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矽肺合并肺部感染病人痰中109株肺炎克雷伯菌的药敏分析
资料与方法2008年3月～2009年12月矽肺合并肺部感染病人痰中肺炎克雷伯菌109株,所有菌株经ViTEK-AMS全自动分析仪鉴定.方法和材料:采用K-B法纸片扩散法进行试验,采用纸片确证试验进行ESBLs的检测,按美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS-2007)标准判读结果.标准菌株为肺炎克雷伯菌ATCC700603.
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昆明市部分医院临床标本中革兰阴性杆菌耐药性检测
1.材料与方法:①菌株来源:昆明市4家三甲医院临床标本中首次分离的革兰阴性杆菌2 390株.②抗生素类:氨苄西林(AMP)、哌拉西林(PIP)、头孢哌酮/舒巴坦(CFP/SUL)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、哌拉西林/他唑巴坦(PIP/TZB)、亚胺培南(IPM)、头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢吡肟(FEP)、阿米卡星(AMK)、环丙沙星(CIP),按美国临床实验室标准委员会(NCCLS)2001标准判读结果,以上纸片均为OXOID公司产品.③药敏试验:Kirby-Bauer琼脂纸片扩散法,培养基采用Mueller-Hinton(OXOID).④统计学分析采用WHONET 5.
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569株病原菌耐药性调查
为了解病原菌的耐药性,为临床用药提供参考,对1998年1～10月5 321份送检物作分离培养,得到病原菌569株,并用23种常用的抗生素进行药敏试验.药敏试验采用Kirby-Bauser纸片扩散法,按卫生部抗菌药物细菌耐药性监测中心规定的标准进行.
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红茶菌发酵液抑菌作用研究
目的 研究不同pH值下红茶菌发酵液及其蛋白提取液的抗菌作用,为探寻新的抗菌物质奠定基础. 方法 采用K-B纸片扩散法检测不同pH值下红茶菌发酵液及不同量的蛋白提取液分别对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌作用. 结果 红茶菌发酵液在酸性条件下对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的生长具有明显的抑制作用,而在碱性条件下均未表现出抑制作用;红茶菌蛋白提取液对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有抑菌活性,红茶菌发酵液及蛋白提取液对白色念珠菌无明显抑菌作用. 结论 红茶菌发酵液具有明显的抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生长的作用.红茶菌发酵产生的蛋白质类物质是红茶菌液中的抑菌活性成分之一,具有用作食品抑菌剂的潜在价值.
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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药机制及1型整合酶基因的研究
铜绿假单胞菌(PAE)是医院感染的重要病原菌之一,探讨本地区临床分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药性及金属β内酰胺酶、外膜蛋白通道OprD2基因和1型整合酶基因存在状况有实用意义.用PCR法对金属β内酰胺酶IMP、VIM、SPM、GIM基因和外膜蛋白通道OprD2基因及1型整合酶基因等6种耐药基因进行检测与研究,并用K-B纸片扩散法和微量稀释法测定对庆大霉素等18种抗菌药物的敏感性.
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超广谱β-内酰胺酶基因分型的初步研究
按质粒所携带编码基因同源性的不同，将超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum β-lactamases,ESBLs)分为4类，即TEM型、SHV型、TEM/SHV混合型和非TEM/非SHV型(包括PER、TOHO、CTX-M、OXA型等)。本文报告绍兴地区产ESBLs细菌基因分型的初步结果。 临床标本分离、并经纸片扩散法确证为产ESBLs的细菌42株(其中大肠埃希菌26株，肺炎克雷伯菌16株)。用PCR进行酶基因分型。PCR扩增引物，根据TEM-1和SHV-1编码基因序列设计，TEM引物序列分别为：5′-TCGGGGAAATGTGCG-3′和5′-TGCTTAATCAGTGAGGCACC-3′；SHV引物为5′-TCGGCCTTCACTCAAGGATG-3′和5′-TCCCGCAGATAAATCACCA-3′。待测菌株用碱裂解法提取质粒DNA。PCR反应体积为100μl，含1×PCR反应缓冲液，3.5mmol/L Mg2+,200μmol/L dNTPs,500μmol/L引物，1.6U Taq酶(Promega)，10～100ng质粒DNA模板。
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肺炎克雷伯菌多重耐药机制的研究
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoni-ae,Kpn)是引起医院内感染的常见病原菌之一.用PCR法检测9种氨基糖苷类修饰酶基因、9种β-内酰胺酶编码基因及Ⅰ类整合酶基因并对整合子进行分析,采用纸片扩散法选出58株多重耐药的Kpn,测定对亚胺培南等17种抗菌药物的敏感性.
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100株流感嗜血杆菌的抗生素敏感性调查
1997年至1998年从本院门急诊呼吸道感染病人的痰和咽拭子标本中分离了100株流感嗜血杆菌(HIN).采用美国临床实验室标准化委员会推荐的纸片扩散法,测试了它们对13种抗生素的敏感性,还用E-test(R)条测试了其中头孢布烯的活力.
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4种方法检测替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌体外药敏结果分析
目的：比较四种不同药敏方法检测替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌药敏结果的不同。方法将临床分离的鲍曼不动杆菌（158株）和肠杆菌科细菌（339株）用纸片扩散法检测替加环素敏感性，对非敏感的124株细菌再分别采用微量肉汤稀释法、MTS法、琼脂稀释法检测替加环素小抑菌浓度（ MIC），分析四种不同药敏检测方法间的差异性。结果替加环素对纸片扩散法非敏感的两种细菌均有较好的抗菌活性，MIC50大部分在敏感范围内（0．5～2 mg／L），MIC90均为4 mg／L。微量肉汤稀释法表明，替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌均有较好的抗菌活性，MIC50为1 mg／L， MIC90为4 mg／L。参照美国食品药品监督局（ FDA）和欧洲药敏试验委员会（ EUCAST）判读标准，敏感率分别为87．1％和70．2％。琼脂稀释法显示多数鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌测得的替加环素MIC结果比微量肉汤稀释法高2个稀释度[基本一致性（ EA）为56．5％]，按照FDA判读标准，非常重大误差（ VME）和重大误差（ME）均为0，分类一致性（CA）为46．8％；按照EUCAST判读标准，VME为0．8％，CA为24．2％。MTS法相比于琼脂稀释法，测定替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌的药敏结果更好，MIC50为1．5 mg／L，MIC90为4 mg／L，与微量肉汤稀释法较接近，按照FDA／EUCAST判读标准，敏感率分别为83．1％／21．0％，CA分别为81．5％／29．8％，EA为71．8％，但多数细菌结果比微量肉汤稀释法高1个稀释度。FDA判读标准的相关性比EUCAST判读标准好。纸片扩散法结果表明，按照FDA判断标准， ME 为19．4％，小误差（mE）为71．8％。本研究未出现VME菌株，但CA仅为8．9％。结论纸片法、MTS法、琼脂稀释法与微量肉汤稀释法均存在差异，其中以MTS法与微量肉汤稀释法相关性好，且FDA判读标准相比于EUCAST判读标准相关性更好。建议临床检测替加环素体外药敏试验，可参照美国FDA判读标准，通过纸片法常规检查，对于纸片法中介或耐药的菌株再进行MTS法进行确认，必要时可进行微量肉汤稀释法做进一步确证试验。
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评估纸片扩散法与Vitek2-compact GN13测定的肺炎克雷伯菌体外亚胺培南药敏及AES系统修正可靠性的研究
Vitek2是目前在临床微生物实验室相对普及的商品化鉴定及药敏系统，其中GN13卡在测定临床常用抗菌药物的体外药敏及常见耐药表型方面具有很好的可靠性。但由于近年来亚胺培南在美国临床和实验室标准协会( CLSI)中判断折点的变迁，造成 AES ( advanced expert system)专家系统对其修改率也逐渐攀升，针对此情况我们开展评估纸片扩散法与Vitek2-compact GN13测定肺炎克雷伯菌体外亚胺培南药敏及 AES 系统修正的可靠性。
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评估纸片扩散法与 Vitek2-compact GN13测定肠杆菌科细菌体外药敏及 ESBLs 可靠性的研究
目的：评估纸片扩散法与Vitek2-compact GN13测定肠杆菌科细菌体外药敏及ESBLs的可靠性。方法本研究选取了2011—2012年从21家医院腹腔感染患者中分离的93株肠杆菌科细菌。分别采用纸片扩散法、Vitek2-compact GN13、微量肉汤稀释法测定其对氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、厄他培南、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、亚胺培南、阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星的体外敏感性。以微量肉汤稀释法作为参考方法，分别评估纸片扩散法、Vitek2-compact GN13与参考方法的分类一致率（ CA％）。利用PCR及测序法，在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌中筛选超广谱β-内酰胺酶（ ESBLs）耐药基因，评估纸片扩散法与Vitek2-compact GN13表型确证试验筛选ESBLs的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果纸片扩散法和Vitek2-compact GN13与参考方法的一致率均＞90％；但在使用Vitek2-compact GN13测定厄他培南、氨苄西林-舒巴坦、头孢他啶和头孢吡肟时，会出现一定比例的大错误（ ME，3．2％）和极大错误（ VME，2．2％）。此外，纸片扩散法和Vitek2-compact GN13对产ESBLs菌株测定的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为96．7％（29／30）、100％（20／20）、100％（30／30）和95％（19／20）。结论无论是纸片扩散法还是Vitek2-compact GN13，对肠杆菌科细菌体外药敏及ESBLs的测定均比较可靠。但在采用Vitek2-compact GN13测定厄他培南、氨苄西林-舒巴坦、头孢他啶和头孢吡肟时，应注意可能出现ME及VME。
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临床标本中分离的白念珠菌对氟康唑的敏感性分析
随着近年来免疫抑制剂,介入性检查治疗手段的广泛应用,肿瘤化疗、放疗,器官移植、艾滋病,以及社会老龄化等因素引起的免疫功能低下人群比例增高,临床标本中酵母样真菌的分离率明显增加,尤其是近年来为了有效控制多重耐药细菌引发的感染,大量新的、高效广谱抗生素临床应用,导致酵母样真菌引起的感染日益增多[1,2].近年来临床医生对高危人群和真菌感染患者常以氟康唑作为经验用药或预防用药,临床医生极为关注酵母样真菌特别是白念珠菌对氟康唑是否出现耐药性?其耐药趋势如何?本研究采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS )2003年新颁布的M44-P文件规则所推荐的纸片扩散法[3],分析了我院2003年1～7月从临床感染的标本中分离的104株白念珠菌进行氟康唑药物敏感性分析.
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浓度梯度法监测苛养菌对9种抗生素的耐药性
使用营养丰富的培养基和修改后的判断值,虽然纸片扩散法也可用于苛养菌的药物敏感试验;但是对于苛养菌,简易的纸片扩散法只能对常用抗生素作有限的分析.特别是近年来,美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)不再推荐用纸片扩散法测定阿莫西林/棒酸和氨苄青霉素/舒巴坦对流感嗜血杆菌的抗菌作用, 以及广谱头孢菌素对肺炎链球菌的抗菌作用, 其原因是纸片扩散法的结果会造成过多的解释错误.为此,我们选用了已逐渐被认可的浓度梯度法(Etest法)测定100株苛养对9种抗生素的低抑菌浓度(MIC),来监测它们对抗生素的耐药性,指导临床用药.
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3 236株细菌对头孢美唑和其他10种β-内酰胺药敏感性分析
头孢美唑(cefmetazole)系半合成头霉菌素类,其抗菌谱广,对多种革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌及厌氧菌如脆弱拟杆菌具有很好的活性[1～3],我们采用纸片扩散法测定头孢美唑对1993～1996年来本院住院的病人中分离的3 236株菌体外活性,并与其他10种β-内酰胺抗生素作了比较.
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脑脊髓液中肺炎链球菌耐药性的检测
我们从脑脊液中分离到45株肺炎链球菌，采用苯唑西林纸片扩散法和琼脂稀释法测定了肺炎链球菌对青霉素等10种抗生素药物的耐药情况。报道如下。
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纸片扩散法检测阴沟肠杆菌超广谱β内酰胺酶的评价
目前文献多采用双纸片扩散试验检测阴沟肠杆菌ESBLs[1] ,但美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)对该方法仅推荐用于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌(ESBLs)的检测,我们对临床分离的101株阴沟肠杆菌,同时用双纸片扩散试验和头孢曲松三维试验测ESBLs,以评价双纸片扩散试验用于检测阴沟肠杆菌ESBLs的可靠性.
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什么是VISA?
问:什么是VISA?答:VISA是英文vancomycin intermediate S.aureus的缩写,中文译为万古霉素中度耐药金黄色葡萄球菌.细菌对万古霉素敏感度的判断标准,美国临床实验室标准化委员北会的规定是低抑菌浓度(MIC)≤4 μg/ml为敏感,MIC≥32 μg/ml为耐药,MIC=8～16 μg/ml为中度耐药.所以,将万古霉素MIC在8～16 μg/ml的金黄色葡萄球菌称为VISA.VISA名称的产生源于1996年和1997年分别在日本和美国发现的万古霉素MIC=8 μg/ml的耐甲氧苯西林金黄色葡萄球菌.这种菌株没有万古霉素耐药基因,不表现高度耐药(MIC＞32 μg/ml).VISA的发现提示万古霉素高度耐药葡萄球菌可能会出现.检测VISA,实验室须做稀释法药敏试验,纸片扩散法可能会漏检.
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吸入性肺炎的病原学研究
为给临床吸入性肺炎的诊断和治疗提供依据，我们自1996年2月～1997年3月，对来我院就诊的有误吸史的28例患者的纤维支气管镜（纤支镜）刷检物进行需氧和厌氧培养，获得了有关吸入性肺炎的病原学资料，报告如下。 一、材料与方法 1．病例选择：28例有误吸史、被诊断为支气管肺炎的患者中男性21例，女性7例，年龄在22～65岁之间。21例男性患者中，10例有经常酗酒史。7例女性患者中，1例有服农药自杀史，疑昏迷时误吸呕吐物，引起支气管肺炎。 2．标本采集及培养: (1)需氧培养取支气管刷检物接种血琼脂平板、巧克力平板和麦康凯平板，35℃培养24 h, 选择可疑菌落进行常规鉴定和药敏试验。(2) 厌氧培养采用纤支镜在双套管防污染毛刷双塞保护下刷取病变部位的分泌物，将刷检物立刻接种到已预还原24 h的强化血琼脂平板（BAP ）上，同时涂片进行革兰染色。将已接种的BAP平板立即放入厌氧罐中，35℃培养72 h，挑取不同菌落分离纯培养，并进行耐氧试验，以确定厌氧菌和兼性厌氧菌。 3．细菌鉴定: 需氧菌和厌氧菌的鉴定采用生物梅里埃公司生产的API生化系统，严格按照说明书进行操作。 4．药敏试验:采用纸片扩散法，按美国临床实验室标准化委员会1994年标准进行操作和结果解释。
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对《从血液中分离一株松鼠葡萄球菌》一文的异议
编辑同志:阅读贵刊<从血液中分离一株松鼠葡萄球菌>[1]一文后,笔者觉得有一点是需要更正的.此文中松鼠葡萄球菌的药敏试验采用纸片扩散法,药敏结果为:万古霉素、氯霉素、庆大霉素、替考拉宁、阿莫西林/棒酸均敏感;青霉素、苯唑西林、环丙沙星、红霉素、复方新诺明、克林霉素、四环素均耐药,笔者觉得阿莫西林/棒酸敏感的结果明显不妥.
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对《替加环素体外药敏试验操作规程专家共识》一文的更正
中华检验医学杂志2013年7月第36卷第7期584页发表的《替加环素体外药敏试验操作规程专家共识》一文中，表2（替加环素的抑菌圈直径和MIC药敏判定标准），肠杆菌科细菌根据FDA的折点判定标准，纸片扩散法抑菌圈直径应为：敏感≥19 mm，中介15～18 mm，耐药≤14 mm。由于作者疏忽，错误地写成了敏感≥16 mm，中介13～15 mm，耐药≤12 mm。特此更正，对大家工作中造成的不便，深表歉意。附更正后的表2。
