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轮状病毒G血清型和P基因型与腹泻严重程度的关系
目的 了解轮状病毒G血清型和P基因型与腹泻严重程度之间的关系.方法 收集2001年8月至2003年7月4个监测点医院5岁以下住院腹泻儿童的粪便标本和临床信息,对标本进行轮状病毒检测和分型,根据Vesikari 20点评分法对轮状病毒腹泻患儿的严重程度进行评分.结果 当与P[8]基因型结合时,P[8]G1型和P[8]G3型患儿的严重程度评分分别为13分和12分,腹泻天数分别为6 d和5 d,G1型患儿中发热的比例高于G3型(97%与73%),而且发热患儿的高体温G1型也高于G3型(39℃和38.6℃).当与G3血清型结合时,P[4]G3和P[8]G3型腹泻严重程度评分无统计学差异,但P[4]型比P[8]型的腹泻天数长(分别为6.5 d和5 d),而P[8]型呕吐的高次数比P[4]型多(分别为4次和3次).结论 当与P[8]型结合时,G1型腹泻比G3型腹泻严重.当与G3型结合时,P[4]和P[8]型腹泻严重程度评分无差异.
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四川绵阳部分人群甲、乙、丙和戊型肝炎病毒感染血清学调查
目的 了解健康人群肝炎病毒感染现状.方法 采用ELISA方法检测体检人群血清中抗甲(HAV-IgG)、乙(HBsAg和HBsAb)、丙(HCV-IgG)和戊型肝炎病毒抗体(HEV-IgG和IgM).人群血清均收集于2007年.结果 1352份人群血清肝炎病毒抗体阳性率,HAV-IgG为81,07%(1096/1352),HBsAg和HBsAb为5.4%(73/1352)和61.32%(829/1352),HCV-IgG为0.37%(5/1352),HEV-IgG为49.26%(666/1352).不同年龄段的人群HAV-IgG阳性率,10～19岁组为38.21%,20～29岁组为83%,30～39岁组为88%,40岁以上各年龄组为95.03%～97.77%.HBsAg和HBsAb阳性率,各年龄组依次为5.65%和50.83%、10.0%和68.0%、5.20%和78.80%、5.97%和78.11%、6.50%和62.50%、1.12%和51.40%、4.96%和30.58%.HCV-IgG阳性总数5份,其中10～19岁组1份,阳性率占0.33%,30～39岁组2份,占0.80%,60～69岁1份占0.56%,≥70岁1份占0.83%.HEV-IgG阳性率,10～19岁为26.58%,20～29岁组为42.0%,30岁以上各年龄组阳性率为55.22%～61.0%.对HEV-IgG阳性者再检测HEV-IgG,总阳性率为10.06%(53/527),各年龄组均有阳性者.结论 青少年HAV和HBsAb抗体低于人群总体水平,应及时加强免疫预防.人群HBsAg和HCV感染率与往年相比下降明显.HEV感染率随年龄增长而升高,特别是各年龄段均有新近感染者,应加强餐饮和公共卫生管理.
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卢龙县1998年婴幼儿腹泻轮状病毒血清型调查
目的对河北省卢龙县农村人口中儿童轮状病毒腹泻流行情况进行调查.方法采用病毒核酸电泳和酶免疫方法对卢龙县1998年轮状病毒腹泻发病季节采集的非菌性腹泻粪便标本进行轮状病毒检测.采用酶免疫和RT-PCR方法对轮状病毒阳性标本进行血清型调查.结果 120份婴幼儿腹泻样本轮状病毒阳性率为39.2%,病毒电泳型全为长型,血清分型发现G3型为流行优势株,占61.7%,其次为G1型占36.2%,G4型占6.4%,轮状病毒腹泻病人小年龄为2月龄,大为2岁,男女之比为1∶1.47.结论卢龙县1998年轮状病毒腹泻流行规律与全国情况基本一致,但流行毒株以G3型为主,与全国以G1型为主不同.
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丙型肝炎病毒血清学分型应用的可行性研究
目的探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性.方法应用EIA法对兰州地区148例抗-HCV阳性者进行血清学分型.结果血清学方法的分型率为56.08%(83/148),其中血清1型占50.60%(42/83),血清2型占43.37%(36/83),1+2混合型占6.03%(5/83).对其中70例HCV RNA阳性血清的基因型与血清型结果进行比较,二者完全相符.结论丙型肝炎病毒的血清学分型具有一定的临床应用价值.
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乙肝疫苗长期免疫地区低龄人群乙型肝炎病毒基因序列与突变现状
目的 通过乙型肝炎流行病学调查和病毒基因检测,了解乙肝疫苗长期免疫地区低年龄人群的基因序列与突变特征.方法 从乙肝监测点收集乙型肝炎病毒表面抗原阳性血清,取其中年龄小于16岁者,扩增包括preS和S基因在内的基因序列片段,共1100碱基,序列测定后与标准基因型别比较,确定病毒基因及血清型别,确定a抗原决定簇的氨基酸替代突变发生率,选取一株病毒进行全基因扩增、克隆和序列测定.结果 共检测样本35例,33例血清扩增出乙肝病毒基因序列,其中30例乙型肝炎病毒基因型为B型,占90.9%,3例乙型肝炎病毒基因型为C型,占9.0%,1例血清型为ayw,3例为adr,其余29例为adw,共有5例在a抗原决定簇发生氨基酸替代突变,发生率约为15.2%.其中5856号血清扩增乙型肝炎病毒全基因为B型,血清型为adw,共3215个碱基.结论 该地区乙型肝炎基因型主要为B型,血清型为adw,人群中a抗原决定簇某些位点已发生与疫苗免疫逃逸相关的突变.
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慢性丙型肝炎患者HCV血清学分型研究
目的 探讨HCV基因分型与血清学分型的关系.方法 对来自14家医院的104例已知HCV基因型的慢性丙型肝炎患者血清,经ELISA方法,用Murex HCV Serotyping 1-6 Assay血清分型试剂进行HCV的血清学分型.结果 104例血清中的86(82.69%)例可分出血清型,检出血清型病毒株91株,病毒株检出率为78.4%.血清型与基因型的总符合率为62.1%,血清型1型、2型和3型的符合率分别为69.4%、51.2%和70.0%,以2b基因型的符合率和漏检率低(54.5%).结论 HCV血清型特异性受病毒基因型的影响,与基因型存在一定的差异.
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我国5个地区27株人源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分子特征初步分析
目的 了解我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株的分子生物学特征. 方法 对来源于5个地区的27株腹泻患者和健康人的非O157产志贺毒素大肠埃希菌进行血清分型、stx1和stx2基因检测及亚型分析、eae等黏附基因和其他毒力基因检测,并对菌株进行多位点序列分型(MLST)分析. 结果 27株非O157 产志贺毒素大肠埃希菌分为16种O∶H血清型;11株携带stx1a亚型,12株携带stx1c亚型,2株携带stx2e亚型,携带stx1a+stx2b、stx2d、stx2g亚型各1株;eae、efa1、saa、paa、toxB、astA及ehxA基因的检测率分别为18.5%、18.5%、29.6%、22.2%、11.1%、11.1%及25.9%.MLST将27株菌分为16种不同的ST型.结论 我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌菌株在血清型、志贺毒素亚型及毒力基因等方面存在多样性.
关键词： 非O157产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素 血清分型 多位点序列分型 -
2000至2002年北京儿童中青霉素不敏感肺炎链球菌的血清型分布和同源性研究
研究表明青霉素不敏感肺炎链球菌(penicillinnonsusceptible Streptococcus pneumoniae,PNSP)的克隆传播是其流行的重要因素[1],我们也证实克隆传播是北京地区PNSP流行的重要因素[2].进一步血清分型可为抗生素耐药性和流行克隆分析提供更多信息,为推广接种疫苗预防PNSP感染和控制其传播提供依据.
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丙型肝炎病毒血清学分型应用的研究
为了探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性,对148份抗-HCV阳性标本进行血清分型和基因分型.血清分型应用EIA技术,采用HCV核心区第65～81氨基酸合成多肽,血清1型为RPKARRPEGTWAQPGY,血清2型为IPKDRRSTGKSWGKPGY,可将HCV分为血清1型和2型;基因分型应用型特异性PCR法,设计3条通用引物和4条分型引物,可将HCV分为基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型.
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住院患儿肺炎链球菌血清型及耐药性分析
目的：分析住院患儿临床标本分离出的肺炎链球菌的血清型分布和耐药状况。方法收集2012年1月至2014年3月分离自首都儿科研究所附属儿童医院住院儿童非重复肺炎链球菌103株,其中痰和支气管盥洗液标本的非侵袭性菌株82株,血液和脑脊液的侵袭性菌株21株。采用荚膜肿胀实验进行肺炎链球菌血清分型,应用E-test和纸片扩散法检测肺炎链球菌对抗生素的敏感性,PCR方法检测大环内酯类ermB和mefA基因,采用χ2检验进行率的比较。结果82株分离自下呼吸道的非侵袭性菌株,常见血清型为19F（30．5%,25/82),19A（14．6%,12/82),23F（12．2%,10/82)和6A（10．9%,9/82),7价肺炎链球菌蛋白结合疫苗（PCV7)、PCV10和 PCV13覆盖率分别为53．7%（44/82)、53．7%（44/82)和85．4%（70/82)；21株侵袭性菌株常见血清型为23F（23．8%,5/21)、14（19．0%,4/21)、6B（19．0%,4/21)、19A（9．5%,2/21)和19F（9．5%,2/21),PCV7、PCV10和PCV13的覆盖率分别为76．1%（16/21)、81．0%（17/21)和90．5%（19/21)。非脑膜炎菌株对青霉素的敏感性为96．0%（97/101),发现1株青霉素耐药的脑膜炎菌株。103株肺炎链球菌的多重耐药率为98．1%（101/103)。分离株均对红霉素耐药,且均携带 ermB,同时37．8%（39/103)的菌株携带mefA。结论住院患儿肺炎链球菌分离株 PCV13相对于 PCV7和 PCV10疫苗覆盖率要高,提示PCV13在预防肺炎链球菌疾病和控制多重耐药方面可发挥更好的作用。肺炎链球菌对青霉素敏感,青霉素仍可作为儿童肺炎链球菌感染性疾病临床治疗的首选药物,但对大环内酯类耐药情况严重, ermB是介导肺炎链球菌大环内酯类耐药的主要机制。（中华检验医学杂志,2015,38：622-626)
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2型糖尿病并发颌面部感染来源的肺炎克雷伯菌的分子分型、耐药性及毒力研究
目的 了解临床分离自2型糖尿病并发颌面部感染的98株肺炎克雷伯菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和对常用抗菌药物的耐药情况,揭示其相关耐药机制,并对其毒力性进行探讨.方法 前瞻性研究.本研究采取定点连续抽样的方法,选择2010年3月至2012年10月郑州市7家医院颌面外科确诊为2型糖尿病合并颌面部感染患者为研究对象,共连续收集431例患者脓液标本,分离鉴定出98株肺炎克雷伯菌,K-B法检测肺炎克雷伯菌对15种抗菌药物的敏感性试验.用Xba I酶对菌株进行限制性酶切,PGFE分离酶切片段,Fingerprinting指纹图谱分析软件分析PFGE图谱,并分析PFGE基因组型与耐药表型之间的关系.产超广谱β内酰胺酶(ESBL)菌株检测应用双纸片协同及确认试验.通过PCR检测耐药基因型、血清型及毒力基因.并将TEM、SHV及CTX-M耐药基因的PCR扩增产物纯化、克隆后进行基因测序.黏液丝实验确定菌株的高黏液型(HM)表型.结果 98株肺炎克霄伯菌对15种抗生素的耐药情况严重,ESBL检出率达57.1％(56/98).PFGE将肺炎克雷伯菌分为13型,未发现优势带型及特异的ESBL电泳条带.PCR结果显示56株ESBL菌株中,产SHV型β内酰胺酶40株(占71.4％)、TEM型28株(占50.0％)和CTX-M型21株(占37.5％),测序结果证实均为TEM-1、CTX-M-3及多种SHV型.K1、K2、K3、K5、K20、K54和K57血清型及3种毒力基因均有检出,但不以强毒性血清型为主.HM阳性率为31.6％ (31/98).结论 2型糖尿病伴发颌面部感染来源的肺炎克雷伯菌的耐药性严重,耐药机制多样复杂,并且存在强毒性血清型和毒力基因,需引起临床的高度重视.
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高毒力肺炎克雷伯菌新型变种感染病例分析及耐药机制研究
目的：研究高毒力肺炎克雷伯菌新型变种( hvKP)临床感染分布及对常用抗菌药物的耐药情况,分析相关耐药机制,并对毒力表型进行探讨。方法回顾性研究。收集2011年1月至2013年12月南昌大学第一附属医院分离的210株非重复肺炎克雷伯菌及其药敏结果,筛选出12株hvKP菌；多位点序列分型( MLST)及肠杆菌科基因间重复一致序列( ERIC)-PCR对hvKP菌株进行分子流行病学研究；产超广谱β内酰胺酶( ESBL)菌株和碳青霉烯酶菌株检测分别应用双纸片协同及确认试验和改良Hodge试验；PCR及测序检测耐药基因型、血清荚膜分型及毒力基因；黏液丝试验确定菌株的高黏液型(HM)表型。结果 hvKP菌对15种抗生素的耐药情况严重,ESBL检出率高达8/12,1株改良Hodge试验阳性。12株hvKP中共发现5种 ERIC-MLST分子克隆分型,A/ST23和 B/ST263为主要型别,分别占5/12和4/12。 PCR及测序结果显示,blaKPC-21株,qnrA19株,qnrB47株, qnrS17株,blaCTX-M-36株,blaCTX-M-147株,blaTEM-110株,blaSHV-124株。 K1血清型11株,K2血清型1株,未检出其他血清型。毒力基因magA、rmpA和产气菌素检出率分别为11/12、9/12和9/12。此外,kfu基因、mrkD基因、wabG基因及allS基因的携带率分别为9/12、10/12、4/12和2/12。 HM阳性率为8/12。结论分离出多重耐药hvKP菌株,耐药机制复杂多样,由多种主要分子克隆引起,且存在强毒性血清型和多种毒力基因,应引起临床高度重视,必须采取有效措施控制其传播。(中华检验医学杂志,2015,38：392-396)
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上海地区成人患者肺炎链球菌分子流行病学的分析
目的 研究上海地区成人患者分离的肺炎链球菌耐药、克隆分型、血清分型、毒力因子携带及生物膜形成等分子特征,为感染控制及治疗提供临床流行病学信息.方法 收集2011年1月至2013年12月上海华山医院37株来自门诊和住院成人患者感染分离的非重复肺炎链球菌,用K-B纸片法或E-test法测定对9种常用抗生素(青霉素、万古霉素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、头孢丙烯、头孢曲松、头孢噻肟、利奈唑胺)的敏感性;用PCR与肺炎链球菌荚膜型血清凝集法确定血清型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分析不同血清型菌株的基因组特征;采用多位点序列分型(MLST)方法进行克隆分型;采用半定量生物膜形成试验分析其生物膜形成.PCR和凝胶电泳法检测10个主要肺炎链球菌的毒力基因(cbpA、pspA、cps2A、lytA、nanA、pavA、piaA、ply、psaA、spxB).采用Stata统计软件用Fisher's exact test进行相关性统计.结果 37株肺炎链球菌主要血清型包括19F(13.5％),23F(13.5％),14(10.8％),19A(10.8％),青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP)占64.9％.血清型19F、19A、23F与青霉素耐药有明显相关(x2 =5.89,P=0.015)并且都是多重耐药菌(MDR).克隆分型呈多态性,ST81、ST271对包括青霉素在内的抗生素耐药率较高(x2=4.57,P=0.033).生物膜阳性与血清型19A(x2=5.55,P=0.018)、克隆型ST320(x2=4.33,P=0.037)有明显相关,与青霉素耐药等没有明显相关(x2 =0.16,P=0.686).毒力基因检测中lytA、pavA、ply、psaA、spxB均阳性.结论 成人肺炎链球菌青霉素耐药率呈上升趋势.特定的血清型、流行克隆分型与抗生素耐药密切相关,为感染控制提供依据.毒力因子PspA等将是未来研制新型疫苗降低肺炎链球菌感染的新型靶标.
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肺炎链球菌对红霉素耐药机制的研究
目的研究北京地区肺炎链球菌对红霉素的耐药机制.方法收集本院1998～1999年分离的对红霉素耐药的肺炎链球菌116株,采用"荚膜肿胀"技术进行血清分型,聚合酶链反应(PCR)检测对红霉素耐药的基因erm/mef,脉冲场凝胶电泳(PFGE)和青霉素结合蛋白(PBP)基因印迹技术追踪菌株之间的同源性.结果 116株红霉素耐药株的血清型主要为 23F(30.0%),6A(19.0%),19F(13.8%),15(7.8%),23A(5.2%).95.7%的青霉素不敏感株同时也耐红霉素;85%的菌株表现为MLS表型,即同时耐克林霉素;86.4%的红霉素耐药株具有erm基因,6%的菌株同时有erm和mef基因,1.7%的菌株只有mef基因,4.2%未能检测到erm或mef基因.PFGE发现2种耐药克隆:1个是青霉素耐药的血清型为23F的克隆株,另1个是青霉素敏感而红霉素耐药的、血清型为6A的克隆株.结论核糖体突变(erm基因编码)是北京地区肺炎链球菌耐红霉素的主要机制,2种耐药克隆值得关注.
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杭州某幼儿园健康儿童流感嗜血杆菌携带状况及其血清分型
目的了解健康儿童不同月份流感嗜血杆菌的携带状况及血清分型.方法对2002年9月至2003年6月杭州某甲级幼儿园2～5岁的入托儿童随机进行每周1次的咽拭子培养,用V因子、X因子试验鉴定流感嗜血杆菌,用玻片凝集法进行血清分型,用纸片扩散法进行药敏试验.结果连续10个月中受检儿童848例,217例(占25.6%)携带流感嗜血杆菌,其中1月份的携带率高,达34.8%,6月份的携带率低,为12.6%,儿童在12月、1月、2月、3月4个月中的总携带率显著高于其他6个月(χ2=10.95,P<0.001).217例携带者共分离到223株流感嗜血杆菌,不可分型菌株180株,占80.7%;可分型菌株占19.3% (43株),包括a型4株,c型2株,d型35株,e型1株和f型1株,未分离到b型流感嗜血杆菌.61株(27.4%)菌株产生β内酰胺酶,28.6%的菌株对氨苄西林耐药,且不可分型菌株对氨苄西林的耐药率显著高于可分型菌株(χ2=4.19,P<0.05).结论本研究中健康儿童对流感嗜血杆菌的携带率以12月、1月、2月和3月份为高,可分型流感嗜血杆菌以d型占绝对优势,新型菌苗的研制已成为一项紧迫的任务.
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乙型肝炎病毒S基因直接测序分型方法的建立及应用
HBV血清分型并不能真正反映病毒的异质性以及病毒真正的种系关系,通过对HBV全基因组的比较,HBV分为8个基因型,分型标准依据全基因序列测定,基因型间同源性>92%或基因型间异质性≥8%,S基因序列测定,基因型间同源性>96%或基因型间异质性≥4%[1,2].本研究通过建立乙型肝炎病毒S基因直接测序分型方法,初步探讨HBV基因分型的意义.
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聚合酶链反应与反向线点杂交检测沙眼衣原体及分型
目的建立和评价一个新的多重和巢式PCR-反向线点杂交试验(RLB)检测泌尿生殖道沙眼衣原体及其分型方法.方法该试验设计了3对引物分别针对CT外膜蛋白(omp1)基因VD2区和质粒进行扩增,用CT15种血清型(A、B/Ba、C、D/Da、E、F、G/Ga、H、I/Ia、J、Ja、K、L1、L2 和L3)探针与扩增后的产物杂交.经COBAS Amplicor检测的355份标本,其中277份尿液,2份男性直肠拭子和78份女性宫颈试子,进行PCR-RLB检测CT并分型.结果 192份COBAS Amplicor阳性标本中175份PCR-RLB阳性,其中93.1%(163/175)的CT感染可被正确分型,其单一型感染分型结果与DNA测序结果一致.163份COBAS Amplicor阴性标本中6份巢式PCR-RLB阳性.85.3%(139/163)为单一型CT感染,常见的CT是E(38.6%)F (28.5%)和D(18.2%).14.7%(24/163)为CT混合感染,混合感染以H和K为主.结论 PCR-RLB检测CT是一种简便、快速、特异和敏感的方法,并准确的进行CT分型,为CT感染的临床诊断和分子流行病学研究提供了一种可靠的方法.
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病原微生物实验室生物安全
病原微生物实验室是人类与引起感染性疾病的病原微生物作斗争的场所,也是引起实验室感染的场所.实验室人员在进行标本接种、涂片、染色、镜检、培养、鉴定、生化、药敏、血清分型等不同试验操作时都会暴露于各种病原微生物及危害因子中,而且无法判断标本中所带的致病微生物种类.因此加强病原微生物实验室的生物安全管理是减少和避免实验室感染发生的关键.
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Murex丙型肝炎病毒血清分型试验的初步应用与评价
目的探讨Murex丙型肝炎病毒(HCV)血清分型试验的可靠性与实用性.方法采用Murex HCV 1～6血清分型试剂,ELISA技术检测针对HCV非结构区(NS4区)的特异性抗体,对44例抗-HCV阳性的HCV感染者血清标本进行HCV血清分型,并比较与基因分型结果的符合程度.结果 44例中有35例(79.5%)获得血清学分型结果,其中1型27例(77.1%),2型7例(20.0%),1+2型1例(2.9%).血清型与基因型符合率为96.8%.结论 Murex HCV血清学分型试验结果可靠,简便易行,具有一定的临床应用价值.
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HCV血清分型方法的建立及其评价
目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性.方法克隆表达HCV Core、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建立血清分型方法.分别应用酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应法检测200例慢性丙肝患者的血清抗体和HCV RNA,并用建立的方法进行血清分型.同时采用该方法检测90例乙型肝炎患者、11例戊型肝炎患者和16例其他肝病患者的血清,评价其特异性.结果在200例慢性丙肝患者的血清标本中,基因1b型128例,2a型 72例,型别特异性抗体阳性157例,分型率为78.50%,与基因型一致率为98.09%.而在另外117例乙型肝炎、戊型肝炎和其他肝病患者的血清中,均未检测出HCV型别特异性抗体.结论建立的HCV血清分型方法具有较高的分型率和特异性,可用于HCV抗体的血清学分型和预测干扰素疗效.
