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结核分支杆菌Ag85 B分泌蛋白基因疫苗的构建和免疫原性的研究
目的构建编码结核分支杆菌(MTB)Ag85B分泌蛋白的重组真核表达质粒,并研究其免疫原性.方法采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Ra基因组DNA中扩增出Ag85B分泌蛋白基因,用HindⅢ和EcoRⅠ消化后,与同样酶消化的pcDNA3连接,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆用酶切鉴定;重组表达质粒肌注免疫小鼠4周后,分别用dot blotting和ELISA方法检测抗体的产生和滴度.结果酶切鉴定重组表达质粒pTB30s构建成功;dot blotting检测免疫小鼠血清抗Ag85B特异性抗体阳性,ELJSA检测抗体几何平均滴度为1:120.结论应进一步研究pTB30s刺激机体的细胞免疫应答,以用于结核病(TB)的防治研究.
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核酸疫苗的研究进展(综述)
核酸疫苗又称DNA疫苗或基因疫苗,是近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种全新疫苗,其组分为编码蛋白质抗原的双链环状重组表达质粒,它的出现被誉为第三次疫苗革命,通过肌肉注射等途径接种动物后,外源基因能在宿主细胞内表达相应抗原,通过抗原提呈细胞的加工、提呈、诱导免疫应答.
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人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3基因疫苗肿瘤免疫研究
目的 观察人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(SART3)基因的DNA疫苗能否诱导小鼠产生针对表达该基因肿瘤细胞的免疫反应.方法 构建表达人SART3基因的C3H小鼠肿瘤细胞LM8-SART3.以空载体为对照,注射疫苗,分离小鼠脾细胞,体外检测CTL反应.于疫苗免疫后2周接种肿瘤细胞,比较免疫组与空载体组肿瘤长出及出瘤后肿瘤生长情况.结果 体外可检测到疫苗诱导的小鼠脾细胞CTL活性;疫苗注射后小鼠成瘤率降低,肿瘤生长慢于对照组.结论 表达人SART3基因的DNA疫苗可在一定程度上预防表达该基因的肿瘤细胞LM8-SART3在小鼠体内的成瘤及生长.
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IL-15表达质粒联合HPV基因疫苗诱导特异性淋巴细胞增殖的实验研究
目的 探讨IL-15真核表达质粒对HPV16 E7基因疫苗所诱导的小鼠特异性淋巴细胞增殖的影响.方法 利用基因重组技术构建含IL-15的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-15.将该质粒与HPV16 E7基因疫苗通过肌肉注射方式免疫雌性BALB/c小鼠.基因免疫后,制备脾淋巴细胞悬液,在体外经E7蛋白再刺激后用MTT法检测其T淋巴细胞增殖情况.流式细胞仪检测脾淋巴细胞亚群.结果 pcDNA3.1-IL-15与pcDNA3.1-E7共同注射,可以增强特异性T细胞增殖反应,A570差值为1.313,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05).实验组脾CD4+淋巴细胞数量和CD4+/CD8+比值均高于对照组(P<0.05).结论 IL-15真核表达质粒可以提高HPV16 E7基因疫苗免疫原性.IL-15基因是一种优良的HPV16 E7基因疫苗的基因佐剂.
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bcr-abl和白介素-7共表达基因疫苗诱导小鼠免疫保护作用
目的 探讨小鼠白介素-7(IL-7)基因对bcr-abl融合基因疫苗诱导机体免疫应答的影响.方法 采用pVbcr-abl/mIL-7质粒免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平.以转染bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞为靶细胞,用LDH释放实验检测免疫小鼠脾细胞特异性细胞毒活性.结果 pVbcr-abl/mIL-7质粒能诱导小鼠产生血清特异性抗bcr-abl抗体,pVbcr-abl/mIL-7免疫组的血清特异性抗体滴度高于pVbcr-abl免疫组,脾细胞杀伤SP2/0/bcr-abl靶细胞的细胞毒活性明显增强.结论 共表达bcr-abl和mIL-7的基因疫苗能在小鼠体内诱导较高的特异性体液免疫和细胞免疫水平,为慢性粒细胞白血病基因疫苗的临床前实验研究提供了依据.
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IL-15表达质粒联合HPV基因疫苗诱导细胞免疫应答的实验研究
目的 研究白细胞介素15(IL-15)真核表达质粒,对人乳头瘤病毒(HPV)16E7基因疫苗所诱导的小鼠特异性细胞免疫应答的影响.方法 构建含IL-15的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-15.将该质粒与HPV16 E7基因疫苗通过肌肉注射方式免疫雌性BALB/c小鼠.基因免疫后测定其血清γ-干扰素(IFN-γ)水平;并制备脾淋巴细胞悬液,经体外E7蛋白再刺激后用MTT法检测其T淋巴细胞增殖情况.结果 pcDNA3.1-IL-15与pcDNA3.1-E7共同注射,可以提高免疫小鼠血清中IFN-γ水平至414.1pg/ml,与E7+空质粒组、E7组比较差异有统计学意义(P<0.01).pcDNA3-1-IL-15与pcDNA3.1-E7共同注射,可以增强特异性T细胞增殖反应,OD570差值为1.313,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论 IL-15真核表达质粒可以提高HPV16 E7基因疫苗的免疫原性,增强小鼠细胞免疫应答.
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经涎腺投递基因疫苗的研究进展
基因疫苗能够诱导机体产生较强和持久的免疫应答,制作成本低,运输、储存和使用方便,具有潜在应用价值.常规基因免疫途径有肌肉注射、皮内注射、静脉内注射、腹腔内注射、皮下注射、粘膜免疫等.涎腺作为外分泌腺体,其解剖特点特别适用于基因疫苗的投递.经涎腺投递基因疫苗是近些年涌现出的新的免疫方式,具有免疫原性强、安全性好等优点.经涎腺投递的基因疫苗不仅能够诱导体液免疫和细胞免疫,还能诱导强烈的黏膜免疫.
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变形链球菌表面蛋白及葡糖基转移酶基因疫苗的防龋动物实验
变形链球菌(S.mutans)是主要的致龋菌,其毒力因子PAc和GTF-B在龋病的发生和发展中有重要的生物学作用.我们利用变形链球菌防龋基因疫苗pcDNA3-pac和pcDNA3-gtfB单独及联合免疫定菌鼠后评价龋损,以初步证实基因疫苗的免疫防龋效果.
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结核病Mtb8.4基因疫苗构建、表达及诱导的细胞免疫应答
目的制备结核病Mtb8.4基因疫苗,并研究其免疫原性.方法克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Mtb8.4,转染COS-7细胞后,用RT-PCR检测Mtb8.4基因在细胞内正确表达.将Mtb8.4基因疫苗肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第3次DNA免疫后4周,处死小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100:1、50:1、10:1进行CTL杀伤检测.结果Mtb8.4基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量分别为787.317±45.586pg/ml和319.953±57.978pg/ml,BCG组分别为1 486.540±39.600pg/ml和767.043±50.269pg/ml,BCG组IL-4的含量为90.580±10.998pg/ml,明显高于其他各组(P<0.01).效靶比为100:1、50:1、10:1时,Mtb8.4基因疫苗组的CTL活性分别为55.3%、35.7%、9.2%,BCG组分别为28.9%、21.4%、9.8%.Mtb8.4基因疫苗主要使抗原特异性Th1型细胞免疫应答增强,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,CTL活性增加;而BCG使IFN-γ、IL-2和IL-4分泌均增加.结论结核病Mtb8.4基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,可作为结核病的候选疫苗.
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关键词:
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乙型肝炎DNA疫苗研究进展
DNA疫苗也有基因疫苗、核酸疫苗、DNA免疫、基因免疫等各种名称和相关概念.有人将DNA疫苗称为第三代疫苗.第一代疫苗以Jenner用牛痘预防天花为代表,人类从此开始摆脱许多疾病的困扰.第二代疫苗是运用基因重组技术,以特定的基因表达产生的抗原作为疫苗,重组乙型肝炎疫苗就是典型例子.DNA疫苗则是将编码目的抗原的基因与载体重组以后,经不同途径将基因直接转入机体细胞内,利用宿主细胞内的表达加工机构合成抗原,从而激发体液免疫和细胞免疫.近年来,DNA疫苗在打破HBV慢性感染的免疫耐受方面取得了一定的进展,对乙型肝炎及HBV无症状携带状态的临床治疗提供了值得探索的新途径.
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新型防龋疫苗——变形链球菌基因疫苗防龋应用基础研究
1.主要研究内容:(1)基因疫苗的构建;通过基因重组技术成功地构建了含主要致龋菌变形链球菌毒力因子基因的重组质粒pcDNA3-pac、pcDNA3-gtfB、pcDNA3-pacA和pcDNA3-pacP.(2)基因疫苗的鉴定:经双酶切、测序等分析证实目的基因片段插入相位正确,未改变其阅读框架.
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丙型肝炎基因修饰的树突状细胞疫苗研究
树突状细胞(dendritic cell,DC)在免疫反应中起着举足轻重的作用.我们利用融合基因修饰的树突状细胞作为疫苗在丙型肝炎细胞和动物模型中诱导出强烈的细胞和体液免疫反应.为提高基因疫苗诱导免疫应答的效率提供了新的手段,为丙型肝炎防治提供了新的思路和理论依据.
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重组CEA和IL-2抗肿瘤基因疫苗的构建及其抗肿瘤作用研究
目的:成功构建重组 CEA、CEA/IL-2抗肿瘤基因疫苗,并检测其激活的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。方法将 CEA、CEA/IL-2基因导入真核表达质粒 pcDNA3.1,并转染入 DC 细胞,通过转染 DC 细胞活化淋巴细胞,将活化的淋巴细胞与人 CEA+肝癌细胞共培养,检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果重组 CEA、CEA/IL-2组均检测出较强的抗肿瘤效应,且重组 CEA/IL-2组与重组 CEA 组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论联合 CEA/IL-2基因疫苗具有抗肿瘤作用,且其抗肿瘤作用明显优于单基因 CEA 基因疫苗,证实了重组肿瘤基因疫苗对肿瘤细胞的杀伤作用。
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用于临床的基因工程药物
基因工程药物的生产是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质,然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来,经过系列操作后将基因放入可以大量生产的受体细胞,如细菌、酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细胞中去,在受体细胞不断繁殖过程中,大规模地生产具有预防和治疗这种疾病的蛋白质,即基因疫苗和药物.国外现有的基因药物,国内大部分也能生产,我国目前生产的常用于临床的基因工程药物主要有:
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白细胞介素12基因疫苗治疗低负荷恶性淋巴瘤的实验研究
目的用低负荷恶性淋巴瘤模拟微小残留病,探讨IL-12基因治疗的疗效.方法制备IL-12基因修饰肿瘤细胞(ex vivo疫苗)和IL-12逆转录病毒包装细胞(in vivo疫苗)两种IL-12基因疫苗,对T细胞淋巴瘤(EL4)小鼠的低负荷淋巴瘤模型进行治疗.结果①两个疫苗治疗组各约有50%的小鼠长期无瘤生存,而对照组小鼠全部成瘤死亡.②部分长期生存的小鼠能耐受大剂量野生肿瘤细胞的再次攻击.③形态学检查在长期生存小鼠体内未发现残留肿瘤细胞.④疫苗治疗组其余小鼠成瘤时间延迟、总体存活时间延长,并出现肿瘤消退和肿瘤体积一过性减小的现象和各种免疫指标的改变.结论 IL-12基因疫苗可以有效治疗小鼠低负荷的EL4淋巴瘤的模型,为IL-12基因疫苗治疗恶性淋巴瘤的进一步临床试验打下了基础.
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消化道肿瘤组织MUC1/Y基因表达及其临床意义
MUCI作为粘蛋白的一种,是重要的肿瘤相关抗原[1].
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白细胞介素-2对乙型肝炎病毒基因疫苗免疫效应的影响
目的构建表达乙型肝炎病毒(HBV)S蛋白的重组质粒pCR3.1-S作为基因疫苗,观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)作为佐剂对其诱导BALB/c小鼠产生免疫应答的影响.方法以不同剂量IL-2作为佐剂,生理盐水作为对照,测定不同免疫组的血清抗HBs、淋巴细胞增殖活性、淋巴细胞杀伤活性,比较不同免疫组间体液和细胞免疫应答的差异.结果抗HBs ELISA滴度,IL-2组与对照组比较差异无显著性(P>0.05);淋巴细胞增殖指数、淋巴细胞杀伤率,IL-2 1000U/(只·次)组、IL-2 2000U/(只·次)组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),而IL-2 500U/(只·次)组与对照组比较差异无显著性(P>0 05).结论一定剂量的IL-2作为佐剂可增强HBV基因疫苗的免疫效应.
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基因药的研究与应用进展
基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两大类生物大分子.本文讨论了基因疫苗、反义核酸、肽核酸(PNA)、RNA干涉(RNAi)、等几种新型基因药物,并介绍了它们在基因治疗中的应用.
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乙型肝炎疫苗对乙肝高危新生儿免疫效果观察
我国是乙型肝炎高发区[1],作好乙型肝炎高危产儿的免疫保护,对降低人群慢性HBV感染率具有十分深远的意义.本文对母亲或父亲为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性以及母亲为乙型肝炎既往感染者的新生儿进行了乙型肝炎基因疫苗免疫效果观察.结果报告如下.