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可变剪接在LPS／TLR4信号通路的作用研究进展
全身炎症反应综合征（ systemic inflammatory response syndrome， SIRS）是指因感染或非感染性因素导致机体多种细胞因子及炎症介质失控性释放，可导致全身多个重大器官出现功能障碍，如急性肺损伤（ALI）、多器官功能障碍综合征（MODS）等。过度的炎症细胞因子的分泌无疑成为了预防和治疗SIRS的“中心环节”［1-2］。LPS／TLR4信号通路作为SIRS炎性反应机制的代表，一直是SIRS研究的核心环节。目前国内外的研究重点主要集中在转录水平，而转录后水平调控研究知之甚少。可变剪接是真核细胞转录后调控基因表达的重要方式，参与了人类90％以上基因表达的调控，贯穿细胞生命活动代谢的各个环节，包括炎症、肿瘤等［3－5］。近年来，随着可变剪接对LPS／TLR4信号通路的作用研究越发受到重视，将指导我们探索防治SIRS新思路提供理论依据，本文将为此进行综述。
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低氧诱导因子－1与糖尿病心肌保护作用的研究进展
糖尿病是一种常见的全球流行性慢性内分泌和代谢性疾病，作为心血管围术期并发症及病死率的独立危险因素，糖尿病患者围术期心肌缺血的发生率是非糖尿病患者的1．45～2．99倍［1］。因此，要想降低糖尿病患者围术期心脏不良事件的发生率和病死率，防止心肌缺血／再灌注损伤是多学科亟待解决的重要科学问题。目前越来越多的证据表明功能完整的低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）信号通路是围术期正常心肌抗缺血再灌注损伤的重要内源性机制，它在转录水平通过调控下游上百个基因来调节多种细胞功能事件如血管再生、血管舒缩调节、葡萄糖和能量代谢、红细胞生成、细胞增殖和生存能力等发挥心肌保护作用。然而，随后人们发现糖尿病状态下 HIF-1介导的心肌保护作用消失，具体机制尚不清楚。因此， HIF-1与糖尿病心肌的保护作用也逐渐成为研究的热点，本文围绕 HIF-1与糖尿病心肌保护作用的研究进展做一综述。
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MicroRNA-34在细胞衰老中的研究进展
近年来,微RNA (microRNA,miRNA)是继小分子干扰RNA(siRNA)之后非编码RNA研究的又一热点. miRNA在细胞内有着多种重要的调节作用,主要通过与靶mRNA特异性结合,在转录水平上对基因进行调控,长度约为20 ~24个核苷酸[1]. 研究[2]显示,miRNA在细胞衰老过程中有非常重要的作用,参与细胞衰老的miRNA包括miRNA-15, miRNA-29,miRNA-34,miRNA-371,miRNA-499等. 本文对近年来报道的miRNA-34对衰老相关基因表达的影响及调控机制进行综述,期望推动miRNA在衰老方面的研究.
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核转录因子-kB在肺疾病中的表达
核转录因子-kB(NF-kB)是一种蛋白转录因子,它使细胞间黏附分子、诱生型一氧化氮合酶、TNF-α、IL6、IL-1β及IL-8等炎症反应相关炎症前分子的转录大化.由于这些分子与炎症级链反应相关且主要在转录水平得到调控,因此NF-kB是炎症级链反应重要的细胞间调控物.本综述将系统阐述NF-kB的分子生物学相关机制及其在包括急性肺损伤、哮喘及阻塞性肺病的发病过程中的作用.
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大劣按蚊卵黄蛋白原cDNA的克隆及转录水平研究
目的 克隆大劣按蚊卵黄蛋白原cDNA,进行序列分析,并研究该基因在不同蚊期的转录水平变化.方法 首先提取大劣按蚊总RNA,反转录成cDNA;然后设计昆虫卵黄蛋白原简并引物,以该cDNA为模板进行PCR扩增和测序,对所获取的序列进行生物信息学分析;后利用实时荧光定量PCR方法检测卵黄蛋白原基因在蚊卵、幼虫、蛹和成蚊各时期的转录水平变化.结果 PCR成功扩增出了清晰的单一目的条带,经测序为一段1071 bp的序列,BLAST比对分析显示该序列与浅色按蚊、库态按蚊和斯氏按蚊的卵黄蛋白基因同源性高达90％,与冈比亚按蚊、微小按蚊和美彩按蚊的同源性达89％.对大劣按蚊各时期卵黄蛋白原转录水平的研究结果显示,4d龄按蚊卵黄蛋白原mRNA水平是3d龄按蚊的15.2倍,而吸血后卵黄蛋白原mRNA水平高效上调,是未吸血组的955.7倍(P＜0.01);吸血组6d龄按蚊卵黄蛋白原mRNA表达较吸血组4d龄按蚊骤降(下降近1 870倍),而与未吸血组6d龄按蚊相比,差异无统计学意义.结论 本研究成功地克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的cDNA;大劣按蚊血餐后24 h卵黄蛋白原基因高效表达,提示卵黄蛋白原基因可能参与了大劣按蚊蚊卵的发育.
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胎儿各器官和组织中VEGF转录丰度的研究
目的:利用RT-全套式PCR对胎儿各器官和组织中VEGF转录丰度进行研究.方法:检索人VEGFmRNA的序列,设计、合成上下游引物,提取总RNA,使用RT的方法合成cDNA,通过全套式PCR对VEGF特异性条带(374 bp)进行鉴定.结果:经过agarose电泳检测,人胎儿期各器官和组织cDNA的PCR扩增产物中,均出现一条不同灰度:374bp)的特异性条带.结论:VEGF在胎儿各器官和组织中转录丰度顺序为:大脑、心脏、肾脏、骨骼肌、肝脏、肺脏.
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鲤鱼TLR2过表达对下游干扰素相关免疫因子转录水平的影响
目的 探讨鲤鱼Toll样受体2(CcTLR2)过表达对下游干扰素相关免疫因子转录水平的影响及其介导的抗病毒效应.方法 构建过表达载体pEGFP-N 1-CcTLR2,并将pEGFP-N1-CcTLR2和空载体pEGFP-N1同时转染鲤鱼上皮瘤(epithelioma papulosum cyprinid,EPC)细胞;采用real-time PCR检测转染后0、6、12、24、48和72 h细胞内干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)和IRF7以及干扰素刺激基因ISG15、Mx1、PKR和Viperin的mRNA转录水平;并通过鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)感染实验验证TLR2的抗病毒效应.结果 在EPC细胞中转染pEGFP-N1-CcTLR2后IRF3、IRF7、ISG15、Mx1、PKR和Viperin的mRNA转录水平均出现明显上调,在转染后48 h,其转录水平分别相当于转染前的6.3倍、16.5倍、15.0倍、13.0倍、7.6倍和92.4倍,差异显著(P＜0.01);与转染pEGFP-N1空载体相比,转染pEGFP-N 1-CcTLR2的EPC细胞IRF3、IRF7、ISG15、Mx1、PKR和Viperin的mRNA转录水平在转染后48 h和72 h分别上调2倍和2.2倍、1.5倍和2.4倍、3.9倍和4.7倍、3.4倍和6.7倍、5.4倍和3.7倍、6.6倍和15.6倍,差异显著(P＜0.01);转染pEGFP-N1组在感染SVCV后6、12、24、48和72 h的病毒量分别是转染pEGFP-N 1-CcTLR2组的1.1倍、2.4倍、3.8倍、11.7倍、11.4倍,差异显著(P＜0.01).结论 鲤鱼TLR2在EPC细胞中过表达可上调IRF3、IRF7、ISG15、Mx1、PKR和Viperin基因的mRNA转录水平,以及抑制SVCV的增殖;提示鱼类TLR2可通过激活IRF3或/和IRF7信号通路诱导Ⅰ-IFN的产生,进而诱导ISG15、Mx1、PKR和Viperin等干扰素刺激基因表达抗病毒蛋白发挥抗病毒免疫效应.
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RNAi技术的特征及应用前景
RNAi(RNA interference)即RNA干扰,是近几年发现和发展起来的一门新兴的在转录水平上的基因阻断技术.是一种双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程,也就是序列特异性的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS).
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即刻早期反应基因X-1表达调控的研究进展
即刻早期反应基因X-1(IEX-1)是一个在外界刺激下能快速激活表达的应激诱导表达基因,其在细胞凋亡调控、细胞内各种信号通路的调节以及心血管的保护中都有着重要的作用.IEX-1的表达调控涉及多个调节因子,受很多因素的影响.研究表明:IEX-1的启动子结构非常复杂,有多种转录因子的结合位点,其中研究比较清楚的有NF-κB/rel,p53,c-Myc,Sp1等,它们在IEX-1启动子上有结合位点,直接通过DNA-蛋白质相互作用的方式调节IEX-1的表达,且各因子之间以蛋白质-蛋白质相互作用的方式调控IEX-1表达,使IEX-1在应激的环境刺激中迅速被激活,转录、翻译表达出IEX-1蛋白,发挥其生物学功能.
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炎症性肠病的实验性免疫调节治疗
克隆病和溃疡性结肠炎均属慢性炎症性肠病,两种疾病的病因不明,但是可从典型的临床表现,内镜下的改变或组织学特点加以区分.两种疾病均为粘膜炎症,其免疫学以促炎性反应的细胞因子过度表达为特征.克隆病的临床表现并不是单一性的,可以在不同个体中形成诸如瘘管或狭窄等特征性改变,因此以临床表现推测同一疾病可分为不同亚类,它们在病理生理及对治疗的反应等方面截然不同.随着公认的免疫干预措施的出现,人们开展了靶向治疗并对疗效进行评价.TNF-a为一种促炎症性细胞因子,在炎症反应的免疫调节中起重要作用,人源单克隆抗体经基因工程改造后与TNF-a有较高的亲和性.虽然该抗体发挥作用的确切机制并不清楚,但是一次静注此单抗(cA2)即可大大降低类因醇依赖的慢性活动性克隆病患者的百分比.IL-10做为一种抗炎症反应的细胞因子,可以下调大多数免疫细胞和非免疫细胞的免疫活性,肠外给予IL-10可改善克隆病患者的生活质量.有研究表明,静脉应用IL-10疗效较好,而皮下给药效果不佳.人们正在研究新的治疗方案,其中一种方案就是应用反义核酸技术.具有特定化学结构的反义核酸能够穿透细胞中和靶分子中与之互补的正义mRNA,特异性抑制了靶分子在转录水平的表达.有关IBD免疫治疗方面的研究进展不仅为IBD提供了较好的治疗模式,从新的角度阐明了炎症反应的病理生理基础.
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大鼠脑皮质IRAK1和miR-146a在轻型脑创伤后的表达分析
微小RNA( microRNA)是一类序列长度约为22个核苷酸的非编码小RNA分子,以碱基互补配对原则识别靶向基因,通过转录后翻译抑制作用参与细胞增殖、分化以及凋亡等过程,与人类疾病的发生与发展密切相关[1-3].mieroRNA 146a( miR - 146a)是一个与炎症性反应密切相关的小RNA分子,其上游调控序列包含了NF - κB的顺式作用元件,NF - κB结合该作用元件后正调控miR - 146a的转录水平,从而介导一系列miR - 146a靶向基因的翻译抑制过程[4].
