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异种骨复合物修复兔桡骨骨缺损的实验研究
目的 探讨去抗原异种松质骨复合基因重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)及自体红骨髓(RBM)修复节段性骨缺损的效果.方法 制备去抗原冻干异种松质骨(HCB)并与rhBMP-2复合.采用大耳白兔双侧桡骨干15 mm缺损的动物模型,缺损中分别植入rhBMP-2/BBM/HCB、rhBMP-2/HCB、RBM/HCB及单纯HCB,通过大体观察、X线片、组织学观察、骨密度及钙磷含量测量评价各组移植物修复骨缺损的效果.结果 rhBMP-2/RBM/HCB、rhBMP-2/HCB及RBM/HCB在成骨量、成骨速度及HCB降解吸收速度等方面均明显优于单独HCB植入组,而rhBMP-2/RBM/HCB又明显优于rhBMP-2/HCB及RBM/HCB组,并于12周完全修复骨缺损,髓腔再通.结论 rhBMP-2、RBM及HCB联合移植可同时具有骨生成、骨诱导及骨传导作用.rhBMP-2、RBM的成骨作用可促进HCB的吸收,促进了异种骨修复骨缺损的能力,rhBMP-2/RBM/HCB可用于修复较大的骨缺损.
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血液和骨髓同时感染伊氏李斯特菌和类志贺邻单胞菌一例
患者女,44岁,农民.于4个月前受凉后出现发热,伴有寒战,体温38.0～39.5℃,反复发作,午后时段多见.无脱发、口腔溃疡、关节疼痛、肌无力、肌痛、颜面红斑等.发病4个月来.精神、饮食、睡眠差,体重下降5 kg.曾在当地乡镇和县医院给予输液治疗(具体药物不详),病情时轻时重,期间逐渐出现双下肢红斑并伴有踝关节肿胀疼痛、脱发、口腔溃疡.2011年7月2日,为求进一步诊断急转入我院.门诊以"败血症?系统性红斑狼疮?"收入科.入院查体:体温38.9℃.营养差,消瘦,急性病容.呼吸音粗,未闻及干、湿性哕音.心率108次/min,律齐,各瓣膜听诊区未闻病理性杂音.双侧下肢皮疹且水肿,踝关节肿胀,皮温升高,压之疼痛.入院后急查血常规:白细胞13.05×10'/L、红细胞2.91×1012/L、血红蛋白67 g/L、血小板计数110×109/L、中性粒细胞比例50.5%.ALT 72 U/L,、AST 130 U/L.,葡萄糖7.13 mmol/L,血浆总蛋白56 g/L、白蛋白28.70 g/L,甘油三酯2.8 mmol/L,巨细胞病毒IgG阳性,EB病毒IgG弱阳性,CRP 7.608 mg/L,结核抗体IgG阳性,红斑狼疮细胞检查阴性,血液及骨髓同时培养出伊氏李斯特菌及类志贺邻单胞菌.伊氏李斯特菌对万古霉素等敏感,类志贺邻单胞菌对头孢哌酮、头孢曲松、亚胺培南等敏感.在给予万古霉素、头孢哌酮抗感染的基础上加激素治疗后,患者精神较前明显好转,体温逐渐降至正常,连续10 d未再发热且血培养阴性,同时双侧下肢皮疹及水肿、踝关节肿胀、皮温升高、压痛等症状也逐渐消失,患者康复出院.
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口腔、乳腺及宫颈原发性粒细胞肉瘤一例
患者女，46岁，2010年11月进食时感口腔疼痛，于当地医院诊断“口腔溃疡”，给予抗炎药物治疗，效果不佳。2010年12月小便后发现便池中有类似脓性黏稠分泌物，偶见淡血丝，未就诊。2011年1月18日于左侧乳房扪及核桃大小的包块，无疼痛。1月25日于延安大学附属医院行妇检：见宫颈呈菜花状增生，直径为7 cm，行宫颈活检示：考虑宫颈淋巴瘤，建议进一步检查。行乳腺X线检查示左乳包块考虑肿瘤性病变，不排除恶性可能。2011年1月31日患者于我院妇产科就诊，查血常规提示：RBC 3.28×1012／L、WBC 5.22×109／L、N 67.9％、L 24.5％、Hb 111 g／L、PLT 217×109／L。查体：右侧上颚可见一4 cm ×3 cm 大小的溃疡，边缘肿胀隆起，中心凹陷，左乳可触及多个包块，较大的直径约4 cm ×5 cm，质略硬，活动差，右乳未见异常。妇检示：宫颈增大，可见一个约5 cm ×6 cm大小的包块，色暗红，质硬，触之易出血。行左侧乳腺包块切除术，术中剥离出两个约4 cm ×5 cm及2 cm ×2.5 cm的包块，病检示：（左乳）切片内可见瘤细胞弥漫浸润乳腺小叶、间质及周围脂肪组织，镜下改变，结合临床多考虑“B细胞源性恶性淋巴瘤”可能。后将标本送至第四军医大学西京医院行病理及免疫组化检查，结果支持“淋巴瘤”诊断，但未能具体分型。行阴道镜检查示：宫颈见菜花样增生，质硬，宫颈多点活检不除外淋巴瘤可能。2月10日患者转入血液科，行骨髓细胞形态学检查未见明显异常。经给予CHOP方案化疗2次，患者口腔溃疡凹陷及周边隆起基本平复，乳腺包块完全消散，宫颈包块较前缩小。4月1日患者乳腺包块标本送金域检验所检查，诊断：（左）乳腺粒细胞肉瘤。免疫组化：瘤细胞CD15（＋）、CD43（＋）、CD68（±）、MPO （＋）、Ki67（4＋，80％）、Vimentin（＋）、CD45RO 部分（＋）、CK （-）、CD2（-）、CD（-）、CD8（-）、CD20（-）、CD56（-）、CD79a （-）、CD99（-）、TDT（-）、TIA （-）、Perforin （-）。溶菌酶（±）。4月7日患者于左髋部出现鸡蛋大小一包块，超声检查示：左髋部见一40 mm ×20 mm ×31 mm大小实性包块，边界清楚，形态规则。结合实验室检查分析，患者“粒细胞肉瘤”诊断明确，先后给予盆腔放疗1次及DA、HA、MA方案反复交替化疗多次，患者口腔凹陷及周边隆起完全平复，乳腺及宫颈肿块消失，左髋部包块缩小，多次行骨髓穿刺检查未见异常。至2012年2月患者因个人原因停止化疗。2012年4月，患者双侧乳房再次出现多个核桃大小的包块，并进行性增大，伴头晕、乏力、食欲缺乏及发热。5月中旬，患者于口腔右上颚出现一1 cm ×3 cm大小的包块，局部牙龈增生显著。5月29日于我院就诊，查体：全身皮肤苍白，可见散在出血点及淤斑，双侧颈部可触及多个2 cm ×2.5 cm的肿大淋巴结。下牙床牙龈及上牙床右侧牙龈显著增生，右上颚可见一1 cm ×3 cm大小的肿块，外观呈紫褐色，质地韧，表面黏膜粗糙呈颗粒状，触之有轻微痛感且易出血。双侧乳房均可触及多个约4 cm ×5 cm大小的包块，质硬，无压痛。左髋关节下方可触及一个约3 cm ×4 cm大小的包块。查血常规示：WBC 22.3×109／L、N 32.7％、L 33.6％、Hb 87 g／L、PLT 10×109／L；白细胞手工分类：原始细胞62％。骨髓穿刺检查示：增生极度活跃，退化细胞少见。粒细胞系统占0.888，原始粒细胞约占0.872，全片约见巨核细胞1个，血小板少见。化学染色：POX（＋＋）。免疫分型：MPO（＋）、CD68（-）、CD13（-）、CD14（-）、CD2（-）、CD3（-）、CD7（-）、CD10（-）、CD19（-）、CD20（-）、CD22（-）、CD41（-）、HLA （-） DR （-）。意见：结合免疫分型，诊断急性白血病（倾向髓系）。结合骨髓检查，患者“急性髓系白血病（ AML）”诊断明确，拟给予DA方案化疗。后患者放弃治疗自动出院，于6月底死亡。
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异基因造血干细胞移植 ABO 转型特征与免疫相关性疾病的防治策略
造血干细胞移植（ HSCT ）是目前临床治愈血液系统恶性肿瘤、先天性遗传性疾病以及自身免疫性疾病的重要手段。 Buckner等［1］曾首次报道ABO血型不合对骨髓移植的影响，目前众多的研究证实，造血干细胞（ hematopoietic stem cell ， HSC ）并不表达ABH抗原，移植受者外周血循环中暂时存在的抗A、抗B凝集素对HSC不会产生损害作用，故ABO 血型不合并不影响HSC的植活，亦不增加移植物抗宿主病（ graft versus host disease ，GVHD）的发病率和严重性，因此，异基因造血干细胞移植（ allo-HSCT）在临床应用中不存在移植成功的障碍。基于这一理论的研究成果，allo-HSCT在临床上应用越来越广泛。 allo-HSCT包括骨髓HSC、外周血HSC和脐血HSC，在临床上allo-HSCT 约占造血干细胞移植总数的23％～30％［2］。移植中供受人类组织相容性抗原（ HLA）Ⅰ类和Ⅱ类位点全相合或单倍体型相合，但ABO红细胞血型不合。 ABO红细胞血型不合包括主侧血型不合、次侧血型不合和主次侧血型均不合，移植后受者ABO血型血清学表达与普通正常人存在较大的差异。
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去甲基化治疗在恶性血液病中的进展
目前恶性血液病治疗以化疗为主，化疗药物的耐药导致疾病复发仍为治疗中的大难题，并且化疗对骨髓及其他脏器具有严重的毒副作用，限制了临床治疗效果及影响患者的生活质量。DNA高甲基化在恶性血液病中广泛存在，且具有潜在的可逆性，人们以此作为治疗的靶点，研究去甲基化药物治疗恶性血液病，并有望成为一种新的治疗途径。
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急性髓样白血病患者骨髓干细胞CD200的表达及与临床疗效的关系
目的 研究急性髓样白血病(AML)患者骨髓中CD200的表达情况及与临床疗效关系的相关研究.方法 将51例急性髓样白血病患者根据初发时白细胞计数分为高白细胞组(18例)与非高白细胞组(33例),根据化疗效果分为完全缓解组(31例)和未缓解组(20例),同期选取51例缺铁性贫血或巨幼细胞贫血患者为对照组.采用流式细胞术检测AML患者化疗前后CD200、Foxp3+/CD4+的表达,酶联免疫吸附试验检测AML患者及对照组患者外周血白细胞介素17(IL-17)、IL-4和干扰素γ的水平.同时,采用Pearson线性相关分析研究AML患者中CD200表达水平与化疗前后血清IL-17、IL-4、干扰素γ水平及骨髓中Foxp3+/CD4+水平的关系.结果高白细胞组患者CD200阳性表达率明显高于非高白细胞组患者[(4.8±2.8)%vs.(3.7±2.2)%,t=4.961,P<0.001].未缓解组患者较完全缓解组患者明显偏高[(4.8±2.6)%vs.(3.1±1.6)%,t=5.716,P<0.001].对照组患者与AML患者化疗前比较,IL-17及干扰素γ水平均明显升高(t=26.970,P<0.001;t=4.370,P<0.001),IL-4水平及Foxp3+/CD4+细胞均明显降低(t=9.965,P<0.001;t=7.346,P<0.001).而对照组患者与AML患者化疗后比较,仅IL-17及IL-4水平比较,差异有统计学意义(t=8.897,P<0.001;t=3.965,P<0.001).与AML患者化疗前比较,化疗后IL-17[(147±42)ng/L vs.(332±68)ng/L,t=15.920,P<0.001]及干扰素γ[(24±8)μg/L vs.(31±12)μg/L,t=3.576,P<0.001]水平均明显升高,IL-4水平[(142±54)μg/L vs.(84±31)μg/L,t=6.644,P<0.001]及Foxp3+/CD4+细胞[(7.5±2.4)%vs.(5.2±2.4)%,t=5.330,P<0.001]均明显降低.Pearson线性相关分析发现,CD200表达水平仅与化疗后骨髓中Foxp3+/CD4+水平呈正相关(r=0.347,P=0.012).结论 CD200可能通过抑制免疫相关因子影响AML患者临床疗效.
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异基因骨髓源间充质干细胞移植形成稳定的嵌合体并诱导免疫耐受的研究
目的探讨器官移植中间充质干细胞诱导免疫耐受的可能性.方法雌性C57BL/6小鼠致死量照射后,移植同基因骨髓细胞和异基因骨髓源间充质干细胞,150 d后以流式细胞仪检测其骨髓及脾脏的T细胞嵌合状态;以H3-TdR混合淋巴细胞反应(MLR)和刀豆蛋白A(ConA)诱导增殖实验检测细胞移植组小鼠对供者来源细胞和有丝分裂原的反应性;以皮肤移植实验观测细胞移植组小鼠对供者来源组织器官移植物的反应性.结果在细胞移植组小鼠脾脏中检测到供者来源T细胞占受者脾细胞5.97%;MLR反应中,细胞移植组小鼠的平均刺激指数(SI)为1.79,未处理组小鼠的平均SI为7.28;在ConA诱导增殖实验中,细胞移植组小鼠的平均SI为31.92,未处理组小鼠的平均SI为34.99.细胞移植组小鼠供者来源皮肤移植物存活>90 d,未处理组平均为8 d.结论异基因骨髓源间充质干细胞移植后可形成稳定嵌合体,并诱导特异性免疫耐受的产生,使供者来源的皮肤移植物长期存活.
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损伤肝脏条件培养液体外诱导小鼠骨髓单个核细胞分化为肝细胞的研究
目的 探索小鼠骨髓单个核细胞(BM MNCs)体外诱导分化为肝细胞的可行性及方法.方法 将四氯化碳注射的小鼠肝脏进行培养,收集上清液,用于诱导BM MNCs分化.观察细胞分化中的形态变化;在1、7、14、21 d时,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光反应检测甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)、CK19、肝细胞核因子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基转移酶(TAT)和白蛋白(ALB)基因的表达,过碘酸Schiff氏剂反应(PAS)检测细胞糖原合成.结果 诱导组细胞呈肝细胞样变化;RT-PCR检测,第7天可见AFP、CK19基因表达,第14天AFP表达增强,第21天减弱;第14天可见ALB、CK18、HNF3β基因表达,且持续到第21天;第21天TAT表达.免疫荧光反应结果显示,第21天ALB、CK18、CK19、AFP表达呈阳性;同时PAS糖原合成反应也出现阳性.结论 BMMNCs在损伤肝脏条件培养液诱导下可跨越分化为肝细胞,该方法的建立对分化机制研究有重要意义.
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加强临床流式细胞免疫表型分析的质量控制
流式细胞术(FCM)的应用越来越广泛,流式细胞免疫表型分析已经成为常用的检查项目.FCM可以通过多参数分析异质性细胞群的免疫表型,从双参数分析外周血细胞到参数以上分析骨髓细胞膜、细胞浆和细胞核等多种抗原成分,涉及临床多种疾病的诊断、治疗与预后等诸方面.
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急性髓细胞白血病伴三系病态造血的临床意义
由于急性髓细胞白血病伴骨髓三系病态造血(TMDS)有其独特的生物学和临床特征,已引起越来越多的学者重视和研究[1].我院共收治225例初发的急性髓细胞性白血病(AML),其中30例伴三系病态造血(AML/TMDS).我们对其实验室诊断的特征和临床疗效及预后进行了分析.
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人造血细胞不同分化与发育阶段的免疫表型研究现状
所有血细胞均来源于一个共同的祖先,即造血干细胞(HSC),它是由胚胎干细胞发育而来的,主要存在于骨髓、新生儿脐带血、动员的外周血和其他造血组织中.造血干细胞在自我更新的同时,也在不断地分化和成熟为某一特定类型的血细胞.
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纺织染料在血细胞形态学检验中的应用
纺织染料可染血和骨髓中的血细胞是Ehrlich首先发现的.多年来Kass以各种纺织染料进行血细胞染色研究取得了满意的结果.近年, Kass[1]又以碱性蓝和酸性红进行联合染色,各种白细胞和血小板可显示不同颜色.国内李顺义等[2]发现国产纺织染料耐晒黑G的乙醇溶液对粒细胞有特异性着色.朱芸等[3]利用国产纺织染料碱性品蓝染各种血细胞,也取得了非常满意的效果.
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成年人神经母细胞瘤骨髓转移一例
神经母细胞瘤是常见于儿童时期的恶性肿瘤,成年人尤其中老年人罕见,国内外鲜有报道,近本院通过骨髓细胞学分析确诊了1例成人神经母细胞瘤,现报告如下.
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从血液中分离出黑曲霉菌一例
患者男,22岁.2005年8月无明显诱因出现牙龈出血、全身出血点入住某医院,经骨髓穿刺检查确诊为急性淋巴细胞性白血病(ALL-L1),化疗后缓解,此后规律行7个疗程巩固化疗,骨髓穿刺检查示病情完全缓解.
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心脏外科手术继发偶发分枝杆菌心内膜炎一例
2003年7月本院从一心脏外科手术患者的血、骨髓中培养岀偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum).
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马尔尼菲青霉菌引起败血症致患者死亡一例
马尔尼菲青霉菌主要分布于中国南方地区及东南亚各国,在东南亚引起的临床感染仅次于结核分枝杆菌和新生隐球菌,居第三位,是引起艾滋病(AIDS)患者感染的主要致病菌.该菌常从血液、骨髓以及皮肤活检组织中分离出,我们从1例真菌血症患者的血液及骨髓中分离出1株马尔尼菲青霉菌.
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全自动血培养仪分离羊布杆菌七例
我室应用全自动血培养仪(BACTEC9120,美国BD公司产品)树脂需氧瓶,从血液和骨髓中分离出7株羊布杆菌.
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骨髓巨核细胞计数的新方法
骨髓巨核细胞数量是血液病诊断、治疗、预后及骨髓移植效果和骨髓损伤程度的重要指标.
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血液(骨髓)培养漏检因素探讨
血液细菌培养是诊断和治疗菌(败)血症的主要依据.我室采用生物梅里埃公司miniVITAL 全自动荧光血培养仪,对1 268份临床疑似菌(败)血症患者的血液(骨髓)标本同时进行需氧和厌氧培养,共检出带菌者138份,报道如下.一、材料和方法
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人骨髓间质干细胞PKH 26荧光标记技术
目的 建立一种PKH26体外荧光标记人骨髓间质干细胞(MSCs)的方法.方法 培养人骨髓间质干细胞,按PKH26标记程序进行标记后培养,采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析,观察标记后人MSCs生长状态、荧光强度变化和传代培养效果.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法观察标记细胞的生物学功能.结果 标记后MSCs呈红色荧光,标记率达100%,体外连续传代培养7代后,荧光标记细胞荧光强度逐渐减弱,荧光标记细胞百分比逐渐减低.PKH26标记MSCs的生长形态、生长活力、nucleostemin、三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因表达及体外诱导分化能力等生物学特性不发生改变.结论 PKH26荧光标记人MSCs是一种有效、实用的方法,该方法对MSCs转归、可塑性及MSCs移植治疗研究具有重要的价值.
