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食品微生物病原菌研究
一、肠炎弧菌生理特性肠炎弧菌又称为副溶血性弧菌,其生物学分类属于细菌界、变形菌门、变形菌纲、弧菌目、弧菌科、弧菌属.其为一种革兰氏阴性兼性厌氣性菌,菌体呈笔直的短杆状,而非典型弧菌的弯曲状,长度约1.4-2.6m,宽度约0.5-0.8m,菌体除极鞭毛外还有许多细的侧鞭毛,不会形成芽孢,具有美膜,是常见的引起食物中毒之致病菌.
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2种弧菌的实时荧光PCR快速检测
目的 为快速、特异、灵敏的检测致病性弧菌,建立致病性弧菌的实时荧光PCR方法.方法 针对霍乱弧菌的种特异性基因omp W、毒力基因tcp A、ctx A和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh计引物和Taqman荧光探针,建立实时荧光PCR检测方法.结果 该方法能够特异性地检出副溶血性弧茼或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdh、tcp A或ctx A毒力基因,检测的灵敏度可达到10 CFU/ml或0.171 6 μg/ml(pg/μl)DNA模板浓度.结论 该方法特异性强、灵敏度高,适用于食品中致病性弧菌的快速检验.
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溶藻弧菌引起暴发型食物中毒的病原学研究
为研究一起食物中毒的病原,对分离的可疑菌进行了培养、鉴定、动物毒力实验及ST毒素测定,结果显示分离菌为溶藻弧菌,该菌对小白鼠的LD50为3×107CFU/g鼠体重,存在ST毒素,证明这起食物中毒的病原为溶藻弧菌.
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副溶血弧菌生物膜相关基因突变株的构建
目的 构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证.方法 采用PCR方法扩增得到靶基因的上下游同源臂片段,然后以上下游同源臂片段为模板,PCR扩增得到同源臂融合片段.将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDS132中.通过结合转移的方式将携带有同源臂融合片段的重组质粒转入副溶血弧菌RIMD 2210633中,利用同源重组得到突变株.用PCR方法筛选和鉴定突变株,同时对突变株进行表型分析,从而在分子水平和表型试验上验证突变株是否构建成功.结果 构建得到了分别携带副溶血弧菌生物膜相关基因vbfR、crp、hns、swrZ、swrT、cpsR融合同源臂片段的重组质粒,通过PCR扩增,分别得到了大小为1190、1128、1136、953、1242、1112 bp的片段;用重组质粒构建了相应的突变株(ΔvbfR、Δcrp、△hns、ΔswrZ、ΔswrT和ΔcpsR),进行PCR鉴定时,突变株得到了大小分别为1190、1128、1136、953、1242、1112 bp的扩增产物,比阳性对照分别小610、739、421、542、427、1367 bp;用靶基因内部的引物进行扩增时,无扩增产物;选其中一株突变株Δhns进行生物膜形成能力表型分析,结果表明突变株Δhns生物膜形成量与野生株相比明显增加.结论 构建得到了6株副溶血弧菌生物膜相关基因突变株,并从分子和表型试验上验证了突变株构建正确.
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我国霍乱弧菌毒力协同调节菌毛基因序列分析
目的对我国霍乱弧菌(VC)毒力协同调节菌毛(tcpA)基因进行序列分析.方法 38株VC的tcpA基因经聚合酶链反应扩增、测序和序列分析.结果 13株O139群VC产毒株和15株EVC产毒株(均为流行株)的tcpA类型与EVC标准株N16961为同一类型,共有4个位点碱基发生变异,分为5个亚型.EVC流行株中2 株非产毒株的tcpA类型,1株同N16961,1株为新类型.6株EVC非流行株均为非产毒株,分为2种新类型.2株非O1非O139群VC均为非产毒株,为2种新类型.4种新类型与国外4种类型基因和氨基酸序列比较,同源性为63.8%~84.6%和60.6%~91.7%,趋异性为17.8%~44.6%和8.8%~45.8%,tcpA基因所在的VPI毒力岛的结构是完整的,但部分基因存在一定变异.结论 O139群VC产毒株可能起源于EVC产毒株,然后再进一步分化;在非产毒VC中发现4种新类型tcpA基因.
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创伤弧菌实验室诊断的研究进展
创伤弧菌自然存在于近海和海湾的海水和海底沉积物中,属弧菌属,为低度嗜盐菌[1].流行病学和微生物学研究显示,海水温度超过20℃持续2周以上,海水可污染大量创伤弧菌[2].人通过进食生的牡蛎,经胃肠道黏膜或破损的皮肤接触海水而感染创伤弧菌.
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73株弧菌的分离与鉴定
从657例泻便标本分离出弧菌属细菌73株,分离率为11.1%,以致伤弧菌(24株32.8%)、副溶血弧菌(19株26%)和河弧菌(9株9.6%)为主。0-1群霍乱弧菌9株(5.5%)经血清学鉴定均为小川型,患者呈散在发病。
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抗O/129弧菌抑制剂的非O1群霍乱弧菌特征
非O1群霍乱弧菌的鉴定常用生化、血清学等试验来确定,其中二氨基二异丙基喋啶磷酸盐(O/129弧菌抑制剂)试验是鉴别非O1群霍乱弧菌等孤菌科细菌与其他细菌的特异性试验,常作为细菌命名的重要依据,在重要的微生物学检验专著上都认为弧菌属细菌对O/129弧菌抑制剂10,150μg敏感[1,2].本文对从业人员和腹泻病人中检出的非O1群霍乱弧菌抗O/129弧菌抑制剂菌株进行耐药性、毒力等检测,探讨其与致病力的相关性.现将鉴定结果报告如下.
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副溶血性弧菌的致病性及其快速检测
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是革兰阴性嗜盐性细菌,隶属弧菌科中的弧菌属,它是一种人畜共患病菌[1].
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拟态弧菌肠炎11例
拟态弧菌隶属于弧菌属,在沿海地区的海水、淡水及海产品中分布比较广泛,其毒素的致病力较强,但临床病例报道较少,我们在2000年8月至2000年10月期间肠道门诊535例急性腹泻患者的粪便中检出拟态弧菌感染11例,现分析报道如下.
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API 20E和20NE对弧菌属细菌的鉴定分析
我们在实际工作中发现,API 20E和20NE对弧菌属某些细菌的鉴定易产生错误结果.为此,我们以非O1群霍乱弧菌、副溶血弧菌、拟态弧菌和河弧菌分别接种API 20E和20NE试条,分析其鉴定结果,寻找鉴定失败的原因及处理方法,并根据各菌生化反应,建立一套API鉴定系统与常规方法相结合的鉴定方法.
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876例急性腹泻细菌病原学分析
近几年来,随着人民生活水平的提高,在外就餐人员逐渐增多,以及食用水产品的人数增加 , 水质和环境的污染,由弧菌属、气单胞菌和邻单胞菌属等病原菌引起的急性腹泻有了明显的增加,现报告如下.材料与方法1 标本来源我院肠道门诊急性腹泻病人的粪便876份,时间2000年5~10月 ,病人是铁路职工、旅客及铁路外居民.
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天津市副溶血性弧菌性腹泻流行特征和耐药谱分析
目的 了解天津市腹泻患者副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus,VP)感染状况、症状特征和病原学特征.方法 在天津市7家哨点医院收集腹泻患者粪便样本和症状信息,并于24h内检验分离其中的副溶血性弧菌,对阳性分离株进行血清学分型、毒力基因和耐药性进行检验.结果 VP总检出率为10.56%,以40~49年龄组阳性率高(17.14%),集中在6~9月份检出,8月份检出率高(23.17%),不同年龄组、不同月份间检出率差异均有统计学意义(均有P<0.05);79株菌株中O3:K6型74株,占93.67%,79株菌株全部携带不耐热溶血毒素和耐热溶血毒素,未发现有菌株携带耐热性溶血毒素相关的溶血毒素;79株副溶血性弧菌临床分离株中有8株耐药,耐药率为10.13%.其中2株为多重耐药.结论 天津地区腹泻患者副溶血性弧菌带菌率较高,且出现超级耐药菌株,应开展污染途径的研究,以便提出防控措施.
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387例腹泻病人致病菌的培养结果分析
每年夏季是急性腹泻的高发季节,以往防治重点针对霍乱弧菌,对弧菌科中的其他致病菌重视不够.本文对2006年1月1日至2007年12月30日我院肠道门诊收治的387例急性腹泻病人进行粪便培养,共检出97株病原菌,其中弧菌属65例,气单胞菌属25例,沙门氏菌属7例,现具体报告如下.
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急性腹泻245株弧菌的分离与鉴定
每年夏季是肠道传染病流行和发病的高峰,引起夏季肠道感染的主要病原菌是弧菌属的细菌.其共同点是它们在体内进行大量繁殖的同时,可产生肠毒素和类毒素,造成患者呕吐、腹泻、脱水和酸中毒,甚至休克死亡.
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进出口水产品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌检测结果分析
加强进出口水产品的弧菌属检验尤其是对霍乱弧菌和副溶血性弧菌的检验,既是为杜绝国外不合格的水产品流入我国市场,同时也是包括欧共体在内的许多国家对我出口的水产品提出的要求.
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夏秋季腹泻便中弧菌属与气单胞菌属的分离与鉴定报告
我国传染病防治法所规定的传染病中,感染性腹泻的病例约占总数的一半以上,同时感染性腹泻病仍是世界性的公共卫生问题.以往我们只注重常规性致病菌的分离,而忽略了其它病原菌的分离,国内外大量资料表明许多感染性腹泻是由弧菌属及气单胞菌属所致[1~4].这些病原菌广泛分布在污水、池水中,常从鱼类、青蛙类动物中检出,不仅对冷血动物致病,亦能引起人类腹泻[5].我们于 2001 年 7 月~10 月对我区医院肠道门诊 210 例急性腹泻患者粪便除进行常规致病菌分离鉴定外,亦进行了弧菌属、气单胞菌的分离鉴定,现报道如下:
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拟态弧菌引起腹泻的病原学鉴定报告
前,在弧菌属中已明确11种弧菌对人有致病作用.2002年7~9月,广州市白云区疾病预防控制中心从3名急性腹泻病人的粪便中均分离到拟态弧菌,并对其形态特征、培养特性、生化反应、血清分型及药敏试验等进行了系统分析鉴定,现将结果报告如下.
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某地区O139霍乱弧菌的分离鉴定及分析
弧菌属细菌是一大群菌体短小,弯曲或弧状的革兰氏阴性菌,广泛分布于自然界,以水中多,本菌属共有100多种,大多数菌为非病原菌[1],其中的O139霍乱弧菌含有O1群霍乱弧菌相同的毒素基因,亦可引起霍乱流行,已归入霍乱管理[2].2002年8月从一例临床腹泻病人粪便中检出一株O139霍乱弧菌,现将结果报告如下.
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麦氏弧菌的鉴定及毒力和耐药状况研究
麦氏弧菌属正常海洋微生物,常污染水源或海产品,人类摄食后引起食物中毒.对海水浴者,主要引起耳和伤口感染、败血症,是目前所公认的11种致病性弧菌之一.1999年12月,我站首次从质控菌株中鉴定出一株麦氏弧菌,并对其作了生化、毒力、耐药状况研究,现将结果报告如下.