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CLIA与RIA测定血清β-HCG的对比分析
HCG是一种分子量为39000的糖蛋白,由胎盘滋养层细胞合成和分泌,其分子结构包括α、β两个亚单位.由于其α亚单位与LH、FSH和TSH的α亚单位相似,存在免疫交叉反应,而其β亚单位与LH等不同,故测定β亚单位意义更大.β-HCG的测定,在早期妊娠、先兆流产、流产不全、绒毛膜癌和恶性葡萄胎的诊断、监测及疗效观察方面有重要意义.目前实验室测定血清β-HCG的方法有RIA、EIA和化学发光免疫分析(CLIA)等.本文应用CLIA和RIA同时对β-HCG不同浓度混合血清及50份标本进行检测,并进行对比分析,现报道如下.
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G蛋白与原发性高血压关系的研究进展
G蛋白是一组具有GTP结合、水解活性的蛋白质,在细胞膜受体和效应蛋白之间的信息传递过程中起中介作用.G蛋白由三个亚单位组成:Gα、Gβ、Gγ.目前已知G蛋白α亚单位有21种,由17个基因编码,按照氨基酸序列分为4个亚组:Gs、Gi、Gq、G12;β亚单位有5种;γ亚单位有6种.在非活性状态下Gα与GDP联接,Gβ、Gγ构成Gβγ复合体.一旦G蛋白被激活,GDP被GTP取代,Gα则具有GTP酶的活性,并与Gβγ复合体分离.G蛋白各种α亚单位、βγ亚单位复合体可以各自独立或同时、协同或拮抗地影响效应分子的活性,调节细胞内不同酶的活性和细胞膜离子通道的开放与闭合,引发一系列复杂的细胞生物学效应.
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磷脂酰肌醇3激酶P85α基因亚单位Met326Ile的变异与胰岛素敏感性的关系
磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)是胰岛素(Ins)信号传导的关键信息分子,其含量与活性缺陷是2型糖尿病(T2DM)分子水平的病理改变之一.本研究分析了汉族人PI3K p85α亚单位Met326Ile突变与胰岛素敏感性(IS)的关系.
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心脏Nav1.5相互作用蛋白与心律失常
电压门控钠离子通道负责心肌细胞动作电位的产生、传导和持续时间.钠离子通道由核心α亚单位Nav1.5和1～4个辅助β亚单位构成.Nav1.5是钠离子通道孔形成的亚基单位,可以独立发挥作用.编码Nav1.5基因的突变可以改变钠离子通道电生理特性,导致"钠离子通道病",包括先天性和获得性长QT综合征(LQTS)、Brugada综合征(BrS)、新生儿猝死综合征(SIDS)、心脏传导系统障碍、病态窦房结综合征、心房颤动(房颤)及扩张性心肌病等.
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原发性红斑肢痛症一家系的临床与SCN9A基因突变
原发性红斑肢痛症(primary erythermalgia)是一种少见的自主神经疾病,多在儿童及青春期起病,以肢体远端血管极度扩张、皮肤肿胀以及剧烈的肢端灼痛为主要临床特征.原发性红斑肢痛症的病因和发病机制至今尚不清楚,近年来的研究表明,遗传因素在原发性红斑肢痛症的发病中占重要地位,多呈常染色体显性遗传.现已证实编码电压门控钠通道α亚单位的SCN9A基因(sodium channel, voltage-gated, type Ⅸ,SCN9A)是原发性红斑肢痛症致病基因[1].我们2005年1月在湖南发现了1个原发性红斑肢痛症大家系,共6代98人,对本例大家系临床特点和先证者SCN9A基因突变进行了分析.
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垂体无功能腺瘤的治疗
北京协和医院从1992年至2008年共收治无功能垂体腺瘤1034例,其中男549例,女485例,现就我们的治疗体会讨论有关垂体无功能腺瘤的治疗.文献报道很多垂体无功能腺瘤分泌糖蛋白激素的亚单位(β和α亚单位),α亚单位增高者占6%～67%~([1-2]).我科测定的垂体无功能腺瘤中α亚单位增高者占26.3%~([3]).
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20S蛋白酶体与动脉粥样硬化关系的试验研究
目的 探讨20S蛋白酶体及蛋白酶体α亚单位在人动脉粥样硬化斑块中的表达变化,以及与动脉粥样硬化病变之间的关联.方法 搜集病例组(颈动脉粥样硬化狭窄并行颈动脉内膜切除术患者)及对照组(主动脉夹层并行主动脉置换术患者)的相关临床资料.选择病例组中7例术中所切除的颈动脉粥样硬化斑块组织,以及对照组中7例术中所切除的相对正常的锁骨下动脉及无名动脉组织,采用Western印迹方法,检测并比较其中的20S蛋白酶体及蛋白酶体α亚单位的蛋白质水平.结果 ①病例组和对照组各7例,病例组的高脂血症、糖尿病及吸烟比率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);②蛋白酶体所有α亚基(1-7)在正常动脉内膜、动脉粥样斑块组织中的表达差异无统计学意义(P均＞0.05);③20S蛋白酶体在动脉粥样斑块组织中的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 20S蛋白酶体可能在动脉粥样硬化斑块的病理变化过程中起着重要的作用,而蛋白酶体α亚单位在其中的作用有待进一步探讨.
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钙激活钾通道α亚单位与高血压关系的研究
了解调节血管张力的靶点及内源性活性物质配体的BKca通道的特性，有助于深入研究通道特性及临床治疗药物筛选。用脂质体（lipofectamine2000）转染法转染BKca表达质粒pcDNA3.1-BKca筛选稳定表达单克隆细胞系研究其基本的生理学特性，同时建立BKca动力学研究模型。建立稳定转染BKca通道α亚单位的HEK293细胞系，通过膜片钳记录到与天然细胞BKca电生理BKca相似电流，可以用于分析通道动力模型及药物动力学作用机制。成功建立稳定转染BKca通道α亚单位的HEK293细胞系，膜片钳实验证明具有典型的BKca电生理特性，同时建立细胞系可以较好的运用于BKca通道功能调控研究和动力学参数分析。
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异位性皮炎研究进展
异位性皮炎(atopic dermatitis,AD)为一种慢性、难治性、炎症性、瘙痒性皮肤病,其发病机制可能为患者在一定遗传因素背景下,因感染(如超抗原)、过敏原(吸入、食入或接触)及环境因素等诱发或加重.本文就近几年国内外关于AD研究新进展作一综述.1 发病机制研究进展1.1 分子遗传学研究进展AD的分子遗传学研究主要集中在参与免疫反应的基因方面,包括人类白细胞抗原基因(位于6p)、T细胞受体(T-cell receptor,TCR)α/δ链基因(14q11.2)、细胞因子基因簇(5q31～33)及IgE高亲合力受体β亚单位基因(11q13),这些基因的多态性、突变或异常表达可能与AD有一定相关性.1998年,Kawashima等[1]研究显示,白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)基因启动子序列590 C/T中T位点多态性可能与AD发病相关.1997年,Hershey等[2]研究显示IL-4受体α亚单位基因突变可能与AD发病相关,但随后研究显示其多态性影响IL-4受体信号及IgE合成.位于14 q 11.2的肥大细胞胃促胰酶基因被认为特异性地与AD有关,但未能获得其他学者的赞同[3,4].
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重组人促甲状腺激素α亚基在大肠杆菌中的表达
目的:构建pGEX-3X/hTSHα大肠杆菌表达系统,制备重组人促甲状腺激素α(TSHα)亚基.方法:Trizol法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,将1 μg总RNA逆转录合成cDNA并以之为模板进行PCR扩增hTSHα亚基的完全编码序列.EcoR1和BamHI双酶切将所扩增的hTSHα基因定向克隆入表达载体pGEX-3X,转化感受态大肠杆菌Mach1-T1,IPTG诱导表达融合蛋白GST-rhTSHα.离心收集菌体,超声碎菌后获得包涵体.以梯度浓度降低的尿素溶液洗涤,8 mol/L尿素溶液溶解包涵体.包涵体溶解液经透析后复性进行SDS-PAGE鉴定及竞争性ELISA抗原性分析.结果:DNA序列分析证实重组pGEX-3X/h TSHα质粒含有读码框正确的hTSHα基因.PAGE显示重组质粒可表达产生36 ku大小的特异蛋白条带.ELISA结果表明,所表达的融合蛋白具有与抗人TSHα抗体相结合的能力.结论:成功构建了重组pGEX-3X/hTSHα表达载体,其产物具有hTSHα抗原性.
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关于血清HCG假阳性的探讨
人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,HCG),主要由胎盘分泌,代表滋养层细胞增生程度的标志物之一.HCG是一种糖蛋白,由两个以非共价键结合的亚单位:α亚单位和β亚单位组成.
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胰高血糖素与糖尿病及其临床问题
胰高血糖素 (Glucagon,Gg)是由胰岛α细胞分泌的由29个氨基酸组成的直链多肽.分泌后进入血循环,经门静脉到达肝脏,在门静脉中含量高,一般可高达300～500 pg/ml.肝脏是胰高血糖素作用的主要靶器官.当与受体结合后,与鸟嘌呤核苷酸结合调节蛋白Gs相互作用,使Gs的α亚单位释放激活腺苷酸环化酶,催化ATP转化为cAMP发挥其生物学效应.肝中胰高血糖素的许多生物活性即是通过腺苷酸活化酶的活化介导的.
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缺氧诱导因子1与细胞凋亡
缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)是一种缺氧诱导的主要转录因子,含一个α亚单位和一个β亚单位,其中HIF-1α是可调控的功能单位,受氧浓度变化的调节,缺氧后其转录活性增加;HIF-1β是一个结构单位,不受氧浓度的调节.既往研究发现HIF-1α上调后具有神经保护作用[1-2],但近年也有研究表明HIF-1α在一定条件下有促凋亡作用,本文将对缺氧时HIF-1α诱导凋亡的机制及调控作一综述.
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整合素拮抗剂治疗脑胶质瘤的研究进展
1987年,Richard Hyncs首次提出整合素的概念,它是指存在于细胞膜表面的跨膜糖蛋白受体,是关联细胞间或者细胞与细胞外基质的一族粘附分子.所有的整合素分子都是由α、β两条异源二聚体蛋白通过非共价键连接而成,目前发现的至少存在25种α亚单位和11种β亚单位,亚单位之间通过非随机的连接组合,组成大约20多种不同的整合素分子.
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周期性张应力对面颌肌细胞Na+/K+-ATPase的影响
目的:研究周期性张应力对Na+/K+-ATPase功能活性及其表达的影响,明确Na+/K+-ATPase在功能矫形中面颌肌肉适应性改建的生物和分子机制.方法:构建面颌肌细胞体外培养-力学刺激模型；应用多通道细胞牵张应力加载系统,对面颌肌细胞施加不同时段的张应力刺激,测定Na+/K+-ATPase的功能活性；运用实时荧光定量PCR研究周期性张应力刺激对Na+/K+-ATPase功能亚基α亚单位mRNA的影响.结果:Na+/K+-ATPaseα1,α2亚单位随着加力时间延长,表达增强,同对照组比较,呈一致性上调(P＜0.001)；细胞加力1小时,α1的mRNA表达不受影响；加力2小时后,α1和α2的mRNA表达呈现逐渐增强趋势,48 h时达到大值.张应力刺激对α2亚单位的mRNA表达似乎更为敏感,加力lh时α2亚单位的mRNA表达水平即增加,增加量约为对照组的37.74％,具有显著的统计学意义.结论:周期性的机械牵张作用于培养的骨骼肌细胞,可诱导α1和α2亚单位mRNA的表达量增加；α1和α2亚单位对周期性张应力刺激的作用时间反应不同,α2亚单位的反应可能更为敏感.周期性张力刺激的增加所产生的压力可能是转录调节的主要因素；周期性张应力对骨骼肌细胞Na+/K+-ATPase水解亚的调节作用不同,可能在面颌肌肉对功能矫形力的适应性改建中具有重要作用.
关键词： 面颌肌细胞 功能矫形 Na+/K+-ATPase α亚单位 张应力刺激 -
整合素与肝癌转移的相关研究进展
整合素家族是一类由一个α亚单位和一个β亚单位通过非共价键连接而成的异二聚体跨膜糖蛋白,目前已确认有18种α亚单位和8种β亚单位组成至少24种整合素.二种亚基都包括一个大的结合基质配体的胞外域,一个单次跨膜域和一个短的无催化作用的胞质域[1].每种整合素都有自己相对特异的配体,整合素通过识别细胞外基质(ECM)成分蛋白及细胞间黏附分子(ICAM),细胞膜免疫球蛋白超家族黏附分子来介导细胞-基质及细胞-细胞间的黏附反应,并接受,传导级联信号以调节细胞存活、凋亡、运动等,在肿瘤的侵袭转移中起重要作用.
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缺氧诱导因子-1α与消化系肿瘤
缺氧诱导因子(HIFs)是调节细胞适应缺氧的一个主要调控因子,存在三种亚型:HIF-1、HIF-2、HIF-3,其中HIF-1和HIF-2与肿瘤的血管生成关系密切.HIF-1由α亚单位和β亚单位组成异源二聚体,α亚单位是主要氧调解亚单位.在缺氧条件下,HIF-1α的DNA结合活性和HIF-1α蛋白水平增加.
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法尼基转移酶β-亚单位基因在胃癌组织中的表达
法尼基转移酶(farnesyltransferase,FTase)是一种细胞溶质中的酶,广泛存在于哺乳动物细胞、酵母及卵蛙细胞中,催化细胞多肽翻译后修饰的第一步骤(法尼基化),底物包括Ras蛋白、核纤层蛋白A、B、视紫红质激酶、磷酰化酶激酶等[1].FTase是由α和β亚单位组成的异二聚体,α亚单位识别法尼基焦磷酸,β亚单位结合至Ras蛋白[2].Ras蛋白的生物活性与法尼基化修饰有密切关系,FTase已成为抗癌治疗的一个重要靶标和研究热点.我们通过检测人胃癌和癌旁组织中FTase β亚单位mRNA表达水平,探讨FTase β亚单位基因在胃癌中的表达及其与临床病理特点的关系,了解其在胃癌诊断和预后判断中的作用和价值,为法尼基转移酶抑制剂治疗胃癌提供理论依据.
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低氧对人肝癌HepG2细胞中HIF-1α及miR-210表达的影响
目的:研究低氧对人肝癌细胞株HepG2细胞表达缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor一1 alpha,HIF-1a)及缺氧特异性微小RNA一210(microRNA一210,miR-210)的影响,探讨肿瘤细胞在低氧环境下miR-210表达的变化情况.方法:HepG2细胞经体外常规培养后,用体积分数为1%的氧气分别培养HepG2细胞6、12、18和24 h.应用实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测细胞中HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化,同时用茎环RT-PCR检测miR-210的表达变化,分析HIF-1α与miR-210的表达关系.染色质免疫共沉淀PCR(chromatin immunoprecitation PCR,ChIP-PCR)分析HIF-1α与miR-210启动子结合的可能性.结果:低氧培养6～12 h,HIF-1α mRNA的表达量存在明显改变(P<0.05),而其蛋白的表达量从低氧培养开始直至24 h均有明显变化(P<0.005);与此同时,miR-210的表达量在低氧培养6～18 h时出现明显改变(P<0.01),且与HIF-1α蛋白表达存在明显的线性相关(R=0.795,P=0.037).进一步的ChIP-PCR实验表明,HIF-1α在HepG2细胞内可与miR-210启动子区近转录区的低氧反应元件(hypoxia response element,HRE)结合,从而发挥转录调控作用.结论:适度的低氧环境可能影响miR-210表达,其机制可能是通过HIF-1α结合其启动子来调节实现的.
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过表达HIF-1α调控HO-1对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的研究
目的 探讨过表达缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对糖尿病心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响,并对其作用机制做初步探讨. 方法 构建重组HIF-1 α真核表达载体,用链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型,动物分为正常假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和I/R加HIF-1 α诱导组(I/R+HIF-1 α组),每组12只大鼠,共36只.检测各组大鼠心肌病理损伤分级、心肌坏死面积、HIF-1 α和HO-1的蛋白表达. 结果 I/R+HIF-1α组心肌病理损伤分级及心肌坏死面积与I/R组相比明显减少(P＜0.05),I/R+HIF-1α组心肌HIF-1 α的蛋白表达与I/R组相比明显增加(P＜0.05),I/R+HIF-1α组心肌HO-1的蛋白表达与I/R组相比明显增加(P＜0.05). 结论 过表达HIF-1 α,可以调控HO-1的表达,减轻糖尿病大鼠心肌的缺血再灌注损伤,对防治糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤有一定的作用.
