首页 > 文献资料
-
弓形虫速殖子抗原的提取及蛋白分析
弓形虫病是一种严重危害人民健康的人兽共患病.全球约有10亿人被弓形虫感染,我国弓形虫血清阳性率约5%[1].由于弓形虫的生物特性,人体感染后一般症状不明显,多呈隐性感染,无特异的临床症状与体征,且病原学检查难以查到病原体.因此,弓形虫感染的诊断多依靠免疫学方法.本研究主要对弓形虫RH株速殖子抗原的提取、纯化和制备进行初探,对速殖子抗原的蛋白分子进行试验分析,以提高免疫诊断的敏感性和特异性,并试图了解其功能性抗原.
-
等电聚焦免疫印迹技术检测人α1-抗糜蛋白酶
等电聚焦是一种蛋白分析技术,尽管薄层等电聚焦分析法具有节省试剂、分辨率高、可同时分析数十份样本和样本组间比较差异小等优点,但其在试验后期的免疫固定过程中所用的抗体较多.本研究对分析α1-抗糜蛋白酶(α1-ACT)蛋白表型的等电聚焦免疫固定和等电聚焦免疫印迹技术进行比较,以寻找一种更敏感、经济的蛋白分离分析方法.
-
血小板抗体检验技术进展
人类血小板抗原(HPA)是一组复杂的不均一的膜蛋白系统,由于感染或免疫因素引起的血小板抗体与临床输血和疾病诊断关系密切.近年来,随着检验医学的发展和检测技术的不断更新,对血小板抗体的本质和靶抗原的研究日益深入,HPA的生化特性及其遗传学多态性逐渐被揭示,血小板血型的研究从血清学方法发展到分子免疫学方法,为血小板抗体的检测及其膜糖蛋白分析提供了新的检验技术,对研究手段的完善以及疾病的诊断具有重要的临床意义.如何提高血小板抗体检测技术将成为输血与检验医学今后的研究重点.我们就上述方面的技术进展作一综述.
-
微流控浓度梯度芯片在肺癌耐药性研究中的应用
微流控芯片系统是20世纪末开发的一种高效的微分析系统,可将样品制备、液体分离、生物与化学反应检测、细胞培养及蛋白分析等研究手段集成,具有高通量检测的特点,近年来已逐渐应用于化学、药物筛选及环境检测等多个领域,但在医学及分子生物学研究中的应用较少.本研究中利用该微流控芯片系统对人肺鳞状细胞癌细胞内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在肺癌对化疗耐药中的作用进行分析.
-
宫颈癌组织ATM和DNA-PKcs表达与放疗敏感性及预后关系研究
放射线是通过导致细胞DNA双链断裂(DNA-double strand breaks,DSB)来起到杀死肿瘤细胞的作用,细胞被照射后DNA损伤修复能力是影响肿瘤放射敏感性的主要因素.笔者选择DSB修复通路中毛细血管扩张性共济失调症突变(ataxia telangiectasia mutated,ATM)、DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)两个主要蛋白分析在不同放疗敏感性宫颈癌中的表达差异,初步探明其与宫颈癌放疗敏感性的关系.
-
质谱在肽和蛋白分析中的应用
质谱已成为肽和蛋白分析的重要工具,主要归功于一些软电离技术的应用,如电喷雾(ESI)和基体辅助激光解吸电离(MALDI).生物大分子多为极性、难挥发化合物,不易气化,用传统质谱无法测定.但随着新的离子化技术的广泛应用,现已能高效地电离一些完整或片断的大分子生物聚合物,从而进行质谱测定.本文对质谱在肽和蛋白分析的几个领域中的应用进展进行评述.
关键词: 质谱 软电离技术 电喷雾 基体辅助激光解吸电离技术 蛋白分析 -
肾病综合征患者血清蛋白及血脂类检测的价值
本研究对我院2005-2006年住院的80例肾病综合征患者进行血清蛋白分析和部分脂类的检测分析,同时对50名健康成人进行同类分析,结果报告如下.
-
补肾法对激素干预成骨样细胞作用的差异蛋白分析
背景:中医"肾主骨"理论治疗激素性股骨头坏死足否对成骨细胞的蛋白表达变化起调节作用尚不清楚.目的:实验拟观察地塞米松对成骨样细胞的损伤及六味地黄丸的治疗作用机制,从蛋白水平观察激素引起成骨样细胞凋亡和中药对凋亡细胞保护作用的蛋白表达变化.设计、时间及地点:对比观察,于2005-06/2007-12存广州中医药大学分子生物实验室完成.材料:新西兰兔20只,雌雄各半,体质量(2.0±0.5)kg.方法:制备六味地黄丸含药血清,通过OS-732细胞增殖实验及碱件磷酸酶活性测定及引起OS-732细胞凋亡的实验分别筛选出中药及地塞米松的佳剂量用于实验.实验分组:正常组用含体积分数为0.1小牛的RPMI 1640培养液培养3 d;模型组用高浓度(10-7 mmol/L)地塞米松培养3 d;治疗组在高浓度(10-7mmol/L)地塞米松培养2 d后加入100g/L中剂量六味地黄丸含药血清3 d.主要观察指标:提取正常组、模型组和治疗组OS-732细胞总蛋向的双向电泳图谱,对差异蛋白点进行分析.结果:模型组有7个蛋白表达下降,其中SSP1005、SSP2301、SSP3202和SSP6501 4个点为明显.SSP5604点蛋白不发生表达;治疗组对上述7个点的表达均有不同程度的增强,SSP5604点明显增强.结论:糖皮质激素作用可以使成骨样细胞某些蛋白表达减弱,从而造成成骨样细胞凋亡;补肾中药町改善激素作用下 OS-732细胞的蛋白表达变化,其作用是多靶点的.
-
肝移植后胆道铸型4例全蛋白质的表达
背景:肝移植后胆道铸型综合征的胆道铸型形成机制尚未彻底被阐明,因此胆道铸型中是否存在一些和其形成有关或对铸型形成有预警作用的蛋白质还不清楚.目的:了解肝移植后胆道铸型综合征患者胆道铸型中全蛋白质表达情况,总结其规律.方法:武警总医院肝移植研究所实施肝移植患者4例,于移植后3个月经T管窦道行纤维胆道镜检查治疗时取出胆道铸型,将4种不同颜色质地的胆道铸型深低温保存,经过蛋白质提取、酶切,后经高解析离子淌度质谱仪鉴定并经MASCOT数据库查询,得出每份标本的全蛋白质名称.比较4份标本的差异,找出共同的蛋白质.结果与结论:通过检测及查询4份标本分别包含82、44、56及65种蛋白质,经比对分析,重叠4份标本的共同蛋白质13种,除此外,重叠3份标本的蛋白质7种、重叠2份标本的蛋白质5种.重叠4份标本共同蛋白质中已命名蛋白质8种,未命名蛋白质5种,命名蛋白质包括:α-纤维蛋白原前体、β-纤维蛋白原前体、纤维蛋白原γ链、载脂蛋白A链、人组织蛋白酶G、钙结合蛋白A9和乳铁蛋白等.证实胆道铸型中确实存在蛋白质,4例胆道铸型的共同蛋白质揭示了胆道铸型的形成与胆道上皮受损后的胆道渗出性炎症(纤维蛋白渗出)有关:一些蛋白质有可能作为预警胆道铸型综合征的出现、判定胆道上皮受损后胆道炎症程度及胆道铸型综合征预后的标记物.
-
血浆和尿液中免疫球蛋白分析在浆细胞病诊断中的意义
免疫球蛋白是机体中一种正常成份,在血浆中保持一定浓度,尿中也有微量存在.免疫球蛋白分五种,即IgA、IgG、IgM、IgD和IgE,血浆中IgG含量高(约12g/L左右),IgE含量低(约0.0003g/L),而尿液中只有微量IgG,其它免疫球蛋白几乎测不出来,只有在肾脏损伤时或免疫球蛋白增殖病时,可在尿中大量出现某种免疫球蛋白.血液中免疫球蛋白定量是一个极有价值的检查,结合尿液中免疫球蛋白分析对许多疾病具有直接诊断意义.
-
大鼠龈沟液吸潮纸尖采集方法的建立及其评价
目的:建立并评价大鼠龈沟液(GCF)吸潮纸尖采集方法,为大鼠龈沟液分析奠定基础。方法:选取健康雄性大鼠20只,随机分为 GCF组和唾液组,每组各10只。15#吸潮纸尖分别采集 GCF组大鼠右上第一磨牙腭侧龈沟内液体和唾液组大鼠唾液。样本离心后进行 SDS-PAGE分析及蛋白丰度检测,分析2组样本的蛋白成分。结果:GCF组样本电泳结果可见相对分子质量约为77000、66000、55000、51000和28000等的蛋白质条带,尤以66000处条带亮度高。唾液组样本在相对分子质量约为66000、60000和48000附近隐约可见蛋白质条带,条带亮度较低。2组样本66000条带处蛋白丰度值比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GCF组样本的蛋白条带数量以及种类不同于唾液组样本,证明本实验利用15#吸潮纸尖袋内多次取样法可排除唾液、血液干扰,成功采集大鼠 GCF。
-
蛋白免疫印迹法同时检测大、小分子蛋白的实验条件改进
目的:蛋白免疫印迹法是现代生物医学研究中广泛应用于蛋白定性和半定量分析的实验技术.然而,常规采用传统单一浓度凝胶的蛋白免疫印迹法在应用过程中仍有不足之处,如不能同时检测分子量很大和很小的蛋白,因而有必要探索一种增大凝胶有效分离范围的检测方法.本文提出采用组合凝胶来实现更大范围分子量蛋白的同时检测.方法:比较双浓度的组合凝胶与单一浓度凝胶的分离范围以及分析采用组合凝胶,蛋白免疫印迹法对大、小分子蛋白的检测效果.结果:12%/7.5%组合凝胶和15%/7.5%组合凝胶的分离范围显著大于相应的单一浓度凝胶.通过12%/7.5%组合凝胶,蛋白免疫印迹法同时检测到15-300 kDa范围内的大、小分子蛋白.结论:组合凝胶有助于蛋白免疫印迹法对分子量相差很大的蛋白进行同时检测分析,具有很强的实用性.
-
乙型病毒性肝炎血清蛋白分析及其临床意义
血清中不少蛋白成分是在肝内制造,参与机体代谢和免疫.乙型病毒性肝炎病程较长,因肝功能损害影响血浆蛋白的代谢而使血清浓度有所改变.近年来国外对肝病血清蛋白检测的报告不少[1~3],然专门检测乙型病毒性肝炎者不多,国内开展尚少.我们对1984年2~4月入院的不同病期的乙型病毒性肝炎66例以及HBsAg阴性急性肝炎患者10例与正常成人62例作对照,选择与肝病有关的血清蛋白成分补体O3(O3)、补体O4(O4)、а1-抗胰蛋白酶(а1-AT)、а2-巨球蛋白а2-M)、血浆铜蓝蛋白Op)和转铁蛋白(Tf)进行检测,并探讨其临床意义报告如下.
-
泌尿系草酸钙结石蛋白分析
目的 研究泌尿系草酸钙结石蛋白成分特点,为后续进一步探索蛋白质在结石形成中的作用机制奠定基础.方法 随机收集临床结石样本20例,采用结石红外光谱分析仪分析结石组成成分;收集对应患者尿液进行尿液分析及细菌培养.采用RIPA蛋白裂解液溶解结石内蛋白成分,通过冷冻干燥浓缩提取结石内蛋白.采用细菌蛋白质提取试剂盒提取大肠杆菌蛋白.应用Bradford法测定蛋白浓度,再通过SDS-SPAGE电泳纯化蛋白,银染染色和考马斯亮蓝染色分别鉴定结石和大肠杆菌内蛋白分子量大小,进行蛋白比对.通过胶内酶解后抽提肽段,经液相色谱仪和质谱仪鉴定蛋白质成份,对质谱结果进行Gene Ontology等生物功能信息分析.结果 ⑴草酸钙结石平均蛋白浓度为0.57μg/μL.存在泌尿道感染时的草酸钙结石内蛋白含量相对较高(P<0.05).大肠杆菌蛋白浓度为5.38μg/μL.⑵SDS-PAGE电泳结果显示草酸钙结石内蛋白有3至4条蛋白带,主要集中在25.0-35.0KDa和66.2-116.0KDa;大肠杆菌的蛋白条带主要集中在35.0KDa-116.0KDa.蛋白条带图谱提示草酸钙结石与大肠杆菌内蛋白质成份具有重叠性.⑶蛋白质谱分析显示草酸钙结石内有88种蛋白成分,以结合功能蛋白为主;其中包括S100A8、S100A9、纤维连接蛋白、角蛋白等炎症相关蛋白.结论 泌尿系草酸钙结石内蛋白成分复杂,不仅与大肠杆菌蛋白成分存在交叉,而且有炎症相关蛋白,提示草酸钙结石形成与尿路感染存在关联,结石内炎症性蛋白成分在结石形成过程中的作用有待深入研究.
-
肾病患者血清蛋白及血脂类的实验室检测
肾病又称为肾病综合征(mephritic syndrome),凡能引起肾小球毛细血管滤过膜损伤的各种疾病,均可发生肾病综合征[1].它不是一组独立的疾病而是许多疾病过程中损伤了肾小球毛细血管滤过膜的通透性而发生的一个综合症状.本文为探讨该病在实验室的佳检测综合指标,对来我院住院的80名患者进行血清蛋白分析和部分脂类的检测分析,同时对50名健康成人进行同类分析,现将结果报告如下:
-
毛细管电泳在脂蛋白分析中的应用
电泳法用于脂蛋白分析可追溯到1965年,Lee和Fredrickson用纸上电泳第一次成功分离了血浆脂蛋白[1],为高脂血症分型提供了依据,也有助于临床选择治疗方案.常用的分析方法可将脂蛋白分为几大类:高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL).
-
023 血清蛋白分析检测早期肿瘤
-
一个新的遗传性非息肉性大肠癌突变位点及其蛋白分析
目的:筛查一个遗传性非息肉性大肠癌(HNPCC)家系的MLH1基因突变并进行突变位点与蛋白质结构功能分析。方法:提取样本 cDNA 后进行 MLH1、MSH2基因外显子测序;利用 PolyPhen-2、Anthe_2000、swiss model PDB viewer 等工具进行突变位点与蛋白质结构功能分析。结果:检出MLH1基因c. C350T,p. Thr117Met的新突变;分析得出突变型蛋白的疏水性有所升高;突变型蛋白结构突变处侧链缺失,该位点氨基酸与相邻氨基酸形成的氢键也发生了变化。结论:该家系位点突变可能造成MLH1蛋白结构功能发生改变,从而导致HNPCC的发生。
关键词: 遗传性非息肉性大肠癌 基因突变 蛋白分析 -
SPR-微流控芯片技术在医学研究中的应用
SPR-微流控芯片技术已经成为21世纪为重要的前沿技术之一,现已广泛应用于生物医学领域.对比传统的研究方法,微流控技术具有微量、快速、自动、可控的特点;SPR技术具有非标记、灵敏、实时、定量检测的特点.它们相结合将具有高灵敏度、高通量、非标记、样品和试剂耗量小等优点,它们的综合应用将会改变现代生物医学研究的格局.SPR-微流控芯片在医学方面的研究取得巨大成就,本文将在细胞、基因、蛋白质、小分子与小离子检测等方面进行综述.
-
血浆(清)超敏C-反应蛋白分析临床应用及其局限性
近年来对血浆C-反应蛋白(CRP)和患心血管疾病危险度的关系研究明显增加,明确了CRP是与急性感染和组织损伤等有密切关系的主要急性相蛋白,是评价机体损伤的总体量化指标,CRP和其他有关的指标如血脂、心肌酶谱、cTnI、Mb、CK-MB、纤维蛋白原、血清淀粉样蛋白A等结果表明CRP是更敏感的参考指标,是冠心病形成的危险因子,血浆中CRP水平与冠心病的严重程度相关,可作为心血管病的检测项目之一,并可作为冠心病患者预后判断的指标.然而,个体间血浆CRP浓度的变化极大,如果仅仅根据血浆CRP测定很可能导致心血管疾病危险度的错误划分,即使重复测定也不能解决这个问题[1~3].