive spinal cord injury,TSCI组),每组5只.术后1d取材,对脊髓组织蛋白进行提取制备、定量、分离,建立差异表达图谱,通过双向凝胶成像分析和人工比对,分别确定差异蛋白质斑点.采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术鉴定差异蛋白,检索数据库,对差异蛋白进行分类.结果 Sham组与TSCI组两者间完全相同的差异蛋白质点共22个,其中4个下调,18个上调；4个差异蛋白点新出现在TSCI组.鉴定出16种有意义的蛋白质,其中与凋亡相关的蛋白4种,神经信号转导相关的蛋白3种,参与代谢的蛋白6种,未知蛋白3种.结论 鉴定出的蛋白质可能通过神经信号转导、调节细胞凋亡及细胞代谢等途径参与了TSCI的损伤及修复过程.
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胰腺癌患者血清的比较蛋白质组学研究及其意义
目的 利用比较蛋白质组学方法鉴定胰腺癌早期诊断的差异表达蛋白,筛选出潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)分离2007年5月至2008年9月收治的20例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者和20名健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对差异显著的蛋白进行鉴定,并对鉴定出的差异表达蛋白进行Western blot验证.结果 成功鉴定出胰腺癌差异表达蛋白补体3(C3).C3在胰腺癌组织中的灰度比为1.63±0.28,高于正常胰腺的0.65 ±0.13(t=11.81,P=0.00)和慢性胰腺炎的0.88±0.19(t =9.93,P=0.00).结论 应用2D-DIGE联合MALDF-TOF-MS技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法快速、有效.检测鉴定的差异蛋白质C3可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.
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实时荧光定量RT-PCR检测胸、腹腔积液和癌胚抗原mRNA表达的临床意义
目的探讨良、恶性胸腔腹腔积液中癌胚抗原(CEA) mRNA表达的临床意义. 方法收集明确病理学诊断的恶性肿瘤(58例)及良性疾病患者(76例)的胸腔、腹腔积液,采用实时荧光定量RT-PCR法检测其CEA mRNA的表达水平,并与脱落细胞学检查结果比较. 结果 58例肿瘤患者胸、腹腔积液中,脱落细胞学检查有19例(32.8%)找到癌细胞,而CEA mRNA阳性(>1 CN)者为46例(79.3%),二者阳性率差异具有极显著性意义(χ2=21.82,P=0.000).76例良性疾病患者的胸、腹腔积液中CEA mRNA阳性(>1 CN)者为19例(25.0%),良性疾病与恶性肿瘤患者胸腔腹腔积液中CEA mRNA的表达水平差异有极显著性意义(χ2=38.85,P=0.000). 结论采用实时荧光定量RT-PCR法可定量检测胸、腹腔积液中CEA mRNA表达,其敏感性优于脱落细胞学检查,且有助于胸、腹腔积液良、恶性的鉴别.
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激光诱发荧光光谱诊断肺癌的初步临床研究
609）差异有显著性意义（P＜0.01）；正常支气管组织在580～600 nm波段表现为一小坪（I580nm/I600nm=1.064±0.133），而肺癌平滑下降（I580nm/I600nm=1.329±0.085），差异有显著性意义（P＜0.01）。以I580nm/I600nm比值为判断值（S≥1.221为肺癌，S＜1.221为正常支气管组织)诊断肺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及总符合率分别为87.5%、80.9%、77.8%、89.5%和83.8%。结论用LIF光谱对肺癌进行临床诊断是可行的。
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正常肺组织和肺癌组织激光诱发自体荧光光谱
目的 分析正常肺组织和肺癌组织的激光诱发自体荧光光谱,特征,探讨激光诱发自体荧光光谱区分正常肺组织和肺癌组织的可行性.方法 收集肺癌手术标本39例,使用三倍频YAG激光(波长355nm)和光学多道分析仪(OMA)测定肺癌组织和正常肺组织的激光诱发荧光光谱,寻找其自体荧光光谱特征并与病理结果比较.结果 (1)正常肺组织和肺癌组织的主峰位置不同[(471.6±5.2)nm对(461.9±4.3)nm],向右偏移(P＜0.001);(2)肺癌组织的相对荧光强度大于正常肺组织[(24227±4349)对(14854±4621)](P＜0.001);(3)正常肺组织在560nm及600nm处有2个次峰,而肺癌组织平滑下降,正常肺组织在580nm与600nm的荧光强度比为0.831±0.178;肺癌为1.269±0.147(P＜0.001).结论 正常肺组织和肺癌组织的激光诱发自体荧光光谱有明显区别,可用于区分二者.
关键词： 肺肿瘤 肺 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片筛选卵巢恶性肿瘤患者的血清标志物
目的 应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片筛选卵巢恶性肿瘤患者的血清标志物.方法 选择广西医科大学附属肿瘤医院自2003年1月-2005年5月间收治的卵巢恶性肿瘤患者99例(恶性肿瘤组),卵巢良性肿瘤患者21例(良性肿瘤组);另取体检中心健康妇女87例(正常组)作为对照.分别采用IMAC3型固定金属亲和芯片和WCX2型弱阳离子交换芯片检测各组血清标本,应用Ciphergen蛋白芯片3.2.0软件采集3组标本的蛋白峰进行比较,蛋白峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白.同时应用Biomarker Pattern 5.0软件建立由IMAC3和WCX2型芯片筛选结果 共同组成的诊断模型,扩大样本量,对该诊断模型进行盲法验证.应用本诊断模型筛选出潜在的卵巢恶性肿瘤血清标志物.结果 将恶性肿瘤组(随机选取其中41例)与正常组(随机选取其中39例)血清标本比较,其中31个蛋白为差异蛋白(P＜0.05).建立诊断模型后,扩大样本量,分别取恶性肿瘤组中另外58例卵巢恶性肿瘤患者的术前血清和正常组中另外48例健康妇女的血清进行盲法验证,结果显示,其敏感度为100%,特异度为98%.将恶性肿瘤组与良性肿瘤组血清标本比较,发现质荷比为7769的蛋白为卵巢恶性肿瘤的潜在标志物.结论 应用飞行时间质谱技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选血清中特异性蛋白标志物,为建立卵巢恶性肿瘤的诊断模型提供可靠的技术平台.
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子宫腺肌病的比较蛋白质组学研究
目的 建立子宫腺肌病病灶组织的蛋白质表达图谱,筛选并鉴定差异表达的蛋白质.方法 收集2007年1月至10月北京协和医院妇产科收治的因子宫腺肌病行子宫全切除术患者的子宫肌层病灶组织(腺肌病组)及因宫颈上皮内瘤变和宫颈癌行子宫全切除术患者的正常子宫肌层组织(对照组)各5份,采用双向凝胶电泳技术分别建立两组的蛋白质表达图谱;利用图像分析软件进行比较分析,寻找差异表达的蛋白质点;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱和生物信息学方法鉴定差异表达的蛋白质,并进行功能分析.结果 子宫腺肌病组织考马斯亮蓝染色图谱中平均含(512±36)个蛋白质点,以其中1块凝胶为参考胶进行匹配,不同凝胶之间蛋白质点的匹配率为83.7%;银染图谱中平均含(762±54)个蛋白质点,不同凝胶之间蛋白质点的匹配率为81.1%.与对照组比较,腺肌病组中有15个恒定差异表达的蛋白质点,其中10个被成功鉴定.这些蛋白质的功能涉及细胞骨架、氧化反应、凋亡和免疫反应等.结论 子宫腺肌病组织在细胞骨架、氧化反应、凋亡、免疫反应等过程中存在异常,这些过程可能参与了子宫腺肌病的发病.
关键词： 子宫内膜异位症 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 蛋白质组学 -
子宫内膜异位症患者血浆蛋白质指纹图谱诊断分类树模型的初步建立
建立内异症诊断分类树模型,并对该模型诊断内异症的敏感度和特异度进行验证.结果 与对照组比较,内异症组患者血浆中有14个异常表达的蛋白质峰(P<0.01).采用相对分子质量分别为3 956 000、11 710 000和6 986 000的3个蛋白质峰构成的内异症诊断模型,其敏感度为92%,特异度为83%;验证后其敏感度为88%,特异度为80%.结论 SELDI-TOF-MS技术对于筛选内异症的生物标志物提供了一条新的途径,其临床应用价值值得进一步研究.
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血清蛋白质谱检测在子宫颈癌手术前后的临床应用价值初步分析
目的 初步探讨血清蛋白质谱在宫颈癌患者手术前后检测的临床应用价值.方法 采用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测54例宫颈癌患者手术前后的血清样本与53例健康志愿者的血清样本.采用Biomarker Wizard软件分析蛋白质谱.结果 宫颈癌患者手术前后血清蛋白质,在质荷比1500～50 000范围内,有22个不同质荷比的蛋白质的相对含量有明显差异(P<0.01).其中,宫颈癌患者术前血清中质荷比为3981、4290、28 066的蛋白质的相对含量为(1.51±1.78)%、(2.70±2.19)%、(1.99±1.70)%,高于健康人的(0.83±0.38)%、(1.72±0.91)%、(0.92±0.95)%,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但在术后均显著降低,分别为(0.59±0.45)%、(1.01±0.64)%、(0.54±0.37)%,分别与术前比较,差异均有统计学意义(P<0.01).而宫颈癌患者术前血清中质荷比为11 487、11 529、11 678的蛋白质的相对含量为(0.38±1.41)%、(0.16±0.46)%、(1.02±1.67)%,术后升高为(2.74±3.67)%、(2.00±1.76)%、(7.71±9.46)%,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 血清蛋白质谱可以筛选出宫颈癌手术前后相对含量有差异的蛋白质.质荷比为3981、4290、28 066的蛋白质可能与肿瘤负荷相关,质荷比为11 487、11 529、11 678的蛋白质可能与手术应激相关.
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子(癎)前期患者与正常妊娠孕妇羊水差异蛋白质谱分析
目的 探讨并初步筛选子(癎)前期患者的特异性羊水标志物.方法 利用CMlO蛋白芯片和表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI TOF MS)技术,检测8例重度子(癎)前期患者(研究组)和8例晚孕期正常孕妇(对照组)羊水中差异蛋白质的相对含量.并在8例中孕期(孕20±周)正常孕妇(中孕组)羊水中寻找有无这些差异蛋白的存在及其含量变化情况. 结果 (1)研究组与对照组羊水蛋白质在相对分子质量/电荷比值(质/荷比)2000～50 000范围内,有4种不同质荷比蛋白质的相对含量有明显差异.(2)研究组质荷比为4653的蛋白质相对含量[(1.52±0.71)%]明显低于对照组[(3.16±1.64)%](P＜0.05),而质荷比为384.1、8520、8579的蛋白质相对含量分别为(7.02±4.37)%、(3.74±1.96)%、(5.09±1.93)%,均高于对照组[(2.58±1.09)%、(1.83±0.67)%、(3.06±1.57)%,P均＜0.05].(3)中孕组羊水中可以找到这四种差异蛋白质.结论 子(癎)前期患者与正常孕妇羊水蛋白质质谱存在明显差异.有4种不同质荷比相对应的蛋白质可能是子(癎)前期患者羊水特异性的生物标志物.
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膀胱低级别尿路上皮癌及癌旁组织比较蛋白质组学的研究
目的:利用蛋白质组学方法建立膀胱低级别尿路上皮癌组织及其癌旁黏膜组织的差异蛋白质表达谱.方法:对15例人低级别尿路上皮癌组织和配对的癌旁黏膜组织进行比较蛋白质组学研究,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离两者总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质.结果:1)比较分析15例膀胱癌及正常配对组织的2-DE图谱,得到差异蛋白质点54个;2)对54个差异蛋白质点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出一些与癌基因、细胞周期调控及信号转导等有关的膀胱癌相关蛋白.结论:成功鉴定45个膀胱低级别尿路上皮癌组织相关蛋白,为进一步筛选用于膀胱癌诊断、治疗和预后评估的分子标志奠定基础.
