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NOK癌基因对人胚肾293T细胞周期G1/S期的影响及其作用机制
目的 探讨NOK癌基因对人胚肾293T细胞周期G1/S期的影响,并研究NOK对G1/S期调控的作用机制.方法 用流式细胞仪对瞬时转染NOK及pcDNA3.0空载体的293T、293 ET及HeLa细胞进行周期检测,并用免疫印迹法(Western blot)在293T细胞中,对其细胞周期G1/S期检验点调控蛋白 cyclin D/E1及CDK2/4等蛋白水平进行检测.结果 瞬时转染NOK 1可使293T、293 ET及HeLa细胞G1期较转染空载体pcDNA3.0的细胞比例减少,S期比例增多(P＜0.05).转染NOK可使G1/S期检验点相关蛋白cyclin D、cyclin E1、p-CDK-2、p-CDK-4、p-Akt及p-Rb 蛋白的表达量上升,使P21及P53蛋白表达量下降.结论 NOK可促进细胞快速通过细胞G1/S期检测点,其机制涉及对Akt及CDK2/4通路的影响.
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周期素A募集心脏干细胞促进梗死后心肌自身修复
目的：探讨周期素A能否促进梗死后心肌再生。
方法：C57小鼠随机分为两组：梗死+生理盐水组（n=30）；梗死+病毒基因组（n=30）。模型建立前一周，将2×1011病毒稀释到200μl生理盐水中，随后通过尾静脉注射到血液循环中，对照组注射同样剂量的生理盐水。超声心动图检测各组左室舒张末内径、左室收缩末内径及射血分数。免疫组化、WB检测周期素A2在心肌细胞中的表达和定位。增殖细胞相关因子PCNA和H3P验证DNA合成及细胞有丝分裂。心脏细胞干细胞特异性抗原C-kit和connexin-43同样被检测。 -
周期素激酶抑制剂p27在氟伐他汀抑制系膜细胞增生中的作用
系膜细胞(MC)增生是肾脏疾病的常见病理现象,细胞增生与否受细胞周期调节蛋白(CCRPs)控制[1],其中周期素激酶抑制剂p27是一种十分重要的CCRPs,研究证实,p27水平下降在MC增生中起重要作用[1-3].
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X射线全身照射对小鼠骨髓细胞CyclinD、 CDK4表达的影响
目的研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4表达的影响,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理.方法采用Northern blot和半定量RT-PCR方法分别检测CDK4、CyclinD基因转录水平变化;流式细胞仪检测了X射线全身照射小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4的表达及周期时程的变化.结果 2 Gy X射线全身照射后12 h骨髓细胞出现G1期细胞百分数升高(P＜0.05),G2+M期细胞百分数于照后4 h及12 h升高(P<0.05);CyclinD基因转录水平从2 h开始下降,48 h达到低,照后72 h恢复至正常水平,CDK4的变化趋势与CyclinD相似,只是从8 h开始下降,48 h达到低,照后72 h恢复假照组水平;CyclinD蛋白表达在照射后2、4、24、48 h显著降低(P<0.01),CDK4蛋白表达在照射后2 h开始急剧下降,持续至照射后48 h仍未恢复到对照水平(P<0.01).结论 2 Gy X射线全身照射可诱导小鼠骨髓细胞发生G1、G2阻滞;CyclinD、CDK4基因及其蛋白产物可能在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期阻滞中起重要作用.
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Cul1蛋白与肿瘤发生
细胞内各种功能蛋白如原癌蛋白、抑癌蛋白、周期素、细胞分裂周期蛋白、转录调节因子等动态地影响到细胞周期进程.这些细胞周期相关蛋白在细胞内水平的高低,受泛素-蛋白酶体降解途径的精细调控[1].
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细胞信号转导通路中药物作用靶分子研究进展
细胞内有许多信号转导通路,交织成一个大的细胞信号转导网络系统,该网络系统是非常有序和复杂的.受外环境的干扰和基因突变等因素的影响,细胞信号转导系统的有序在肿瘤细胞中被打乱,某些信号转导途径出现异常.美国MIT肿瘤研究中心的ras基因发现者Robert A Weinberg教授认为有四种细胞信号转导途径的异常与肿瘤的生长有密切关系,它们包括TGF-周期素(transforming growth factir-cyclin)途径、p19-p53途径、端粒酶(telomer-ase)途径和RasMARP途径,这些信号转导途径既独立又相互影响.
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地塞米松干预大鼠星形胶质细胞周期素的表达及细胞周期进程
背景:有研究表明地塞米松可引起星形胶质细胞凋亡,但其机制不清,有关地塞米松干扰星形胶质细胞的周期素表达的作用未见报道.目的:观察地塞米松引起大鼠星形胶质细胞凋亡与周期素表达的关系.方法:将不同浓度的地塞米松(0,10-5,10-4,10-3 mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24 h后,经流式细胞仪检测细胞周期,并用免疫细胞化学方法检测周期素A和E在星形胶质细胞内的表达.结果与结论:地塞米松10-5,10-4 mol/L浓度组G1期细胞指数较对照组增加(P < 0.05,P < 0.01),10-3 mol/L组的S期细胞指数较对照组明显升高(P < 0.01);周期素A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱(P < 0.05).周期素E的表达在地塞米松0,10-5,10-4 mol/L组随着地塞米松浓度的升高而减弱(P < 0.05),但在10-3 mol/L浓度组反而表达增强(P < 0.01).说明地塞米松10-5,10-4 mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于G1期且与周期素A和E表达降低有关,地塞米松 10-3 mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于S期主要与周期素A表达降低有关.
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周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用
周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5, CDK5)是CDKs家族的成员之一,属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,具有与其他的CDKs成员同源的序列~[1].CDK5早是从Hela细胞中分离并克隆,并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57%的同源性~[2],故又称为cdc2相关的蛋白激酶.
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氨基胍减轻高糖培养系膜细胞的肥大程度与降低周期素激酶抑制物p27有关
Wolf等发现无血清高糖培养导致系膜细胞(mesangial cell,MC)停顿于G1[1],MC肥大在糖尿病肾病(DN)肾小球系膜区扩大中起重要作用[2],氨基胍(aminoguanidine,AG)可改善DN早期的肾小球系膜区扩大[3].现已明确细胞是否肥大和周期停顿均由细胞周期调节蛋白(cell cycle regulatory protein,CCRP)控制[4].其中周期素激酶抑制物p27是一种十分重要的CCRP,在DN早期的MC肥大中起重要作用[4,5].本研究旨在观察AG对高糖培养MC肥大程度及MC中p27水平的影响,从而探讨AG的作用机制.一、材料和方法1.细胞培养:SD大鼠MC按谌贻璞等[6]方法培养和鉴定(抗desmin和抗vimetin染色阳性,抗Ⅷ因子染色阴性).MC培养于含10%小牛血清的正常糖(5.56 mmol/L)DMEM中,常规置于37℃、5%的CO2培养箱中孵育,每周传代2次.实验用MC为亚培养6～8代MC.进入实验前行无血清正常糖培养24h,然后分别无血清正常糖(G100组)、高糖(25 mmol/L)(G450组)及高糖+AG(Sigma公司,AG终浓度0.25 mmol/L,溶于无血清高糖DMEM中)(G450+AG组)培养72h;另外,对MC分别转染p27错义(missense)或反义(antisense)寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)后无血清高糖(G450+错义ODN组及G450+反义ODN组)培养72h.
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周期素E表达在粘膜下胃癌进展中的作用
周期素E(Cyclin E)是一种G1期核蛋白,它能结合并激活周期素依赖激酶2(cyclin-dependent kinases,CDK2)而间接促进细胞从G1向S期过渡.p53通过激活p21蛋白而间接抑制细胞从G1向S期过渡.故Cyclin E与p53的异常将使G1/S期的调控失常,有可能引起无限制地细胞增殖,进而参与多种肿瘤的发生和发展[1].Cyclin E在基因和蛋白水平的过度表达[2]及其在癌中的高发生率证实Cyclin E也参与和促进了胃癌的发生.本文旨在探讨Cyclin E的过度表达在粘膜下胃癌进展中的作用.
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老龄大鼠局灶性脑缺血后细胞周期素表达变化及意义
目的:探讨老龄大鼠局灶性脑缺血后细胞周期素表达意义.方法:应用原位末端标记、原位分子杂交、免疫组织化学等方法,分别对老龄大鼠局灶性脑缺血后4 h,24 h,5d脑组织中的凋亡细胞,CyclinDlmRNA,CyclinD1,CyclinA和CyclinB1蛋白表达进行观察.结果:CyclinD1 mRNA,CyclinD1及CyclinBl蛋白阳性细胞主要见于缺血灶周围,其分布范围及动态变化规律与Tunel阳性细胞一致.但未见CyclinA蛋白表达.结论:CyclinD1,CyclinB1参与了局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡过程,此过程可能是细胞周期异常调控的结果.
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周期素D、E、A在乳腺癌中的表达及其意义
细胞周期失控是细胞增殖失控而导致癌变的重要原因[1].细胞周期的不同时相由不同的细胞周期蛋白(cyclin)控制,周期素与周期素蛋白依赖激酶(cylin-dependent kinase, CDK)结合,并通过激活CDK活性发挥作用.其中周期素D1(cyclin D1)基因是近年提出的重要的原癌基因,在细胞周期的调控中起关键作用[2].我们用免疫组织化学检测cyclin D1、E、A基因在31例乳腺癌中的表达,旨在探讨细胞周期素表达对乳癌发生发展及预后的影响.
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他扎罗汀对角质形成细胞增殖周期蛋白Cyclin D1/CDK4/CDK6表达水平的影响
目的:探讨他扎罗汀(Tazarotene)对角质形成细胞增殖周期蛋白Cyclin D1、CDK4和CDK6表达水平的影响.方法:分别以不同浓度的他扎罗汀作用于HaCaT细胞,用CCK-8比色法检测每组细胞在12、24、48和72 h的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,western blot检测周期相关蛋白水平变化.结果:他扎罗汀对HaCaT细胞具有明显的增殖抑制作用(如21.23,P＜0.05),并使G0/G1期细胞比例增加(F=19.83,P＜0.05),周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK6的表达水平明显下调.结论:他扎罗汀对HaCaT细胞具有明显的增殖抑制和周期阻滞作用,其作用机制可能与下调Cyclin D1/CDK4/CDK6蛋白复合物的表达有关.
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增殖细胞核抗原与喉癌
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)又称周期素(cyclin),是1978年Miyachi等[1]在系统性红斑狼疮患者血清中发现并提纯的一种自身抗原.PCNA是一种细胞周期调控蛋白,是DNA多聚酶δ的辅助蛋白,DNA合成必不可少的因子.
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生长抑素对人肝癌HepG2细胞增殖及cyclinD1、cyclinE蛋白表达的影响
目的 探讨生长抑素治疗肝癌的作用机制.方法 取对数生长期HepG2细胞以不含血清的培养液使其周期同步化,以含血清培养液继续培养24 h后随机分为观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,前三组分别加入质量浓度为100、200、400 μg/(kg·d)的生长抑素,对照组加入等体积RPMI1640培养液24～72 h.MTT比色法观察各组细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫组化法检测周期素D1(cyclinD1)、周期素E(cyclinE)蛋白表达.结果 观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组不同时间点细胞增殖抑制率均显著高于对照组,且同一时间点观察Ⅲ组＞观察Ⅱ组＞观察Ⅰ组,同组中72 h＞48 h＞24 h(P＜0.05、0.01);观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组G1期细胞比例均显著高于对照组,观察Ⅱ、Ⅲ组S期细胞比例均显著低于对照组(P＜0.05、0.01);观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组cyclinD1、cyclinE蛋白水平均显著低于对照组,且观察Ⅲ组＜观察Ⅱ组＜观察Ⅰ组(P＜0.05、0.01).结论 生长抑素可通过下调cyclinD1、cyclinE表达抑制HepG2细胞增殖,此可能为其治疗肝癌的作用机制之一.
关键词： 生长抑素 人肝癌HepG2细胞 细胞增殖 周期素 -
D型周期素在鼻咽癌中的表达及功能分析的初步探讨
目的和方法:肿瘤是一种细胞周期病.D型周期素是调节细胞周期G1/S期进展的重要正性调节因子,包括D1、D2及D3三个亚型,尤其是D1已被证实是一种候选瘤基因.我们先前的研究已首次在鼻咽癌活检组织中建立了D型周期素的表达谱,发现D型周期素在鼻咽癌活检组织中呈差异性表达.新近的研究表明,在B淋巴细胞中EB病毒潜伏膜蛋白LMP1能诱导D2的表达,协同D1调节G1期行进.因此,在此基础上,本文利用Western blotting方法进一步检测了EBV-LMP1(+)及(-)的鼻咽癌细胞系CNE-LMP1、HNE1中D型周期素的表达状况,并利用流式细胞仪双参数法同时从DNA及蛋白质水平分析了D1在鼻咽癌细胞系中的群体水平及细胞亚群水平的表达特征,探讨了其功能.结果:D1、D3在CNE-LMP1中过表达,在HNE1中也有弱表达;D2在CNE-LMP1及HNE1中均表达,在CNE-LMP1中的表达较强.流式细胞仪双参数的结果显示,D1在鼻咽癌细胞系中的表达呈细胞周期依赖性,且呈周期性振荡,在G1期表达高,S期下降,但是S期及G2/M期仍可检测到D1的表达.结论:D型周期素在鼻咽癌的发病中具有一定的作用,D1可能调控G1/S期行进,D型周期素在EBV-LMP1(+)的细胞系中表达增强可能与EBVs-LMP1的表达有关,为我们进一步探讨EBV-LMP1的活化与细胞周期的紊乱提供了新的线索.
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P16基因的研究进展
恶性肿瘤的发生,目前认为是细胞内癌基因的激活与抑癌基因的缺失和(或)失活所致,其中已发现的癌基因有100多利,而抑癌基因的发现很少,目前已肯定的抑癌基因包括Rb、P53、nm23、P16等,其中P16基因是近研究的热点(1).p16基因,又称MTS1(Multiple Tumor Suppressor 1)或CDKN2基因,是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因,位于染色体9P21(2),其编码蛋白质是周期素依赖激酶4(CDK4,Cyclin Dependent Kinase 4)的抑制剂,周期素与CDK结合,能使Rb1蛋白磷酸化,解除其对DNA合成必需的-酶表达的抑制作用.这一过程是起动细胞由G1其进入S期的核心步骤,因此,P16能控制细胞由G1期进入S期,对细胞的生长周期起负调控作用(3).本文将结合近的新进展,对P16基因与肿瘤的发生、发展及应用的关系,作一简述.
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细胞周期正负调控因子在伤口愈合中的表达的观察
目的探讨伤口愈合过程中细胞周期正负调控因子Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4、p21cip1、p27kip1 、p16ink4a 、p15ink4b 的表达变化及意义.方法采用大鼠全皮层开放伤模型,收集伤后3～30 d伤口组织,以免疫组织化学法测定细胞增生标志物Ki67的表达,Western blot 法检测Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4及p21cip1、p27kip1 、p16ink4a 、p12ink4b.结果细胞生长主要发生在伤后一周之内,生长高峰出现在伤后5 d.Cyclin D1、CDK2、CDK4的表达均保持较为恒定的水平,整个愈合过程无明显的起伏变化;伤后3～11 d,Cyclin E呈高表达,14 d开始明显下降,伤后21～30 d几乎回落到伤前水平.Western blot法未检测到p16ink4a 、p12ink4b的表达;p21cip1在伤后7～14 d呈一过性表达,其峰值水平出现在伤后9 d;p27kip1呈结构性表达,伤后3～5 d表达强度相对低下,随后大幅度上调.结论伤口愈合过程中,p21cip1、p27kip1表达确与Ki67的表达呈反向趋势,p21cip1、p27kip1在防止过度增生趋势中发挥着监控作用,其中p27kip1的作用更为重要.
关键词： 伤口愈合 细胞周期 周期素 周期素依赖激酶 周期素依赖激酶抑制物 -
周期素D1、E、A在乳腺疾病中的差异性表达
目的探讨周期素D1、E、A在各类乳腺疾病中表达的差别及其在肿瘤发生发展中的意义.方法用免疫组化的方法检测人类各类乳腺疾病组织中周期素D1、E、A的表达.结果三种周期素的表达强度皆为恶性肿瘤高于良性肿瘤,高于增生性疾病,差异极为显著(P＜0.001).表达阳性率在恶性肿瘤与良性肿瘤及增生性疾病之间,也存在显著差异(P＜0.005).而恶性肿瘤中,在浸润性导管癌和浸润性小叶癌之间周期素E和A的表达阳性率也存在显著差异(P＜0.005).结论周期素D1、E、A的过度表达与乳腺肿瘤的发生和恶性转化密切相关,它们的表达强度可以作为评价乳腺肿瘤恶性程度的一个分子生物学指标.而浸润性导管癌和浸润性小叶之间周期素E和A表达阳性率存在的差异,说明不同组织类型的乳腺恶性肿瘤发病机制有所不同.
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增殖细胞核抗原与大肠癌预后的关系
大肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,其预后与组织分化程度有一定关系.增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是分子量为36KD的一种周期素,表达和合成于细胞周期S期和G1晚期.
