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蜕皮甾酮对胰岛素抵抗细胞模型胰岛素敏感性和糖代谢的影响
目的应用高胰岛素体外诱导培养建立的胰岛素抵抗HepG2细胞模型探讨蜕皮甾酮对其胰岛素敏感性和糖代谢的影响.方法采用3H-D-葡萄糖的参入试验评价细胞的胰岛素敏感性,在诱导胰岛素抵抗HepG2细胞模型的过程中或模型建立后,培养液中加入蜕皮甾酮及吡格列酮共同孵育,观察蜕皮甾酮及吡格列酮对HepG2细胞葡萄糖参入率,同时观察蜕皮甾酮对胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖消耗量的影响.结果含有蜕皮甾酮(浓度为1×10-6～10-4mol·L-1)的胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖参入率与葡萄糖消耗量明显高于不含蜕皮甾酮的胰岛素抵抗HepG2细胞(对照细胞,P<0.01).蜕皮甾酮与吡格列酮对胰岛素抵抗模型细胞的葡萄糖参入率与葡萄糖消耗量差异无显著性(P>0.05).结论蜕皮甾酮在胰岛素抵抗细胞模型中能提高胰岛素介导的葡萄糖摄取和利用能力,即增加胰岛素的敏感性;并能明显改善糖代谢.
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CYP3A4高表达细胞模型及其应用于药物代谢研究进展
细胞色素P450酶3A4(cytochrome P450 3A4,CYP3A4)属于细胞色素P450酶家族,参与多种化合物代谢及相互作用,是药物(尤其是口服药物)筛选和代谢研究的重要对象.该文按年代顺序对国外文献中CYP3A4高表达细胞模型的建立及在药物代谢中的应用进行综述,旨在将这一有价值的模型引入到新药研究中.
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Caco-2细胞模型在药物研究中的应用
Caco-2细胞模型广泛用于药物的吸收、代谢以及毒性研究,Caco-2细胞模型作为药物吸收研究的一种快速筛选工具,在抗癌药物、无机药物、中药的研究方面得到了广泛的应用,成为药物研究的重要手段.
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稳定表达TRPA1通道的HEK-293 T细胞模型的建立
目的 建立稳定表达TRPA1的HEK-293T细胞模型,并鉴定模型构建是否成功.方法 构建TRPA1真核表达质粒,采用脂质体转染法将其转入HEK-293T细胞中,经G418筛选稳定表达株,采用RT-PCR、免疫组化技术,检测HEK-293T细胞TRPA1基因的转录和蛋白的表达.结果 经酶切、测序证明,TRPA1基因的真核重组表达质粒已成功构建;PCR、免疫组化检测结果表明,将此重组质粒转入HEK-293T细胞可稳定表达TRPA1基因.结论 成功构建了能稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞株,为体外研究TRPA1生理病理功能和筛选相关TRPA1通道调节剂奠定了基础.
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实时细胞分析法建立小肠上皮细胞生长实验模型
目的 利用实时细胞分析仪,并以表皮生长因子(EGF)为促进细胞生长的工具药,观察EGF在不同培养条件下对细胞生长的影响,为建立IEC-6细胞生长(增殖)药理实验模型提供参考.方法 以1×104/孔的密度将细胞接种于E-Plate 16板,并以含10％血清DMEM培养24h,换成无血清DMEM培养(即血清饥饿)20 h后,观察不同培养条件对细胞生长的影响及EGF的药效.结果 ①10％血清时,EGF组(1、10、100 μg·L-1)给药24、48、72 h后,细胞生长指数与空白组比较均P ＞0.05,提示含10％血清培养不能反映EGF的药效;②0％血清时,EGF(1、10 μg·L-1)对无血清培养所致的细胞生长抑制有改善作用,但不能使其恢复正常水平(给药24、48、72 h后,EGF组与5％血清空白组比较均P＜0.01),提示无血清培养不能反映EGF的药效;③0％、0.5％、1％血清可对细胞生长产生不同影响,其中0.5％血清既不会对细胞生长产生明显抑制,也不会由于促进细胞生长时间较长而不利于反映EGF药效;④0.5％血清时,EGF各剂量组给药24、48、72 h后,均能促进细胞生长(细胞指数与空白组比较均P＜0.01),提示0.5％血清培养条件下可较好反映EGF药效;⑤重复验证了0.5％血清时EGF(10μg·L-1)促进细胞生长的药效.结论 在实时细胞分析仪建立IEC-6细胞生长(增殖)药理实验模型的参考方案:细胞以含10％血清DMEM培养24h,再以无血清DMEM培养(即血清饥饿)20 h,然后加受试药,并以含0.5％血清培养48 ～72 h,可观察其对细胞生长(增殖)影响的药效.
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以 GLP-1受体为靶点的药物筛选模型的建立及功能鉴定
目的：以 GLP-1受体为靶点，建立 GLP-1类似物活性检测的细胞模型，为 GLP-1类似物以及 GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源 GLP-1受体基因插入 pEGFP-N3，构建真核表达载体 pEG-FP-GLP-1 R，并转染至 HEK293A 细胞中，经 G418压力筛选后获得稳定表达 GLP-1 R-GFP 的293A 细胞株，然后通过GFP 荧光信号和 Western blot 检测 GLP-1 R-GFP 融合蛋白在该细胞中的表达与分布；后利用 GLP-1类似物利拉鲁肽刺激细胞，均相时间分辨荧光法检测细胞内 cAMP 含量变化。结果成功构建了 GLP-1 R-GFP-293A 稳转细胞株，GLP-1 R-GFP 蛋白主要分布在细胞膜表面，该细胞对 GLP-1类似物利拉鲁肽具有高灵敏度和产生 cAMP 的特异性反应。结论利用所构建的细胞模型，可对小分子和 GLP-1类似物进行体外活性分析，为筛选 GLP-1受体激动剂奠定了模型基础。
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油酸诱导单纯性肝脂肪变性细胞模型的建立及应用
目的 探讨人肝癌HepG2细胞单纯肝脂肪变性细胞模型的建立方法与模型的应用.方法 体外培养HepG2细胞,以不同浓度的油酸处理24 h诱导细胞脂肪变性,油红O和尼罗红染色定性观察细胞内脂滴蓄积情况,并测定细胞内甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及培养液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,确定佳模型浓度;同时,利用此模型观察黄酮类化合物对脂肪变性肝细胞内TG的影响.结果 油酸终浓度为0.4mmol·L-1时,肝细胞内有大量脂滴形成,且细胞内TG含量明显增加,而MDA含量、SOD活性及培养液中ALT、AST释放量较正常组无明显变化;槲皮素和表儿茶素可明显降低模型细胞内TG含量.结论 采用0.4 mmol·L-1油酸可成功诱导HepG2细胞发生脂肪变性,建立单纯性肝细胞脂肪变性模型,该模型适用于预防非酒精性脂肪肝病的天然降脂药物研究.
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一种新型大鼠结肠纵行肌细胞分离培养方法的建立
目的 对大鼠结肠纵行肌细胞分离培养的方法进行改进,建立一种取材方便,纯度高的新型大鼠结肠纵行肌细胞的原代分离培养方法,并观察乙酰胆碱和去甲肾上腺素对结肠纵行肌细胞的作用,为结肠纵行肌生理、病理的研究提供细胞模型.方法 取Wistar大鼠结肠,从外侧刮去外膜层,剥离外膜下结肠纵行肌,消化后过滤所剩组织进行贴块培养.观察乙酰胆碱和去甲肾上腺素对纵行肌细胞的作用,用NTS-Elements BR3.60分析软件进行分析.结果 经α-SM-actin免疫组织化学染色确定培养的细胞为平滑肌细胞,且纯度高;乙酰胆碱对大鼠结肠纵行肌细胞具有收缩作用,当浓度为5.5×10-1 μmol·L-1时,收缩作用强.去甲肾上腺素对纵行肌细胞具有舒张作用,当浓度为4.86×10-2 mmol·L-1时,舒张作用强.结论 从结肠外膜分离肠纵行肌层,消化后过滤,所剩组织进行贴块培养,此方法简便易行、纯度高,且对乙酰胆碱和去甲肾上腺素反应良好.
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建立NF-κB核转位的转基因细胞模型
目的 建立NF-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)转基因细胞模型.方法 RT-PCR方法扩增p65基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染不同细胞;Western blot验证蛋白表达;利用荧光可视化技术观察p65核转位的情况.结果 成功获得与绿色荧光蛋白(GFP)融合的载体;并建立p65转基因细胞模型;转基因组中p65蛋白表达量明显高于对照组,给予LPS刺激BV-2后能够促进p65向细胞核转位;而转染后的PC12细胞,p65的核定位现象则呈现不均一性.结论 成功建立p65转基因细胞模型,针对不同细胞建立的模型,可用于相关化合物的筛选.
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一种快速可靠筛选作用于细胞缝隙连接药物的方法建立
目的 建立一种可以快速有效地筛选能影响细胞缝隙连接(gap junction,GJ)功能药物的方法;为研制以GJ为靶点的新型药物提供技术手段.方法 构建能同时双向表达两种不同连接蛋白(connexins,Cxs)的质粒;用能表达Cx26/Cx32的质粒转染HeLa细胞,建立可以稳定表达Cx26/Cx32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型.用荧光传递示踪法测定荧光示踪剂在细胞之间的传递,以此反映GJ的功能.观察公认的GJ激活剂--维甲酸(retinoid acid,RA)和GJ抑制剂--油酸酰胺(oleamide)对GJ功能的影响,检验该方法是否能够准确地检测出GJ功能.结果 Western blot和荧光传递示踪法的结果表明,转染含有Cx26/Cx32 cDNA质粒的HeLa细胞,可以稳定表达Cx26/Cx32;并能够形成可以传递荧光示踪剂在相邻细胞间的GJ.RA和油酸酰胺能分别增强和抑制荧光示踪剂的传递.结论 在转染Cx26/Cx32质粒并稳定表达Cxs的HeLa细胞上,用荧光传递示踪法测定GJ功能,可以快速准确地检测出药物对GJ的作用.该方法的建立为筛选作用于GJ的药物提供了一种有用的技术手段.
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STAT5b靶控报告基因检测胰岛素受体激酶活性细胞模型的建立
目的 建立方便快捷的检测胰岛素受体激酶活性的方法,为筛选抗糖尿病的药物提供一种新的细胞模型.方法 用克隆有胰岛素受体基因、STAT5b基因和STATS响应元件靶控的荧光素酶报告基因的质粒共转染CHO细胞,RT-PCR检测外源基因的表达.转染的细胞经胰岛素处理,考察胰岛素对报告基因表达的剂量和时间效应,并采用AG1024处理和PTP1B基因共转染考察模型的特异性.结果 经瞬时共转染的CHO细胞中检测到胰岛素受体和STAT5b基因表达,转染细胞中荧光素酶表达受胰岛素诱导且呈浓度依赖性和时间依赖性,高诱导表达率为6.25倍.胰岛素受体酪氨酸激酶特异性抑制剂AG1024和酪氨酸磷酸化酶1B(PTP1B)可特异地阻断胰岛素的对荧光素酶表达的诱导效应.结论 该细胞模型通过报告基因表达检测胰岛素受体激酶活性,灵敏性高、特异性强,在胰岛素受体激动剂和增敏剂的筛选方面具有应用价值.
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吡格列酮对胰岛素抵抗HepG2细胞模型的药理学评价
目的应用高胰岛素诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗的细胞模型.并探讨吡格列酮对该模型胰岛素敏感性和糖代谢的影响.方法将HepG2细胞置于5×10-7 mol·L-1胰岛素培养液中16 h,采用3H-D-葡萄糖参入试验观察高胰岛素对HepG2细胞葡萄糖摄取率的影响.模型建立后,培养液中加入吡格列酮共同孵育,观察吡格列酮对胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖摄取率和葡萄糖消耗量的影响.结果高胰岛素诱导培养的HepG2细胞葡萄糖参入率明显低于未用高胰岛素诱导的HepG2细胞(对照细胞).将高胰岛素诱导培养的HepG2细胞置于不含胰岛素的培养液中60 h,其细胞葡萄糖摄取率仍明显低于对照细胞.含有吡格列酮(浓度为1×10-6～1×10-4 mol·L-1)的胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖参入率与葡萄糖消耗量明显高于不含吡格列酮的胰岛素抵抗HepG2细胞(P<0.01).结论将HepG2置于5×10-7 mol·L-1胰岛素环境中16 h,该细胞对胰岛素的生物学效应产生抵抗,其胰岛素抵抗状态可维持60 h.该方法较为简便、易行、重复性好、成功率高,可广泛用于胰岛素抵抗的研究.吡格列酮能增加胰岛素抵抗模型细胞的胰岛素敏感性,并能明显改善糖代谢.
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胰岛素抵抗细胞模型研究进展
胰岛素抵抗是2型糖尿病和代谢综合征共同的重要病理生理基础和显著特征.由于胰岛素信号传递复杂,为阐明胰岛素抵抗产生的具体机制,研究者通过建立胰岛素抵抗细胞模型进行胰岛素抵抗研究,其中脂肪细胞和肝细胞是应用较多的两种细胞模型.然而在相同的诱导因素下不同的细胞类型发生胰岛素抵抗的程度都会不同,其机制也不尽相同.该文就关于不同细胞类型建立胰岛素抵抗模型做个相关综述.
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类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染RAW264.7细胞模型的建立
目的 建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础.方法 摸索类鼻疽伯克霍尔德氏菌培养条件、构建模型的感染条件(e.g.感染复数,感染时间),通过吉姆萨染色、透射电镜、活细胞工作站动态观察等确证胞内感染和宿主细胞的形态变化,分析病原菌侵袭率、胞内复制率和宿主反应性来评价该模型中病原菌侵入RAW264.7特点和病理损伤类型.结果 确定了类鼻疽伯克霍尔德氏菌的一般培养条件,感染复数MOI=100感染宿主细胞,170 g离心5 min后37℃共孵1 h以利于细菌侵入胞内,含250 μg/ml卡那霉素的DMEM-10培养以杀死胞外病原菌.形态观察,类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染后早8 h可观察到异物多核巨细胞(MNGC),RAW264.7细胞伸出伪足,相互融合.感染初期(<3 h)TNF-α升高较快,9 h后则下降至低值,直至感染后期(15~24 h)再次升高.结论成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌胞内感染模型,拟为进一步研究其致病机制提供了条件.
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PrP 106-126肽段在朊蛋白病模型中的应用
朊蛋白病是一种人畜共患的具有传染性的中枢神经系统变性疾病,近年对朊蛋白病研究取得的进展与朊蛋白病模型的应用有着重要的关系,其中朊蛋白106-126肽段(PrP 106-126)在朊蛋白病细胞模型中的应用受到人们越来越多的关注,现对其综述如下.
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帕金森细胞模型的研究进展
帕金森病(PD)是中老年常见的神经系统变性疾病,其发病机制尚不清楚.利用PD细胞模型,深入探究PD的发病机制和治疗方法非常必要.但PD细胞模型较多且各有优缺点,本文将通过综述PD细胞模型的研究进展,为进一步的基础研究和药物开发开辟新思路和途径.
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胰岛素抵抗细胞模型的研究进展
胰岛素抵抗是产生2型糖尿病、心血管疾病、高脂血症、高尿酸血症及代谢综合症的共同病理基础.构建胰岛素抵抗细胞模型是进行IR相关疾病的病理机制探索及药物研发的重要途径.IR产生机制尚未阐明,现已证实糖脂代谢紊乱,高胰岛素持续刺激.炎症微环境等因素均可导致IR.收也将此作为IR细胞模型建立刺激因素.目前已建立肪细胞、骨骼肌细胞、肝细胞及内皮细胞等胰岛素抵抗模型.
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水飞蓟宾对巨噬细胞胆固醇逆转运的影响
目的：探讨水飞蓟宾对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响及相关机制。方法：采用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的R AW264.7巨噬细胞为泡沫细胞模型，给予水飞蓟宾进行干预。通过油红O染色及酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化； Western blot及real-time PCR检测水飞蓟宾对巨噬细胞ABCG1蛋白及mRNA表达的影响。采用SPSS 10.0统计软件分析数据，并采用双尾t检验进行统计学意义评估。结果：50μg/mL水飞蓟宾显著抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取(抑制率为(80±1.8)%)，减少细胞内总胆固醇及胆固醇酯量。(oxLDL处理组巨噬细胞内胆固醇酯量是对照组的1.5±0.07倍，12.5～50μg/mL水飞蓟宾组细胞内胆固醇酯量是对照组的1.1±0.08、1±0.05、0.93±0.07倍，水飞蓟宾组与oxLDL处理组比较，P<0.05，差异有统计学意义；oxLDL处理组巨噬细胞内总胆固醇量是对照组的1.8±0.05倍，12.5～50μg/mL水飞蓟宾组细胞内总胆固醇量是对照组的1±0.08、0.96±0.078、0.83±0.06倍，水飞蓟宾组与oxLDL处理组比较，P<0.05，差异有统计学意义。)终抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成；12.5~50μg/mL的水飞蓟宾剂量依耐性促进巨噬细胞ABCG1蛋白及mRNA表达(12.5、25、50μg/mL水飞蓟宾ABCG1蛋白量是对照组的1.3±0.06、2±0.06、2.3±0.05倍，与对照组比较，P<0.05，差异有统计学意义；12.5、25、50μg/mL水飞蓟宾组ABCG1 mRNA水平是对照组的1.2±0.08、1.5±0.05、1.9±0.04倍，与对照组比较， P<0.05，差异有统计学意义)；水飞蓟宾可增强ABCG1蛋白稳定性。结论：水飞蓟宾通过增加ABCG1蛋白的表达及蛋白稳定性，促进细胞内胆固醇的排出，终抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成。
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蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛细胞模型的建立
目的建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的细胞模型.方法①基底动脉平滑肌细胞的培养与鉴定.取兔基底动脉中层,应用组织贴块法培养平滑肌细胞,用光学相差显微镜、免疫细胞化学染色鉴定.②蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛细胞模型的建立.培养的平滑肌细胞加入OxyHb分别孵育24 h和72 h两组,应用电镜测定平滑肌细胞的长度和超微结构改变.结果①培养的动脉平滑肌细胞的鉴定:在相差倒置光学显微镜下观察,传代细胞呈单层及多层重叠成长,为典型的峰谷状.抗α-actin抗体免疫细胞化学染色显示,95%培养的细胞染色阳性.②成功建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的细胞模型:24 h组与正常组比较平滑肌细胞平均长度缩短了27.67%,72 h组与正常组比较平滑肌细胞平均长度缩短了65.26%.结论OxyHb对基底动脉平滑肌细胞有收缩作用.细胞模型的建立为在细胞水平探讨蛛网膜下腔出血引起脑血管痉挛的发病机制提供了条件.
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软脉煎对血管内皮细胞动脉硬化模型白介素-6水平的影响
目的:为了探讨具有补肾益气作用的中药复方软脉煎干预动脉硬化(AS)的机制,研究其对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)造成血管内皮细胞(VEC)AS模型白介素-6(IL-6)水平的影响.方法:采用人脐静脉内皮细胞原代培养,加ax-LDL共同孵育造成血管内皮细胞损伤模型,用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型,用ELISA法测IL-6,并设舒降之(辛伐他汀)组进行对照.结果:模型组IL-6显著升高(P＜0.01);软脉煎组和舒降之组均能十分显著地降低IL-6水平(P＜0.01),两组差异无显著性(P＞0.05).结论:软脉煎能显著降低血管内皮细胞IL-6水平,从而达到抗AS的作用.
