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抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定
目的用噬菌体展示技术构建抗SSA单链抗体库.方法分离抗SSA抗体阳性病人外周血单个核细胞,提取RNA并反转录cDNA.扩增免疫球蛋白重链可变区(VH)和κ链可变区(Vκ).通过重叠聚合酶链反应(PCR)用连接片段将VH和Vκ体外连接成单链抗体(single-chain Fv,scFv)基因.而后用SfiⅠ和NotⅠ酶切并与噬菌粒pHEN2连接;将pHEN2-scFv电转至大肠杆菌TG1,建立抗SSA scFv cDNA库.随机挑选克隆用PCR扩增插入片段了解插入效率.用辅助噬菌体VCS-M13感染含pHEN2-scFv的TG1,产生scFv噬菌体抗体.用酶联免疫吸附(ELISA)检测构建的scFv噬菌体抗体库中有无抗SSA抗体存在.结果与VH和Vκ支架结构互补的引物可扩增出300~400 bp大小VH和Vκ片断;重叠PCR体外连接成约800 bp大小scFv基因(VH-linker-Vκ).将scFv基因克隆至pHEN2,电转TG1后计数克隆数为3.0×107 cfu.随机挑选12个克隆,其中11个克隆PCR扩增出插入片段,插入效率约为91%.用辅助噬菌体VCS-M13感染含pHEN2-scFv的TG1后,产生1.2×1014pfu/ml噬菌体抗体颗粒.抗SSA ELISA试剂盒检测其抗SSA活性,scFv噬菌体抗体的A值比相同稀释度的VCS-M13的A值高2.0~2.2倍.结论建立的抗SSA scFv噬菌体抗体库含有的独立克隆数为3.0×107 cfu,插入效率约91%,ELISA检测证实此抗体库中存在抗SSA抗体.可进一步进行亲和力筛选以得到单克隆抗SSA scFv抗体.
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抗Kinectin抗体与白塞病相关性研究
目的研究抗kinectin抗体与白塞病的关系.方法从人喉癌上皮细胞(Hep2细胞)抽提RNA,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增碱基序列相当于kinectin的氨基酸503~994(kin-m)和氨基酸920~1 346(kin-3) 两个片段,并克隆到pET42-a(+)载体中.诱导表达的融合蛋白经纯化后建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,并对白塞病患者血清进行分析.结果构建的表达kinectin载体能在大肠杆菌中表达具有抗原性的肽段,用纯化的融合蛋白建立检测抗kinectin抗体的ELISA方法,对46例白塞病患者、118例其他自身免疫病患者及51名正常人检测显示kinectin抗体阳性率分别为白塞病63%(29/46),系统性红斑狼疮22%(8/37)、类风湿关节炎16%(5/31)、干燥综合征41%(11/27)、混合性结缔组织病29%(4/14).与118例其他自身免疫病相比,白塞病中抗kinectin抗体的检出率明显升高(P<0.01).结论 Kinectin是白塞病的相关抗原,在其他自身免疫病中也可检测到该抗原抗体,其意义有待进一步研究.
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自身精氨酸肽的瓜氨酸化与类风湿关节炎
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血液中存在许多针对大量自身抗原的自身抗体,其中被广泛了解的是类风湿因子(RF),但RA中RF阳性率仅约75%,而且RF也可出现在其他风湿性疾病和感染性疾病中,甚至一部分正常人中,对RA的诊断价值受到限制[1].
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自身免疫病新自身抗体的筛选方法研究进展
自身免疫病是指机体针对自身抗原发生免疫反应而导致组织损伤或器官功能障碍的疾病,其发病率占世界人口的3%~5%。自身免疫病异质性很强,发病机制和临床表现复杂,使早期诊断尤为困难,因而耽误病情影响患者生存质量甚至危及生命。自身抗体是自身免疫病的重要标志,不同疾病和不同亚型具有不同的自身抗体谱,探索自身抗体对疾病的发病机制、疾病预警、预后判断以及治疗具有重要意义。随着实验技术的进步,越来越多的方法应用在寻找新的自身抗体中,并取得系列研究成果。自身抗体的寻找思路主要为用抗原和患者的血清免疫球蛋白相互作用,不同方法源于抗原制备方式的不同而各有特点。本文就自身免疫病中新自身抗体的筛选研究进展综述如下。
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B细胞与系统性红斑狼疮的发生发展及治疗
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一典型的临床表现多样,能针对自身组织产生多种抗体的自身免疫性疾病[1].SLE针对自身抗原产生多种自身抗体的现象,不仅表现在不同人种的人群中,同时也表现在各种鼠模型中.研究表明固有B淋巴细胞的高度活动可能参与狼疮疾病的整个过程.过去的研究主要认为由于T淋巴细胞的监察功能的缺失,自身反应性T淋巴细胞诱导B淋巴细胞产生自身抗体,而近来的研究则表明B淋巴细胞除了参与抗体的合成和释放外,在对淋巴系统的发育、通过分泌细胞因子调节树突细胞(DCs)和T细胞亚群及激活T细胞等方面均有重要的功能.
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系统性红斑狼疮免疫机制研究进展
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及多系统的自身免疫疾病,其主要特征是能产生针对多种自身抗原的自身抗体.以抗核抗体(ANA)为主的多种自身抗体形成的免疫复合物在许多组织沉积,如肾小球、中枢神经系统、皮肤、关节等,触发Ⅲ型超敏反应,造成广泛组织损伤,引起多种临床表现.
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病毒感染与干燥综合征发病的研究进展
干燥综合征(Siogren's syndrome,SS)是一种主要累及全身外分泌腺的慢性炎症性自身免疫病,以唾液腺和泪腺损害为主,以腺管腺泡细胞凋亡以及大量淋巴细胞浸润为特征,自身抗体形成在SS发病过程中起重要作用.其病凶尚不完伞清楚.SS发病可分为两部分:①在易感基闪背景下,外部因素(如病毒等)参与导致外分泌腺上皮细胞过度凋亡并表达自身抗原;②自身抗原吸引淋巴细胞侵入靶器官导致第二阶段器官明显和持久损伤[1].
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人类软骨糖蛋白-39在类风湿关节炎发病中的作用
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病机制至今不甚明了.免疫遗传学和流行病学研究发现RA与Ⅱ类组织相容性抗原(MHC-Ⅱ) HLA-DR4分子相关联.根据分子模拟学说,自身抗原得以呈递给被激活的T细胞,从而产生自身免疫反应[1],在RA的发病中起到了关键性作用.
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α-Galcer干预自身免疫疾病研究新进展
自身免疫疾病是机体针对自身抗原发生免疫反应而导致的多系统疾病,发病原因可能与调节性T细胞有关.尽管人们对于调节性T细胞的免疫调节机制有所了解,但是大多数调节性T细胞亚型的抗原特异性仍不清楚,因此很难利用这些细胞的免疫调节活性达到治疗目的.近来,一类特殊类型的T细胞--invariant natural killer T cells(iNKT细胞)逐渐引起了人们的关注.相关研究发现,许多自身免疫疾病与iNKT细胞缺陷相关,而一种起源于海绵组织的脂类物质α-Galactosylceramide(简称α-Galcer)可以激活iNKT细胞产生大量的Th1和Th2细胞因子,参与免疫调节,为某些疾病的治疗提供了新的思路.目前许多研究小组已经将α-Galcer作为研究各种疾病的重要物质,其中包括自身免疫疾病的研究.已有的研究结果提示用α-Galcer干预自身免疫疾病可能有很大的潜力.本文就α-Galcer与自身免疫疾病的研究进展作一扼要综述.
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系统性红斑狼疮外周血单核细胞及中性粒细胞CD44表达及其临床意义
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)显著特点之一是产生多种自身抗体.自身抗体的产生可能与凋亡细胞清除障碍而导致自身抗原暴露、积聚,进而被自身反应性免疫活性细胞识别有关.凋亡细胞的清除可能由具有吞噬功能的单核巨噬细胞完成.
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补体异常与系统性红斑狼疮
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)为一自身免疫病,特征性表现为血清多种自身抗体和循环大量致病性免疫复合物沉积.人们很早就发现,SLE病情活动期多伴有血清补体C3、C4水平降低.经典理论认为,自身抗原和抗体结合形成免疫复合物,进而激活补体,造成炎症反应和组织损伤.
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调节性B细胞与类风湿关节炎
RA 是一种以慢性、进行性、侵蚀性为特征的全身性自身免疫病,其发病率、致残率高,发病机制尚未完全明确。作为体液免疫的重要部分,B 细胞能够针对自身抗原产生相应抗体,在自身免疫病的发生和发展中起着重要的正向免疫调节作用,已被广泛认识。近来研究表明,B 细胞中也存在一种可以调节免疫应答的细胞亚群,通过分泌 IL-10或 TGF-β及其他机制介导免疫耐受,抑制过度炎症反应,这种具有负向调控免疫应答的 B 细胞亚群被命名为调节性 B 细胞。本研究就调节性 B 细胞在 RA 中的研究进展做一综述。
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诱导性调节性T细胞在自身免疫病的研究进展
自身免疫病(autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。免疫系统紊乱在发病中起着重要作用,免疫调节逐渐成为自身免疫病的中心环节。越来越多的研究发现,CD4+CD25+Foxp3+调节性T 细胞(regulatory T cells,Tregs)[1]是生理和病理生理条件下免疫调节起到关键作用,在感染、肿瘤、移植免疫及自身免疫病中均发挥着重要作用。Treg主要分为两大类:自然调节性T 细胞(natural Treg,nTreg)和诱导性调节性T细胞(induced Treg,iTreg),在近期的研究中发现,与nTreg相比,iTreg在自体内分离相对容易、扩增相对较快、Foxp3表达较高、稳定性好及对动物模型的治疗效果好等方面上均有明显的优势,其可作为治疗自身免疫病的新靶点[2]。因此,本文将iTreg的概念、特性及临床应用前景等方面进行如下综述。
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中性粒细胞胞外诱捕网在系统性红斑狼疮发病机制中的作用
系统性红斑狼疮(SLE)是一种具有多种临床表现的复杂的多基因疾病,对自身抗原耐受的降低及多种自身免疫性抗体的产生是它基本的特征。在过去的几十年内,人们主要关注适应性免疫特别是调节性T细胞、B细胞的异常,以及基因、激素水平、环境等因素在SLE的发病过程中所起的作用[1-3]。但SLE的确切机制仍未能得到明确阐述。
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树突状细胞在类风湿关节炎中的作用
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以滑膜炎为主要特征的自身免疫病,一般认为RA的发生涉及抗原呈递细胞(APC)对自身抗原的异常呈递,导致自身反应性T细胞的激活.树突状细胞(dendritic cells,DC)是一类专职性APC,在诱发免疫反应及免疫耐受的形成中起重要作用.本文主要综述DC在RA中的作用.
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1型糖尿病的实验室诊断
1型糖尿病是遗传易感性个体通过自身抗原介导的免疫反应引起胰岛β细胞破坏的自身免疫性疾病.目前认为在临床明显的糖尿病发生以前,1型糖尿病经过一较长时间的糖尿病前期,如何在前期预测糖尿病的发生,筛选1型糖尿病的高危人群,及时进行免疫干预治疗是预防1型糖尿病的关键,因而1型糖尿病的生化检测指标显得尤为重要.
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疑难血型鉴定的两种简易处理方法
自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是体内产生针对自身抗原的抗体和(或)活化的补体,吸附于红细胞表面,使其易被破坏所引起的一种溶血性贫血[1]。自身抗体对患者血型鉴定和交叉配血常有干扰。近期工作中遇到的2例溶血危象患者,其体内的自身抗体对血型血清学试验同样造成了严重影响,但通过2种简易的处理方法,可得出正确的血型鉴定及交叉配血试验结果,实现临床用血的安全保障,现报告如下。
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肿瘤相关抗原抗体联合检测在肺癌患者诊断中的意义
肺癌是常见的恶性肿瘤之一,肿瘤是由于细胞分化增殖调控异常而导致的细胞生长失控.在肿瘤的恶变过程中,因新的蛋白质产生,同时某些蛋白质被过度表达,从而激发机体的免疫应答[1].以CD8+T为主的特异性细胞免疫应答在抗肿瘤效应中发挥主要作用,同时,在肿瘤患者的血清中可检测到多种针对自身抗原和肿瘤抗原的抗体,虽然其产生机制和作用并不清楚,但这些自身抗体的存在表明体液免疫在识别肿瘤抗原中起着一定的作用[2].
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糖尿病患者血清中谷氨酸脱羧酶抗体的测定
1型糖尿病是遗传易感个体通过自身抗原介导的免疫反应所引起胰岛B细胞破坏的自身免疫性疾病,GAD是此反应关键的始动靶抗原,因此GAD-Ab是糖尿病前期个体较特异的免疫指标.GAD-Ab的存在提示胰岛B细胞的破坏及部分功能的丧失,故作为1型糖尿病的预测、诊断、治疗都有独特的价值.本文通过对住院患者的GAD和C-肽兴奋试验的联合测定结果作一初步探讨.
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白塞病的实验室诊断
白塞病(behcet disease,BD)是一种器官非特异性自身免疫病,临床特点是复发性口腔溃疡、外生殖器溃疡和葡萄膜炎三联征.