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绿脓假单胞菌主动外排表型及OprM基因检测
绿脓假单胞菌(PA)是医院内常见的条件致病菌之一,对多种抗菌药物表现耐药[1].研究发现PA细胞膜上的主动外排泵是导致其多重耐药的主要原因之一,主动外排泵由菌体细胞膜的内膜蛋白与外膜蛋白组成,在六种外排泵中外膜蛋白OprM为常见[2].本试验对临床分离的PA多重耐药菌主动外排表型及OprM基因进行筛选,探讨PA多重耐药和主动外排的分子机制.
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大肠埃希菌O157:H7菌体抗原基因检测芯片的制备
为探讨大肠埃希菌O157:H7菌体抗原基因检测芯片的制备方法,为进一步研制O157:H7诊断芯片奠定基础.
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幽门螺杆菌对体外原代培养的人胆囊上皮细胞损伤作用
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)在体外对人胆囊上皮细胞(HGBEC)的损伤作用.方法:采用液体增菌及人胆囊上皮细胞原代培养研究Hpylori对HGBEC的损伤作用.结果:从Hpylori的生长曲线可知观察其他因素对HGBEC的影响在细胞生长旺盛期即培养的2-6 d为合适,Hpylori增菌上清液及菌体破碎液对培养的HGBEC形态学及上清酶学指标ALP(33.84±6.00 vs 27.01±4.67,P<0.05),LDH(168.37±20.84 vs 55.51±17.17,P<0.01),GGT(42.01±6.18 vs 25.34±4.33 P<0.01)有明显影响.结论:Hpylori增菌上清液及菌体破碎液对培养的HGBEC有明显损伤作用.
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结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展
结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白.分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中,在细菌对数生长的晚期细菌死亡后才释放到培养基中.将培养不超过5 d的滤液蛋白称为短期培养滤液蛋白,这是记忆性免疫CD+4T淋巴细胞的靶分子;将培养7 d以上的滤液蛋白称为长期培养滤液蛋白,随着培养时间的延长,滤液中蛋白越来越多,由于部分MTB开始裂解死亡,释放胞质蛋白,培养42 d时滤液中已有100多种蛋白质.结核病保护性免疫主要是细胞免疫,诱导细胞免疫反应的抗原主要存在于细胞壁、细胞质和培养滤液中,其中分泌蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原,将成为新疫苗研究的首选靶抗原.现将保护性抗原的编码基因、生物学特性、免疫学功能等介绍如下.
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真菌体外鉴定和药敏试验的临床意义
由于免疫缺陷人群的增多,侵袭性真菌感染发病率逐渐增加,但真菌感染诊断的现状却远远不能满足临床需要.一方面是真菌早期病原学诊断方法还远不如细菌学诊断那么完善,早期诊断非常困难;另一方面现有的真菌学知识还不被广大临床医生熟知,因此很多患者病情延误导致治疗失败或失去了治疗的机会.为了更快提高真菌病的诊断和治疗水平,临床微生物实验室应密切配合临床,一方面做好真菌的常规检验,并积极开创真菌检验新方法,另一方面也有义务向临床医生介绍如何正确使用真菌学的诊断方法,如何正确解释真菌的实验室报告.作为临床医生,要在熟悉侵袭性真菌感染的临床表现、影像学特点的基础上,争取病原学诊断,用真菌学知识指导临床的诊断和治疗.
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马内菲青霉菌败血症一例
马内菲青霉菌(Penicillium marneffei)是在1956年首次发现的病原真菌.该菌主要侵蚀单核细胞系统,菌体主要位于巨噬细胞中,细菌大小形态极似荚膜组织胞浆菌,随着艾滋病病人的增加,马内菲青霉菌病也明显增加.近期我们从我院呼吸科病人血培养中分离出马内菲青霉菌,现报道如下:
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嗜肺军团菌Ⅳ型分泌系统及其致病性研究进展
革兰阴性菌侵袭真核细胞,将毒力因子运送至菌体表面或宿主细胞内,这类转运过程需要细菌分泌系统的参与.目前已知革兰阴性菌有Ⅰ~Ⅳ型分泌系统.其中Ⅰ、Ⅱ型可将蛋白直接排泌于菌体外环境;但Ⅲ、Ⅳ型较为特殊,通过细菌的菌毛样结构与宿主细胞紧密结合形成一个孔道,将蛋白直接注入宿主细胞内.Ⅳ型分泌系统是革兰阴性菌常见的分泌机制,可将蛋白毒素和其他致病因子运输到宿主细胞内[1].例如,根癌土壤杆菌VirB/VirD分泌系统是目前研究为透彻的Ⅳ型分泌系统,其能够运输DNA蛋白复合体到宿主细胞;百日咳鲍特杆菌利用PtlⅣ型分泌系统可将百日咳毒素转运出细菌外膜;嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)可通过Dot/IcmⅣ型分泌系统运输毒力蛋白到宿主细胞内.
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原发性肝癌患者血清、肝组织纳米细菌的检测
纳米细菌(nanobacterium,NB)是新近发现的细菌,有矿化外壳覆盖于菌体周围,与肾、膀胱结石等疾病相关[1,2] .为探讨NB是否与肝癌的发生有关,本研究对肝癌患者的血清、肝组织中NB感染情况进行了测定,结果如下.
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大蒜素对结核分枝杆菌体外抑菌效果观察
近年来,大量的基础研究表明,大蒜制剂具有降血脂、扩张血管、抗动脉粥样硬化、抗血小板聚集、溶栓、抗菌、抗肿瘤[1]等作用,但对结核分枝杆菌作用的研究报道尚少.1998年6月~1999年6月,我们观察了大蒜素片对结核分枝杆菌的体外抑菌效果,报告如下.
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微生态制剂在消化系统疾病中的临床应用
微生态制剂(michroecological preparation)或称为微生态调节剂(microecological modulator)是指利用正常的、非致病性微生物或促进其生长的物质制成的制剂.微生态制剂以活菌为主体,也包括死菌菌体及其组分和代谢产物,供口服或经由其他黏膜途径投入黏膜表面,能改善微生态的平衡,或刺激特异性和非特异性免疫机制.微生态制剂包括3类[1,2,3,9]:①益生菌(probiotics):能改善宿主肠道微生态平衡且含生理性活菌的微生物制剂,以及死菌菌体及其组分和代谢产物;②益生元(prebiotics):能选择性刺激或促进一种或几种生理性细菌在宿主结肠黏膜定植、生长或活化的物质;③合生元(synbiotics):是益生剂与益生元的组合制剂,可发挥两者的协同作用,大大提高调节微生态的功效[5,9].
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菌体中L-5-甲基四氢叶酸的HPLC法检测
目的:建立高效液相色谱法测定菌体中L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的方法.方法:加热法破碎细胞,强碱性阴离子交换树脂纯化,高效液相色谱柱为C18反向柱,流动相为K2HPO4(0.02 mol·L-1,pH7.2)-甲醇(84∶ 16)溶液,流速为1.0 mL·min-1,柱温为40℃,检测波长为290 nm.结果:L-5-MTHF在0.5~50 μg· mL-1范围内线性良好,r=0.9995,RSD为1.11%.结论:色谱法灵敏、准确、重现性好,可用于菌体中L-5-甲基四氢叶酸的定性与定量.
关键词: L-5-甲基四氢叶酸 高效液相色谱 菌体 -
β-内酰胺类抗生素复方制剂分析与应用
β-内酰胺类抗生素是抗感染效果很好的一类抗菌药物.但目前细菌对这类药物的耐药性已成为一个严重的问题.细菌耐药机制之一是细菌通过产酶来破坏β内酰胺环,使抗生素失去活性.细菌对β-内酰胺类药物耐药机制主要有:(1)产生灭活酶,使抗菌药物在作用于菌体前即被破坏.(2)抗生素的渗透障碍,由于细菌细胞壁的障碍或细菌胞浆膜通透性的改变,使药物不能进入菌体内.(3)作用靶位的改变或新靶位的产生,细菌青霉素结合蛋白的构象变化,使其与抗菌药的结合力降低.(4)作用靶位的过度表达.(5)主动外排系统,细菌产生主动外排机制,增加抗生素从细菌体内向体外的主动排出 [1,2].其中第一种机制是耐药菌株扩散的主要原因.解决耐药问题的方法之一是开发β-内酰胺酶抑制剂,通过酶抑制剂灭活β-内酰胺酶,保护β-内酰胺环,从而使这些抗生素发挥它们原有的抗菌作用.体外试验结果证明,BRL4271效果明显,他唑巴坦、克拉维酸钾第二,舒巴坦作用弱.这些酶抑制剂必须与抗生素合用才能更好发挥作用,因此国内外许多药厂生产出一批复方制剂用于临床 [3,4],现将这些抗菌复方制剂处方进行分析,供临床和药品研究开发部门参考.
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肺炎的处理及其抗生素耐药的对策
1 90年代细菌耐药的回顾 抗生素的发展是20世纪医学上一大进步。不幸的是耐药菌的产生,使几十年来感染性疾病死亡率下降的良好局面不能持续,而近年又有上升趋势,Bernstein等(1999)认为任何抗生素若使用不当均可缩短其使用年限。当前三代头孢过度使用,诱发了肺炎杆菌和大肠杆菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的产生,泰能过多应用导致霉菌及不动杆菌致病的增加。人们一直抱乐观态度的肺炎链球菌肺炎治疗,1997年20届国际化疗会议上报告耐青霉素肺炎链球菌(PRSP),美国为40%,香港45%,南韩77%,北京协和医院14%,PRSP不仅对β内酰胺类不同程度耐药,对大环内酯类、四环素亦有不同程度耐药,只有泰能、万古霉素、利福平及新氟喹诺酮类等尚好。β内酰胺类抗生素不仅在人类抗感染应用且在农业畜牧业均应用广泛,亦为导致耐药菌产生的因素之一。 细菌对不同抗生素耐药有不同的机制,如革兰阳性球菌以改变青霉素结合蛋白或细菌细胞壁靶位改变而使其抗生素不能奏效。β内酰胺酶的产生是当前革兰阴性杆菌主要的耐药机制,它不但能分泌菌体,破坏β内酰胺类抗生素,而且还可以通过质粒介导分四种方式在微生物间互相转移:(1)转导(transduction):通过噬菌体将耐药基因转给敏感的细菌;(2)转化(transformation):耐药菌溶解后释出DNA进入敏感的菌体内;(3)接合(conjugation):耐药菌敏感菌接触后交换耐药因子,如大肠杆菌可与痢疾杆菌,肺炎杆菌接合而造成耐药的传播;(4)易位(translocation):耐药基因从一质粒转移到另一个质粒,从质粒转移至染色体,后可引起流行。氨基糖苷类钝化酶也主要是革兰阴性杆菌耐药机制。目前已有20种,分磷酸、乙酰及核苷转移酶等,改变DNA旋转酶靶位及细菌细胞膜的通透性常为氟喹诺酮类的耐药机制,各种抗菌药、各种细菌耐药机制及其现代和将来的主要矛盾见表1如下。
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甲型副伤寒(伤寒)患者肥达氏反应结果的评价
肥达氏反应是用伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验,一直来用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学的调查,但对于肥达氏反应在辅助诊断中的实际应用价值问题备有争议.2004年我市某街道发生甲型副伤寒沙门氏菌引起的疾病流行,其间我们对住院的41例疑似伤寒副伤寒患者先后二次抽血作细菌学培养和肥达氏反应,现将结果报告如下:
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卡介菌多糖核酸的药理作用与临床应用进展
卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)系采用酚醇梯度密度法将卡介苗中的菌体蛋白质去除后提取的菌体脂多糖,在保留了卡介苗免疫作用的同时,降低了其不良反应.我国自20世纪70年代起开始对卡介菌多糖核酸提取物进行免疫活性的研究,并将其应用于临床.随着对BCG-PSN药理作用机制的深入研究,该药在临床应用上也取得了一些新的进展,现将有关文献综述如下:
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幽门螺杆菌的生物学特性及其感染的胃粘膜病理学特点
幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)是在胃内生长的一种常见细菌,目前认为与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃粘膜相关淋巴瘤等疾病均有关系.1 Hp的生物学特性幽门螺杆菌呈"S”形或弧形,革兰染色阴性.新鲜培养物湿涂片在相差显微镜下可见到典型形态和活泼的动力.电镜下菌体呈螺旋形弯曲,长1.5~5.0μm,宽0.3~1.0μm.表面光滑,末端钝圆,一端具有2~6条带鞘鞭毛,长度稍长于菌体,每一鞭毛基部与菌体细胞膜上直径约50nm的圆球状结构相连,内侧有一电子密度降低区域.
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细菌性感染的临床意义
1溶血性链球菌感染
溶血性链球菌分为从A到T除外I、J共18组,引起人类感染的主要为A组;而C、G组很少引起上呼吸道感染,B组可引起新生儿脑脊髓膜炎等严重感染。菌体和菌体外抗原物质有20余种,用于临床检验的有:抗链球菌溶血素O(ASO),抗链球菌激酶(ASK),抗透明质酸酶抗体(AHD),抗脱氧核糖核酸酶B抗体(ADN-B),抗链球菌多糖体抗体(ASP)。其中以ASO为常用。 -
医用消毒灭菌器的改装
1 工作原理医用消毒灭菌器是医院日常消毒灭菌必不可少的设备之一,该设备主要利用高温蒸汽对手术器械等进行消毒灭菌.首先,水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,因此增加了灭菌器内的压力,使沸点增高,终导致菌体蛋白质凝固变性,从而达到灭菌的目的.
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9 种中药提取物对乙型溶血性链球菌的抑菌作用比较
乙型溶血性链球菌是人体易感染的菌体,能引起变态反应性肾炎、风湿病、心肌炎等疾病.本实验着重比较 9 种中药提取物抑菌程度,为明确抑菌效果提供理论基础.
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中医药抗内毒素损伤的研究
生素治疗革兰阴性(G-)菌感染时,细菌被杀灭后菌体溃解,即可生成内毒素.如轻度感染,体内的网状内皮系统(RES)可以清除生成的内毒素,不致成机体的危害;若重度感染,抗生素治疗使菌体溃解生成大量的内毒素,它超出了RES可以清除的阈值,从而对机体致成严重的危害,威胁患者的生命,使机体的生命器官细胞和亚细胞器遭受中毒性损害,导致多脏器衰竭(多脏衰)的发生.重症感染性多脏衰,给予清除病灶和抗生素治疗后依然死亡,死后尸检没有感染的证据,近年的研究揭示了它的死因与内毒素血症有关.