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阿托伐他汀抑制内皮细胞Rho/Rho激酶信号通路改善细胞骨架
目的 探讨阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)表达的影响.方法 体外培养HUVEC,分4组:对照组;AngⅡ组;阻断剂组(Rho激酶阻断剂Y-27632);阿托代他汀组.硝酸还原酶法检测NO含量;免疫细胞化学法观察p-MLC蛋白定位表达,Western blot法测定Rho激酶和p-MLC蛋白定量表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组NO含量显著减少(P<0.01);阻断剂组和阿托伐他汀组NO含量较AngⅡ组显著升高(P<0.01).AngⅡ组细胞质内出现大量棕色颗粒积聚、浓染;阻断剂组和阿托伐他汀组细胞质中仅有少量棕色淡染颗.与AngⅡ组比较,阻断剂组和阿托伐他汀组Rho激酶及p-MLC蛋白表达显著降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.01);2组间蛋白表达仍有明显差异(P<0.01).结论 阿托伐他汀对AngⅡ诱导的HUVEC保护作用,是通过抑制Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶及其下游的p-MLC蛋白表达,减弱AngⅡ对内皮细胞骨架的损伤.
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血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对细胞骨架的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老及对细胞骨架的影响.方法 体外培养HUVEC,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ干预,分为对照组、10-6 mol/L AngⅡ诱导组(AngⅡ组).主要观察衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力.β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞增殖能力;考马斯亮蓝染色显示内皮细胞骨架,利用Western blot印迹法分析波形蛋白表达的变化.结果 与10-6 mol/L AngⅡ细胞存活率(77.15±6.83)%比较,10 5 mol/L AngⅡ存活率(55.61±7.92)%明显降低(P<0.01);AngⅡ组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数目明显增加(P<0.001),流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1期[(80.11±7.92)%];AngⅡ组细胞骨架及波形蛋白较对照组明显降解.结论 AngⅡ可以诱导HUVEC衰老,其分子机制可能与细胞骨架蛋白裂解有关.
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RNA干扰人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达对内皮细胞骨架损伤的影响
目的 构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL处理)、阴性转染组(ox-LDL处理+阴性慢病毒转染)和慢病毒转染组(ox-LDL处理+佳干扰序列慢病毒转染).荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、Rho激酶(ROCK)、LOX-1蛋白的表达;免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的变化.结果 与对照组比较,ox LDL组和阴性转染组p MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达增高;细胞F-actin发生损伤并伴含量减少(P<0.05).与阴性转染组比较,慢病毒转染组抑制p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达,减轻F-actin损伤及伴含量增加(P<0.05).结论 干扰LOX-1表达对ox-LDL诱导引起的内皮细胞ROCK、p-MLC表达增加及细胞骨架损伤均有抑制作用.
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法舒地尔对大鼠心肌血管紧张素转换酶2和血管紧张素(1-7)的影响
目的 探讨法舒地尔对压力超负荷大鼠心肌血管紧张素转换酶2(ACE2)和血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]的影响.方法 50只SD大鼠制备压力超负荷模型,术后4周末,将存活36只大鼠随机分为假手术组8只、模型组10只、法舒地尔高剂量组(高剂量组)9只和法舒地尔低剂量组(低剂量组)组9只.术后8周末,计算各组左心室质量指数(LVMI);观察心肌组织HE和Masson胶原染色;碱水解法测定心肌羟脯氨酸(HYP)含量;免疫组织化学分析ACE和ACE2水平;RT-PCR和ELISA法分别检测ACE2 mRNA表达、AngⅡ和Ang(1-7)浓度.结果 与假手术组比较,模型组心肌间质大量胶原蛋白沉积,LVMI、HYP、ACE和AngⅡ明显升高,ACE2、ACE2 mRNA及Ang(1-7)明显降低(P<0.01);与模型组比较,高剂量组和低剂量组LVMI、HYP明显降低,间质胶原蛋白沉积明显减轻,ACE和AngⅡ明显降低(P<0.05),ACE2、ACE2 mRNA和Ang(1-7)明显升高(P<0.01).结论 法舒地尔抑制压力超负荷诱导的心肌纤维化的作用可能与局部ACE-AngⅡ及ACE2-Ang(1-7)的改善有关.
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内收蛋白家族基因多态性与原发性高血压相关性研究进展
原发性高血压(EH)是由遗传和环境因素共同作用而导致的多基因遗传性疾病,是冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的独立危险因素,严重影响人们的生命健康[1].研究结果显示,30%~60%个体间的血压变异是由遗传因素决定的[2].
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前纤维蛋白-1对内皮功能影响的研究进展
近年来,血管内皮功能已成为心血管领域研究中发展迅速的热点之一。内皮功能障碍在高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化等心血管疾病及糖尿病、代谢综合征等代谢性疾病中发挥着重要的作用。干预血管内皮功能对上述疾病的防治意义重大。研究结果表明,前纤维蛋白-1(Profilin-1)参与了血管内皮功能失调中的诸多通路,从而参与了各种心血管疾病和代谢性疾病的发生、发展[1-3]。因此,研究Profilin-1对细胞骨架的调节和内皮功能的调控,通过干预Profilin-1的表达改善内皮功能,可望为高血压、动脉粥样硬化、代谢综合征等疾病的防治提供新的思路。
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早老素:阿尔茨海默病分子遗传学的研究进展
老年性痴呆(AD)是神经系统的一种进行性退行性疾病,临床表现为日常生活能力(ADL)减退、精神行为异常(BPSD)及认知功能减退(Cognitive impairment),并伴有神经炎斑及神经元纤维缠结等特征性病理改变.AD的发生与许多基因突变相关,其中早老素(PS)基因突变可导致早发性家族性及散发性AD的发生,推测PS基因突变导致细胞骨架发生变化及细胞内钙信息紊乱,促进微管蛋白(tau蛋白)过度磷酸化及改变淀粉样前体蛋白(APP)的剪切,从而加速神经炎斑及神经元纤维缠结的形成.
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电场干预对血管平滑肌细胞形态和细胞骨架的影响
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细胞骨架在原代培养乳鼠窦房结细胞模拟缺血预适应中的作用研究
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细胞骨架及KATP通道在乳鼠窦房结细胞模拟缺血预适应中相互作用的研究
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细胞骨架及运动基因对瘢痕挛缩作用的实验研究
目的:探讨细胞骨架和运动相关基因与瘢痕挛缩的关系以及这些基因间的相互作用.方法:收集病人不同时期增生与扁平瘢痕作为研究标本,利用基因芯片筛选结果选择表达强、涉及细胞结构主要方面的5个基因,制成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片原位杂交.同时,将各标本进行组织块培养、成纤维细胞爬片、原位杂交.结果:各种基因在早期增生性瘢痕中表达均明显强于晚期增生及扁平瘢痕;其中,α-平滑肌肌动蛋白出现早、持续时间长、表达明显强于其他基因;更有意义的是,它在增生性瘢痕与扁平瘢痕之间表达差异显著大于其他.结论:瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的各方面相关基因存在密切关系,而平滑肌肌动蛋白起到关键与首要的作用.同时,各种基因参与其启动与形成,抑制该基因的表达,可能实现减轻瘢痕挛缩.
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角质素结构、分布及其在创面愈合中的作用
1 角质素的结构真核细胞内含复杂的细胞骨架,由三种结构蛋白组成:含肌动蛋白的微丝(microfilament,直径6nm)、含微管蛋白的微管(microtubule,直径25nm)和粗细介于上述两者之间的中间丝(intermediate filament,IF,直径10nm).根据其基因结构和蛋白排列顺序的特点,可将IF分为六个亚型:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ型.其中Ⅰ型和Ⅱ型即为角质素(keratin),是所有IF蛋白中为复杂的,可作为上皮增生、分化的特征性蛋白.
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良性前列腺增生中Caspase的研究进展
良性前列腺增生( benign prostate hyperplasia , BPH)是导致老年男性下尿路症状( lower urinary tract symptoms , LUTS )的主要原因之一。发病率随年龄增加而呈上升趋势,其发病机制迄今尚未完全阐明。但研究表明,细胞增殖和凋亡与BPH密切相关。 Caspase家族是半胱氨酸依赖性细胞死亡蛋白酶,可分解细胞骨架中的结构蛋白、调节细胞周期和DNA修复所需的功能蛋白,与真核细胞凋亡密切相关。本文将就caspase目前在良性前列腺增生中的相关研究做一述评。
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17β-雌二醇对破骨细胞骨架和骨吸收功能影响的实验研究
目的研究17β-雌二醇对体外培养破骨细胞细胞骨架的影响,以及这种影响与骨吸收功能之间的关系.方法在破骨细胞培养液中加入不同浓度的17β-雌二醇,用F-actin特异性抗体进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察破骨细胞细胞骨架的变化情况,同时用扫描电镜观察破骨细胞在骨片形成骨吸收陷窝数目及面积的变化.结果随着17β-雌二醇浓度的升高,实验组破骨细胞F-actin相对荧光强度从(89.6±7.5)%下降至(34.7±5.4)%(与对照组荧光强度相比),细胞内微丝收缩变短,排列紊乱,细胞波状缘消失,破骨细胞伸展面积从(1289±53)μm2/细胞核下降至(406±42)μm2/细胞核,同时,骨吸收陷窝的数目和面积从(131.5±11.7)个/片和(2157±51)μm2减少到(16.8±4.0)个/片和(965±75)μm2.生理浓度(10-7mol/1)及其以上17β-雌二醇处理组与对照组比较,差异有显著性(P<0.01).结论17β-雌二醇影响破骨细胞内细胞骨架的结构,下调F-actin的表达,降低破骨细胞的活动能力,从而抑制破骨细胞的骨吸收功能.
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破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察
目的:采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法①用脂质体转染方法(阳离子脂质体Lip2000)转染EB1?GFP基因至Raw264?7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264?7细胞,荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1?GFP的Raw264?7细胞系建立;②活细胞工作站下观察转染EB1?GFP的Raw264?7细胞中EB1蛋白的运动;③用含100ng/mLRANKL和30ng/mL M?CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1?GFP的Raw264?7细胞与正常Raw264?7细胞为破骨细胞,进行TRAP染色鉴定,比较两组细胞形态有无差别;④Raw264?7细胞系诱导出破骨细胞后,用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布;⑤活细胞工作站下观察稳转EB1?GFP的Raw264?7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果①脂质体转染方法建立了稳定转染EB1?GFP基因的Raw264?7细胞系;②观察到破骨前体细胞Raw264?7的微管正端蛋白( EB1)的运动轨迹;③转染EB1?GFP基因的Raw264?7细胞与正常Raw264?7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别;④活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态,结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264?7活动性低。结论①EB1?GFP基因对破骨前体细胞系Raw264?7诱导破骨细胞无明显影响;②微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。
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原发性肝细胞癌β-catenin基因突变的研究
β-连环蛋白(β-catenin)不但在钙粘蛋白(cadherin)介导的细胞粘附,而且在细胞发育、分化、细胞骨架维持上起重要作用.β-catenin基因突变所致β-catenin蛋白异常与结肠癌、黑色素瘤等发生关系密切,被认为是候选的癌基因之一[1].有关β-catenin基因在肝癌中突变情况国外报道极少,国内尚未见报道.本文研究了上海医科大学肝癌研究所手术切除的34例肝癌标本中β-catenin基因突变,现报告如下.
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细胞死亡蛋白酶Caspase家族的信号传导:在前列腺细胞凋亡中的作用
[Coffey RNT,et al.J Urol,2001,165∶5] Caspase家族是半胱氨酸依赖性细胞死亡蛋白酶,可分解细胞骨架中的结构蛋白、调节细胞周期和DNA修复所需的功能蛋白。作者总结了使Caspase酶家族发挥作用的信号传导通路,及近来在前列腺癌治疗中针对此酶家族的可能治疗方法。能激活其发挥作用的凋亡刺激因子包括肿瘤坏死因子α、转化生长因子β、Fas基因、放疗、化疗及一些化学物质等。针对此酶家族的可能治疗方法包括:(1)作用在基因表达及转录后的激活水平等,前者目标为基因治疗。(2)通过化学方法使转染后的Caspase酶前体形成二聚物,可激活癌细胞中的Caspase酶家族。(3)通过改变Caspase酶家族的磷酸化状态也可激活Caspase酶家族。凋亡与前列腺癌的发生发展密切相关,凋亡调节紊乱可诱发前列腺癌的发生、转移及向激素不敏感状态进展,而有效的治疗常有赖于诱发前列腺癌细胞发生凋亡的能力。对凋亡信号传导通路异常的研究,极大的促进了对前列腺癌发生发展的认识与了解,而已研究阐明的Caspase酶家族的调节机制,有助于设计寻找治疗前列腺癌的常规有效方法。(周利群摘译 顾方六校)
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高迁移率族蛋白1对人脐静脉内皮细胞骨架蛋白及通透性的影响
高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1 protein,HMGBl)是一种重要的晚期炎症因子[1],参与急性胰腺炎的全身炎症反应[2],而急性胰腺炎患者血管内皮通透性增加是导致全身毛细血管渗漏、液体正平衡的直接原因.
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Paxillin和p130Cas蛋白在肝癌中的表达及意义
肝癌复发和转移是一个复杂的生物学过程,涉及多个基因和多种分子变化.研究表明,细胞的黏附动力学和形态改变在肿瘤的侵袭与转移中起重要作用.paxillin(桩蛋白)和p130Cas是两个黏着斑相关蛋白, 具有接头蛋白的活性,在细胞骨架与细胞外基质的黏附及细胞信号传导中起重要作用, 是很多不同癌蛋白的共同靶点[1-4].我们采用免疫组化和Western蛋白印迹的方法对原发性肝癌组织中paxillin和p130Cas蛋白表达水平进行分析,并探讨其与肝癌生物学行为的关系.
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微丝功能对成纤维细胞胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的影响
目的研究微丝功能对正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1mRNA表达水平的影响.方法采用细胞培养、Northern blot分析等方法,以α-32P-dCPT标记的胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1 cDNA为探针,检测正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1 mRNA表达水平的变化.结果用细胞松弛素B破坏微丝后,正常皮肤及增生性瘢痕成纤维性细胞的胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1 mRNA含量明显升高.结论微丝骨架可在基因转录水平参与对成纤维细胞合成细胞外基质的调控.