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肝外胆管癌组织中细胞周期素D1、CDK4、Rb和p16的表达及其意义
细胞周期素D1(cyclinD1)癌基因、视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)和p16抑癌基因均为细胞周期蛋白调控基因.细胞周期素依赖激酶(cyclin dependent kinase4,CDK4)介导影响细胞的增殖和分化[1].我们应用免疫组织化学方法研究肝外胆管癌组织中cyclinD1、CDK4、Rbp16的表达特征及其意义,从而探讨它们与肝外胆管癌之间的关系,现将结果报道如下.
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斑蝥酸镁抑制人胃癌细胞BGC-823增殖及其机制
目的 探讨斑蝥酸镁在体外对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用及其机制.方法 分别加入0.52、1.04、2.08、4.17、8.34 μmol/L的斑蝥酸镁作用24 h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测BGC-823细胞增殖的影响;光学显微镜和透射电镜观察细胞形态学和细胞超微结构的变化;碘化丙锭(PI)单染色法检测细胞周期变化,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白(Cyclin) B1蛋白的表达.结果 不同浓度斑蝥酸镁作用24h后,BGC-823细胞均出现抑制现象,且呈剂量-效应关系(P=0.000),其半数抑制浓度(IC5o)为4.868 μmol/L;IC50的斑蝥酸镁作用24 h后,BGC-823的细胞核异形、裂解,内质网及线粒体肿胀;加入4.868 μmol/L斑蝥酸镁作用24h后,BGC-823细胞的凋亡率明显增加(P=0.010),且表现出明显的G2/M期阻滞(P=0.009);加入2.434、4.868、7.302 μmol/L斑蝥酸镁作用24 h后,BGC-823细胞的CDK1、Cyclin B1表达明显下降(P =0.000).结论 斑蝥酸镁能够抑制胃癌细胞BGC-823增殖,并将细胞阻滞在G2/M期.
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转染BMPⅡ型突变受体前后Tca8113舌癌细胞中p27和p57表达的定量分析
目的:明确转染BMP-II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用,以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理.方法:检测转染BMP-II型突变受体的Tca8113舌癌细胞(Tca8113ZR细胞)和Tca8113细胞的细胞周期相关因子p27和p57的表达,以明确突变受体对细胞周期及生长的影响.结果:转染了BMPⅡ型突变受体后,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱.结论:BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用,BMPs信号的改变可能导致细胞的恶性程度的改变.
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转染骨形成蛋白(BMPs)Ⅱ型突变受体前后Tca8113细胞周期相关因子表达及凋亡的研究
目的:明确转染BMP-II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用,以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理.方法:检测转染BMP-II型突变受体的Tca8113舌癌细胞(Tca8113ZR细胞)和Tca8113细胞的细胞周期相关因子(CyclinD1,CDK-4,p27和p57)的表达及凋亡,以明确突变受体对细胞周期及生长的影响.结果:转染了BMPⅡ型突变受体后,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱.结论:BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用,BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变.
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红景天苷通过p21和Cyclin对MSCs细胞周期的影响
目的:探讨红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞marrow mesenchymal stem cells(MSCs)向神经元细胞定向分化的相关分子机制.方法:以MSCs(D1细胞)为对象,红景天苷作为诱导剂,运用流式细胞术、荧光免疫化学染色和Western blot方法分别检测红景天苷对细胞周期及Cyclin D1和p21蛋白表达的影响.结果:红景天苷诱导细胞24,48 h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,说明红景天苷能显著促进细胞发生G0/G1期阻滞;荧光免疫化学染色表明,对照组和诱导12~24 h后Cyclin D1为阳性表达,阳性细胞数为71%,71%和44%,而48~72 h组表达呈阴性;诱导12~72 h后p21呈阳性表达,阳性细胞数为85%,90%,65%和73%,与对照组相比差异显著(P<0.01);Western blot检测表明Cyclin D1表达量随诱导时间的延长下调,p21蛋白表达水平上调.结论:红景天苷通过影响细胞周期相关蛋白Cyclin D1和p21抑制细胞增殖,使MSCs阻滞于G0/G1期,进而促进MSCs定向分化.本试验为阐明红景天苷诱导MSCs定向分化的分子机制奠定了坚实的理论基础.
关键词: 红景天苷 细胞周期 MSCs 周期蛋白 周期蛋白依赖性激酶抑制因子 -
生物钟基因Clock通过调节前脂肪细胞增殖抑制脂肪形成的作用及机制研究
目的:探讨Clock蛋白通过对前脂肪细胞3T3-L1增殖的调节来促进细胞成脂的作用和机制。方法:利用RNAi或Clock的高表达病毒载体,分别在3T3-L1中低表达或高表达Clock基因。 CCK-8检测细胞增殖,利用RT-PCR和Western blot技术检测相关细胞周期蛋白和Clock蛋白的表达情况。利用染色质免疫共沉淀技术检测Clock蛋白对Wnt信号通路关键因子的转录调节作用。结果:Clock蛋白可以促进3T3-L1细胞的增殖;同时在Clock基因低表达的3T3-L1细胞和ClockΔ19小鼠脂肪组织中,促进细胞周期进行的关键调控因子细胞周期蛋白D1、c-Myc和增殖细胞核抗原( PCNA)的表达受抑制。低表达Clock基因的3T3-L1细胞中,β-连环蛋白(β-catenin)表达量降低;ChIP结果发现Clock蛋白可与β-catenin、Dvl2(dishevelled 2)和c-Myc上游启动子结合,调控其转录激活,Wnt信号通路抑制剂可以抑制Clock蛋白促进细胞增殖的作用。结论:Clock蛋白可以通过调控Wnt信号通路来促进前脂肪细胞增殖,并进一步抑制脂肪分化程序的启动,抑制细胞成脂。
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尾加压素II介导卵圆细胞增殖的机制探讨
目的:探讨尾加压素II( UII)对肝脏干细胞即卵圆细胞内活性氧( ROS)的影响及其参与UII促细胞增殖的机制探讨。方法:通过流式细胞术,应用DCFH-DA探针检测UII孵育卵圆细胞WB-F344后,胞内ROS水平变化。通过Western blot方法检测胞内NADPH氧化酶亚基、细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白依赖性激酶2及信号通路蛋白ERK表达水平。采用流式细胞术方式分析UII对于细胞周期的影响。应用BrdU掺入法检测细胞增殖情况。结果:UII刺激卵圆细胞可引起胞内ROS水平增加,同时NADPH氧化酶亚基表达上调。给予NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理后,明显改善UII介导的ERK磷酸化水平升高。此外,UII孵育组细胞周期比例S期明显高于G1期,而apocynin预处理组S期比例较UII刺激组有所降低,且细胞增殖检测结果显示apocynin预处理可使UII介导的促细胞增殖效应受到明显抑制。结论:UII可通过上调细胞内NADPH氧化酶介导ROS增加,继而促进ERK激活以及加速细胞从G1期进入S期,参与UII促细胞增殖作用。
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鹿茸多肽促进软骨细胞增殖机制的初步探讨
目的 探讨鹿茸多肽(PAP)促进软骨细胞增殖的机制.方法 以12.5、25.0、50.0、100.0 μg/mL不同浓度的PAP刺激软骨细胞,倒置相差显微镜观察软骨细胞生长情况,噻唑兰法(MTT)检测软骨细胞的生长增殖能力;以6、12、24、48 μg/mL不同浓度酪氨酸受体激酶阻断剂Genistein作用于受PAP刺激的软骨细胞,用MTT和流式细胞仪观察Genistein对PAP作用的影响;免疫组化SABC法检测核增殖抗原cyclinA在PAP和PAP+Genistein作用下的表达变化,RT-PCR法检测c-fos mRNA表达.结果 PAP作用下c-fos mRNA与cyclinA表达增加,S期的细胞比例增高,从6.4%增加到35.2%;Genistein作用后PAP的促增殖作用受到明显的抑制,S期的细胞降到4%,c-fos mRNA与cyclinA表达亦减少;单纯用Genistein不影响软骨细胞生长.结论 PAP可能通过酪氨酸受体蛋白激酶介导,作用下游的信号,引发立早基因c-fos表达,促进cyclinA的表达,引起更多的细胞进入有丝分裂期,从而促进软骨细胞增殖.
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细胞周期蛋白D1与CDK4在增殖性肾炎肾小球的表达及临床意义
增殖性肾炎是常见的肾脏病,系膜细胞(MC)增殖在增殖性肾炎的发生发展中起重要作用,但其机制尚未完全阐明.本研究通过检测原发性肾小球肾炎(PGN)患者针刺肾活检组织肾小球细胞周期蛋白(cyclin)D1、CDK4的表达水平,结合临床资料,从细胞周期角度揭示增殖性肾炎中MC增殖的分子机制,为临床PGN的防治提供一定的理论依据.
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多球壳菌素对肾小球系膜细胞肥大及细胞周期蛋白的影响
糖尿病肾病及高血压肾病会导致慢性肾功能衰竭(CRF),其病理改变为肾小球系膜细胞(GMC)肥大以及系膜基质的积聚,并终导致肾小球硬化[1].目前尚缺乏有效的药物来阻滞肾脏病变的进展.临床观察表明虫草可延缓肾脏病变的进展.近年从虫草分离出多球壳菌素(ISP-1),该物质具有较强的免疫调节活性,有可能是虫草治疗肾病的物质基础.
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p21WAF1/CIP1的功能研究新进展
细胞周期由周期蛋白和周期蛋白依赖激酶(cyclin2dependent kinase,CDK)的相互作用而完成.尤其是G1期过渡到S期受细胞周期负调节因子家族周期蛋白依赖激酶抑制因子(eyclin-dependent kinase inhibitots,CDKI)的调节,其在体外通过与CDKs,cyclins或cyclin-cdks复合物的结合达到抑制CDK催化外源性底物的活性.两个家族:CIP家族和INK4家族.p21WAF1是CIP家族中的一员.转化细胞中p2lWAF1/CIP1的表达对增长停滞起关键性作用[1].
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泛素连接酶 Cullin3的研究进展
泛素-蛋白酶体系统( ubiquitin-protesome system )被认为是生物体内为主要的蛋白质选择性降解方式[1],被发现存在于细胞质和细胞核中参与调控包括细胞周期、信号转导、病毒感染、生长发育等几乎所有的生命过程中,而它的减少对人类的某些疾病如:恶性肿瘤、糖尿病、高血钾、高血压等病理过程的进展有至关重要的作用[2-3]。 E3泛素连接酶( E3 uibiquitin ligases )是泛素-蛋白酶体系统中大的一个家族体系。到目前为止被发现的泛素连接酶已有500多种,它主要划分为两大亚家族:第一类是拥有HECT结构域的E3泛素连接酶;另一类则是含有RING结构域的E3泛素连接酶[4-5],由于它们都具有保守的CUL同源结构域,因此又被称为Cullin-Ring E3泛素连接酶( cullin-RING-based E3-ligases,CRLs)。含有RING结构域的E3泛素连接酶是一个庞大的E3泛素连接酶类群,其调控机体内细胞周期蛋白和转录因子,约占整个泛素-蛋白酶体系统的20%[6]。 Cullin蛋白家族在不同物种之间是高度保守的[8],在哺乳动物中通过N端结构域连接不同的结合蛋白,主要划分为Cullin1、2、3、4A、4B、5和77个亚型[7-8]。 Cullin3是Cullin蛋白家族亚型中的一种,由于其复杂的结构及其在细胞周期、信号转导、发育等生理过程中的重要作用,越来越成为蛋白泛素化降解领域的热点。本文主要从Cullin3的结构、分子调控功能、自身活性调控和临床相关疾病等几个方面进行综述。
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Wee1蛋白激酶与肿瘤相关性的研究进展
细胞周期的进程是由一系列细胞周期调控系统控制的复杂过程。细胞周期调控系统的核心成分是周期蛋白依赖性激酶(CDKs)与周期蛋白(Cyclins)结合形成的CDKs/Cyclins复合物,能促进细胞进入增殖周期。 Cdc2/CyclinB ( CDKs/Cyclins)复合体的快速激活,使细胞完成从G2期到M期的转变,而这一快速的转变正是在Wee1和Cdc25等蛋白激酶的调节下进行的。 Wee1蛋白激酶是一种细胞周期调节因子,属于核内的丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶家族的一员[1]。Wee1蛋白激酶主要通过磷酸化Cdc2第15位上的酪氨酸而抑制Cdc2/CyclinB复合物的激活,特异性的调控细胞周期G2/M 的转换,从而抑制细胞的有丝分裂[2]。在细胞周期中,Wee1蛋白激酶作为一种G2/M期检查点的关键激酶,其表达升高或降低,将使有丝分裂停滞于G2期而发生凋亡,或者是直接通过G2/M期,损伤的DNA得不到修复,细胞继续分裂成子细胞,而发生凋亡或癌变。本文就Wee1蛋白激酶的结构、生物学功能及其与肿瘤的相关性综述如下。
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子研究进展
细胞周期与细胞癌变的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一.细胞周期是细胞生命活动的基本过程,正常情况下,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态.如果细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,如细胞转化、癌变.参与细胞周期调控的因子主要有:细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(Cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI).Cyclin目前发现有8个成员,分别命名为Cyclin A、B、C、D、E、F、G、H.CDK目前发现7个成员,分别命名为CDK1-7.CKI为新发现的一类蛋白,通过与CDK、cyclin或cyclin-cdk复合物的结合,抑制CDK的激酶活性,从而调节细胞周期正常、有序地进行.目前CKI分为两大家族:①Ink4(Inhibitor of cdk 4):包括P16ink4a、P15ink4b、P18ink4c、P19ink4d,其蛋白质结构与功能具有高度相似性,特异性抑制cdk4·cyclin D1、cdk6·cyclin D1的磷酸化激酶活性.②Kip(Kinase inhibition protein):包括P21cip1 (cyclin inhibition protein 1)、P27kip1(kinase inhibition protein 1)、P57kip2,它们在N-末端具有高度的结构和功能相似性,抑制现已知的大多数cdk、cyclin的磷酶化激酶活性.
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细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂:一类全新的抗肿瘤药物
细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDKs)是调控细胞周期的一个蛋白家庭[1],其成员有CDK1~CDK9,共9种,其中有CDK1~CDK7与其相应的调节亚基即细胞周期蛋白(cyclin)组成的复合物可推动细胞跨越细胞周期各时相转换的限制点[2],使细胞完成由G1→S→G2→M各期的转换过程,对细胞分裂增殖的调控处于核心地位.因此,作为一个新的治疗靶点,CDKs抑制剂的研究是目前抗肿瘤药物研究与开发的热点之一[3].笔者现将这类药物作如下综述.
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土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂 (cisplatin,DDP)的增敏作用.方法 采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6 μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6 μmol/L顺铂+ 3 μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6 μmol/L顺铂+6 μmol/L TBMS1.按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 TBMS1(3、6 μmol/L)与顺铂(6 μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,Cyclin D1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01).结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节.
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氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D1基因表达的影响
动脉平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块中的主要细胞,它的增殖在AS形成过程中极其重要,利用体外培养的人主动脉SMC,观察了天然高密度脂蛋白(native high density lipoprotein, N-HDL)及氧化修饰HDL(oxidized HDL,OX-HDL)对培养人主动脉SMC cyclin D1(细胞周期蛋白D1)基因转录表达的影响.结果表明:(1)N-HDL对SMC cyclin D1基因表达无影响(P>0.05);(2)OX-HDL使SMC cyclin D1基因表达显著增强(P<0.01),其表达量随时间(2、12、24h)延长而增加.上述结果表明,OX-HDL的致AS作用可能与其刺激SMC cyclin D1基因表达增加有关.
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乳腺肿瘤细胞周期蛋白E被钙离子依赖性蛋白酶剪切成低分子量片断
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CDK4在病毒性肝炎肝组织中表达的意义
目的探讨CDK在病毒性肝炎肝组织中表达的意义.方法对62例病毒性肝炎、肝炎肝硬变及原发性肝癌肝组织进行CDK4免疫组化检测.结果CDK4阳性物质在病毒性急慢性肝炎间质(包括间质细胞),肝细胞核、肝细胞浆、血窦等部位均有表达;在肝炎肝硬变和原发性肝癌,除间质有分布外,主要表达在肝细胞或癌细胞的胞浆中,细胞核和血窦无表达.结论病毒性急慢性肝炎肝细胞核中CDK4表达增强可能有利于肝组织损伤的修复.
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病理性瘢痕组织中CyclinD1、CyclinE和P21WAF1蛋白的表达及意义
目的:探讨cyclinD1、cyclinE和p21WAF1蛋白在病理性瘢痕中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法检测30例人病理性瘢痕组织、20例普通瘢痕组织和18例正常皮肤组织中cyclinD1,cyclinE和p21WAF1蛋白的表达情况.结果:cyclinD1、cyclinE和p21WAF1蛋白在病理性瘢痕中的表达与在普通瘢痕组织和正常皮肤组织中的表达有显著性差异(P<0.05),且cycl inD1与cyclinE,p21WAF1蛋白的表达成正相关(P<0.05),cyclinE与p21WAF1蛋白的表达无关(P>0.05).结论:cyclinD1、cyclinE和p21WAF1蛋白的过表达及相互作用可能参与病理性瘢痕的形成过程.