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低锌浓度培养基对Caco2细胞二价金属离子转运体mRNA表达的影响
锌是人体必需的微量营养素之一,锌缺乏或过量与多种机能紊乱相关.二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)是近期发现的哺乳动物金属离子转运体,在机体所有组织几乎均有表达,具有对铁、锌等多种二价金属离子的转运功能[1].我们既往的实验结果显示膳食高锌可以导致断乳小鼠睾丸DMT1 mRNA表达显著降低,约为适锌时表达量的1/3～1/4,提示可能为哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制,但是脑组织中的DMT1 mRNA表达未见变化,提示在脑组织锌转运中DMT1可能不作为主要的转运体[2].小肠是锌吸收的重要场所,DMT1是否参与小肠锌吸收过程?我们以不同锌浓度培养的Caco2细胞为模型,观察其对DMT1 mRNA表达的影响及其规律,探讨DMT1在小肠锌吸收中的可能作用.
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6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响
目的:观察6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响.方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用Western blot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平.结果:6-姜酚处理组Caco-细胞60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(6.84±0.46),(8.61±0.54)μmol/孔,高于正常对照组(P<0.05),后者分别为(5.62±0.20)、(6.54±0.54)μmol/孔;6-姜酚与Rp-8-Br-cAMP合用组120 min时点为(6.92±0.67)μmol/孔,明显低于相应时点单用6-姜酚组(P<0.05);6-姜酚处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值6-姜酚组为(0.317±0.022),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);荧光定量PCR结果,6-姜酚能上调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达,但与cAMP抑制剂合用后该抑制作用被阻断.结论:6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与上调PepT1蛋白及mRNA表达有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系.
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理中汤对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响
目的:观察理中汤对Caco-2细胞肽转运载体(PepT1)转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响.方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予理中汤处理,并设立空白及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,用Western blot法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平.结果:理中汤处理组Caco-2细胞15,30,60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(4.52±0.57),(6.34±0.57),(7.29±0.64),(8.23±0.67)μmol/孔,高于空白对照组(P<0.05),后者分别为(2.42±0.68),(3.15±0.76),(5.62±0.20),(6.54±0.54)μmol/孔;理中汤与Rp-8-Br-cAMP合用组15,30,120 min时点分别为(2.68±0.46),(4.13±0.46),(6.73±0.43)μmol/孔,明显低于相应时点单用理中汤组(P<0.05);理中汤处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值理中汤组为(0.326±0.031),高于空白对照组(O.220±0.019)(P<0.01);理中汤对Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达未见明显作用,但与cAMP抑制剂合用,理中汤能逆转Rp-8-Br-cAMP下调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达的作用.结论:理中汤具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与其促进胞浆中PepT1蛋白嵌入胞膜中发挥转运二肽的功能有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系.
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有机阴离子转运多肽OATP1A2介导芬太尼的转运
目的:建立稳定表达有机阴离子转运多肽1A2(organic anion-transporting polypeptide 1A2,OATP1A2)的HEK293细胞株,体外研究OATP1A2是否转运芬太尼(Fentanyl).方法:用脂质体转染法将pIRES2-ZsGreen1-OATP1A2质粒转染至HEK293细胞中,G418(600 mg/ml)筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot、RT-PCR证实HEK293-OATP1A2构建成功;用不同浓度的探针药物非索非那定(Fexofenadine,FEX)验证HEK293-OATP1A2的转运功能;运用不同浓度的芬太尼孵育细胞,另取两组用相同浓度的芬太尼孵育的细胞,分别加或不加抑制剂柚皮素(Naringenin,100μg/mL)进行HEK293-OATP1A2转运实验.结果:FEX浓度为1、10、100 nM时HEK293-OATP1A2实验组与HEK293-VC对照组,FEX的吸收值均有显著的统计学差异(P<0.05),且FEX浓度为100 nM时,实验组对FEX的吸收值是对照组的2.8倍;加入抑制剂柚皮素组FEX吸收值较不加抑制剂时减少了66.8±0.6%.芬太尼转运结果显示,芬太尼浓度为1、10、100、1000 nM时实验组与对照组比较,芬太尼的吸收值均有显著的统计学差异(P<0.05),且芬太尼浓度为1000 nM时,实验组对芬太尼的吸收值是对照组的2.2倍;加入抑制剂组芬太尼的吸收值较未加抑制剂组减少了86.5±0.5%(P<0.05).结论:成功建立了稳定表达OATP1A2的HEK293细胞株,体外研究发现OATP1A2能介导芬太尼的转运.
关键词： 有机阴离子转运体多肽1A2 芬太尼 底物 转运功能 过表达 -
腹膜透析患者CA125水平及腹膜转运功能的纵向观察
目的纵向观察腹膜透析(简称腹透)患者腹膜透出液CA125(d-CA125)水平和腹膜转运功能的变化及其相关性.方法 d-CA125浓度测定采用微量酶免疫方法,腹膜转运功能判定采用 4h 腹透液肌酐/血肌酐比率(4D/P Cr).结果观察2年后d-CA125浓度及表现率较2年前有显著下降,腹膜转运功能有显著增加;感染性腹膜炎时d-CA125浓度显著升高,感染控制后又恢复至原来水平; 2年前及2年后d-CA125浓度及表现率均与腹膜转运功能无显著相关.结论 d-CA125 水平随腹透时间延长而降低,腹膜转运功能随腹透时间延长而增加,间皮细胞受损可能与腹膜转运功能的变化无关.
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脂肪酸结合蛋白研究进展
脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding proteins FABPs)是一组低分子量(14-15 KD左右)结合长链脂肪酸的胞质蛋白,FABPs分布于哺乳动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、表皮等组织细胞中.FABPs以其在组织中的分布而命名,包括心肌型(H-FABP)、小肠型(I-FABP)、肝脏型(L-FABP)、脂肪细胞型(A-FABP)、脑细胞型(B-FABP)、肾脏型(K-FABP)、骨骼肌型(S-FABP)、牛皮癣相关型(PA-FABP)及表皮型(E-FABP)等9种类型,具有组织特异性,在同一细胞中可分布多种FABPs.文献报道在长链脂肪骏的摄取、转运及代谢调节中发挥着重要作用,本文对其组织分布、结构特性及脂肪酸的转运功能作一简要综述.
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线粒体钙离子转运抑制对心力衰竭兔细胞电生理的影响
目的：在心力衰竭的各种病理改变中，线粒体的功能异常处于中心地位；近期研究发现线粒体自身具备钙储存与释放功能，其不仅参与胞内钙离子启动的级联信号过程，还可感受其周围含钙细胞器（如肌浆网）的存在从而摄取钙，二者内游离钙离子浓度紧密相联且处于动态平衡。而心肌细胞钙离子转运功能的改变与心力衰竭心律失常的发生关系极为密切。目前对于线粒体功能对此类心律失常的影响还不得而知。本研究旨在通过观察线粒体钙离子转运体抑制剂Ru360对心力衰竭心肌细胞钙浓度、钙瞬变、肌浆网钙浓度与线粒体钙浓度的影响。
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腹膜透析患者癌症相关抗原125水平及腹膜转运功能的纵向观察
腹膜功能的丧失是长期腹膜透析(简称腹透)患者面临的严重问题.腹膜间皮细胞是腹膜的重要细胞,担负着分泌、吸收、再生、防御功能,腹膜功能好坏与间皮细胞密切相关.癌症相关抗原125( CA 125 )是一种相对分子量为220×106的糖蛋白,能被间皮细胞分泌,是反映间皮细胞数量的标记物[1].本研究的目的在于纵向观察腹透患者d-CA 125水平和腹膜转运功能及其变化与间皮细胞受损有无相关性.
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印记基因IGF-2和H19的印记状态与异常出生体重的关系
近年来异常出生体重的发病机制成为研究热点,而决定胎儿生长的关键因素是胎盘的发育及胎盘供应营养的能力.有证据表明印记基因对胎盘的生长及转运功能有调节作用,控制营养供给[1],对胎儿生长发育很重要,其中胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factor-2,IGF-2)及其交互印记基凼H19对胎儿生长发育[2]和胎盘形成及功能有重要调节作用.本研究旨在探讨印记基因IGF-2和H19的印记丢失(loss of imprinting,LOI)与异常出生体重的关系.
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川芎嗪注射液对腹透患者腹透液CA125的影响
目的 观察川芎嗪注射液对腹透患者腹透液CA125的影响.方法 采用盐酸川芎嗪注射液加入腹透液中治疗7天,观察治疗前后患者超滤量、溶质转运参数、D/Pcr、腹透液CA125浓度,以及尿素清除指数(KT/V),肌酐清除率(Ccr)的变化.结果 治疗后患者超滤量由治疗前(338±71)ml/d明显提高到(692±90)ml/d,腹透液CA125平均浓度由治疗前的(15.1±2.9)U/ml提高到(17.5±3.4)U/ml;而患者尿量、溶质清除率、D/Pcr等未见明显改变.结论 川芎嗪注射液能提高腹透患者的超滤量,安全性良好.
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胱氨酸结石
胱氨酸结石相对较少见,只占所有尿路结石的1%.胱氨酸尿症是胱氨酸结石唯一的病因,是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,其病理基础是肾近曲小管基底膜和肠黏膜上皮细胞对包括胱氨酸、赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸等4种二羟氨基酸吸收和转运功能存在缺陷,导致这些二羟氨基酸在尿中排泄增加.
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锌对红细胞膜转运功能影响的研究
目的:研究锌对红细胞膜离子转运功能的影响.方法:分体内和体外实验.雄性断乳期大鼠按体重随机分为低锌(LZ)、正常锌(NZ)和高锌(HZ)三组,每组10只,分别用锌含量不同的饲料(2.2,28和128 mg/kg diet)喂饲4 w,观察锌摄入量不同对大鼠红细胞膜上Na2/K2泵、COTS-1、COTS-2、Gardos和RF等通道转运活性的影响;体外实验观察加入不同浓度锌(0、5、10、50、100和500μmol/L Zn2+)对人红细胞膜上这5种阳离子转运通道活性的影响.结果:适宜的锌是保证Na+/K+泵、COTS-2和Gardos通道活性的关键因素之一,体内外过高或过低的锌均会抑制其离子转运功能,COTS-1和RF随锌浓度的升高转运活性增强,提示了其部分代偿功能.结论:锌对维持红细胞膜的正常离子转运功能有重要意义.
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载脂蛋白AV基因多态性与血脂代谢关联性研究进展
载脂蛋白是具有脂类转运功能的血浆蛋白质,其结构与合成异常将影响血脂代谢,而血脂异常是冠心病,动脉粥样硬化发生的主要危险因素,也是高血压、肥胖和胰岛素抵抗的易感因子.有多项研究提示,新发现的载脂蛋白AV基因单核苷酸多态性同血脂代谢,尤其同血浆三酰甘油水平密切相关,现将此方面的研究现状作一综述.
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腹膜透析患者如何达到长期充分性透析
透析充分性是影响腹透患者长期生存的主要因素,而影响透析充分性的主要因素是透析剂量,腹膜转运功能,残余肾功能,体表面积,而这些指标又是不断变化的动态指标,因此我们透析方案必须不断修改.
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低氧诱导因子-1α信号通路相关蛋白在腹膜透析患者腹透液中的表达变化
终末期肾脏病（ERSD）患者主要的肾脏替代治疗方案之一即为腹膜透析，但长期腹膜透析易出现腹膜炎、腹膜功能及形态结构的改变及营养不良等因素，易引起超滤衰竭（ul-trafiltration failure，UFF）［1］。UFF的主要机制主要包括腹膜血管新生、腹膜纤维化以及腹膜间质／淋巴系统吸收增加［2］。血管内皮生长因子（VEGF）是目前已知的强有力的促血管形成因子，可以诱导血管新生［3］。转化生长因子（TGF）-β1是一种调节细胞增殖分化和细胞外基质（ECM）合成的多功能生长因子，是一个公认的反映腹膜纤维化的指标［4］。低氧是腹膜纤维化及血管新生发生发展过程中重要的病理生理变化，是超滤衰竭过程中的重要环节。低氧诱导因子-1（hypoxia in-ducible factor 1，HIF-1α）是一个在缺氧状态下发挥活性的特异性转录因子，参与了血管生成、细胞外基质代谢和炎症反应等过程［5］。本文拟通过研究腹透患者腹透液中HIF-1α的表达水平与VEGF、TGF-β1和腹膜转运功能的相关性，初步探讨HIF-1α对腹膜功能的影响以及可能的作用机制。
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胎盘功能不足对胎儿的近期和远期影响
胎盘是母体和胎儿的中介器官,所谓胎盘功能不足分为母体因素造成的功能不足,如母体贫血等导致的相对物质、气体转运功能不足;胎盘自身疾病造成的功能不足,如妊高征等,不仅胎盘交换功能受损,且内分泌功能也受损.临床胎盘功能不足常指后者,但由于两种因素相互影响,很难区分真正原因,所以只要胎儿得不到充足的血、氧和营养物质,就称为胎盘功能不足.
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肺泡液体转运的调节和意义
出生后,为从胎盘氧合过渡到肺氧合,需要迅速清除残留在末梢气道和肺泡内的水分,以后生活中也需要不断地将过多的水分从末梢气道和肺泡内清除,以保持肺泡相对干燥的状态,进行有效的气体交换.这些均有赖于末梢气道和肺泡上皮的液体转运功能[1].
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糖蛋白抗肿瘤研究进展
糖蛋白是由一个或多个寡糖链通过不同连接方式与蛋白质部分的多肽骨架共价相连而成.在生物体内的糖蛋白种类繁多,广泛存在于动物、植物和某些微生物中,在生物体内它以不同形式存在而发挥作用,是细胞膜、细胞间基质、血浆、粘液、激素等的重要构成成分.糖蛋白中糖链维持蛋白质结构稳定,抵抗蛋白酶水解,参与多肽链在内质网的折叠启动及防止抗体的识别.糖蛋白具有调解和开关激素功能、胞内转运功能,还具有保护与促进物质吸收、参与血液凝固、参与细胞识别等功能.近年的研究表明从动物和植物中提取的糖蛋白具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等显著的药用功效和保健功能[1].
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百日咳鲍特菌外膜蛋白的致病性与免疫原性
百日咳鲍特菌外膜蛋白是存在于细菌表面的一组功能性蛋白质，包括P69、FhaC和BrkA，其中以P69为重要。P69分子中的RGD-(GGxxP)_5和(PQP)_5两个富含脯氨酸结构区分别具有粘附作用和很强的免疫原性，其抗体具有较强的保护作用，可作为无细胞型百日咳疫苗中的一个重要抗原成分。P69具有多态性，百日咳流行菌株的P69已从P69A转变成以P69B或P69C为主，所引起的抗原性漂移与疫苗预防效果下降有直接关系。FhaC是该菌的一种外膜蛋白，能特异地辅助丝状血凝素分泌；BrkA不仅具有蛋白转运功能，且能抵抗抗体依赖补体介导的细胞毒作用。
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有机溶质转运体α-β在胆汁酸代谢及胆汁淤积症中的作用
过去20多年的研究发现了数个在胆汁酸肠肝循环中重要的转运体,包括肝细胞摄取胆汁酸的钠离子牛磺胆酸共转运多肽(Na-Taurocholate Co-transporting Polypeptide,NTCP),肝细胞输出胆汁酸的胆盐输出泵(Bile Salt Export Pump,BSEP)及回肠顶端膜刷状缘吸收胆汁酸的顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(Apical Sodium-dependent Bile acid Transporter,ASBT).但是,肠上皮细胞基侧膜控制胆汁酸分泌至门静脉血流的转运体近才被发现,被命名为有机溶质转运体α-β(Organic Solute Transporter alfa-beta,OSTα-OSTp).随后的研究对OSTα-OSTβ的分子学特点、组织细胞分布、转运功能、表达的调控,以及在胆汁淤积状态下的适应性改变等有了进一步了解,为将来深入研究打下了基础.
