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应用酶联免疫吸附试验检查流行性出血热抗原和抗体及其抗原性分析
近年来,国内外先后分离到流行性出血热(EHF)病毒[1～3].间接免疫荧光抗体技术(IFAT)作为EHF病毒抗原和抗体的检测指标,具有简便可靠和敏感的特点.但由于需要昂贵的荧光显微镜,对抗原不能定量以及不能检查可溶性抗原,其应用受到一定限制.1981年苏联[4]和1982年美国[5]报道将酶联免疫吸附试验(ELlSA)用于检查肾病综合征出血热(HFRS)血清抗体和野鼠肺HFRS抗原.到目前为止,国内尚未见ELISA法应用于EHF抗原和抗体检测的报道.我们对ELISA在EHF抗原和抗体及其抗原性分析中的应用做了初步研究,现将方法和结果报告如下.
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Bio-rad脑膜炎乳胶凝集试验在流行性脑脊髓膜炎诊断中的初步应用
Bio-rad脑膜炎乳胶凝集试验盒由中国疾病预防控制中心免疫规划中心分发给流脑防控重点地区,用于检测本地区细菌性脑膜炎患者的脑脊液、血清、尿液、血培养物等标本的可溶性抗原.
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ELISA测定血清可溶性HLA-I类抗原
目的建立定量测定可溶性HLA-I类抗原的ELISA方法. 方法测定上海地区汉族正常人群血清可溶性HLA-I类抗原的含量,并进一步研究可能影响这一含量的因素. 结果测得116例上海地区汉族正常个体血清可溶性HLA-I类抗原的含量为 529.32±282.88 ng/ml. 结论性别和常见HLA-A位点抗原型别对血清可溶性HLA-I类抗原的含量未造成显著影响.
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两种抗原检测弓形虫病IgM的效果
目的 观察弓形虫P30重组抗原及可溶性抗原检测弓形虫病IgM的效果.方法 建立斑点免疫金渗滤法(DIG-FA).采用2种抗原分别包被在两条硝酸纤维素膜(NC)上,与待检血清中的相应IgM抗体结合,通过金标记兔抗人IgM直接显色,以检测弓形虫病IgM.2种抗原的DIGFA分别检测弓形虫IgM抗体阳性、类风湿、支原体肺炎、血吸虫病人和正常人血清.结果 两种抗原建立的DIGFA检测试剂共检测5种血清样本166份,其中弓形虫感染IgM抗体阳性病人血清38份,弓形虫P30-DIGFA敏感性为92.1％(35/38),可溶性抗原-DIGFA敏感性为81.6％(31/38),差异无统计学意义(P＞0.05).正常人群对照血清63份,检测全部阴性,特异性为100％.检测类风湿病人血清30份、血吸虫病人血清25份及支原体肺炎病人血清10份,仅类风湿病人血清出现阳性交叉反应,其中弓形虫P30-DIGFA阳性2例,可溶性抗原-DIGFA阳性3例.结论 弓形虫P30重组抗原检测弓形虫病人血清IgM的DIGFA试剂可用于临床早期或急性期弓形虫病的诊断.
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日本血吸虫病肝纤维化诊断研究进展
机体感染日本血吸虫后,虫卵在肝脏沉积并释放可溶性抗原,刺激巨噬细胞释放一系列细胞因子(TNF-a、TGF-β、IL-1等),激活枯否细胞(KC)、星状细胞(HSC),使前胶原mRNA表达增加,促进胶原与非胶原细胞外间质(LN、HA等)合成、分泌,成纤维细胞增生,产生大量胶原纤维沉积于肝脏,沿肝内门脉小分支形成特征性的血吸虫性干线型肝纤维化[1～3].
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吡喹酮是否具有免疫调节作用
血吸虫病是一种免疫性疾病,主要的致病机理是血吸虫卵在肝脏和肠组织的沉积,虫卵释放出可溶性抗原,引起一系列免疫反应,形成虫卵肉芽肿(Ⅳ型超敏反应),不断破坏肝脏和肠组织结构等.吡喹酮具有显著的杀血吸虫作用,但实验显示,吡喹酮不杀日本血吸虫成熟期卵及发育期卵,对虫卵的发育无明显影响.肖树华等[1]以小鼠做实验,于感染血吸虫尾蚴后32 d一次口服吡喹酮300 mg/kg,于不同时间剖杀小鼠,取肝组织压片,作卵谱检查,并与未治疗感染鼠对照.
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角膜清创、羊膜移植、氟康唑三联治疗真菌性角膜溃疡
真菌性角膜炎是一种难治性感染性眼病.常见的致病菌株为曲霉菌、镰刀菌、念珠菌.农村多见,植物性损伤常为其诱因.目前尚无强有效的抗真菌药物,一旦发生真菌在角膜组织繁殖,蛋白溶解酶及真菌可溶性抗原等引起强烈的炎症反应,组织坏死,溃疡形成,极难控制，在短时间内可造成视力丧失甚至毁掉眼球.2002年1月～2004年2月,我们应用病灶清除联合羊膜移植治疗真菌性角膜溃疡11例,现报道如下.
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抗核抗体、抗ENA抗体谱联合检测对系统性红斑狼疮的诊断意义
系统性红斑狼疮(SLE)是一种表现有多系统损害的慢性系统性自身免疫性疾病,其血清具有以抗核抗体为代表的多种自身抗体[1].我们将189例SLE患者和45例健康体检人员的血清分别检测抗核抗体(ANA)、抗可溶性抗原(ENA)抗体谱,来对SLE诊断加以评价.资料与方法一、一般资料收集我院2007年1月～2009年8月的住院患者189例(SLE组),男23例,女166例,年龄9～85岁,临床诊断均符合有关相应的诊断标准.健康体检者45例为对照组,男15例,女30例,年龄12～71岁.
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肌幼虫可溶性抗原与ES抗原检测抗旋毛虫抗体效果的比较
目的 比较旋毛虫肌幼虫可溶性抗原(SAg)与ES抗原(ESAg)检测抗旋毛虫抗体的效果.方法 应用SAg-ELISA和ESAg-ELISA对旋毛虫病患者血清、感染旋毛虫的小鼠血清及肉汁、其他寄生虫感染人及动物血清进行抗旋毛虫抗体的检测.结果 SAg-ELISA和ESAg-ELISA对10例旋毛虫病患者血清检测时抗体阳性率均为100%,但对10份正常人血清检测时SAg-ELISA的背景较深,两种抗原的A值相比较具有显著性差异(P＜0.05);应用两种抗原对旋毛虫感染小鼠和正常小鼠血清及肉汁的检测结果与对人血清的检测结果相似.SAg与肝吸虫、肺吸虫、血吸虫等寄生虫感染人及动物血清均有交叉反应,而ESAg仅与1例肺吸虫病患者血清有交叉反应.结论 旋毛虫肌幼虫SAg和ESAg检测抗旋毛虫抗体的敏感性相同,但ESAg的特异性优于SAg;肉汁也可作为样本进行抗旋毛虫抗体的检测.
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田鼠巴贝虫可溶性抗原组分分析及其初步应用
目的 分析田鼠巴贝虫可溶性抗原,寻找可用于免疫诊断的有效抗原组分.方法 用田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠,待虫血症达高峰期时,收集田鼠巴贝虫虫体;采用超声法制备可溶性粗抗原(soluble babesia antigens,SBA)并包板,ELISA检测血清特异性IgG,评价SBA的免疫反应性、交叉反应性和特异性;以SDS-PAGE电泳分析SBA组分,并进行Western Blot,分析其与感染鼠血清的反应性.结果 SBA-ELISA法可检测早期感染(7 d)小鼠血清,且与恶性疟、间日疟弓形虫病阳性血清无交叉反应,显示出其较好的诊断敏感性和较高的特异性.通过SDS-PAGE分析,获得5条分子质量为72、66、60、53、43 kDa的主蛋白带和介于14.4～116 kDa的7条次带.经Western Blot分析,SBA有15个抗原组分能被阳性小鼠血清识别,以72、53、43、39、30 kDa蛋白组分反应较强.结论 以SBA建立的间接ELISA可用于巴贝虫感染的有效筛查工具;田鼠巴贝虫可溶性抗原组分中72、53、43、39、30KDa为比较理想的抗原组分.
关键词： 田鼠巴贝虫 可溶性抗原 SDS-PAGE Western bolt ELISA -
旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE和双向电泳分析
目的 鉴定旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)与伪旋毛虫(T. pseudospiralis,T4)肌幼虫的差异蛋白.方法 应用SDS-PAGE和双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对T1、T4肌幼虫的可溶性抗原与培养24 h的ES抗原的蛋白组分进行分析.结果 SDS-PAGE显示,T1肌幼虫可溶性抗原有22条蛋白带(221.62 kDa~14.88 kDa),其中6条为T1特异性蛋白带(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34 kDa);T4可溶性抗原蛋白有18条带(185.28 kDa~14.27 kDa),其中4条为T4特异性蛋白带(132.60、119.30、35.26、31.02 kDa).T1的ES抗原有10条蛋白带(113.21 kDa~14.37 kDa),T4的ES抗原有9条蛋白带(104.71 kDa~14.51 kDa),T1、T4肌幼虫ES抗原的蛋白带均不相同.2-DE显示,T1可溶性抗原有193±12个蛋白点,分子量主要为11 kDa ~22 kDa、25 kDa ~64 kDa及100 kDa ~144 kDa,所对应的等电点(pI)分别为4.7~8.2、4.5~6.5及5~7;T4可溶性抗原有175±9个蛋白点,分子量主要为12 kDa ~21 kDa及25 kDa ~90 kDa,所对应的pI分别为4~9.5与4.5~9.6.T1的ES抗原具有82±6个蛋白点,分子量主要为13 kDa ~16 kDa、18 kDa ~22 kDa及40 kDa ~55 kDa,所对应的pI分别为4~7、3.8~6.2及5~9;T4的ES抗原具有69±5个蛋白点,分子量主要为10 kDa ~15 kDa、17 kDa ~25 kDa及29 kDa ~55 kDa,所对应的pI分别为4.7~6.5、4.6~6及5~7.结论 旋毛虫肌幼虫可溶性抗原及ES抗原的蛋白组分与伪旋毛虫的明显不同.
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不同免疫接种方法在单克隆抗体制备中的应用及比较
在制备抗泡球蚴原头节可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞时，我们采用常规的小鼠腹腔免疫接种－脾淋巴细胞法(以下称腹腔免疫法)和后肢跖部局部免疫接种－胴淋巴结淋巴细胞法(以下称后肢跖部法)，进行了4次杂交瘤细胞融合。经ELISA筛选和有限稀释克隆，后获得了16株可以稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。现将这两种免疫接种方法的结果及所获得的单克隆抗体的特性分析报告如下。1 材料和方法1.1 泡球蚴可溶性抗原手术摘取在沙鼠腹腔人工接种培养1年以上的泡球蚴包囊，在事先盛有生理盐水的培养皿中，粗铁纱网破碎过滤，沉淀用生理盐水悬浮清洗3遍后，在解剖镜下，仔细将位于中央的原头节收集，注意不要混入位于周围的大量石灰小体。取1.5×106个原头节，用pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)漂洗2遍后，再冻融2次。将原头节混悬液与等容的50mM n-heptyl-β-D-thioglucoside(含0.5mM PMSF)混合，超声粉碎后，10000g×4℃离心1h。上清即为泡球蚴可溶性抗原。以Bradford法测定蛋白浓度后，用PBS调整为10mg／ml，分装冻存。1.2 单克隆抗体的制备1.2.1 腹腔免疫接种－脾淋巴细胞法 50μg以1ml PBS稀释的泡球蚴原头节可溶性抗原，与等容福氏完全佐剂充分乳化后，腹腔注射BALB／c小鼠。14天后，换用福氏不全佐剂同法加强免疫。2周后，再次以1mlPBS稀释的100μg抗原腹腔注射强化免疫。3天后，检测血清抗体滴度，手术摘取ELISA结果OD值超过1.0小鼠的脾脏，采取脾淋巴细胞后，与P3X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合[1]。
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用阴道毛滴虫可溶性抗原和单克隆抗体进行ELISA试验研究
目的 探讨用阴道毛滴虫可溶性抗原和单克隆抗体进行ELISA试验的条件。方法 选用不同抗原浓度(50μg／ml～400μg／mg)包被酶标板，选用不同孵育时间(15～120)、不同封闭剂(脱脂奶粉、吐温20/PBS、牛血清白蛋白、小牛血清)和不同酶标板(国产和进口)。结果 以200μg／ml抗原量，用1%牛血清白蛋白封闭，37℃孵育1小时为本试验佳条件。结论 检测10例滴虫性阴道炎患者血清，阳性率为90%，与多种寄生虫感染血清或单克隆抗体均无交叉反应。X
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SLE患者可溶性抗原及自身抗体检测与临床意义研究
目的:探讨SLE患者免疫发病机理及其临床意义.方法:免疫印迹技术测定ENA抗体,免疫金标法测定ds-DNA抗体,ELISA法测ANA、sCD106、sCD95、sCD25、sCD54.ESR按临床检测常规进行.结果:活动性SLE患者sCD106、sCD54、sCD25水平均高于非活动性SLE患者的相应值(P<0.05);而后者又分别高于正常对照组的相应值(P<0.05);活动期SLE患者sCD95水平高于非活动期或正常对照组,后两者sCD95水平无差别(P>0.05).相关分析表明,sCD106和sCD54相关(r=0.549,P<0.05),sCD95与sCD25正相关(r=0.568,P<0.05),ESR与sCD106、sCD54、sCD95及sCD25均相关,ANA只与sCD95相关,ds-DNA在活动与非活动两组间差别明显(x=4.76,P<0.05)与可溶性细胞表面抗原间无相关性.结论:SLE患者自身免疫异常,可溶性sCD54、sCD95、sCD106及sCD25与活动性有关.
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抗精子抗体与男性免疫性不育
现代免疫学研究已证实，人类的全部生殖过程均存在着复杂的免疫学现象。精子对自身机体而言具有抗原性，但由于生殖免疫屏障的存在使机体不会对自身精子产生免疫反应，而在病理状态下，尤其是血睾屏障的破坏，就会造成精子或其可溶性抗原成分的逸出，诱发机体产生抗精子抗体(ASAb)，造成生殖障碍。男性不育中有8％～10％与免疫因……
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华支睾吸虫成虫虫体与排泄-分泌物抗原在ELISA检测中的评价
目的:探讨华支睾吸虫成虫可溶性抗原和排泄-分泌物抗原ELISA检测的临床诊断价值.方法:分别以虫体可溶性抗原和排泄-分泌物抗原作为诊断抗原,采用间接ELISA检测方法检测感染者(来自流行区,粪便虫卵检测阳性)血清107份和健康人(来自非流行区,粪便虫卵检测阴性)血清50份,计算其敏感性、特异性和符合率,并进行两种诊断抗原间的统计学比较与评价.结果:可溶性抗原的敏感性为58.88%,特异性为98%,符合率为71.34%;排泄-分泌物抗原的敏感性为87.85%,特异性为100%,符合率为91.72%.经统计学分析,两者敏感性和符合率差异具有统计学意义(P＜0.05).特异性差异无统计学意义(P＞0.05).结论:作为诊断抗原,排泄-分泌物抗原优于可溶性抗原.排泄-分泌物抗原具有较高的敏感性与特异性,对于华支睾吸虫感染具有较高的诊断价值.
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单克隆抗体在血清幽门螺杆菌可溶性抗原检测中的应用
目的建立一种血清幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)可溶性抗原检测方法,并评价其在Hp感染诊断中的作用.方法利用抗Hp单克隆抗体,采用双抗体夹心法检测血清中可溶性Hp抗原.并对其特异性和敏感性进行分析,同时与临床常用的血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养5种方法进行了比较,并对药物根除效果进行了评价.结果血清可溶性Hp抗原检测方法敏感性和特异性分别为96.5%和96.0%,此方法明显优于血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检和细菌培养,与14C尿素呼气试验无显著差别,药物治疗前后血清Hp可溶性抗原含量有显著差异.结论血清可溶性Hp抗原检测方法是一种简便、高敏感性和特异性检测Hp感染的方法,可用于Hp感染药物根除效果的评价.
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肠道病毒71型外壳蛋白VP1的可溶性表达、纯化及活性鉴定
目的 克隆、表达和鉴定肠道病毒71型(EV71)VP1基因,得到可溶性的蛋白VP1,为制备EV71的抗体和诊断试剂的开发打下基础.方法 优化EV71 VP1蛋白基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/VP1,转化大肠杆菌BL21.使用NP亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting检测目的 蛋白.以重组蛋白VP1为抗原,ELISA检测抗原活性.结果 重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量为36 000,与预计大小一致.ELISA实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了EV71 VP1蛋白,并得到可溶性的蛋白,对肠道病毒71型诊断试剂的开发有进一步潜在的应用价值.
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黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白抗原的分析
目的了解黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原的免疫生化特性.方法采用十十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定并通过酶联免疫印迹(ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性.结果四种抗原蛋白经SDS-PAGE后银染色,均得到清晰的蛋白显色带.卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见13、28、26、41条蛋白区带,其中主带分别为2、10、10、13条,分子量大多位于10～97kDa范围.具有免疫原性的蛋白质大多分布在43kDa以上分子量范围,四种抗原组分相互之间有交叉抗原的存在.结论不同发育阶段黑胸大蠊的蛋白质组分从卵-若虫-成虫出现次第增多现象并趋于复杂化,这对研究黑胸大蠊的发育生物学特征具有一定的潜在意义.
关键词： 黑胸大蠊 可溶性抗原 酶联免疫印迹 十玩弄烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
ANA、抗ds-DNA 抗体及抗 ENA 抗体在自身免疫性疾病诊断中的应用
目的：探讨抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（ds‐DNA）抗体及抗可溶性抗原（ENA）抗体在自身免疫性疾病诊断中的应用。方法选取40例确诊为自身免疫性疾病患者（调查组）和33例健康体检者（对照组）的血清进行ANA、抗ds‐DNA抗体及抗ENA抗体检测，对比2组人员的检测结果。结果通过检测，调查组患者的ANA、抗ds‐DNA抗体及抗ENA等阳性率分别为79．6％、55．6％、58．5％；对照组的 ANA阳性率为1．9％，其他抗体阳性率均为0，2组差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ANA、抗ds‐DNA抗体及抗ENA抗体联合检测结果，可以有效地用于自身免疫性疾病的诊断与疗效观察，值得临床推广。
