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HBV感染者血清HBV DNA定量检测临床价值的探讨
为评价HBV感染者血清HBV DNA定量检测的临床价值,我们对636份临床血清标本进行HBV DNA含量、HBV标志物检测.并对它们进行了对比研究,现将结果报道如下.
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应用双重聚合酶链反应检测乙型、丙型肝炎病毒
常规聚合酶链反应(PCR)方法对患者HBV和HCV需要分别检测,因而操作繁琐,费时费力,且增加了污染的机会,为此,我们建立了双重PCR技术,实现一步法同时进行HBV和HCV的检测。 选取肝病患者血清标本115例,20例正常对照标本采自HBsAg阴性、肝功能正常的献血员。核酸提取采用蛋白酶K消化,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,将提取的DNA和RNA复悬于焦碳二乙酯处理过的蒸馏水中,并加入2U RNA酶抑制剂Rnasin。PCR反应在核酸提取管中进行,总体积50μl,反应条件为10 mmol/L Tris·Cl(pH8.3),50mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,0.5μmol/L HBV和HCV引物,0.2 mmol/LdNITP,AMVRT逆转录酶2U,Tag DNA聚合酶2U,RNA酶抑制剂Rnasin 10 U,混匀。
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HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV前C区的序列分析
为了解HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者中HBV前C区突变株流行情况,本研究对31例HBeAg阴性慢性乙型肝炎住院患者血清HBV前C区序列进行了分析,血清标本采自广西南宁市各大医院,按2000年全国第10次病毒性肝炎和肝病学术会议修订的"病毒性肝炎防治方案"诊断.其中男性25例,女性6例,年龄为18~36岁.
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半套式逆转录聚合酶链反应技术诊断中枢神经系统肠道病毒感染
肠道病毒(EV)感染常见,所致疾病轻重不一,可表现为无症状感染或严重的脑膜炎、脑炎和心肌炎等。长期以来缺乏有效的病原学诊断方法。组织培养分离病毒费时,阳性率低,且病合1至2周得到结果时已无益于临床诊断和治疗。聚合酶链反应(PCR)方法能快速、特异地检测出脑膜炎病人脑脊液(CSF)中EV RNA,但感染初期及回顾性研究的临床标本中病毒滴度较低,扩增结果多为阴性,病毒培养也常常失败。我们采用二步扩增半套式PCR方法检测无菌性脑膜炎病人脑脊液(CSF)和血清标本中肠道病毒RNA,发现该方法较常规一步PCR敏感性至少增加100倍。10例病毒培养阳性的CSF标本,二次PCR后10例均阳性;同时期的血清标本病毒培养4例阳性,而二次扩增后7例阳性。10例CSF培养阴性者二次扩增后4例CSF阳性,2例血清阳性,对照组全部阴性。表明本方法特异敏感,对临床EV感染的病原学诊断有较高的使用价值。
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一起病毒性脑膜炎流行的病原学研究
2002年12月底至2003年6月上旬,湖北省某地中学发生无菌性脑膜炎流行,发病年龄为12~16岁.临床症状表现为发热38℃~39℃、嗜睡、呕吐、脑膜刺激症状,其发病症状较轻.湖北省疾病预防控制中心传染病所先后采集脑脊液、血清标本,采用病毒分离、RT-PCR、中和试验和ELISA方法进行了病原学检测,现将初步结果报道如下.
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幽门螺杆菌感染患者血清可溶性粘附分子1研究
采用ELISA法检测了205例慢性胃病患者血清sICAM-1(Soluble Intercellular Adhesion Molecule 1, sICAM-1)水平,收集因上消化道症状来本院作胃镜检查的慢性胃病患者205例,年龄21~70岁,平均年龄45.43±12.24岁,男132例,女73例,诊断均经电子胃镜及病理学检查确诊.其中慢性浅表性胃炎54例,慢性萎缩性胃炎109例,消化性溃疡42例.每例经尿素酶试验、14C-尿素呼气试验、幽门螺杆菌(Hp) IgG抗体检测和血清sICAM-1检测.上述四项Hp检测至少两项阳性者判为Hp感染阳性.18例健康体检正常者血清标本作为正常对照组.
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问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测
寻找钩体属特异性保护抗原,对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值.Cullen等[1]首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因.我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因[2].已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫[3].我们采用显微镜凝集试验(MAT)检测了156份钩体病人血清的凝集效价,并建立rLipL21-IgM/IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测.
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检测肺炎衣原体血清IgM抗体ELISA的建立和应用
特异性抗体测定是目前诊断肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,C.pn)感染较敏感的方法.主要外膜蛋白(MOMP)是C.pn重要的抗原成分,具有良好的免疫原性,与C.pn的感染密切相关,其特异性抗体具有免疫保护作用[1].机体感染C.pn后体内可出现特异性的IgM抗体,检测该IgM抗体可作为判断C.pn感染的标志.本研究利用特异性的MOMP抗原,建立检测血清中C.pn特异性IgM抗体的ELISA[2],以351例病原学确诊的临床血清标本和11例其他病原体感染的肺炎患者血清标本为对照,对其灵敏度和特异性进行了评价,现报告如下.
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SARS病毒核衣壳蛋白抗体消长规律
研究SARS病毒抗体的消长规律对于评价患者的愈后及SARS疫苗的使用效果具有重要意义.本项目选用了军事医学科学院生物工程研究所研制的双抗原夹心SARS N蛋白抗体ELISA诊断试剂.对279例临床确诊的、发病不同时间SARS患者的血清进行检测,并同时跟踪检测了41例SARS患者在不同发病时间(发病3 d至160 d)的血清标本,对抗体产生的时间规律进行了研究.
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排除总胆固醇试剂对镁离子的影响
<中国误诊学杂志>编辑部:我们在使用OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪进行日常工作时[试剂采用总胆固醇试剂(酶试剂法)和血清镁测定试(二甲苯胺蓝法),均为上海申能-德赛诊断技术有限公司生产的DIASYS试剂],发现被检血清标本中Mg2+结果常有偏高现象.
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NKF-K/DOQI腹膜透析充分性的临床实践指南第三部分腹膜透析剂量的测定
指南8 测定方法的可重复性(观点)总Kt/Vurea和Ccr的精确测定要求收集和分析尿液、透析液和血清的方法重复性好及结果可靠.因存在葡萄糖的干扰,对透析液肌酐浓度的检测必须进行校正.可靠的测定需在治愈腹膜炎1个月以后进行.标本收集的依从性非常重要.例如,1名患者每日排尿≥3次,收集24h尿就足够.而对于每日排尿次数少的患者,要求收集48h标本.对于CAPD患者,可在任何方便的时间获得血清标本.而对NIPD的患者,采样必须在白天干腹的中点时间.对CCPD的患者,采取血清标本必须在白天腹膜透析液留置的中点时进行.
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两种方法在检测艾滋病病毒高危感染人群中的评价
目前我国人类免疫缺陷病毒(HIV)的筛查,常用酶联免疫吸附试验(ELISA),以检测抗体的第三代试剂为主.近年来国外采用全自动酶联免疫荧光检测(ELFA)系统筛查HIV感染者.我们用上述两种方法对39份血清标本进行比较,并用WEST-BLOT作为确诊试验.
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病毒性心肌炎患者自身抗体的检测及临床意义
病毒性心肌炎(viral myocarditis,VM)已成为内科常见病,其发病率有逐年增高趋势,但临床尚缺乏安全可靠的诊断手段.鉴于病毒可通过多种不同机制促进自身免疫应答,如病毒可插入细胞膜从而改变自身组织的抗原性,病毒可作为多克隆激活剂,刺激B细胞分裂增殖并发育成浆细胞产生抗体[1].我们运用免疫印迹技术、间接荧光抗体法以及快速斑点免疫金渗滤法,对42例VM患者的血清标本分别进行了抗可提取性核抗原抗体(anti-ENA)、抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(anti-dsDNA)的检测,以探讨它们在病毒性心肌炎诊断中的意义.
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电化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较
目前,临床实验室常规检测血清甲胎蛋白(AFP)多采用酶联免疫法.近年来,电化学发光免疫法以其敏感、快速、稳定等优点,在固相标记免疫测定技术上居领先地位[1].为进一步了解电化学发光免疫法的特点,本文应用电化学发光免疫法与酶联免疫法对比检测165份临床血清标本的AFP含量,对数据进行统计分析和比较,报告如下.一、材料和方法
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检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析
卫生部下发的<血站管理办法(暂行)>中规定,对献血者血液乙型肝炎病毒(HBV)检测的质量标准是"HBV表面抗原(HBsAg)酶免疫吸附法(ELISA):阴性",但未要求用一步法还是二步法检测.目前,国内检测HBsAg绝大多数采用ELISA中的双抗体夹心双位点一步法.用该方法检测HBsAg,当标本中的HBsAg浓度过高时,会因钩状效应(Hook)现象出现假阴性,而造成漏检,增加输血传播HBV的风险度,严重威胁输血安全.HBVe抗原(HBeAg)和HBV核心抗体(HBcAb)两项阳性时,大多数HBsAg都为阳性,但HBsAg阴性也可能存在漏检问题.为此,我们将对HBeAg和HBcAb两项阳性的血清标本进行不同比例稀释后,再用一步法和二步法进行分别检测及比较,以探讨一步法试剂的HOOK在HBsAg检测的漏检情况和二步法的临床应用意义及价值.
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两种方法检测抗可提取性核抗原抗体的比较
抗可提取性核抗原(ENA)抗体的检测是诊断自身免疫性结缔组织疾病重要的血清学依据,我院风湿免疫科实验室用免疫双扩散法(ID)和免疫印迹法(IB)进行常规检测.现将随机抽取997例各种疾病患者及20名健康人血清标本的检测结果比较分析如下.
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肌酐酶法试剂盒在OLYMPUS自动生化分析仪的应用
临床实验室肌酐测定方法从早的全血肌酐碱性苦味酸法(Jaffe)到血清肌酐苦味酸比色法[1],又发展为同一原理的速率法[2]。我们对Jaffe氏反应原理的肌酐速率法和肌酐酶法在OLYMPUS-AU600 自动生化分析仪上的测定结果做了分析比较。 一、材料和方法 1.试剂:(1)上海长征康仁医学科学有限公司生产的肌酐酶法试剂盒,批号 D80315及苦味酸速率法试剂盒,批号:60110。(2)肌酐标准液浓度为440 μmol/L,由长征康仁公司生产批号:35940。血清标本:来源于内蒙古医学院第一附院患者。 仪器:日本OLYMPUS-AU600型全自动生化分析仪。 2.肌酐酶法(PATE):波长 340 nm,温度37℃,双试剂,样品:试剂1∶试剂2为20∶200∶40。启动试剂3 min后加入,反应时间3.9 min到6.3 min,读取吸光度变化。肌酐苦味酸速率法(FIXED),波长520 nm,温度37℃,单试剂,样品:试剂为20∶200。反应时间,54 s至126 s,读取吸光度变化。标准type 4点定标,浓度分别为110、220、330、440 μmol/L,公式:X=AY2+BY+C。 二、结果 1.线性试验:将高值肌酐血清(H)与正常混合血清(L)按下表比例混合测定血清肌酐,测定结果见表1。
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两种浓度的二硫苏糖醇对抗体区分试验结果的影响
对新生儿溶血病及同种抗体检测,抗体区分试验是必不可少的.运用巯基类试剂可裂解IgM分子的二硫键,使其失去原有的血清性质,来检测共存的IgG抗体.观察抗体用巯类试剂处理前后的活性,对于免疫球蛋白性质的确定非常重要[1].目前经典方法之一采用0.01 MDTT(二硫苏糖醇)溶液处理血清标本.但该浓度的试剂在某种情况不能使IgM分子完全降解,直接影响免疫球蛋白性质的确定.为此,我们对单位时间内不同浓度的试剂(0.01 mol、0.02 mol)对IgM抗体破坏结果及各项指标进行了比较,旨在探讨试剂浓度与IgM抗体的关系.
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关注人细小病毒B19感染对人类健康的危害
1975年Cossart等从1例无症状者血清标本电镜检查中发现直径20~25nm球形病毒样颗粒,编定为B19病毒,经证实该病毒属细小病毒.以往发现的细小病毒只能感染牛、猫、狗、水貂、小鼠等哺乳动物,不感染人,故将B19病毒命名为人细小病毒(human parvovirus,HPV)B19.
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重叠丙型肝炎病毒感染在慢性乙型肝炎患者肝脏病变中的作用
目的:观察重叠丙型肝炎病毒(HCV)感染对慢性乙型肝炎(CHB)患者肝脏病变的近期及远期影响.方法:选择6 mo-15 a前后行两次肝脏穿刺活体组织学检查的CHB患者230例两次同期血清标本应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行了HCV-RNA检测,并将血清HCV-RNA阳性与阴性患者近期肝脏病变及血清HCV-RNA持续阳性患者(随访时间4.12±1.46a)与随访时间具有可比性的持续阴性患者远期肝脏病变分别进行了回顾性对比分析.结果:血清HCV-RNA阳性4l例(17.83%).血清HCV-RNA阳性患者近期肝组织炎症活动度(G1、G2、G3、G4例数分布分别为5、8、16、12)与纤维化程度(S0、Sl、S2、S3、S4分布分别为l、3、8、19、10)与阴性患者(G1、G2、G3、G4例数分布分别为37、60、57、35;S0、Sl、S2、S3、S4分布分别为8、20、63、69、29)差异具有显著性意义(P<0.05).随访结束时血清HCV-RNA持续阳性患者29例.HCV-RNA持续阳性患者与116例持续阴性患者远期肝组织炎症活动度(加重、无变化、好转例数分布分别为12、10、7;24、24、68)与纤维化程度(加重、无变化、好转例数分布分别为15、8、6;27、26、63)差异亦具有显著性意义(P<0.05).结论:重叠HCV感染加重CHB患者肝脏病变,并加速其进展.