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间皮瘤相关特异性抗体的研究进展
自1979年Singh等[1]用培养的人反应性间皮细胞悬液作免疫原制备多克隆抗间皮细胞抗体以来,陆续用人恶性间皮瘤(MM)细胞株研制了MAb45,anti-MS和ME1等抗体.另外,识别卵巢肿瘤抗原的抗体OV632和K1及抗维尔姆斯瘤抗体anfi-WF1,在MM中亦有较高的敏感性和特异性.
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基因工程抗体分泌影响因素研究进展
基因工程抗体(gene engineering antibody,GEAb)是继多克隆血清和单克隆抗体之后的第三代抗体,在许多医学领域都极具应用潜力.众所周知,预防和治疗感染性疾病常用的药物是疫苗和抗生素,但对于如SARS、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)等难以获得相应疫苗或疫苗治疗效果不理想的病毒感染,目前仍缺乏有效的治疗方法,而基因工程抗体将有望为这类疾病提供一条有效的治疗途径,具有广阔的临床应用前景.
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荧光原位杂交探针在腺泡状软组织肉瘤诊断中的应用
腺泡状软组织肉瘤是一种好发于儿童和青年的罕见恶性软组织肉瘤，主要症状为缓慢生长的软组织肿块，多数患者在诊断数年后出现远处转移，预后差。腺泡状软组织肉瘤的肿瘤组织中存在特异性基因非平衡易位：der（17）t（X；17）（p11.2；q25）［1-2］，即Xp11.2处TFE3端粒侧基因经复制后易位至17q25位点，并与该位点着丝粒侧的ASPL基因融合形成ASPL-TFE3基因，同时原X染色体是完整的，而17 q25端粒侧基因丢失。根据腺泡状软组织肉瘤特有的基因改变，我们设计了一种荧光原位杂交（ FISH）多克隆探针，用来判断肿瘤组织内是否存在TFE3基因的非平衡易位，提供了一种诊断腺泡状软组织肉瘤的新方法。
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重组小鼠Galectin-9在大肠杆菌中的表达以及体外功能检测
本研究旨在构建重组Galectin-9(半乳糖凝集素9)原核表达质粒,并对表达蛋白进行纯化和功能学鉴定.通过常规RT-PCR技术扩增小鼠Galectin-9基因序列,并将其插入质粒pET-11a的多克隆位点之间,构成重组表达质粒pET-11a-Galectin-9.
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持续性多克隆B淋巴细胞增多症
持续性多克隆B淋巴细胞增多症(Persistent polyclonal B-cell lymphocytosis,PPBL)是由于B淋巴细胞非克隆性或多克隆性持续增殖所致的一种非恶性淋巴细胞增殖性疾病.1982年,Gordon等[1]描述了3例女性患者,其共同特征是:均为吸烟者;外周血B淋巴细胞中等程度地增多,随访多年无变化;有数量不等的双核淋巴细胞;血清IgM呈多克隆升高;HLA-DR7阳性,认为是一种少见的良性淋巴细胞增殖临床病理综合征,从而提出了持续性多克隆B淋巴细胞增多症的概念.以后多位作者陆续报道,迄今已近90例(见表1).PPBL常被误诊为慢性淋巴细胞白血病(CLL)等恶性淋巴细胞增殖性疾病,而给予不必要的化疗,应以鉴别.
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Nogo-66多克隆抗体的制备和鉴定
目的制备抗中枢神经系统(CNS)突起再生抑制因子Nogo胞外段Nogo-66的多克隆抗体,以进行Nogo分子检测和功能研究.方法采用原核系统表达来源于大鼠的GST-Nogo-66融合蛋白,经纯化后免疫新西兰兔制备多克隆抗体,采用免疫印迹、免疫组织化学和细胞培养技术对该抗体的特异性及生物学活性进行鉴定.结果获得了高效价的1∶ 10 000兔抗大鼠Nogo-66多克隆抗体,该抗体能够识别原核表达的Nogo分子,大鼠脊髓切片的免疫组织化学结果显示,Nogo分子在神经元和少突胶质细胞中有广泛表达;并能阻断Nogo分子对PC12细胞突起生长的抑制作用,具有一定的生物学活性.结论制备了能识别天然Nogo分子,并具有良好生物学活性的抗Nogo-66多克隆抗体,为检测Nogo分子和进一步研究其功能提供了有力的工具.
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3种便携式仪器测定心肌肌钙蛋白Ⅰ性能的评价
心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)是临床心肌损伤,尤其是急性心肌梗死(AMD的重要检测指标[1].在测定cTnⅠ的多种方法中,固相免疫层析法应用广泛,但有多个厂家生产的仪器和试剂,由于各家采用的单克隆或多克隆抗体针对的表位或株数、标记抗体针对的表位、示踪技术、校准物以及抗凝剂等方面的不同,测定结果亦不一致,可比性差[2].我们结合临床反馈意见对本实验室备选的3种便携式cTnⅠ检测系统进行性能评价,报告如下.
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表现为肾病综合征的巨球蛋白血症一例报告
巨球蛋白血症是指血中出现异常增多的lgM，有原发和继发之分。原发性巨球蛋白血症（Waldenstrom 巨球蛋白血症）是一种原因不明的B淋巴细胞异常增殖性疾病［1］，继发于其它疾病的单克隆或多克隆lgM增多称之为继发性巨球蛋白血症。巨球蛋白血症为少见病，近报道美国患病率为3．8／百万，以男性多见［2］。以肾脏损害为主要表现的巨球蛋白血症罕见，现将我科收治的1例以肾脏损害为主要表现的巨球蛋白血症病例报告如下。
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癌基因LMO3的原核表达及多克隆抗体的制备及应用
目的:制备抗神经特异性表达的癌基因LMO3的多克隆抗体,进行LMO3分子检测和功能研究.方法:采用RT-PCR方法扩增LMO3的基因序列,构建其原核表达载体pET32a-LMO3.在大肠埃希菌中诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE分离纯化原核表达的融合蛋白,PBS溶解聚丙烯酰胺凝胶颗粒中的融合蛋白,乳化后免疫新西兰兔制备多克隆抗体.采用免疫印迹、免疫组化等对该抗体的特异性进行鉴定.结果:构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实序列正确.经诱导表达在相对分子质量为37×103处有一条明显的蛋白条带,与预期值一致;免疫动物所得抗血清效价为1∶16 000,该抗体能够识别原核表达的LMO3蛋白及细胞内源性表达的LMO3蛋白;免疫组化显示,LMO3在SHG44胶质瘤细胞株及脑胶质瘤组织中均有表达. 结论:制备了能识别天然LMO3分子的抗LMO3的多克隆抗体,为检测LMO3分子的表达和进一步研究其功能提供了有力的工具.
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血管性痴呆患者31例血清抗磷脂抗体水平的测定
抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody,aPL)是循环血清中的多克隆免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA或其复合物).它包括抗心肌磷脂抗体(anticardiolipin antibody,aCL)和狼疮抗凝物(lupus anticoagulant,LA)两大类.关于抗磷脂抗体与血管性痴呆的关系,目前报道尚不多见.我们检测了31例血管性痴呆患者的血清aCL,以探讨aCL与血管性痴呆的关系.
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术前血管栓塞治疗颅骨嗜酸性肉芽肿一例并文献复习
嗜酸性肉芽肿为郎罕氏细胞组织细胞增多症(langerhans'cell histiocytosis,LCH)的一种,LCH为一组原发性郎罕氏细胞多克隆异常增生的非肿瘤性质的疾病~([1]),临床少见.我科近日收治患儿1例,累及眼眶.考虑到小儿对失血耐受力弱,病变累及较深,手术时间长,给予介入栓塞肿瘤供血动脉后再行肿瘤刮除术,术中出血明显减少,且刮除彻底.现结合相关文献报道如下.
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局部复发喉癌的发生学研究
局部复发是喉癌的主要致死原因之一,保证安全切缘是防止喉癌术后复发的主要手段.但研究发现局部复发喉癌病例中27.8%切缘安全(>5 mm,甚至>20 mm),很难用残留肿瘤导致复发来解释[1].如果原有器官内微小转移灶或是术中器官内种植,则复发肿瘤与原发肿瘤是相同克隆来源,通过遗传学检测应具同源性;如果切缘安全的病例是再发肿瘤,而非"复发",与原发肿瘤克隆来源应不同.临床上对复发和再发的区别完全是靠时间来界定的,即>5年的复发肿瘤称为再发,<5年则为复发.显然用分子生物学方法更能精确区分这两个概念.2003-2004年对喉癌的局部复发灶与原发灶通过微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)分析进行等位基因比较,研究复发灶与原发灶的肿瘤发生学关系,即是单克隆来源还是多克隆来源,从而用分子生物学方法明确肿瘤是复发还是再发.
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SEREX方法鉴定CTCL细胞肿瘤抗原
目的 分离纯化皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系SeAx细胞膜蛋白并制备多克隆抗体.利用SEREX法从SeAx cDNA噬菌体表达文库中筛选肿瘤抗原.方法 培养SeAx细胞至2×1010个,用组织匀浆器匀浆后差速离心法分离细胞各组分,富集细胞膜抗原.用细胞器特异性抗体对纯化步骤中的各组分进行检测.用膜蛋白组分免疫家兔4次,每次免疫后用ELISA法测定血清抗体滴度.4次免疫后用Western blot方法测定多抗与SeAx细胞各组分蛋白反应的特异性.重组噬菌体感染大肠杆菌,将表达的重组蛋白转印到硝酸纤维素膜上,与SeAx细胞膜蛋白免疫的兔血清进行反应,阳性的克隆测定核苷酸序列,通过数据库搜索比较确定基因.结果 用差速离心法得到SeAx细胞膜蛋白,免疫家兔4次后获得了效价为1×10-5的多克隆抗体.共筛选了1×106个噬菌体克隆,得到25个阳性克隆,经核苷酸序列测定和数据库分析,其中4个cDNA片段为膜蛋白成分,分别为integrin alpha 4,ligatin,matrix metalloproteinase 24和MHC-I molecule HLA-A.结论 分离并纯化了CTCL细胞系SeAx细胞膜蛋白,成功制备了多克隆抗体,用SEREX方法从SeAx mRNA建立的cDNA噬菌体表达文库中筛选到4个肿瘤细胞膜蛋白基因,它们可以引起机体产生体液免疫反应,并可能成为潜在的免疫治疗靶点.
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抗人胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备胃癌相关蛋白GCRG224的多克隆抗体,为进一步深入研究其生物学功能及其在胃癌发生发展中的作用奠定基础.方法 在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,并以所获蛋白免疫新西兰兔,制备抗GCRG224的多克隆抗体.分别用ELISA、Western blot法鉴定抗体的效价及特异性.结果 在大肠杆菌中高效表达出相对分子量约为16.8kD的Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,经凝胶回收法得到纯度近100%的蛋白产品.制备了抗GCRG224多克隆抗体.ELISA法检测抗体的效价达到1∶256 000,Western blot证实该抗体可与原核表达的GCRG224蛋白特异性结合.结论 成功地制备了胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体.
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肝病患者血清中游离CD44和CD95的检测及其意义
CD44和CD95均是细胞表面的受体分子,其中CD44是细胞表面的粘附分子,介导细胞之间及细胞与胞外基质成分的结合,同时参与淋巴细胞的迁移和归巢;CD95是细胞凋亡相关的受体分子.正常情况下,CD44和CD95存在于细胞膜表面,体液中也可能有低水平的存在,但在自身免疫性疾病、肿瘤及感染状态下,血清中可能会出现这些游离型受体分子的异常表达或出现变异型的受体分子.因此,分析血清中游离的受体分子对于分析它们在各种疾病发生发展中的作用有重要意义,游离受体分子的存在可能成为多种疾病诊断和预后预测的重要指标.
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儿童狼疮性肾炎治疗新知
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种全身性自身免疫性疾病.免疫调节功能紊乱、多克隆B细胞活化和抗原抗体免疫复合物沉积为其主要发病机制.其病变可以累及全身各组织和器官,约有1/4～2/3患者可出现狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)的临床表现,已成为继发性肾小球疾病常见类型之一.近年来不仅对其发病机制等进行了深入研究,相应其治疗也有不少进展,兹将有关狼疮性肾炎的治疗文献作一介绍.
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颅内浆细胞肉芽肿的临床、病理及影像学诊断现状
颅内浆细胞肉芽肿是颅内罕见的特发性炎性肉芽肿性病变,以多克隆浆细胞增生为特征[1].1993年WHO神经系统肿瘤分类中将其归为肿瘤样病变[2].本文旨在详细阐述颅内浆细胞肉芽肿的临床、病理及影像学特征,并就其诊断现状综述如下.
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儿童重型再生障碍性贫血12例的护理
再生障碍性贫血简称再障，临床以贫血、出血和感染为主要表现。抗人T-淋巴细胞兔免疫球蛋白（ATG）是一种多克隆抗淋巴细胞血清，对免疫活性淋巴细胞具有特异性抑制作用，但不良反应较多，治疗过程中必须密切监测用药反应。我科于2014年5月至2016年8月对12例重型再障患儿使用ATG联合免疫抑制疗法，效果明显，现将护理体会总结如下。
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大颗粒淋巴细胞白血病的发病机制及研究进展
大颗粒淋巴细胞(LGLs)克隆性疾病是来自成熟T细胞(CD3+)或NK细胞(CD3-)的淋巴增殖性疾病,是由良性多克隆/寡克隆和恶性单克隆LGLs增殖组成的连续疾病谱,表现为惰性行为或需要侵袭性治疗的快速进展血液学肿瘤,包括4种不同的类型:T-LGLs白血病、侵袭性T-LGLs白血病、慢性NK细胞白血病和侵袭性NK-细胞白血病,其中85%是T-LGLs白血病.由于其他3种LGLs白血病少见,本文主要就T-LGLs白血病的发病机制进行综述.
