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阿德福韦酯抗病毒治疗对乙型肝炎病毒核酸序列及体外转录水平的影响
阿德福韦酯(ADV)能有效抑制HBV复制,且对拉米夫定耐药株有效,是一种新型核苷类抗病毒药物,其耐药相关变异有rtN236T和A181V突变.我们采用HBV全基因组克隆及体外转染的方法,观察了4例慢性乙型肝炎(CHB)患者在使用ADV抗病毒治疗的不同时期HBV全基因组序列及HBV病毒株体外转录水平的变化.
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自身免疫性甲状腺病患者血清可溶性Fas测定及意义
Fas属肿瘤坏死因子(TNF)/神经生长因子受体(NGFR)超家族成员,除主要以膜受体形式存在外,尚可通过转录水平后的不同拼接或膜脱离产生可溶性分子即sFas。Fas的主要作用是传递凋亡信号,介导细胞凋亡。近年来研究认为,从胚胎的发育、个体的成熟、自稳、衰老以至肿瘤、自身免疫病的发生都有细胞凋亡参与,但sFas与疾病的关系研究多集中在恶性血液病及部分风湿病等〔1,2〕。Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)是典型的自身免疫病,本研究测定这两种疾病患者血清sFas水平,并与亚急性甲状腺炎及正常人进行比较,讨论这些患者sFas改变的意义。 一、对象和方法 1.对象:GD 26例,男12,女14,年龄(34.4±12.3)岁;HT 25例,男11,女14,年龄(31.3±10.5)岁;亚急性甲状腺炎19例,男10,女9,年龄(35.4±11.2)岁。所有病例均符合临床和实验室诊断标准,均为未经治疗的初诊患者,所有HT患者甲状腺功能(T3、T4、TSH)测定正常。大部分GD、全部HT和亚急性甲状腺炎进行甲状腺粗针或细针穿刺病理诊断。以20例健康献血员为正常对照。
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二甲双胍对糖尿病大鼠胰腺β细胞磺脲类药物受体的影响
2型糖尿病(DM)治疗中的难题是磺脲类药物失效(SUF),后者的发生机制尚不完全清楚,胰腺β细胞上的磺脲类药物受体(SUR)和DM的关系是近年来的一个新研究热点[1,2].SUR异常能影响胰岛β细胞胰岛素的分泌,从而影响机体对血糖的调节[3].本研究检测二甲双胍作用后糖尿病大鼠胰岛β细胞SUR mRNA转录水平的变化,旨在探讨二甲双胍对磺脲类药物失效的影响.一、材料和方法1.48只雄性SD大鼠(150~250 g)用小剂量链脲佐菌素尾静脉(25 mg/kg体重)注射,高热量饲料饲养,形成类似2型DM的大鼠模型,把符合要求的40只2型DM模型SD大鼠分成二组,每组20只.(1)2型DM模型组;(2)二甲双胍治疗组:2型DM模型大鼠,加用二甲双胍250 mg*kg-1*d-1.在第4周、第12周、第24周测定血糖和血脂,在第24周取胰腺β细胞测定其SUR mRNA的表达水平.
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早期生长反应基因-1在胃癌中异常表达及其与肝素酶转录水平的关系
胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,侵袭及转移是导致其预后不良的主要原因~([1]).解析胃癌侵袭、转移的分子机制及其防治策略已成为关注的焦点.
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荧光素酶法检测幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞白细胞介素-8转录能力
幽门螺杆菌(Hp)是人消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的重要致病因子,对Hp免疫致病机制的探讨是当今研究的热点.Hp诱导胃上皮细胞产生趋化因子(chemokines)与胃黏膜炎症过程密切相关,其中以C-X-C类趋化因子IL-8尤为引人注目[1].文献中对胃上皮细胞IL-8转录水平的检测多采用分子生物学(如Northern blot, RT-PCR等)方法,但这些方法操作要求高、步骤复杂、耗时较长.我们应用荧光素酶活性测定检测Hp诱导的胃上皮细胞IL-8转录能力,旨在探讨一种敏感、快速、简便的测定胃上皮细胞IL-8转录的方法.
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脱氧核糖核酸甲基化与胃癌RASSF1A基因失活的相关性研究
胃癌的发生发展是遗传因素、环境因素、癌基因激活、抑癌基因缺失等多步骤参与的渐进过程。RASSF1A基因是近确定的一种候选抑癌基因,它在多种人类恶性肿瘤中因启动子区甲基化而致表达缺失。DNA甲基化是指在具有胞嘧啶甲基转移活性的DNA甲基转移酶(DNMT)催化下,将甲基基团转移至某些基因的碱基上并进行转录水平调控。DNMT1是维持机体现有DNA甲基化模式的关键因素。本研究运用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)、甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测沉默DNMT1基因后SGC-7901细胞RASSF1A基因表达情况及DNA甲基化状态改变情况,探讨DNMT1基因与胃癌RASSF1A基因失活的关系。
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糖尿病大鼠胰腺β细胞SUR mRNA转录水平与2型糖尿病的关系
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肿瘤中M2型丙酮酸激酶的表达、功能及调节
高水平的糖酵解是癌细胞的重要特征之一,而其中一个重要的调节因子即M2型丙酮酸激酶(M2 typeof pyruvate kinase,PKM2).除此之外,PKM2还具有调控基因转录以及细胞周期进展、促进肿瘤形成和侵袭迁移等蛋白激酶活性.同时,PKM2受多种转录因子、癌基因蛋白和中间代谢产物等复杂因素的调控.大量研究表明,PKM2在肿瘤的发生进展过程中起着至关重要的作用,针对PKM2展开相应临床诊断和治疗研究有着良好的应用前景.
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AP-1在转录水平调控氧化低密度脂蛋白诱导的转化生长因子-β1表达(摘要)
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剪切力对培养内皮细胞原癌基因表达的影响
内皮细胞位于血管壁的内层,因其独特的解剖位置,内皮细胞常常暴露于血液流动所产生的血流应力的作用下。血液在流动过程中,对不同血管的内皮细胞有着不同类型、不同强度的力学作用。血管的锥度、分枝分叉等均可改变血流方式,使内皮细胞所受的切应力大不相同。在生理稳态范围内,组织(或器官)内的应力分布应使得组织(或器官)处于某种优化状态[1]。血液流动对血管壁产生的力包括由于对血管壁面摩擦而产生的剪切力、血管周向应力和压应力。离体血流系统模型证明剪切力可调节内皮细胞结构和功能的各个方面,这些影响在一定程度上是由于对内皮细胞转录水平的调节。这里所述的主要是对原癌基因的调节。原癌基因是在细胞受刺激后,短时间内由转录因子或称第三信使迅速调控表达。细胞通过选择性诱导这些基因而对外部刺激作出应答。原癌基因在未受刺激的细胞中表达量极其微弱,但受刺激后几分钟即可检测到这些基因转录的mRNA。但这些基因诱导是短暂的,其mRNA寿命很短,而且诱导这些基因并不依赖于新蛋白的合成。这些变化主要是由于内皮细胞对剪切力开始作用后的反应是产生一定的第二信使激活特定的代谢通路,这些在细胞功能方面的迅速改变常常伴有蛋白的合成,这在剪切力作用后几小时内即可检测出来。原癌基因有多种,如c_fos、c_jun、c_myc、egr_l、c_kit、c_myb、c_met、c_ets_1、bcl_2、c_mas、fps、fes、ret、c_fms、c_src等等。血流状况不同,即剪切力作用方式、大小、持续时间的不同,对基因表达的调节也不同。下面分别阐述。1c_fosc_fos是编码AP-1家庭的一个DNA结合蛋白。在静止状态下(不受剪切力的情况),培养内皮细胞内的c_fos的转录水平很低,但在剪切力作用下,可直接导致c_fos转录及翻译水平表达量增高[2]。尤其高水平剪切力(如25达因/平方厘米),c_fos可很快达到高水平(高可达基础水平的20倍),然后很快回到基线水平[3,4]。剪切力大小不同,对c_fos基因的调节作用也不同,vibhuRanjanandScottL.Diamond的研究指出在培养的人脐静脉内皮细胞中,核内c_fos蛋白水平在动脉水平剪切力(25达因/平方厘米)作用时比在静止状态(无剪切力作用)时高5.4+/-2.0倍(P<0.01);而在低水平剪切力(4达因/平方厘米)作用下,内皮细胞中c_fos水平仅轻度增加,但比静止状态高2.4+/-0.73倍(P<0.01)[5]。这是由于剪切力作用于内皮细胞后,诱导c_fos基因转录和其蛋白质转运过程均有蛋白激酶E,G-蛋白,磷脂酶C和细胞内钙离子参与[6,7]。上述无论是高水平剪切力还是低水平剪切力都指的是稳定的层流。就层流而言,稳定性的和波动性的对内皮细胞的c_fos的影响也是不同的。Hdyue_JenHsieh等研究表明波动性血流(频率为1赫兹,平均剪切力为16达因/平方厘米)使培养的人脐静脉内皮细胞内的c_fos在受到血流剪切力作用0.5h后迅速而明显地增加,1h后降到基础水平。稳定的血流(剪切力为16达因/平方厘米)使培养的人脐静脉内皮细胞内的c_fos水平的增加程度较波动性血流轻而且短暂[8]。在人体中,除了大多为层流外,有一些部位如动脉分叉部、弯曲部等这些动脉粥样硬化好发部位是涡流频发部位,它形成空间剪切力梯度,涡流对内皮细胞基因的影响与层流是不同的[9]。TobiNagel指出涡流时的剪切力使培养的人脐静脉内皮细胞内的c_fos增加的程度比层流大,用平均灰度值来表示分别为1018和397[10]。
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银屑病患者皮损表皮p16INK4a mRNA表达与启动子甲基化的相关性
银屑病斑块形成反映了角质形成细胞增殖和凋亡的异常,p16INK4a作为一种重要的抗凋亡基因,其蛋白表达在银屑病患者皮损中异常,可能与银屑病斑块的形成有关[1-2].基因启动子甲基化可以在转录水平抑制基因表达,进而影响蛋白表达[3-4].研究发现,银屑病患者表皮p16INK4a基因甲基化存在异常,并与皮损的活动性有关[5].我们对p16INK4a基因甲基化在银屑病患者斑块形成机制中的作用进行探讨.
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英文文摘
3.丙戊酸抑制组蛋白去乙酰化酶使人牙髓干细胞和成骨细胞骨钙素基因表达下调:为 HDAC2参与这一过程提供依据(英)/Paino F…//Stem Cells.-2014,32(1).-279-289
由于成体间充质干细胞(如牙髓干细胞)可向多种组织特异性细胞分化(尤其是成骨细胞向分化),因此研究者们将这些干细胞用于组织工程研究。近年来,干细胞表观遗传学研究表明,特定的组蛋白改变和修饰酶在细胞分化过程中起重要作用。丙戊酸(VPA )是一种组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)的选择性抑制剂,研究表明,VPA 可增强成骨细胞向分化,但骨钙素作为分化后期标志,其表达下降。本研究旨在探讨 VPA 对牙髓干细胞分化的影响。低浓度的 VPA不会降低细胞活力、增殖和细胞周期分布,但它足以通过上调骨桥蛋白和骨涎蛋白的表达,使基质矿化明显增加。与之相反,在转录水平上来看,骨钙素水平降低,这与 HDAC2受到抑制密切相关。事实上,通过 shRNA 介导的 HDAC2沉默对成骨细胞相关标记物表达的影响与 VPA 刺激的影响相类似。我们得出结论,VPA 不会诱导成骨细胞的终末分化,但可刺激不完全成熟细胞的产生。此外,通过 RNA 干扰可特异性抑制单个 HDAC,从而使成骨向分化能力增强,表现出一种选择效应。 -
生物代谢基因调控在抗生素生物合成中的应用
抗生素的生物合成是以原核或低级真核生物复杂的次级代谢过程为基础的,次级代谢过程能产生数量丰富、结构复杂的各类代谢物作为具有应用价值的抗菌药物.次级代谢产物的合成与某种遗传物质或基因及其决定的酶密切相关.所以,深入阐明代谢过程及调控基因(靶基因)并对相关基因进行体外重组并高效表达,必将提高药物生物合成的效率.近年来,国外开展了用带关键酶基因的质粒转化菌种,增加菌种中关键酶基因浓度和转录水平以及抑制菌种非必要基因的表达,简化后处理工序,提高产量等代谢基因调控的研究和实践,并取得了一定成果.
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心律失常的昼夜节律与生物钟研究进展
生物体组织器官的活动呈现24h的周期性振荡称作昼夜节律.在分子水平,昼夜节律通过高度保守的转录水平反馈环路进行调控,整合时钟输入信号.中枢生物钟基因表达的时相受外界刺激影响的因子称为授时因子,与外界环境同步化,控制下游钟基因表达.心血管系统的多项生理信号指标也呈昼夜节律分布,每天的心律失常事件发生也有集中趋势.本文就生物钟机制以及心律失常、心电参数、离子通道等的昼夜变化规律综述如下.
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转运体稳定表达的验证方法及其研究进展
目的 介绍验证转运体稳定表达的方法和技术,为转运体细胞模型的应用提供依据.方法 对近年来研究转运体在细胞模型中稳定表达的相关文献进行综述.结果 实时定量PCR及Western blot是分别验证转运体转录水平和蛋白表达的经典方法.结论 与荧光检测技术相结合的验证方法在转录水平、蛋白表达与功能活性等三方面都显示出广阔的应用前景.
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长链非编码RNA在甲状腺癌中的研究进展
甲状腺癌是常见的甲状腺恶性肿瘤,也是内分泌系统常见的恶性肿瘤之一。据统计,无论国内还是国外,甲状腺癌的发病率均是所有恶性实体肿瘤中增长快[1-2],已严重影响到人类健康。但甲状腺癌具体的发病机制尚不完全明了。目前认为90%的人类恶性肿瘤与环境因素有关,环境的改变诱导机体内某些致病基因发生变化,从而促进了疾病的发生[3]。在人类的基因转录组中,发现了一类长度>200nt,本身缺乏明显的开放阅读框,且不参与蛋白质编码功能,以RNA形式在多种层面上调控基因表达水平的RNA,这种RNA即为长链非编码RNA(longnoncoding RNA,lncRNA)[4],其占了RNA总量的绝大部分。不同于编码RNA,lncRNA的保守性要差得多,然而在其分子内部,却含有较为保守的局部区段,且其表达具有时空特异性,这些现象均提示了lncRNA在肿瘤中具有重要的生理生化功能[5-7]。已有研究表明lncRNA参与了X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程[8]。而在甲状腺癌细胞的转录水平和转录后水平的调控基因表达中,lncRNA发挥着重要作用,未来可能会成为甲状腺癌诊断及治疗中重要的新型分子标记物和治疗靶点。本文将着重讨lncRNA在甲状腺癌中对基因表达的调控机制以及其发生、发展中的意义。
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泛素-蛋白酶体通路及其与胆道疾病相关性研究进展
泛素-蛋白酶体通路(UPP)是真核生物细胞质和细胞核内依赖于ATP、非溶酶体途径的蛋白质降解通路。UPP通路不仅能降解变性、异常或起短暂作用的蛋白质,而且能降解植物色素、转录因子、内膜蛋白和细胞周期蛋白等天然蛋白质,因而在转录水平调节、蛋白质降解、蛋白质稳定状态调节、程序性细胞死亡、细胞周期控制和免疫介导等过程中起重要作用,因此泛素介导的蛋白质降解通路的异常与许多疾病,如恶性肿瘤、脓毒血症所致肌肉萎缩等密切相关。笔者就UPP与胆道疾病相关性的研究进展作一综述。
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斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平分析
目的:研究斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因在不同虫期的转录水平以更深入了解该吸虫的物质代谢途径,探索药物作用的药靶。方法分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的总RNA ,并反转录为cDNA。将目的基因质粒作为标准品制作标准曲线,以5个虫期的cDNA为模板,特异引物为实验组引物,卫氏并殖吸虫的18SrDNA基因引物作为内参引物做实时荧光定量PCR ,分析斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因分别在5个虫期的转录水平。结果标准曲线线性关系良好,回归系数γ=0.994。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示,斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb转录主要在囊蚴期、30 d幼虫期及60 d童虫期,并且是逐步升高趋势,但成虫期转录较少,虫卵期没有转录。结论斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平有差别,在60 d童虫期高转录,提示Cytb基因在幼虫的发育和移行中起着重要作用。
关键词: 斯氏狸殖吸虫 线粒体Cytb基因 Realtime PCR 转录水平 -
钙超载诱导心肌肥厚的信号传导
心肌肥厚是指心肌细胞体积增大和间质增生.许多心血管疾病如高血压、心肌梗死、心脏瓣膜病、心肌病,心肌肥厚为其共同的病理阶段,研究心肌肥厚发生发展,予以早期干预、逆转肥厚,具有重要的意义.Ca2+是细胞信号转导过程中主要的第二信使,高血压时许多胞外信号可激活蛋白激酶A[1-3](protein kinase A,PKA),PKA使L型Ca2+通道α和β亚基磷酸化,从而明显增加ICa(L);T型Ca2+通道调控细胞生长和增殖[4],在心肌梗死导致的心室肥大大鼠模型上观察到T型Ca2+通道的转录水平上调[5],在动物和人心脏都证实,高血压心肌肥厚时观察到Na+/Ca2+交换器、莱恩素受体(ryanodine receptor,RyR)[6]、三磷酸肌醇[7](inositol-1,4,5-triphosphate,IP3)表达上调,钙泵表达明显下降,形成钙超载,钙超载是心肌肥厚重要的形成机制之一[8,9],也是目前研究的一大热点,本文就新近国内外研究对钙超载在介导心肌肥厚过程中的信号传导作一综述.
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USF2与其截短体真核表达载体的构建及对Smurf1/2转录水平的影响
目的 构建上游刺激因子2(USF2)及其截短体的真核表达载体,鉴定USF2蛋白中抑制泛素连接酶Smurf1/2转录的功能区域.方法 采用PCR技术扩增USF2及其两个截短体USF2(1~ 235aa)、USF2(236 ~346aa)编码基因,分别将其构建在pCMV-Myc重组载体上,转染真核细胞后验证其表达,Western blot及实时定量PCR确定USF2下调Smurf1/2转录水平的区域.结果 成功地将USF2及其两个截短体编码基因构建至pCMV-Myc载体,并验证其在真核细胞中的正确表达,Western Blot和实时定量PCR实验结果显示,USF2 C端236 ~346aa区域对Smuff1/2的转录水平有抑制效应.结论 USF2通过其C端236 ~346aa区域对Smuff1/2的转录产生抑制效应.
关键词: 上游刺激因子2 Smad泛素调节因子1/2 转录水平 截短体