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姜黄素与阿米洛利联用对肝星状细胞增殖及分泌细胞外基质的影响
近年来,有不少学者以干扰肝纤维化形成过程中某一因素的方法来抑制肝纤维化的发展,取得了一定成绩.新近关于肝纤维化形成机制的研究表明氧应激和Na+/H+交换泵在肝纤维化形成中起重要作用,为抗肝纤维化的研究提供了新靶点.本实验应用肝星状细胞(HSC)T6细胞系,观察联用钠氢交换抑制剂与抗氧化剂对大鼠HSC增殖及分泌细胞外基质的影响,以探索临床抗肝纤维化的新途径.
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第四讲酒精性肝病发病机制若干进展
酒精性肝病发病机制较复杂,由多种因素造成,长期大量饮酒是酒精性肝病的发病基础,酒精及其代谢产物乙醛等直接或通过免疫机制损害肝细胞,发生肝细胞脂肪变性、酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化.本文对细胞色素P450 2E1、氧应激以及细胞因子在酒精性肝病发病机制中的作用作一简述.
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羰基应激衰老学说的发生发展与衰老生化本质
1 羰基应激衰老学说的提出尽管自由基生物医学研究从宏观上连接了氧化应激和生物体衰老的种种现象,而且发现几乎所有的疾病过程不管是急性病还是慢性病,都有自由基的参与.例如与增龄相关的退行性疾病,无论是心脑血管疾病、癌症、老年痴呆、肾脏衰老还是糖尿病等,都与自由基的存在及其造成的伤害有着千丝万缕的联系.然而用自由基伤害衰老学说解释衰老的本质,却遇到了不少实验结果造成的困惑和反驳.越来越多的实验表明,自由基与氧应激和相关损伤既不与衰老变化成正比,也不与大寿限直接相关,因为损伤值减去了修复与更新值才意味着与衰老相关的变化.
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D-半乳糖诱发氧应激合并实验性高脂血症对大鼠血液流变学指标及颈动脉血流量的影响
目的观察D-半乳糖诱发氧应激及实验性高脂血症对大鼠血液流变特性的影响.方法皮下注射D-半乳糖140mg/kg连续7周诱发大鼠氧应激,并灌胃脂肪乳1周诱发高脂血症,造成动物模型.分别测定模型与对照动物的颈总动脉血流,血浆MDA、SOD以及血流变和血脂指标.结果模型组血浆MDA含量显著升高((P<0.01),SOD略有下降.总胆固醇和低密度脂蛋白显著升高(P<0.05).血浆粘度有显著升高(P<0.05),其他血流变学指标无显著改变.两组颈动脉血流量无显著差别.结论一般衰老、氧应激和高血脂状态不会对全血粘度造成显著的影响,不会影响组织器官的供血.
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D-半乳糖诱发氧应激合并实验性高脂血症对大鼠血液流变学指标及颈动脉血流量的影响
目的观察D-半乳糖诱发氧应激及实验性高脂血症对大鼠血液流变特性的影响.方法皮下注射D-半乳糖140mg/kg连续7周诱发大鼠氧应激,并灌胃脂肪乳1周诱发高脂血症,造成动物模型.分别测定模型与对照动物的颈总动脉血流,血浆MDA、SOD以及血液流变学和血脂指标.结果模型组血浆MDA含量显著升高(P<0.01),SOD略有下降.总胆固醇和低密度脂蛋白显著升高(P<0.05).血浆粘度有显著升高(P<0.05),其他血流变学指标无显著改变.颈动脉血流量则有增加倾向.结论本实验提示,在衰老、氧应激与高血脂状态的早期,不一定出现全血粘度等指标的显著改变,可能仅出现轻度的血液高粘滞综合征和组织器官供血的某种调整.
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OxyR蛋白对不同应激条件下伤寒沙门菌生存能力的影响
目的:研究OxyR蛋白对伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)在应激条件下生存能力的影响.方法:用λ-Red系统制备S.Typhi oxyR基因缺陷变异株;通过重组质粒pBAD/gⅢ将oxyR基因和pBAD/gⅢ空质粒分别导入oxyR基因缺陷变异株;构建oxyR缺陷回补株和oxyR缺陷回补空质粒株;制作生长曲线,观察野生株、oxyR缺陷株、oxyR缺陷回补株及oxyR缺陷回补空质粒株在不同应激条件下的生长状况;实时荧光定量PCR(qRTPCR)分析OxyR对S.Typhi氧化调节相关基因表达的影响.结果:成功制备S.Typhi oxyR基因缺陷变异株、oxyR基因缺陷回补株和空质粒对照株;生长能力分析结果表明,与野生株相比,oxyR缺陷株在氧应激时生长缓慢(P<0.05),oxyR缺陷回补株的生长能力得到恢复;qRT-PCR结果显示,在氧应激时OxyR蛋白可以抑制hemH基因的表达,活化uxuA基因的表达.结论:OxyR蛋白参与S.Typhi对氧应激的调节,为进一步研究S.Typhi的致病性奠定了基础.
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氧应激对体外大鼠心肌线粒体呼吸链复合物的损伤及益心康胶囊含药血清的保护作用
目的:研究了氧应激对体外大鼠心肌线粒体呼吸链复合物的损伤及益心康胶囊(H303)含药血清的保护作用.方法:利用氧应激损伤体系(Fe2+/抗坏血酸,Fe2+/Vc)在体外攻击线粒体模型,观察对呼吸链复合物I-Ⅳ活性的影响.结果:大剂量损伤体系可使复合物Ⅱ活性明显降低,对复合物Ⅳ的影响具有剂量依赖性,随着Fe2+/Vc浓度的增加,复合物Ⅳ活性呈进行性降低的趋势.H303含药血清对四个复合物分别产生不同的影响.对复合物I和Ⅳ活性有明显的保护作用;大剂量对复合物Ⅱ活性的增高有进一步增强作用,对复合物Ⅲ活性的增高无明显影响.结论:氧应激可致大鼠心肌线粒体呼吸链复合物损伤.H303含药血清对损伤所致的复合物活性降低具有一定的保护作用.
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吡格列酮对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏氧化应激的影响
目的:观察吡格列酮对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏组织氧化应激的影响。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和吡格列酮组(每组10只)。正常组全程饲以普通饲料,另两组均给予高脂饮食。6周后每组各处死2只大鼠,验证NAFLD造模成功后,给予吡格列酮组大鼠10mg·kg-1·d-1吡格列酮灌胃,正常组、模型组给予相应体积的0.9%氯化钠溶液灌胃。6周后处死并留取肝组织,行病理组织学检查,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)的含量,免疫组织化学法检测肝脏组织血红蛋白氧合酶(HO)-1的表达。结果与模型组相比,吡格列酮组大鼠肝组织病变改善,MDA的含量显著下降,且该组肝脏组织内HO-1表达较正常组、模型组均显著升高(均P<0.05)。结论吡格列酮可诱导NAFLD大鼠肝脏组织内HO-1的表达,减弱氧化应激,可能是其改善NAFLD病理变化的机制之一。
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细胞色素P450 2E1在脂肪性肝病中致病作用研究进展
脂肪性肝病根据病因可以分为酒精性和非酒精性脂肪性肝病.研究发现两种病理变化无明显差异,提示可能具有相似的发病机制.近年来,虽然对于脂肪性肝病发病机制、防治方法的研究逐渐受到重视,但到目前为止,其确切发病机制仍无定论.细胞色素P450酶是肝脏主要代谢酶,其中细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)在肝细胞物质代谢方面起主要作用.研究发现[ 1,2],脂肪性肝病发病过程中CYP2 E1的诱导表达可加重肝内脂质代谢异常,并参与肝细胞的氧应激、脂质过氧化、细胞凋亡、炎症因子形成及星状细胞激活等过程.本文就脂肪性肝病发生发展过程中CYP2E1可能的致病作用作以综述.
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红景天苷对原代培养脂肪变性大鼠肝细胞细胞色素P4502E1蛋白表达的抑制作用
目的 研究红景天苷对原代培养大鼠脂肪变性肝细胞细胞色素P4502E1(CYP2E1)蛋白表达的抑制作用.方法 体外分离、原代培养SD大鼠肝细胞,选取培养48 h的大鼠肝细胞,加入0.25 mmol/L棕榈酸诱导肝细胞脂肪变性,同步加入150 μg/ml的红景天苷继续培养24 h,检测培养肝细胞上清液ALT、AST、丙二醛(MDA)和肝细胞甘油三酯(TG)含量的变化.采用油红O染色观察肝细胞脂滴沉积,采用蛋白质印迹法检测CYP2E1蛋白表达的变化.结果 以0.25 mmol/L棕榈酸和150 μg/ml红景天苷同步培养细胞24 h,红景天苷干预组细胞培养上清ALT[(11.3±1.0) U/L、AST(3.7±0.5) U/L、MDA(1.7±0.2) nmol/ml和TG(105.7±16.8)μg/mg protein]均显著低于棕榈酸模型组[ALT(13.5 ±1.2) U/L,P<0.05;AST(5.9 ±0.7) U/L,P<0.05;MDA(4.2 ±0.9) nmol/ml,P<0.01;TG (268.3±25.8)μg/mg protein,P<0.01];油红O染色显示红景天苷处理肝细胞脂滴明显减少,蛋白质印迹法显示红景天苷能有效抑制脂肪变性肝细胞CYP2E1蛋白表达的上调.结论 红景天苷抑制细胞CYP2E1蛋白表达可能是其防治肝细胞脂肪变性的主要机制之一.
关键词: 脂肪肝 红景天苷 细胞色素P4502E1 肝细胞 氧应激 -
植物雌激素α-ZAL对oxLDL诱导人内皮细胞中ET-1基因表达的抑制作用及其抗氧化机制
目的 通过氧应激信号转导通路探讨植物雌激素α-ZAL对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞中ET-1基因表达的抑制作用.方法 用荧光探针DCF检测内皮细胞活性氧的含量;采用RT-PCR方法对ET-1mRNA的表达进行分析,运用Western Blot法测定了ERK、pERK和c-jun/AP-1蛋白的表达;同时测定了内皮细胞上清液中ET-1的分泌的变化,利用瞬时转染技术观察了内皮细胞的AP-1报告基因的活性.结果 实验结果表明α-ZAL对oxLDL诱导的ET-1的分泌有抑制作用(P<0.05),它可能通过抗氧化作用阻断oxLDL诱导的内皮细胞氧应激的产生;并能抑制oxLDL诱导的内皮细胞AP-1的激活(P<0.05).结论 研究发现α-ZAL可能是通过氧应激激活细胞外信号调节激酶,进一步通过调节ET-1基因上的核转录因子AP-1结合位点来抑制oxLDL诱导内皮细胞的ET-1基因表达.
关键词: 植物雌激素α-ZAL ET-1 氧应激 核转录因子AP-1 -
FOXO1因子与β细胞功能障碍关系研究进展
β细胞功能障碍是2型糖尿病主要病因之一,β细胞功能障碍由多种机制产生:如氧化应激、内质网应激、缺氧应激、炎症因子作用下,引起β细胞自噬、增殖减少,去分化,终导致细胞凋亡,形成2型糖尿病。FOXO1因子是胰岛素信号路径的关键因子,参与了形成β细胞功能障碍的机制。本文就 FOXO1与β细胞功能障碍之间的关系做一综述。
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脂肪肝的基础与临床研究进展脂肪肝的病因
脂肪肝是由多种不同原因引起的肝脏脂肪性变.近年来,随着人们生活水平提高,饮食结构变化、老龄化人口增加及新的检测手段不断问世,脂肪肝及其相关疾病的患病率日益增多,其发病年龄趋于年轻化.脂肪肝的病因主要为酗酒、肥胖、营养不良和糖尿病等,但文献介绍迄今仍有20%为原因不明;其发病与脂质及脂蛋白代谢异常、氧应激、免疫反应等有关.目前,脂肪肝的治疗措施正在研究中,本文主要阐述脂肪肝的常见病因.
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非酒精性脂肪性肝病与胰岛素抵抗的关系
非酒精性脂肪肝性肝病(NAFLD)是一种病变在肝小叶,以肝细胞弥漫性脂肪变性和脂肪蓄积为病理特征,且无过量饮酒史的临床综合征.包括单纯性脂肪肝(NAFL)及其演变的脂肪性肝炎(NASH)和脂肪性肝硬化三种类型.本病常发生于与胰岛素抵抗(IR)相关的超重(肥胖)、2型糖尿病和高脂血症等代谢紊乱,目前认为遗传因素、环境因素、脂质代谢异常、氧应激及脂质过氧化损伤、免疫反应损害等可能参与NASH的发病,所以该病可能属于一种遗传-环境-代谢应激相关性疾病.
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六味地黄丸含药血清减低高糖诱导的肾小管上皮细胞的氧化损伤和凋亡的研究
目的 观察六味地黄丸含药血清对高糖环境下培养的肾小管上皮细胞的保护作用,以及对高糖诱导的线粒体氧化损伤和凋亡的影响.方法 制备不同剂量大鼠六味地黄丸含药血清,并培养高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2),采用四甲基偶氮唑盐法和乳酸脱氢酶释放实验确定药物适作用浓度.六味地黄丸含药血清处理高糖诱导的HK-2细胞24和48h后,2,7-二氯氢化荧光素二酯染色检测细胞内ROS含量,流式细胞仪测定线粒体膜电位变化,real-time PCR方法检测线粒体DNA的拷贝数,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,以及使用分光光度法检测细裂解液中Caspase-3和Caspase-9酶的活性.结果 与正常对照组比较,高糖组在培养的24、48 h内HK-2细胞的ROS含量、线粒体膜电位、mtDNA拷贝数、细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9酶活性显著上调(P<0.01).与高糖组比较,10%六味地黄丸含药血清均能逆转上述变化(P<0.05),且抑制作用呈一定的时间依赖关系.结论 六味地黄丸可能通过调控高糖环境下肾小管上皮细胞的线粒体ROS生成、改善线粒体膜电位和mtDNA拷贝数、抑制Caspase蛋白的级联激活反应,降低肾小管上皮细胞的氧化损伤和细胞凋亡,从而有利于延缓糖尿病肾病的间质纤维化的进展.
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植物雌激素α-ZAL抑制同型半胱氨酸诱导HUVECs的ET-1基因表达及抗氧化机制
同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY)对血管壁的毒性作用包括脂蛋白的化学修饰、血管结构的改变、氧应激、内皮功能紊乱、内皮重建障碍和血管平滑肌细胞的增殖等[1].动物实验表明HCY的升高与氧应激(ROS)的增加有相关性,它们均能促进内皮功能紊乱,提示HCY可能通过ROS对血管系统的有害效应[2]促进动脉粥样硬化(AS)的发生.
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因宁片对甲亢性肝损害模型大鼠肝功能和氧化应激的影响
目的:研究因宁片对甲状腺激素诱发大鼠甲亢性肝损害的肝功能和氧化应激的影响.方法:SD大鼠给予L-甲状腺素钠灌胃30 d,制备甲亢性肝损害模型.大鼠造模后给予因宁片低、中、高剂量或甲亢灵灌胃治疗30 d后,处死收集血样和肝组织,采用放射免疫法测定血清T3、T4含量,全自动生化仪检测AST、ALT水平,比色法测定肝组织匀浆SOD、MDA、GSH.Px、CAT、GSH值.结果:因宁片可以明显降低L-甲状腺素钠引起的大鼠血清甲状腺激素水平(T3、T4)升高.纠正肝功能(AST、ALT)异常,降低肝脏MDA含量,提高SOD、CAT、GSH-Px活性,升高GSH水平.结论:因宁片对甲状腺激素诱发的大鼠甲亢性肝损害有明显保护作用,其作用机制可能与降低甲状腺激素水平及抑制肝脏氧化应激有关.
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红景天苷抗大鼠肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的研究
目的:探讨红景天苷(Salidroside,SDS)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)氧应激所致脂质过氧化的作用.方法:HSC与FeNTA共同培养产生氧应激.以MTT法测定红景天苷对HSC增殖的效应;LDH法测定红景天苷对HSC的毒性作用;以ELISA法测定细胞培养液中Ⅰ型胶原的水平;以试剂盒分别测定细胞培养液中MDA、GSH、GSH-PX、SOD水平.结果:HSC与FeNTA共同培养后,细胞内MDA、GSH水平明显升高,GSH-PX、SOD活力明显降低,并能明显促进HSC增殖和提高细胞培养上清中Ⅰ型胶原的水平.红景天苷可以逆转上述所有FeNTA所致效应.结论:红景天苷抗肝纤维化作用可能与其抑制脂质过氧化有关.
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丹参酮ⅡA抗大鼠肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的研究
目的:探讨丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA, Tsn)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)氧应激所致脂质过氧化的抑制作用.方法:HSC与FeNTA共同培养产生氧应激;以MTT法检测丹参酮ⅡA对HSC增殖的效应;LDH法检测丹参酮ⅡA对HSC的毒性作用;以ELISA法测定细胞培养液中Ⅰ型胶原的水平;以试剂盒推荐方法分别测定细胞培养液中MDA、GSH、GSH-Px、SOD水平.结果:HSC与FeNTA共同培养,细胞内MDA、GSH水平明显升高,GSH-Px、SOD活力明显降低.FeNTA与HSC共同培养,能明显促进HSC增殖和提高细胞培养上清中Ⅰ型胶原的水平,丹参酮ⅡA可以逆转上述所有FeNTA所致效应.结论:丹参酮ⅡA的抗肝纤维化作用可能与其抑制脂质过氧化有关.
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姜黄素与阿米洛利联用对大鼠肝星状细胞氧应激所致纤维化的抑制作用
目的:探讨钠氢交换抑制剂阿米洛利(Amiloride)与抗氧化剂姜黄素(curcumin,Cur)联用对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)氧应激所致纤维化的作用.方法:HSC与三醋酸亚硝酸铁(FeNTA)共同培养.以MTT法观察阿米洛利、姜黄素对HSC增殖的效应.LDH法观察阿米洛利、姜黄素对HSC的毒性作用.以ELISA法测定细胞培养液中Ⅰ型胶原的水平.以试剂盒推荐方法分别测定细胞培养液中丙二醛(MDA)、谷胱苷肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:HSC与FeNTA共同培养,细胞内MDA、GSH水平明显升高,GSH-Px、SOD活力明显降低.FeNTA与HSC共同培养,能明显促进HSC增殖和提高细胞培养上清中Ⅰ型胶原的水平.阿米洛利、姜黄素可以逆转上述所有FeNTA所致效应,且联用组优于单用组.结论:作用于HSC不同靶点的抗纤维化药物姜黄素、阿米洛利合用优于单用.