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胰岛细胞自身抗原IA-2及其自身抗体在1型糖尿病研究中的意义
IA-2是近年来发现的1型糖尿病的一种主要自身抗原,它不仅是体液性自身免疫反应的靶蛋白,而且可能也是细胞免疫反应的靶分子.对IA-2及其自身抗体的研究,在1型糖尿病发病机制、预测及防治等方面均具有重要的意义.
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T细胞接种与自身免疫病
正常的T细胞库中包含了识别自身抗原的自身反应性T细胞,它们可以存在于血循环中而不引起自身免疫病,是因为处于灭能(anergy)状态.在某些情况下,自身反应性T细胞异常激活、增殖,引发针对自身抗原的免疫应答.在许多器官特异性自身免疫病中可找到己激活并发生克隆增殖的自身反应性T细胞[1].对自身免疫性疾病治疗手段的根本性突破应该寄希望于对自身反应性T细胞的调节机制深入的认识,包括生理状态下自身反应性T细胞的调节和功能性调节网络的失控.但在发病机制未完全阐明之前,着眼于利用自身免疫调节网络,避免传统免疫抑制治疗副作用的方法正日益为人们所重视.其中之一就是T细胞接种(T cell vaccination,TCV).TCV是指用灭活或低于致病剂量的自身反应性T细胞或其T细胞受体(T cell receptor,TCR)多肽作为疫苗接种,特异性地防治自身免疫性疾病,它的出现对于以T细胞为中心的免疫耐受研究来说有其必然性.
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风湿性心脏病自身抗原RHDAG1的获得与鉴定
目的 探索用风湿性心脏病患者噬菌体表达文库构建和免疫筛选方法来研究风湿性心脏病的自身抗原候选分子.方法 提取风湿性瓣膜性心脏病患者心肌组织总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成长链cDNA,用噬菌体载体构建表达文库,用风湿热患者血清免疫筛选该库,对筛选获得的自身抗原基因进行鉴定、生物信息学分析、体外表达、Western blotting鉴定和免疫反应结合性分析.结果 成功构建了风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/ml,重组率为99%,81%外源片段大于1 kb.通过免疫筛选方法获得了自身抗原RHDAG1,该自身抗原与人类角蛋白18同源,能与活动性风湿热患者血清和风湿性心脏病患者血清结合,而与体检健康人血清无结合.结论 构建噬菌体展示文库方法可以有效地用于筛选和获得风湿性心脏病患者自身抗原;本研究提示自身抗原RHDAG1可成为风湿热和威风心病的候选分子标志物.
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胰岛自身抗体检测及其临床应用
1型糖尿病(T1DM)是由致病性T淋巴细胞介导的以胰岛β细胞进行性破坏为特征的自身免疫性疾病.自身反应性T淋巴细胞破坏胰岛β细胞,使得存在于胰岛细胞内的自身抗原释放,被B淋巴细胞识别,从而产生抗体.自1974年胰岛细胞胞浆抗体(islet-cell cytoplasmic autoantibodies,ICA)被首次发现,胰岛自身抗体与T1DM的关系便引起了广泛关注.胰岛自身抗体通常出现于T1DM发病初期,也可出现在T1DM发病前数月至数年,因此,胰岛自身抗体检测对T1DM的诊断和预测具有十分重要的临床意义.本文将重点阐述胰岛自身抗体检测的研究现状及临床应用.
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慢性移植肾肾病大鼠体内自身蛋白vimentin与megalin的免疫原性迥异
目的:研究自身组织蛋白vimentin (Vim)和megalin (Meg)在慢性移植肾肾病(CAN)大鼠体内的免疫原性.方法:Lewis大鼠接受F344大鼠供肾移植,每2周检测受体蛋白尿水平观察CAN进程.肾移植后第14、49、98天收获受体脾细胞,检测Vim及Meg特异性IFN-γ分泌细胞的数量;收获受体血清检测Vim及Meg特异性抗体水平.结果:受体肾移植6周后肾功能逐渐衰退,处于CAN病程中.Vim特异性IFN-γ分泌细胞数量逐渐增加,至98 d时其数量比对照孔差异有极显著性(126.0±10.4 vs.24.7±4.3,P＜0.001).Vim特异性抗体水平肾移植后14 d即显著升高(0.230±0.018 vs.0.063±0.008,P＜0.01),其后缓慢持续升高.CAN大鼠Meg特异性IFN-γ分泌细胞数量无显著性变化.Meg抗体水平直至98 d时比正常大鼠略有上升(0.054±0.006 vs.0.022±0.003,P＜0.05),但远低于同期Vim抗体水平(P＜0.01).结论:在同种肾移植大鼠CAN病程中,自身蛋白Vim表现强免疫原性而Meg免疫原性极弱.
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肿瘤血管内皮抑素tumstatin腺相关病毒载体的构建及其功能的初步鉴定
目的:探讨腺相关病毒(rAAV)-肿瘤内皮抑素(tumstatin)(简称rAAV-Tum)栽体的构建及其生物学效应的初步鉴定.方法:用PCR扩增tumstatin序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-Tum;采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩;用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对rAAV-Tum生物学效应进行初步鉴定.结果:成功构建pAAV-Tum载体,并经酶切、PCR及测序证实;rAAV病毒颗粒滴度达2 × 1010 v.p/mL,浓缩后可达到2×1011～12 v.p/mL;rAAV-Tum可以分泌内皮抑素,诱导HUVEC凋亡.结论:成功构建rAAV-Tum腺相关病毒,体外实验表明该病毒能高效诱导内皮细胞的凋亡.
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吲哚胺2,3-双加氧酶与自身免疫性疾病
吲哚胺2,3-双加氧酶(indol eamine 2,3-dioxygenase,IDO)是肝脏外唯一可催化色氨酸沿犬尿氨酸分解的关键酶和限速酶,通过降解色氨酸,使局部组织中的色氨酸耗竭,色氨酸的代谢产物犬尿氨酸的浓度增加,从而抑制T淋巴细胞的增殖.自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病.目前,大多数学者认为自身免疫性疾病是自身免疫失耐受,产生针对自身抗原的抗体以及自身反应性淋巴细胞的活化.文献报道在健康成年个体内,可发现具有潜在自身反应活性的T淋巴细胞,这些自身反应性T淋巴细胞可通过诱导凋亡及免疫无能等多种机制来维持自身免疫耐受状态[1-2],而在这一过程中,免疫调节酶IDO起了非常重要的作用.IDO作为免疫平衡的一个重要调节器,通过自身免疫反应,能诱导外周免疫耐受和调控自体免疫反应.有研究证实IDO介导的色氨酸代谢异常已在移植、肿瘤、妊娠以及自身免疫性疾病中起作用[3-6].
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TSHr在Graves眼病发病机制中作用的研究进展
促甲状腺素受体(TSHr)是Graves病(GD)甲状腺功能亢进的自身抗原[1].近年来,因其可能是甲状腺和眼眶的共享自身抗原而引起了广泛的关注.本文就TSHr的生物学特性、其在眼眶组织中的表达以及影响其在眼眶组织中表达的有关因素等研究中的进展作一介绍.
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造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病的机制
自身免疫性疾病(autoimmune disease,,AID)是机体免疫系统功能紊乱,产生针对自身抗原的抗体和(或)致敏淋巴细胞,导致组织器官损伤和功能障碍的一类疾病.目前公认的自身免疫疾病有几十种,包括结缔组织疾病、神经肌肉疾病、内分泌性疾病、消化系统疾病等.一般应用免疫抑制剂进行治疗,但其有较多的不良反应,且重症患者疗效不佳.
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一例自身免疫性溶血性贫血的输血治疗体会
自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia, AIHA)是由于病人的免疫系统对"自我与非自我"的识别机制发生紊乱,产生针对各种自身抗原的自身抗体或/和活化的补体,吸附在红细胞表面,导致红细胞破坏加速,寿命缩短而引起的溶血性贫血.AIHA涉及的免疫学问题非常复杂,病因呈复杂多样性,AIHA的输血与一般贫血有所不同,笔者就1例AIHA患者交叉配血情况,和该类患者输血治疗过程作探讨.
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Graves眼病自身抗原研究进展
Graves眼病是一种器官特异性自身免疫性疾病,被认为是由针对自身抗原的抗体造成的自身免疫反应.目前比较公认的自身抗原为促甲状腺激素受体(TSHR),另外有研究发现可能导致Graves眼病的自身抗原还包括甲状腺过氧化物酶(TPO)、甲状腺球蛋白(Tg)以及眼外肌抗原等[1].到目前为止,对Graves眼病的各种自身抗原的本质及其相互间关系仍不清楚,下面仅就各种Graves眼病的自身抗原作一简要介绍.
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流式免疫多重微球芯片技术检测干燥综合征自身抗体的评价及应用
目的：建立多重微球芯片流式免疫荧光发光法检测原发性干燥综合征（pSS ）自身抗体的评价及应用。方法采用多重微球流式免疫荧光发光法，以聚苯乙烯微球为反应界面，将8种[SSA（60 kD）、SSB、α‐fodrin、M3、ds‐DNA、nRNP／Sm、Sm、M2]抗人IgG单克隆抗体包被微球后，用该方法检测同一血清样本中的多种可溶性蛋白抗体。选取pSS患者206例、非pSS患者110例和健康人69例，用多重微球流式免疫荧光发光法检测8种自身抗体。结果多重微珠流式免疫荧光发光法检测8种抗体的批内差异及批间差异均较小；检测pSS组的8种抗体水平与非pSS组、健康组比较，差异均有统计学意义（ P＜0．01）；诊断pSS的总敏感度可达97．20％，总特异性可达96．34％。结论多重微球流式免疫荧光发光法检测pSS自身抗体方法可以一次同时进行8种自身抗体的联合检测，为pSS及其他自身免疫病的确诊创造了一种准确、便捷的检测新方法。
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3-磷酸甘油酸脱氢酶及其抗体对自身免疫性肝炎的诊断意义
目的 克隆D-3-磷酸甘油酸脱氢酶(Phgdh)的cDNA,构建重组表达质粒,纯化重组蛋白,初步探讨Phgdh抗体在自身免疫性肝炎诊断中的意义. 方法血清蛋白质组学方法鉴定差异蛋白,构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达,融合蛋白经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot法进行免疫鉴定;应用表达蛋白建立间接酶联免疫吸附法,检测60名健康体检者、65例自身免疫性肝炎(AIH)、122例原发性胆汁性肝硬化、56例慢性乙型肝炎,117例慢性丙型肝炎患者血清中抗Phgdh抗体.组间率的比较用χ2检验.结果 经重组质粒测序和酶切鉴定结果证实,Phgdh目的 基因已正确插入原核表达载体中,基因序列正确,符合表达框架.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达产物在相对分子质量约6.0×104附近有一明显的蛋白表达带,Western blot分析结果显示重组蛋白具有Phgdh抗原反应性.酶联免疫吸附法检测血清标本结果显示,AIH、原发性胆汁性肝硬化、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及正常人抗Phgdh抗体阳性检出率分别为66.15%、21.42%、12.50%、6.83%和3.30%.AIH组Phgdh自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 本研究成功克隆了Phgdh的cDNA,并将其在大肠杆菌中成功表达.该抗体主要在AIH患者中检出,此抗体的检测有助于提高AIH的临床诊断水平.
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钙调蛋白对骨骼肌炎症的干扰效应
目的 探讨钙调蛋白(Calmodulin,CaM)对急性骨骼肌炎症反应的影响.方法 心毒素(Cardiotoxin,CTX)肌内注射,诱导C57BL/6小鼠胫骨前肌(tibialis anterior,TA)急性损伤.肌损伤小鼠腹腔注射钙调蛋白抑制剂R24571或激动剂CALP1.分别检测TA肌组织自身抗原和TLRs表达以及单核/巨噬细胞的肌内浸润程度.结果 CTX注射导致急性肌损伤,TA肌内出现大量的炎性渗出,并伴随肌纤维坏死.损伤肌组织内CaM、自身抗原(Mi-2,HRS和Ku70)以及TLR3表达上调.较之CTX损伤组,CALP1处理导致损伤TA肌内单核/巨噬细胞数量增多,肌内自身抗原和TLR3 mRNA和蛋白水平上调,R24571则减少肌内炎性浸润并下调上述炎性介质.结论 CaM信号参与介导急性骨骼肌炎症反应.
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周期性力学刺激对成肌细胞自身抗原表达的影响
目的 探讨周期性力学刺激对体外培养的成肌细胞自身抗原表达的影响. 方法 取C2C12细胞根据处理方法不同分为实验组及对照组,其中实验组分为4个亚组,即2、4、6d周期性拉伸组(2、4、6d拉伸组)及1d拉伸组.2、4、6d拉伸组:细胞置于Flexercell 5000柔性基底加载系统,以0.25 Hz拉伸频率、10％拉伸幅度进行每天2h应力加载,连续加载2、4、6d; 1d拉伸组:细胞置于Flexercell 5000柔性基底加载系统,以1 Hz拉伸频率、15％拉伸幅度拉伸1h,23 h后收集细胞;对照组:细胞常规培养1、2、4、6d.培养期间于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况.采用流式细胞仪检测细胞增殖情况,Western blot检测自身抗原DNA依赖蛋白激酶催化亚基(Ku/the catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase,DNA-PKcs)、Mi-2 (reconfigurable components deacetylase complexes of NuRD)、U1-70 (A partofATP-dependent DNA helicase Ⅱ)、组氨酰-tRNA合成酶(histidyl tRNA synthetase,HRS)表达情况. 结果 经培养后,1d拉伸组可见脱落细胞,对照组1d时无细胞脱落；2d拉伸组细胞增殖较对照组2d时明显；4 d拉伸组细胞出现分化,6d拉伸组细胞部分融合,与对照组4、6d时情况一致.1d拉伸组细胞经单次拉伸后出现凋亡,相对DNA增殖指数(relativeDNA proliferation index,DPI)与对照组1d时比较,差异无统计学意义(t=0.346,P=0.747).经周期性拉伸后,2、4d拉伸组DPI较对照组2、4d时显著提高(P＜0.05),6d拉伸组与对照组6d时比较差异无统计学意义(t=1.191,P=0.303).2d拉伸组DNA-PKcs、Mi-2、HRS和U1-70蛋白相对表达量均较对照组2d时明显降低(P＜ 0.05); 4d拉伸组与对照组4d时比较差异均无统计学意义(P＞0.05).4d拉伸组各抗原蛋白相对表达量均较2d拉伸组显著增加(P＜0.05),而对照组4d时均较2d时显著降低(P＜0.05). 结论 短期力学刺激可以抑制成肌细胞自身抗原表达,但随时间延长,细胞分化融合以及对力学刺激的适应使其对自身抗原表达抑制作用减弱.
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I型糖尿病自身抗体对胰岛移植的反应
在自身免疫I型糖尿病患者中进行胰岛同种异体移植是对自身抗原的再暴露.这里,对36名患者(33名通过环孢霉素和基于类固醇的免疫抑制接受胰岛及肾脏移植,3名通过霉菌酚盐而非环孢霉素免疫抑制仅接受胰岛移植)进行胰岛移植前后GAD抗体及IA-2抗原测定,表明5名患者(3名肾移植后接受胰岛移植,2名仅接受胰岛移植)在胰岛移植后7天内GAD抗体明显升高且在30天内第3名患者仅接受胰岛移植.
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各种肿瘤抗原相关肿瘤疫苗的研究现状
治疗癌症有各种各样的方法,但癌症仍是目前全世界的主要死因之一.针对这种快速分裂细胞的非手术治疗如放疗、化疗等,仍然会作用于正常细胞而导致不良反应,使治疗效果受限.随着人们对免疫系统及其调节方式认识的深入,用免疫手段来控制和清除肿瘤成为了一个热点.微生物和肿瘤细胞作为一个免疫靶点时,它们的不同之处在于肿瘤细胞是起源于宿主的,其表面的大多数分子是正常的自身抗原,在正常细胞中也存在.为使肿瘤分子具有免疫的特异性,必须找到能区分肿瘤细胞与宿主细胞的肿瘤抗原[1].
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葡萄糖-6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的意义
类风湿关节炎(RA)是一种免疫功能紊乱所引起的自身免疫性疾病.患者体内存在多种自身抗原和自身抗体,不同患者的自身抗原可能不同,自身抗原或非自身抗原产生的免疫反应是RA产生或持续存在的原因.触发免疫的自身抗原很大程度上为软骨或关节特异性抗原.
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谷氨酸脱羧酶抗体测定在糖尿病中的临床意义
谷氨酸脱羧酶(glutarmic acid decarboxylase,GAD)是催化谷氨酸形成抑制性神经递质r-氨基丁酸(GABA)的关键限速酶,它主要存在于脊椎动物和人中枢神经系统的神经元及胰岛组织中,其他组织如睾丸、卵巢、胸腺、肝脏、脾、肾脏中亦存在GAD.在胰岛组织中,GAD催化合成GABA,激活α2细胞中GABA分泌的抑制作用[1].自1982年Backkescov等首先提出GAD是1型糖尿病的自身抗原后,GAD抗体测定在临床上的应用也日趋受到重视.现对128例糖尿病患者血清进行了测定分析,探讨GAD抗体在糖尿病患者中的发病机制,为临床诊断、分型及治疗提供依据.
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利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究
目的:利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体.方法:将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色.结果:本法的敏感性和特异性分别为93.33%和100%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94.87%.结论:本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景.
