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骨密质碎片法分离培养小鼠间充质干细胞及其生物学特性鉴定
目的:建立一种从小鼠骨密质中分离培养间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)的高效方法,并证实骨密质来源MSCs具有成骨、成脂肪和成软骨的多向分化能力.方法:采取骨片法从C57BL/6小鼠骨密质中分离和纯化MSCs,荧光倒置显微镜下直接观察不同生长时期MSCs形态学特征；流式细胞术(Flow cytometry,FCM)对其进行免疫表型鉴定;取第5代MSCs进行成骨、成脂肪和成软骨定向诱导并作组织化学染色鉴定,RT-PCR方法检测定向诱导后特异性基因表达:骨特异性的骨钙素(Osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)基因,脂肪特异性的脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LP)和脂肪酶(Adipsin)基因,软骨特异性的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和蛋白聚糖(Aggrecan)基因.结果:接种骨密质碎片约24小时后即可见短梭状细胞从骨碎片向周围爬出,呈贴壁生长,经3次传代后即可获得细胞形态均一、贴壁能力强、易于消化的梭形MSCs.第5代C57BL/6小鼠MSCs阳性表达CD44 (99.81％)、CD29(99.77％)、Sca-1 (99.76％)和CD34(94.51％),阴性表达CD45(0.86％)和CD117(0.17％).第5代MSCs经诱导后可成功的分化为骨、脂肪和软骨细胞,相应茜素红、油红0和阿利辛蓝染色成阳性,并分别表达骨特异性骨钙素(Osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)基因,脂肪特异性脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LP)和脂肪酶(Adipsin)基因,软骨特异性Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和蛋白聚糖(Aggrecan)基因.结论:经骨密质碎片法培养可以在较短时间内分离出更高纯度的MSCs,该方法操作简单、经济,稳定性好,分离效率高,可重复性强.培养出的MSCs符合公认的标准(具有塑料粘附、特定的免疫表型和多向分化潜能).
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间充质干细胞制备类人工真皮修复全层皮肤缺损的实验研究
工程组织构建的关键因素:细胞、支架、生长因子.其中鉴定和分离既能在临床上存活又能适用于组织工程的细胞是目前组织工程面临的问题之一[1].研究表明间充质干细胞(MSCs)来源于中胚层,广泛存在全身各种组织中,经诱导后具有多向分化和相互转化的潜能[2,3],本实验拟以M SCs为种子细胞经体外培养、扩增、诱导后种植于壳多糖基质网架上,用此构建人工类真皮修复皮肤损伤,为用生物学方法治疗皮肤损伤寻找一种新途径.
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人骨髓间质干细胞分离、培养、分化和鉴定方法的研究
目的 探讨人骨髓间质干细胞(hMSCs)分离和体外培养的适宜条件,检测其多向分化的能力.方法 应用细胞生物学干细胞培养法、分子生物学干细胞组织工程学等方法研究hMSCs的分离、培养并检测其多向分化潜能.结果 hMSCs增殖能力在一定的范围内(2.5%～20%)随着血清浓度的增加而增大,20%的血清浓度适宜,其增殖活性在一定种植密度范围内(1～8×10~4/ml)随种植细胞数量增加而增高,在种植细胞密度为8×10~4/ml时,细胞的增殖活性高.所分离、培养的hMSCs是纯的、可长期传代、扩增的稳定的细胞.hMSCs在成脂培养基中有脂肪细胞形成,苏丹Ⅲ染色法将脂肪细胞胞浆染成桔红色.在成软骨培养基中有软骨细胞形成,阿尔新蓝染色法将软骨结节样结构染为深蓝色.在成骨培养基中有成骨细胞形成,Von Kossa染色法显示有黑色矿化结节形成.该细胞在特定的诱导培养条件下具有向脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞分化能力,符合判定hMSCs的"金标准".结论 所分离、培养的hMSCs是纯的、可长期传代、扩增并保持未分化状态的、稳定的细胞,其在体外诱导条件下可向脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞分化,是一种具有多向分化潜能的细胞.
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牙周膜干细胞的研究进展
根据干细胞的来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞,由于利用胚胎干细胞面临复杂的伦理学问题,因而对成体干细胞的研究就具有深远的意义[1].牙周膜干细胞( PDLSC)是牙周组织中具有自我复制和高度增殖能力的一类成体干细胞.PDLSC具有分化成牙槽骨,牙骨质和牙周膜潜能,在牙周病的治疗中发挥极其重要的作用.本文就PDLSC的培养、定位、分离以及牙周膜干细胞的生物学作用、应用展望等作一综述.
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人脐带间充质干细胞的分离鉴定及其修复缺血缺氧脑损伤作用
目的:研究人脐带间充质干细胞(UCMSCs)多向分化潜能,了解UCMSCs移植治疗脑缺血缺氧损伤(HIBD)大鼠的神经修复功能.方法:采用组织消化原代贴壁法分离培养人UCMSCs;取第4和10代UCMSCs进行流式细胞术检测间充质干细胞(MSCs)表面特异标志物表达;染色体分型检测染色体是否畸变;进行成神经、骨、脂诱导,了解其多向分化潜能;制备HIBD大鼠模型,穿梭箱测试对照组、HIBD细胞移植组和HIBD组大鼠的主动逃避率(AARR)和未逃避率(NARR).结果:流式细胞术结果显示,类似MSCs样细胞强表达CD29、CD44和CD105,极低表达CD34和CD45,符合UCMSCs的特征.多向分化诱导后的细胞染色和免疫荧光结果显示,UCMSCs可诱导分化为神经样细胞、脂肪细胞和成骨细胞,多次传代后仍可多向诱导,且未发生染色体畸变.穿梭箱测试提示,UCMSCs移植组大鼠在测试的第3、4和5天的AARR高于HIBD组(P<0.05).结论:UCMSCs易获取及纯化,具有多向分化潜能,多次传代功能稳定,可改善脑损伤动物的神经功能.
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膀胱与前列腺交界处多向分化癌3例临床病理分析
为探讨膀胱与前列腺移行处多向分化癌的临床病理特征，本文收集我院3个典型病例资料及组织标本，进行常规制片及免疫组化检测，分析其临床特点、病理组织形态及免疫组化特征。发现3例均发生于老年人，病变均累及膀胱与前列腺，以排尿困难为主要症状及首发症状，均有慢性尿道、前列腺炎症病史；2例按膀胱癌进行化疗生存期均未达15个月，1例未化疗行比鲁卡胺、抑那通及帕米膦酸二钠治疗，目前生存期为28个月，尚存活。3例癌组织形态均呈多样性，既有尿路上皮癌的特征又有前列腺癌的特征，3例均有前列腺大导管的化生与不典型增生；免疫组化检测显示HCK、LCK、p53、p63、PSA、P504 S阳性，Vimentin、S－100阴性，Ki－67增殖指数平均为77％。
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成体干细胞的可塑性与缺血性脑损伤治疗进展
干细胞(stem cells)指在生命成长和发育中起"主干"作用的原始细胞,它具有自我更新、高度增殖和多向分化的潜能.根据其发育阶段不同,可分为胚胎干细胞(embryonicstem cells,ES细胞)和成体干细胞(adult stem cells,AS细胞)两类.ES细胞因其来源困难、免疫排斥、转化条件未明及伦理道德等诸多问题,限制了其应用.AS细胞自我更新能力强,具有多向分化的潜能,可进行自体移植和激活,是发展细胞治疗的重要方向,尤其是干细胞可塑性的不断发现,为治疗困扰人类健康的脑血管疾病提供了无限契机.以下就部分主要成体干细胞的研究进展及与缺血性脑损伤关系的研究进展作一简要综述.
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胚胎干细胞在人类疾病治疗中的价值
干细胞具有自我更新、高度增殖和多向分化的潜能.各种功能细胞的生成依赖于微环境、细胞因子、基质细胞及细胞外基质等多种因素的相互作用与平衡,并涉及细胞的增殖、分化、发育、成熟、迁移、定居、衰老、凋亡及癌变等生命科学中的基本问题和研究热点.
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猪脂肪干细胞体外多向分化潜能的实验研究
目的 探讨猪脂肪干细胞(Adipose-Derived Stem Cells,ADSCs)在体外是否具有多向分化潜能.方法 从猪项背部皮下脂肪组织中获取ADSCs,经过体外培养扩增至第2代分别进行成软骨细胞、成骨细胞和成脂肪细胞诱导分化,通过免疫荧光和RT-PCR对其相关表型进行检测.结果 猪ADSCs在体外成软骨诱导分化2周后有特异软骨基质Ⅱ型胶原和Aggrecan表达,RT-PCR检测显示有Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox-9 mRNA的表达;体外成骨诱导分化2周后有与成骨相关的OPN、OCN和ONN表达;体外成脂肪诱导2周后,经油红染色显示细胞内有脂滴形成.结论 猪ADSCs在体外具有向成软骨细胞、成骨细胞和成脂肪细胞分化的潜能.
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不同类型干细胞移植治疗缺血性脑卒中的研究现状
干细胞具有自我复制和多向分化的潜能,可分化为神经元或其支持结构,为其移植治疗脑卒中提供了广阔的前景.目前,用于治疗脑卒中的成体干细胞主要包括骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脐血间充质干细胞(UCBM SCs)、造血干细胞(HSCs)、神经干细胞(NSCs)及人畸胎瘤衍生的细胞(NT2细胞).
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表皮生长因子对骨髓单个核细胞治疗肝损伤的动物实验研究
干细胞是机体组织器官的起源细胞，具有自我复制、高度增生和多向分化的功能，在适当的诱导条件下，可分化为不同的功能细胞。有研究表明细胞因子可大量扩增骨髓干细胞，并促使其向肝细胞转化［1］。表皮生长因子（EGF）是一种小肽，由53个氨基酸残基组成，是类 EGF 大家族的一个成员，是一种多功能的生长因子，可以促进骨髓干细胞向神经和皮肤等组织器官迁移［2］，但在肝脏方面鲜有报道。本实验初步探讨 EGF 动员骨髓单个核细胞向肝脏迁移情况及对肝损伤的修复作用。
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骨髓基质细胞及其在神经科学领域应用的研究进展
骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是一群存在于骨髓内的具有多潜能特性的干细胞,具有自我更新及多向分化的能力,参与组织细胞的替代及修复.骨髓基质细胞在体内为造血干细胞提供生存和发挥生物学作用的微环境,它对骨髓血系细胞有支持作用.
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英文文摘
1．人血清在体内外可促进人牙髓干细胞的成骨分化（英）／Pisciotta A…／／PLoS One．-2012，7（11）．-e50542
人牙髓干细胞（hDPSCs）是以细胞为基础的组织工程研究中很有前途的种子细胞来源，易获取，对病人侵袭性低，细胞可自我更新和多向分化。目前，间充质干细胞体外培养通常添加含胎牛血清（FCS）的培养基。FCS 含大量生长因子，可促进细胞在塑料表面的附着、增殖和分化。然而，动物源性的 FCS 可能传播疾病，甚至导致异体免疫反应。因此， FCS 的替代物可避免 FCS 的上述不足。我们的研究证实人血清（HS）是 FCS 合适的代替者，将其加入培养基中可提高hDPSCs的增殖率，并促进其在体外的成骨分化。将 hDPSCs在体外 HS 培养基中预分化培养10 d后植入大鼠的颅骨区，能够修复临界大小颅骨缺损。这些研究表明，hDPSCs 体外培养及分化过程中，HS 是 FCS 的有效代替品。 -
骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞治疗肝纤维化机制的研究进展
??肝纤维化不是一个独立的疾病，是各种致病因子导致肝内结缔组织的异常增生，引起肝内弥漫性细胞外基质（ECM）过度沉积的病理过程，较多慢性肝脏疾病均可引起肝纤维化。常规的内科保肝治疗效果不佳，病死率较高。目前原位肝移植仍是治疗终末期肝病有效的措施，但由于缺乏供体、费用昂贵、并发症多、免疫排斥等因素，使这一治疗方法较难得到推广。骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有多向分化的潜能，多项研究表明，BMSCs能有效逆转肝纤维化，对肝组织的损伤和修复有显著作用。
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大鼠骨髓间质干细胞多向分化研究
目的:分离和培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs),并进行多向分化研究.方法:体外分离培养大鼠骨髓单个核细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD44、CD90、CD45)的表达.传至第3代后,分别进行成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞及成肝细胞的诱导.结果:通过流式细胞仪器检测表明培养的细胞为大鼠BMSCs.BMSCs经诱导后分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞及肝细胞.结论:大鼠BMSCs具有多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞.
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骨髓造血干细胞调控及其研究进展
在多细胞生物的组织中，干细胞群对于组织结构和功能的维持是十分重要的。目前，成体干细胞（SSC）已经在多种具有自我更新功能的组织器官中得到鉴定，如肠上皮、表皮及造血系统等。定植在骨髓中的成熟造血干细胞（HSC）是SSC中的重要部分，可以持续不断地产生各谱系的造血细胞并释放入外周血[1]。HSC具有干细胞的两大特性，即自我更新和多向分化。HSC的自我更新通过两种不同的细胞分裂方式来完成，一种是对称分裂，即两个子代细胞均保持干细胞特性，理论上这种分裂方式有助于维持干细胞池中HSC数量的恒定，当机体造血系统受到损害或移植术后这种分裂方式对于补充HSC的数量尤为重要；另一种方式是不对称分裂，即其中一个子代细胞仍然维持干细胞特性，另一个子代细胞则多向分化成造血细胞成分。自我更新是维持HSC壁龛的关键性因素，也是发挥长期造血功能的先决条件。本文就HSC的调控及相关细胞因子、骨髓微环境和信号通路在调控中的作用作一综述。
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脑膜瘤细胞多向分化及其临床意义
目的:探讨脑膜瘤多向分化及其与病理诊断和预后的关系.方法:采用光镜、电镜、组化染色(网状纤维、PAS-AB和VG)和免疫组化染色S-P法.结果:脑膜瘤共55例,复发7例,复发率为12.73%.脑膜上皮型12例,过渡型13例,纤维型14例,砂粒体型7例,血管瘤型3例,微囊型4例,分泌型2例.Vim、EMA、α1-ACT、FⅧRAg、ER、PR、NSE均不同程度表达,GFAP、desmin及c-erbB-2均阴性. 在不同水平上证实上皮样细胞、过渡型细胞及纤维细胞以及玻璃样变性和微囊的病变均有过渡关系.结论:脑膜瘤是一个具有多向分化的肿瘤.各种类型脑膜瘤之间均有移行,其它类型脑膜瘤均是上皮型脑膜瘤分化的结果.脑膜瘤容易复发主要与上皮型脑膜瘤有关.
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派杰细胞试解读
乳腺派杰病是1874年由派杰(Paget)首先描述的发生于乳头乳晕区皮肤的湿疹样癌.由于病因未明,派杰病、派杰癌的名称便一直延用至今.形态特殊易于辩认的癌细胞也因此被称为派杰细胞.但派杰细胞来源一直存在争议.到目前为止,大致有两种假说:其一是来自乳腺导管癌、输乳管癌的爬行蔓延;其二是来自表皮细胞或变异的黑色素细胞.由于派杰病具有乳头溢液继之出现皮肤湿疹样改变的临床过程,且可与导管癌相伴发生,所以多数学者倾向于前一种假说.但多方研究均未能找到其来源于腺癌的确切证据.笔者通过对实际病例的观察和对相关论述的反复推敲,拟就派杰细胞的多向分化特征和胚胎发生学相关认识试作如下解读,希望得到有关研究者批评指正.
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大鼠尾椎髓核干细胞的分离与分化能力
目的:分离大鼠尾椎髓核干细胞(NPSCs),并检测其多向分化的能力.方法:取4周龄大鼠10只,解剖显微镜下分离尾椎C1～C5的髓核,经Ⅰ型胶原酶消化获得髓核原代细胞(NPCs),按照200个/cm2的细胞密度接种于10 cm培养皿,获取细胞集落,观察集落细胞的形态特点,并与NPCs比较.并将获得的细胞集落按照50个/cm2的密度进行单克隆形成能力检测.进行成骨、成脂肪及成软骨方向分化诱导,分别用茜素红、油红O及番红染色鉴定.结果:髓核组织呈半透明的胶质状,质软.按照200个/cm2的细胞密度接种培养髓核细胞,在培养3～5 d可见细胞集落形成,且集落内细胞的形态呈梭形,无"空泡".而NPCs呈不规则性状,且细胞内含有较多"空泡".获得的细胞集落仍然具有单克隆形成能力.且体外能进行成骨、成脂肪及成软骨方向分化诱导.结论:大鼠髓核组织中存在干细胞,按照200个/cm2的密度能够分离出NPSCs,且具有成骨、成脂肪及成软骨等多向分化的能力.
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胃肠间质瘤31例临床分析
胃肠间质瘤(GIST)是胃肠道常见的间质肿瘤,起源于胃肠间质干细胞(Cajall细胞),具有多向分化的特征,是一种具有恶性潜能的胃肠道黏膜下肿瘤.
