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降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:为阐明神经因素与平滑肌细胞增生调控之间的关系提供理论依据.方法:取人胚胎的主动脉,体外原代培养血管平滑肌细胞.实验分为联胺诱导组、联胺+降钙素基因相关肽(CGRP)组、CGRP组;用细胞计数法和MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测细胞周期蛋白D1、周期蛋白E mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:联胺能诱导血管平滑肌细胞的增殖.CGRP对正常血管平滑肌细胞的增殖有抑制作用,但对联胺诱导增生的血管平滑肌细胞抑制作用更明显.对周期蛋白D1 mRNA的表达有明显下调作用.结论:CGRP对血管平滑肌细胞的增殖,特别对联胺诱导增殖的下调作用更明显.
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利什曼原虫ICAM-L分子阻止巨噬细胞从细胞周期G1过渡到S阶段
利什曼原虫专一寄生于宿主的巨噬细胞内,通过受体介导的吞噬作用感染巨噬细胞.近,用感染杜氏利什曼原虫的巨噬细胞cDNA微阵列分析所得到的分布图显示,37%的巨噬细胞基因表达下调,这其中包括一组细胞周期蛋白依赖的激酶抑制因子(CKIs).细胞分裂依赖于细胞周期蛋白依赖的激酶(CDKs)诱导细胞周期向S阶段过渡,随后启动了有丝分裂.在正常的情况下,CDKs的功能受细胞周期抑制因子如p21、p27蛋白周密调节,而未受控制的CDKs的活性经常导致肿瘤发生.在利什曼原虫感染期间,一些巨噬细胞基因可以吸引更多的巨噬细胞至感染部位.至今尚无任何单一的机制或因子被确定可以解释利什曼原虫感染期间巨噬细胞的活化或失活.
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CyclinD1m RNA和蛋白在胃黏膜非典型增生癌变过程中的表达及其意义
胃黏膜非典型增生(G ED )不仅是胃癌的癌前病变,而且提示了胃黏膜发生腺癌的风险增加[1]。CyclinD1由Motokura等[2]于1991年从甲状旁腺瘤中克隆并提取出来,是细胞周期进程中的重要调控分子[3]。目前对于细胞周期蛋白的研究无论在形态结构、作用机制还是作为治疗靶点方面均取得了一定进展,细胞周期调控异常是近年来的研究热点之一[4]。本研究拟检测CyclinD1在GED癌变过程中基因和蛋白的表达情况,探讨其分子机制,为G ED早期癌变的发病过程提供临床诊断依据。
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新星奖获奖者报告1:LRP16基因对胰岛β细胞功能的影响及其机制的研究
雌激素改善机体糖代谢水平,降低糖尿病的发生率.实验证明,小鼠β细胞表达雌激素受体,其增殖和功能均能受雌激素的调控.我们前期研究发现LRP16是雌激素下游重要信号蛋白可与雌激素共激活下游靶基因.为研究LPR16是否介导雌激素对β细胞的保护作用,我们建立了稳定表达LRP16 shRNA的min6细胞系.LRP16敲除的min6细胞处于S期(DNA合成期)的数量显著减少,增殖减缓.细胞周期蛋白cyclin E、D1、D2和D3表达均显著降低.
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Cyclins/CDKs及其抑制剂的抗瘤作用
本文简要介绍了细胞周期蛋白(Cyclins)、周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-Dependent Ki nases,CDKs)以及周期蛋白依赖性激酶抑制因子(Cyclin-Dependent Kinases Inhibitors ,CKIs)的研究新进展以及周期调控中关键蛋白及相关抑制因子之间的相互关系,并着重介绍了内、外源抑制剂对细胞周期的调节作用及它们的抗瘤作用.
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细胞周期相关因子与乳腺细胞的癌变及生物学特性的相关性研究
目的:研究正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞之间以及不同恶性程度的乳腺癌细胞之间的细胞周期相关因子的表达异同.方法:采用Western印迹法检测正常乳腺细胞株AG11132A、ER阳性的乳腺癌细胞株MCF-7及ER阴性的乳腺癌细胞株MDA-MB-231之间细胞周期蛋白D1、E及P21蛋白表达的异同及与其生物学特性的关系.结果:(1)正常乳腺上皮细胞株高表达P21蛋白,低表达周期蛋白E.与正常细胞相比,乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231细胞高表达周期蛋白E,其中高表达的周期蛋白E中存在异常的低分子量周期蛋白E成分,而正常乳腺上皮细胞不表达这种异常的周期蛋白E.(2)在乳腺癌细胞株之间,相对ER阳性的MCF-7细胞,ER阴性的MDA-MB-231细胞则高表达周期蛋白E,基本无表达P21蛋白.结论:(1)正常细胞与癌细胞之间、相对低恶性程度的癌细胞与相对高恶性程度的癌细胞之间的差别是多环节的、质和量的异常导致的结果;(2)周期蛋白E及P21均可反映乳腺癌细胞的增殖活性和恶性程度,可能是乳腺癌的临床预后指标.
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hSulf-1过表达提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性
目的:探讨人硫酸酯酶-1(human sulfatase 1,hSulf-1)基因过表达是否提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性.方法:采用不同浓度AZD2281处理细胞,并筛选AZD2281处理的佳浓度.将携hSulf-1基因的重组腺病毒Ad5-hSulf1感染MCF-7细胞,以Ad-hSulf1和AZD2281单独或联合处理MCF-7细胞,以Ad5-EGFP处理为对照.采用流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin depend-ent kinase 4,CDK4)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的表达,Transwell法、MTT法分别检测细胞的迁移及增殖.结果:AZD2281浓度为7μmol/L时对MCF-7细胞的抑制作用趋于峰值,用于后续实验.Ad5-hSulf1+ AZD2281联合处理与AZD2281单独处理相比,MCF-7细胞的G2/M期细胞比例明显增多[(22.15±0.17)%vs(17.44 ±0.57)%,P<0.01],细胞克隆形成率[(21.43±1.52)% vs(49.43±1.44)%,P<0.01]及细胞周期蛋白CDK4的表达[(0.67 ±0.02)vs(0.72±0.02),P<0.05]、AKT的磷酸化水平[(0.17 ±0.003)vs(0.42 ±0.02),P<0.01]均明显降低,同时细胞的增殖率和迁移能力也有明显下降[(57.69±4.83)% vs(79.35±5.44)%;(10.33±1.53)个vs(50.67 ±2.31)个,均P<0.01].结论:hSulf-1过表达可明显提高乳腺癌细胞MCF-7对AZD2281的化疗敏感性,阻滞细胞周期于G2/M期,并更明显地抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,这一效应可能是通过调节细胞周期蛋白CDK4及AKT通路产生的.
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Roscovitine和Mimosine在Fas介导白血病细胞凋亡中的作用及其可能机制
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱(mimosine)在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制. 方法:以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt-4和急性T细胞白血病细胞Jurkat为靶细胞,用rhFasL、Roscovitine、Mimosine分别单独作用Molt-4细胞18 h(Jurkat细胞8 h)、24 h、24 h,或rhFasL分别与后两者联合作用靶细胞,用流式细胞术检测cyclins的表达和细胞凋亡率,Western blotting法检测CDK2和CDK1的磷酸化水平. 结果:Fas介导的细胞凋亡定位于G1期,Roscovitine和Mimosine作用后均可使Fas介导的细胞凋亡率明显增加(P<0.05).Roscovitine作用后G1期的cyclin D3和cyclin E表达升高,靶细胞被阻滞在G1期的比例明显升高,并下调CDK2 Thr-160位点的磷酸化水平;Roscovitine和rhFasL共同作用后,CDK2 Thr-160位苏氨酸磷酸化水平进一步减弱.Mimosine作用后 cyclin D3的表达下降和CDK2 Thr-160位点磷酸化水平明显下降,靶细胞被完全阻滞在G1期.Mimosine和rhFasL共同作用后cyclin D3、E、A和B1均有所下降,CDK2 Thr-160位苏氨酸和CDK1 Thr-161位苏氨酸的磷酸化水平明显减弱. 结论:Roscovitine和Mimosine均有协同rhFasL促进白血病细胞凋亡的作用,其机制与该两制剂阻滞细胞于G1期、抑制CKD2活性以及影响细胞周期蛋白表达有关.
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果蝇生物钟基因
Rosbash等报告了果蝇昼夜节律的分子遗传学研究进展,确定了具有昼夜节律起搏点功能的周期蛋白(PER)和永久蛋白(TIM).两种基因都显示出强大的转录和表达功能.
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泛素结合酶UbcH10与肿瘤
泛素结合酶UbcH10(Ubiquitin-conjugating enzymes,UbcH10)又称周期蛋白选择性泛素载体蛋白E2-C,属于泛素结合酶E2家族的成员[1],是肿瘤相关的泛素结合酶[2].在泛素介导的蛋白质降解途径中,E2蛋白的作用将来自E1活化酶的泛索转至具有E3连接酶活性的特异的底物蛋白的赖氨酸残基,泛素化的靶蛋白被26s蛋白酶体识别而降解[3].
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套细胞淋巴瘤的治疗进展
套细胞淋巴瘤(MCL)是20世纪90年代初期由RaffeldJaffe及Banks 3人首先提出,是一种特殊类型的B细胞淋巴瘤.细胞遗传学特点是[t(11;14)(q13:q32)],由11号染色体的bcl-1基因(11q13)易位到14号染色体免疫球蛋白重链基因启动子的下游,从而导致bcl-1基因表达的上调.bcl-1基因的移位致细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA过度表达,终导致细胞增殖的调控紊乱.
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新型维甲酸对乳腺癌细胞周期蛋白
目的研究新型维甲酸AHPN对乳腺癌细胞的生长抑制的可能机制。方法应用细胞生长抑制试验及Western印迹法,研究新型维甲酸对乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞的生长抑制现象、不同时间点细胞内周期蛋白D1、周期蛋白E蛋白表达情况。结果AHPN可有效地抑制MDA-MB-435细胞的生长,周期蛋白D1的蛋白表达随药物的作用时间的延长而逐渐降低,但周期蛋白E的蛋白表达却无明显的改变。结论AHPN可有效地抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞的生长,这种抑制作用可能通过降低周期蛋白D1的蛋白表达实现,而与周期蛋白E的蛋白表达量无明显关系。
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癌基因蛋白C-erbB-2、细胞周期蛋白Ki-67与上皮生长因子受体在乳腺癌表达的临床意义
目前,对癌基因蛋白C-erbB2、细胞周期蛋白Ki-67及上皮生长因子受体(EGFR)蛋白在乳腺癌过度表达的临床意义仍存在不同的看法,本研究采用免疫组织化学方法测定乳腺癌中上述3种蛋白表达并分析其与癌肿大小、淋巴结转移及术后生存的关系,现报道如下.
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肠道喂养和静脉营养对烧伤早期肠道复苏和修复的效应
肠道喂养与静脉营养两者各有利弊,在临床营养支持时,两者应结合应用.从本系列实验30% Ⅲ°大鼠烧伤以及50%成人烧伤来看,早期肠道喂养组对改善肠粘膜血流量、肠道血管通透性及血液流变性;降低REE,改善肠粘膜能荷,提高肠粘膜细胞线粒体Ⅲ态呼吸率、呼吸控制率及磷氧比,提高肠组织氧摄取率及肠粘膜pHi,降低细胞内游离Ca2+;减轻肠粘液层、粘膜变薄、绒毛变短、隐窝变浅、肠粘膜PD下降、L/M升高、血清DAO升高,降低血浆、肠道、肠粘膜细胞线粒体MDA以及血浆内毒素、TNF;提高血清蛋白及肠粘膜DNA、RNA、氮量,降低尿氮排量,促进肠粘膜增殖,增加肠粘膜PCNA表达、G1期周期蛋白D、E及其激酶CDK4表达,增进肠粘ALP、MAL、TK活性,促进肠粘膜ITF、EGF分泌等的作用均优于早期静脉营养组.
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CLOCK基因突变与2型糖尿病发生率以及2型糖尿病患者心血管病发生率之间的联系
昼夜节律对代谢途径相关的关键生物学过程具有调控作用。既往研究显示,昼夜节律与2型糖尿病(type 2 diabetes, T2D )和心血管病(cardiovascular diseases, CVD )相关。昼夜节律由涉及核心生物钟基因(clock gene)的转录自动调节反馈回路产生。作为这些核心基因之一,昼夜节律运动输出周期蛋白故障基因( circadian locomotor output cycles protein kaput, CLOCK )已知可在啮齿类动物模型中调节葡萄糖代谢。横断面研究显示,该基因位点与肥胖、血糖、高血压和T2D患病率有关,从而支持其在CVD风险中的作用。然而,迄今尚未进行过纵向研究来探讨CLOCK基因变异与T2D或CVD发病率之间的联系。此外,虽然西班牙瓦伦西亚大学医学院预防医学和公共卫生教研室的Corella等在以往的研究中检测到CLOCK-rs4580704(C>G)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP )与单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA)摄入量对胰岛素抵抗的影响存在基因-饮食相互作用,但尚未进行过干预性研究来分析这种基因-饮食相互作用对T2D或CVD转归的影响。
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018细胞周期蛋白D1有助于套细胞淋巴瘤皮肤组织学诊断
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细胞周期蛋白D1和磷酸化Rb蛋白在小汗腺汗孔癌和小汗腺汗孔瘤中的表达
小汗腺汗孔癌(eccrine porocarcinoma,EPC),以往被称为恶性小汗腺汗孔瘤,是常见的恶性汗腺肿瘤.好发于老年患者的下肢、躯干、头皮和上肢,男女发病率为1.3:1.小汗腺汗孔瘤(eccrine poroma,EP)是一种好发于足底、足侧缘等部位的呈孤立结节的良性汗腺肿瘤.组织学上,认为它们起源于末端汗管的外层细胞和真皮上部的小汗腺导管.国内外有关EPC和EP的发病机制的研究报道较少,有报道p53和p16/Rb与这两种小汗腺来源的良恶性有关[1-2].
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细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白D1和p21WAFI/CIPI在尖锐湿疣中的表达
我们采用免疫组化SP法检测细胞周期蛋白(Cyclin)E、CyclinD1和p21WAFI/CIPI在尖锐湿疣组织中的表达情况,同时应用原位杂交技术检测尖锐湿疣组织中HPV DNA的表达,旨在探讨CyclinE、CyclinD1和p21WAFI/CIPI在尖锐湿疣发生发展中的作用,以揭示尖锐湿疣组织增生机制.
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细胞周期蛋白E、P27、增殖细胞核抗原在皮肤鳞状细胞癌中的表达
我们采用免疫组化方法观察细胞周期蛋白E(Cyclin E)、P27、增殖细胞核抗原(PCNA)在皮肤鳞状细胞癌(皮肤鳞癌)的表达,了解其在皮肤鳞癌发生、发展中的作用.
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细胞周期蛋白E、P16蛋白与脂溢性角化病的相关性
本研究采用免疫组化方法检测脂溢性角化病皮损组织中细胞周期蛋白E和P16蛋白的表达,旨在了解它们在脂溢性角化病发生发展过程中的作用.