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ERK信号传导通路与肝星状细胞周期调控
慢性肝病的重要病理基础是肝纤维化,慢性肝病通过纤维化的发展走向肝硬化现公认肝星状细胞(HSC)的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节,HSC的增生有赖于一系列细胞内信息分子的调控,近年研究证实了ERK信号传导通路通过调控细胞周期相关周期蛋白的表达而调控细胞增生.因此本文对ERK信号传导通路调控HSC周期的研究概况作一扼要综述.
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细胞周期蛋白D1 RT-PCR ELISA的建立及其初步应用
目的:建立一种灵敏、特异和简便实用的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平的检测手段.方法:生物素标记Cyclin D1 5'端引物,PCR DIG Labeling Mix取代dNTP,RT-PCR终产物置于链霉亲和素包被的ELISA板中孵育,洗涤、显色后,自动酶联检测仪测A45onm值.常规RT-PCR方法作对照.检测对象包括Cyclin D1表达细胞系SGC7901,转染反义Cyclin D1基因的SGC7901D1AS细胞及转染空载体的SGC7901neo细胞,原发性胃癌组织30例、胃癌旁和正常胃黏膜组织20例,胃良性病变组织22例.结果:RT-PCR ELISA与RT-PCR琼脂糖电泳检测结果吻合,所测得的A450nm值与Cyclin D1特异性基因片段的丰度和检测细胞数量有一很好的对应关系.SGC7901胃癌细胞转染Cyclin D1反义基因后,Cyclin D1mRNA表达显著降低(P<0.05).Cyclin D1 mRNA在胃良性疾病起即开始明显升高(P<0.05).在胃癌各组中,进展期胃癌伴转移组的Cyclin D1 mRNA表达水平显著高于其他两组(P<0.05).结论:本文建立的Cyclin D1 RT-PCR ELISA可作为一种侯选的、较为简便和半定量的cyclin D1 mRNA检测方法.致谢:第三军医大学数学教研室罗明奎主任在本课题结果统计分析的工作中给予了无私的指导和帮助.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒与增生细胞核抗原的关系
0引言增生细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)位于真核细胞中,为一环形发夹样蛋白结构,与复制因子和细胞周期蛋白p21(Cip1/Waf1)相互作用,是DNA延长的"分子开关".他不仅对于DNA的复制,而且对于细胞的许多功能都是必需的,因此对于PCNA调节DNA复制及阐明蛋白相互作用的确切机制的理解是非常重要的.
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CDC25B在大肠肿瘤中的表达及意义
目的:探讨CDC25B(cell division cycle 25B,细胞分裂周期蛋白25B)在大肠肿瘤中的表达及临床意义.方法:应用半定量的RT-PCR及免疫组化染色(S-P法)方法检测该基因在大肠癌(RT-PCR法,n=24;S-P法,n=168),大肠腺瘤(RT-PCR法,n=62;S-P法,n=25)及大肠正常黏膜(RT-PCR法,n=10;S-P法,n=20)中的表达.结果:CDC25B mRNA在癌及大肠腺瘤中的相对含量明显高于正常大肠黏膜(1.41±0.07,1.32±0.17vs0.62±0.02,P<0.01),在大肠腺瘤伴轻-中-重度不典型增生组织中的相对含量逐渐增高(1.25±0.21,1.36±0.19和1.40±0.07,P<0.01);CDC25B基因翻译蛋白在正常大肠黏膜、腺瘤中未见表达,在大肠癌中以细胞核表达为主,其表达与大肠癌有无远处脏器转移相关(2/46 vs 14/106,P<0.05);经随访发现CDC25B蛋白阳性表达者,5 a生存率明显降低(25/31vs42/82,P<0.05).结论:CDC25B可能参与了大肠腺瘤到大肠癌的转变过程,其在大肠癌发展中可能起一定作用,为大肠癌预后不良的危险因素.
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细胞周期蛋白D1对被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖调控的影响
支气管哮喘(以下简称哮喘)的本质是气道慢性炎症,并在此基础上出现气道高反应性和气道重塑;而气道平滑肌增殖在哮喘气道重塑中起重要作用,是不可逆性气流阻塞、持续气道高反应性的重要病理基础.细胞分裂增殖必须经过细胞周期有规律地运行,细胞周期蛋白对细胞周期运行起关键的调控作用.已有研究证实,在人气道平滑肌细胞(HASMC),细胞周期蛋白D1表达增加可促进细胞增殖[1],但有关细胞周期蛋白D1对哮喘HASMC增殖调控的研究目前少见报道.由于哮喘患者的气道平滑肌很难获得,本实验用哮喘血清被动致敏的HASMC[2],观察细胞周期蛋白D1对HASMC增殖的影响,进一步阐明哮喘HASMC的增殖机制.
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细胞周期蛋白E2基因表达与白血病的关系
探讨细胞周期蛋白E2(cyclinE2)基因表达与白血病预后的关系.
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正常上皮细胞特异性-1基因超甲基化在肝癌发病机制中的作用
目的:探讨正常上皮细胞特异性-1基因在正常肝细胞和肝癌细胞株中的表达及其甲基化状态对该基因表达和细胞生物学的影响。方法用实时PCR 和实时 QPCR 方法检测NES1 mRNA在肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞L02中的表达,用MSP检测基因甲基化状态。以不同浓度DNA甲基化酶抑制剂(5-aza-dC)处理肝癌细胞株后,分别用实时QPCR检测NES1 mRNA表达量, MTT法检测细胞的存活率,蛋白印迹( WB)检测细胞周期蛋白cyclin D1、P21和P53表达水平。结果NES1 mRNA在肝癌细胞株中的表达量较正常肝细胞明显降低。肝癌细胞株中NES1外显子3 CpG岛的甲基化程度远远高于正常肝细胞。肝癌细胞株去甲基化后,NES1 mRNA表达水平有所上调,细胞存活率明显下降,P21和P53表达水平上升,cyclinD1表达水平下调。结论 NES1在肝癌细胞株中的低表达与该基因外显子3 CpG岛甲基化有关。 NES1基因外显子3甲基化可能是肝癌细胞中NES1表达缺失的分子机制。去甲基化药物5-aza-dC可通过阻滞细胞周期而抑制肝癌细胞株的增殖。
关键词: 肝癌 基因 正常上皮细胞特异性-1 甲基化 周期蛋白 -
P27kip1、CyclinD1在胆囊癌中的表达及其意义
我们应用免疫组化方法检测胆囊癌组织中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白( P27kip1)、细胞周期蛋白(CyclinD1)的表达,探讨它们在胆囊癌发生发展中的作用及其与临床病理参数的关系.
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周期蛋白在兔肝内胆管结石胆管组织中的表达及临床意义
肝内胆管结石是胆道外科领域的常见疾病,尤其是在东南亚地区发病率甚高[1].本实验用兔肝内胆管结石模型,探讨肝内胆管上皮的增殖活性以及肝内胆管结石的发生机理.
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Keap1-Nrf2- ARE 和 p53/p21信号通路在对乙酰氨基酚引起肝损伤后肝再生中的作用
对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)过量使用是引起肝损伤的主要原因。代偿性肝再生是药物性肝损伤的关键因素。但是 APAP 引起的肝损伤后肝再生的分子机制尚不清楚。本文旨在讨论 Keap1-Nrf2-ARE 和 p53/ p21信号通路在 APAP 引起肝损伤后肝再生中的作用。研究人员通过给予小鼠400 mg/ kg 的 APAP 体内注射后发现,小鼠在12 h 内表现出巨大的肝毒性,而肝脏功能的恢复却要在24 h 之后。注射 APAP 后转录因子 NF-E2相关因子2( nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的表达量和在细胞核中的积累量都有增加。在注射APAP 后的第一个24小时内,醌NADH 脱氢酶1(NQO1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶( GCLM)和血红素氧合酶1(HO-1)的表达被抑制,然后抑制氧化应激反应。注射APAP 后,p53及其下游靶基因p21含量显著增加,但是在48 h 内又降至正常水平。此外,细胞周期蛋白D1、细胞周期依赖性激酶4(CDK4)、增殖细胞核抗原(PCNA)和肝再生增强因子( ALR)水平在48 h 时明显增强,提示肝细胞增殖和组织修复的启动。这些结果表明,Keap1-Nrf2-ARE 和p53/ p21信号通路在对乙酰氨基酚引起肝损伤后肝再生中的作用。
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细胞周期蛋白D1的表达与乳腺浸润性导管癌的临床病理相关性
细胞周期蛋白(cyclin)是细胞有丝分裂过程中的一组重要蛋白,是细胞周期调节因子之一,通过相应的周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)及其抑制因子(cyclin-dependent kinases inhibitor,CKI)对细胞周期中G1/S期起重要调控作用[1].正常细胞中cyclin的合成和降解受到高度有序的调节,但乳腺癌细胞中却往往有异位表达.本研究应用免疫组织化学方法和回顾性方法探讨细胞周期的正相调节因子Cyclin D1在乳腺癌标本中的表达及其与经典的临床病理指标的关系.临床按TNM分期.
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存活素、细胞周期蛋白D1在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及意义
子宫颈癌是常见的妇女恶性肿瘤之一,有关宫颈癌研究一直是妇科肿瘤工作者关注的问题.存活素(survivin)是一种凋亡抑制基因,可抑制细胞凋亡,同时survivin基因的表达具有细胞周期依赖性,在细胞分裂过程中起重要作用.
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细胞周期蛋白D1与蛋白质p16在异位子宫内膜中的表达及其临床意义
子宫内膜异位症(内异症)主要发生于生育年龄妇女,病理表现呈细胞增生、浸润、转移及复发,严重影响妇女的身体健康和生活质量,且发病率逐年上升[1].细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和蛋白质p16是与肿瘤发生密切相关的、重要的细胞周期调控因子.本研究对两者在内异症患者异位子宫内膜中的表达及其临床意义进行探讨,现报道如下.
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子宫内膜癌组织p27蛋白、细胞周期素E和增殖细胞核抗原的表达及其临床意义
细胞周期素E(cyclin E)是G1期的周期蛋白,与细胞周期素依赖性激酶(CDK)2在G1期末结合而发挥作用,促进细胞进入S期.p27蛋白是一个多功能CDK抑制剂.目前,在多种肿瘤的研究中发现了p27蛋白、cyclin E表达的异常,而增殖细胞核抗原(PCNA)是反映细胞,特别是恶性肿瘤细胞增殖活性的一个指标.本研究拟通过免疫组织化学方法探讨其在子宫内膜癌中的表达及临床意义.
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苦杏仁甙对体外高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型细胞增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白D1及p21CIP1表达的影响
肺泡Ⅱ型细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cell,AECⅡ)在生后肺发育和肺组织损伤修复过程中占有重要地位,高氧暴露导致肺组织损伤,其修复有赖于AECⅡ的正常增殖.
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p21/WAF-1/CIP-1与宫颈癌放射敏感性的关系
已知凋亡受多种基因调控,其中p21/WAF-1/CIP-1是近年来研究较多的基因,又简称p21[1].它通过作用于周期蛋白-周期蛋白依赖性激酶(cyclin-CDK)复合物及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)引起肿瘤细胞生长抑制及调控细胞凋亡,从而影响肿瘤的放射敏感性.笔者搜集了30例宫颈癌病例,通过研究细胞凋亡与肿瘤放射敏感性以及p21与细胞凋亡的关系,探讨p21对宫颈癌放射敏感性的作用.
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人脑梗死后细胞周期蛋白D1及细胞增殖核抗原的表达
对人脑梗死周围组织中的星形胶质细胞反应及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平进行观察,探讨人脑梗死后星形胶质细胞反应的机制.
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脑膜瘤相关蛋白的表达及其意义
随着免疫组化技术在肿瘤中的应用,许多学者对脑膜瘤进行了大量的免疫组化研究,但目前尚未发现特异的免疫组化标记蛋白.本文对41例脑膜瘤标本应用免疫组化方法检测细胞周期蛋白A(Cyclin A)、组织蛋白酶D(Cathepsin D)和Ki-67的表达情况及分析他们与肿瘤组织学分级的关系.
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FOXO转录因子参与银屑病表皮增殖失调
转录因子FOXO是叉头框基因家族的成员,其编码的FOXO蛋白家族在细胞代谢、增殖和凋亡等方面发挥重要作用.3-磷酸肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)和丝裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路以及microRNA等参与FOXOs翻译后修饰调节,调控FOXOs转录活性和亚细胞定位.FOXOs可能参与调控银屑病皮损角质形成细胞的过度增殖,但具体机制尚不明确.该文对FOXOs参与银屑病表皮过度增殖的可能机制进行综述.
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胆脂瘤上皮细胞增殖及分子调控机制的免疫组化研究
近年来研究表明胆脂瘤细胞的过度增殖行为与信号传导相关的蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)异常激活有关[1],信号传导中涉及细胞周期,G1期的重要调控者周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependen kinase 4,CDK4)和其特异性抑制因子周期蛋白依赖性激酶抑制物p15调控结果对细胞周期产生重要影响,有决定细胞增殖还是凋亡的作用[2],因此,我们用超敏免疫组化技术(ultrasensitive immunohistochemistry,SP)检测胆脂瘤上皮细胞磷酸化PTKs、CDK4、p15的表达水平,报道如下.