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乌司他丁对心肺复苏后大鼠肠屏障的保护作用
目的 探讨乌司他丁对心肺复苏后大鼠受损的肠屏障是否有保护作用及其可能机制.方法 21只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为3组:对照组(sham组=7)、心肺复苏组(CPR组=7)和乌司他丁组(ulinastatin,UTI组=7),戊巴比妥钠(45～ 60 mg/kg).腹腔注射麻醉,sham组大鼠麻醉后只行动静脉插管,不经历心搏骤停复苏;CPR组大鼠插管后用致颤法导致心搏呼吸骤停,8 min后行心肺复苏,开始实验前2h经尾静脉注射与UTI组等量的无菌生理盐水,而UTI组大鼠注射UTI(100 000 U/kg),余程序同CPR组.在复苏成功后48 h大鼠心脏取血测定TNF-α和IL-1β的质量浓度,留取回肠标本行肠黏膜电镜观察、肠黏膜TUNEL染色及western blot监测caspase-3的蛋白水平.结果 CPR组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的质量浓度明显升高(与sham组比较,P＜0.01;与UTI组比较,P＜0.05);UTI组较sham组高,但明显低于CPR组(P＜0.05).电镜下观察到CPR组肠黏膜上皮细胞间紧密连接明显开放增宽,UTI组开放增宽不明显,sham组成正常形态;sham组未见明显肠黏膜上皮细胞凋亡,CPR组凋亡明显,UTI组黏膜上皮细胞凋亡较CPR组明显减轻;UTI组caspase-3表达较sham组高,但较CPR组低(均P＜0.05).结论 乌司他丁可以减少心肺复苏后大鼠血液中促炎介质的释放,降低肠黏膜caspase-3的表达,减轻肠上皮细胞的凋亡,对心肺复苏后大鼠受损的肠屏障有保护作用.
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影响脓毒症受损肠黏膜修复的机制
目的 探讨影响脓毒症肠黏膜损害后修复的因素。方法 采用肓肠结扎穿孔(CLP)所致脓毒症模型，分别以CLP后6，24，48 h不同时间段观测肠黏膜损伤程度和修复过程，前者包括形态学观察及细胞凋亡的测定，后者包括肠黏膜修复的杯状细胞变化、黏膜肠三叶因子3(TFF3)、转化生长因子β1(TGF-β1)以及TNF-α、IL-1含量。结果 形态学观察显示肠黏膜呈持续损害状态，6h的损害积分明显小于24h，48 h组(P＜0.05)，后两组之间差异无统计学意义(P＞0.05)；磷酸化caspase-3蛋白在3组均高于sham组4倍以上；黏膜IL-1，TNF-α含量明显高于sham组3～4倍，其中24h及48 h组明显高于6h组。肠黏膜的修复过程不明显，损伤黏膜未见到明显的杯状细胞积聚；TFF3在6h组轻度增高，24h及48 h组表达下降；杯状细胞数量在CLP的3个组明显减少；TGF-β1在6h组增高，其他两组均接近于sham组。结论 严重脓毒症肠黏膜持续的高炎症状态、杯状细胞功能以及黏膜重建能力下降，影响了受损肠屏障的修复。
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超声引导下兔肝脏VX_2肿瘤射频消融治疗术后残存瘤组织中caspase-9表达变化的意义
目的 探讨兔肝脏VX_2肿瘤射频消融治疗术后残余瘤组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)表达变化的意义.方法 制备兔肝脏VX_2肿瘤动物模型,经超声引导下行射频消融术(RFA)治疗,人为造成肿瘤组织残余,应用免疫组化方法检测治疗后兔肝VX_2肿瘤残余瘤组织中caspase-9的表达情况.结果 射频消融治疗术前caspase-9在兔肝脏VX_2肿瘤组织中呈低表达,为(9.6±5.3)%,治疗后即刻组残存瘤组织中的阳性表达率为(13.6±9.8)%;治疗1周后caspase-9于残存瘤组织中的阳性表达率为(46.8±12.8)%;治疗2周后的阳性表达率为(76.7±15.5)%.结论 射频消融术可以诱导兔肝VX2肿瘤残余瘤组织中的肿瘤细胞凋亡,从而起到进一步的治疗作用.
关键词： VX_2肿瘤 射频消融 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 细胞凋亡 -
姜黄素对脓毒症大鼠肝细胞线粒体膜通透性转换的作用机制研究
目的 研究线粒体膜通透性转换(MPT)与肝细胞凋亡及线粒体损伤之间的关系,初步探讨姜黄素对MPT的影响及其可能机制.方法 将15只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组及姜黄素组,每组5只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型;假手术组仅开腹翻动盲肠,不进行结扎、穿孔.姜黄素组术前以100 mg·kg-1·d-1姜黄素溶于生理盐水至10 mL/kg,连续灌胃7d,其余组灌胃等量生理盐水.术后12h取肝组织,透射电镜下观察肝细胞线粒体形态学改变;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测细胞内游离Ca2+浓度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞活化caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达.结果 透射电镜下观察假手术组细胞膜完整,胞质均匀,线粒体正常、清晰;脓毒症组肝细胞线粒体明显肿胀,内膜嵴断裂或消失,双层膜结构消失;姜黄素组线粒体轻度肿胀,少数细胞出现线粒体肿胀,双侧膜结构不清.假手术组、姜黄素组、脓毒症组荧光强度指数依次增高,分别为417.33±15.88、772.95±42.37、1 560.84±160.78 (F=184.149,P=0.000).脓毒症组活化caspase-3和Bax的蛋白及mRNA表达高,姜黄素组次之,假手术组低[活化caspase-3蛋白(灰度值):1.698±0.061、0.694±0.045、0.246±0.027,F=1 289.667,P=0.000;活化caspase-3 mRNA(2-ΔΔα):1.031±0.135、0.578±0.144、0.183±0.036,F=66.958,P=0.000; Bax蛋白(灰度值):1.826±0.126、1.254±0.140、0.623±0.901,F=94.536,P=0.000; Bax mRNA(2-△△Ct):2.774±0.338、1.661±0.226、0.656±0.114,F=124.710,P=0.000],且各组间两两比较差异均有统计学意义(均P＜0.01);而假手术组、脓毒症组、姜黄素组Bcl-2的蛋白及mRNA表达依次升高[Bcl-2蛋白(灰度值):0.716±0.091、1.328±0.147、1.656±0.104,F=84.918,P=0.000; Bcl-2 mRNA(2△△Ct):0.617±0.118、1.393±0.096、1.650±0.167,F=83.846,P=0.000].脓毒症组Bcl-2/Bax的蛋白及mRNA表达低,假手术组次之,姜黄素组高[Bcl-2/Bax蛋白(灰度值):0.726±0.055、1.150±0.043、1.333±0.163,F=46.265,P=0.000; Bcl-2/Bax mRNA(2-ΔΔCt):0.505±0.041、0.944±0.097、1.006±0.168,F=12.211,P=0.001].结论 MPT可导致线粒体功能损伤,并进一步引起肝细胞凋亡;姜黄素通过降低细胞内Ca+浓度、促进抗凋亡基因Bcl-2表达以及抑制caspase-3活化和Bax基因表达,从而发挥调节MPT的作用.
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早期百草枯中毒大鼠的急性肝损伤研究
目的 探讨百草枯中毒大鼠肝细胞凋亡、炎症因子表达情况及其发生机制.方法 按随机数字表法将40只Wistar大鼠分为对照组(n=8)与模型组(n=32).模型组腹腔注射20％百草枯浓缩液30 mg/kg;对照组则给予等量生理盐水.制模后0.5、1、3、7d分别处死8只大鼠,收集下腔静脉血及肝组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-1β、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和p53的mRNA表达;采用底物显色法检测3d时肝组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3、-8、-9、-12)的活性;经苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肝组织病理学改变.结果 模型组肝组织出现碎片状坏死、毛细血管扩张、炎性细胞广泛浸润等现象,且随时间延长明显加重.模型组0.5 d时血清IL-1β、TNF-α水平即明显高于对照组[IL-1β(ng/L):220.13±69.74比0.14±0.03,TNF-α(ng/L):102.66±26.43比0.16±0.02,P＜0.01和P＜0.05],分别于3d、1d时达高峰[IL-1β:(423.72±153.11) ng/L,TNF-α:(690.35±229.64) ng/L],随后均逐渐降低,7d时仍明显高于对照组[IL-1β:(357.47±87.28) ng/L,TNF-α:(12.39±5.06) ng/L,均P＜ 0.05].模型组肝组织IL-1β、TNF-α和iNOS的mRNA表达均较对照组明显升高,其峰值分别出现在1d、1d、3d时[IL-1β mRNA(灰度值):1.569±0.057比0.123±0.016,TNF-α mRNA(灰度值):0.683±0.077比0.261±0.025,iNOS mRNA(灰度值):3.259±0.135比0.002±0.001,P＜0.05或P＜0.01].模型组早期p53 mRNA表达与对照组无差异,均为低表达,染毒7d时p53 mRNA表达显著增高(灰度值:2.959±0.086比0.263±0.032,P＜0.01).模型组3d时肝组织caspase活性(pmol/mg)显著高于对照组(caspase-3:857.25±309.26比169.73±48.21,caspase-8:199.18±61.41比32.26±11.09,caspase-9:321.62±80.73比90.38±29.76,caspase-12:413.13±89.77比26.73±9.86,均P＜0.01).结论 百草枯中毒可导致大鼠发生急性肝损伤,caspase-3、-8、-9、-12活性显著增强;肝损伤的发生与TNF-α、iNOS和p53基因早期高表达有密切关系.
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蕨麻正丁醇提取部位对小鼠急性缺血心肌caspase-9/3 mRNA表达的影响
目的 观察蕨麻正丁醇提取部位(NP)对垂体后叶素致小鼠急性心肌缺血后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9/3(caspase-9/3)mRNA表达的影响.方法 90只雌性昆明种小鼠被随机分为正常对照组、缺血模型组、复方丹参组和NP高、中、低剂量组,每组15只.各组连续灌胃NP浸膏羧甲基纤维素钠溶解物25 d,于末次给药1 h后用腹腔注射垂体后叶素(20 U/kg)建立小鼠急性心肌缺血模型.监测制模前后心电图Ⅱ导联J点变化;测定血清乳酸脱氢酶(LDH)活性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织caspase-9/3的mRNA表达.结果 复方丹参组和NP高、中、低剂量组缺血所致心电图J点的上移均较缺血模型组显著降低((0.100±0.055)、(0.105±0.038)、(0.111±0.034)、(0.145±0.016)mV比(0.223±0.043)mV,P均<0.01],复方丹参组及NP高、中剂量组可显著降低缺血损伤小鼠血清LDH活性((4 277.160±878.327)、(2 650.129±917.367)、(4 752.069±765.974)U/L比(5 769.319±826.513)U/L,P均<0.01].复方丹参组和NP高、中、低剂量组小鼠心肌caspase-9 mRNA表达均较缺血模型组显著下调(0.461±0.103、0.227±0.056、0.435±0.089、0.876±0.094比1.341±0.102,P均<0.01);正常对照组、复方丹参组及NP高剂量组小鼠心肌caspase-3 mRNA表达呈阴性,而缺血模型组及NP中、低剂量组表达明显.结论 NP具有对抗急性心肌缺血损伤的作用,其机制可能与抑制凋亡相关基因caspase-9/3的表达有关.
关键词： 蕨麻 心肌缺血 垂体后叶素 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -
CD4+CD25+调节性T细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3/9活性改变及其与凋亡的关系
目的 探讨脓毒症时CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3/9(caspase-3/9)活性变化及其与激活诱导细胞凋亡的关系.方法 体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,随机分为对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+脂多糖(LPS)组,培养3 d后采用流式细胞术检测Treg凋亡率,荧光比色法检测caspase-3/9活性.同时采用盲肠结穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,将动物随机分为正常对照组、假手术组、CLP组,于第3日分离Treg后检测Treg凋亡率和caspase-3/9活性.结果 体外实验显示,抗CD3/CD28组和抗CD3/CD28+LPS组CD4+CD25+Treg凋亡率均显著高于对照组(P均<0.01),而抗CD3/CD28+LPS组Treg凋亡率明显低于抗CD3/CD28组(P<0.05).抗CD3/CD28组caspase-3/9活性均显著高于对照组(P均<0.01);抗CD3/CD28+LPS组caspase-3/9活性则明显低于抗CD3/CD28组(P均<0.01).体内实验显示,CLP组CD4+CD25+Treg凋亡率和caspase-3活性均显著低于正常对照组和假手术组(P均<0.01),但caspase-9活性改变不明显(P均>0.05).结论 脓毒症病理过程中CD4+CD25+Treg凋亡率明显下降,caspase-3激活是诱发Treg凋亡的重要途径之一.
关键词： 脓毒症 脂多糖 调节性T细胞 细胞凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -
阿尔茨海默病炎性反应机制的研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是目前常见的痴呆类型,约占痴呆总数的50％～70％.流行病学调查显示,在发达国家,这种年龄相关的神经退行性病变已成为威胁至少2 500万人口健康的主要问题,并且,在未来的20 ～ 25年,全世界范围内可能有7 500万人口受累[1].关于AD的发病机制,目前存在多种假说,其中β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)瀑布假说影响较广泛.
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依托咪酯乳剂对老年大鼠海马神经元凋亡及突触素表达的影响
目的 观察腹腔注射依托咪酯乳剂对老年大鼠海马神经元突触素表达的影响. 方法 选择18月龄的SD大鼠45只,用完全随机分组法分为3组(每组15只):生理盐水组(N组)、依托咪酯组(E组)、脂肪乳组(L组).实验第1～3天,E组腹腔注射依托咪酯(乳剂)20 mg/kg,L组腹腔注射20％脂肪乳20 mg/kg,N组腹腔注射同等体积的生理盐水,每天1次,连续3d.实验第4天,处死大鼠,取右侧脑海马组织,固定,石蜡切片,进行细胞凋亡TUNEL检验、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)Western blot检测及突触素免疫组化检验. 结果 TUNEL结果:海马CA1区神经元凋亡,与N组、L组比较,E组海马神经元凋亡细胞及凋亡指数无明显增加,差异无统计学意义(P＞0.05).caspase-3表达结果:海马CA1区神经元caspase-3表达,与N组、L组比较,E组海马神经元活化caspase-3片段表达无明显增加,差异无统计学意义(P＞0.05).突触素结果:海马CA1区神经元突触素表达,与N组、L组比较,E组海马含突触素的神经元个数无明显减少,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 腹腔注射依托咪酯乳剂20 mg/kg对老年大鼠海马神经元的凋亡及突触素的表达无明显影响.
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寻常性银屑病皮损表皮Dsg1 mRNA的表达
银屑病特征性的病理改变不仅与角质形成细胞(KC)异常增殖有关,也与KC凋亡异常有关[1-2].凋亡是由天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族(caspase)成员介导的蛋白酶级联反应过程,其中caspase-3是主要的凋亡效应分子.桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)是caspase底物蛋白.我们采用RT-PCR方法从mRNA水平检测Dsg1与caspase-3在银屑病皮损中的表达,以探讨Dsg1在银屑病皮损表皮KC凋亡中的作用.
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硫化氢对脂多糖诱导的大鼠肺组织细胞凋亡的影响
目的 探讨硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡的影响.方法 ♂ SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只:空白对照组、LPS组、LPS+NaHS低剂量组、LPS+NaHS中剂量组、LPS+NaHS高低剂量组和LPS+PPG组.LPS组、LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组舌下静脉注射LPS(5 mg·kg-1),空白对照组注射等容量的生理盐水.LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组在注射LPS 3 h时腹腔分别注射低、中、高剂量的氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG),空白对照组和LPS组腹腔注射等容量生理盐水.各组大鼠均在舌下静脉注射LPS或生理盐水6 h后处死,取肺组织.应用流式细胞学技术检测各组大鼠肺组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肺组织Bcl-2和Bax的表达,Western blot检测肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3和9(Caspase-3、9)的蛋白表达.结果 LPS组与空白对照组比较肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2蛋白表达明显减弱,Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2/ Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01).与LPS组比较,LPS+NaHS中、高剂量组肺组织细胞凋亡率明显降低,LPS+NaHS高剂量组Bcl-2阳性细胞表达明显增强,LPS+NaHS中、高剂量组Bax阳性细胞表达明显减弱,LPS+NaHS低、中、高剂量组Bcl-2/Bax比值明显增加,LPS+NaHS高剂量组Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显减弱(P<0.05或P<0.01).与LPS组比较,LPS+PPG组肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2阳性细胞表达明显减弱,Bax阳性细胞表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01).结论 LPS诱导的ALI早期肺组织细胞凋亡增加,给予外源性H2S可减少肺组织细胞凋亡,可能与通过下调Bax、Caspase-3、9蛋白表达和上调 Bcl-2蛋白表达有关.
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全反式维甲酸诱导A549细胞凋亡机制的初步探讨
目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法观察ATRA对肺癌细胞株A549的生长抑制作用,流式细胞仪观察ATRA诱导A549细胞凋亡作用和对细胞周期的影响,Western Blot分析凋亡相关蛋白表达.结果 ATRA抑制A549的增殖呈剂量依赖性;ATRA可诱导A549细胞凋亡,凋亡过程伴随caspase-3、caspase-9表达增加,而Bcl-2、Bcl-Xs/LP的表达无明显变化.结论 ATRA可明显抑制A549细胞的增殖,可通过上调caspase-9、caspase-3的表达促进A549细胞凋亡.
关键词： 全反式维甲酸 A549细胞 细胞凋亡 流式细胞仪 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -
乳腺浸润性导管癌中CasPase-3、OPN和Ezrin蛋白的表达及临床意义
目的 探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、骨桥蛋白(OPN)和埃兹蛋白(Ezrin)在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达及其与临床病理因素的关系.方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测71例术中切除的原发性乳腺IDC和33例距癌灶约5 cm处正常乳腺组织中Caspase-3、OPN 和Ezrin的表达,分析3种蛋白间及其与乳腺IDC病理特征的关系.结果 乳腺IDC组Caspase-3、OPN及Ezrin 的阳性表达率分别为43.66%、74.65%、64.79%,正常乳腺组织对照组Caspase-3、OPN及Ezrin阳性表达率分别为75.76%、33.33%、39.39%,3指标在两组间表达差异均有统计学意义(P＜0.05);在IDC组,3种蛋白的表达与乳腺IDC的淋巴结转移及肿瘤复发相关;Caspase-3、OPN及Ezrin蛋白的表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及原癌基因人类表皮生长因子受体2(Her-2)的表达无明显相关性;Caspase-3与OPN、Ezrin的表达呈负相关(r=-0.258、-0.313),OPN与Ezrin的表达呈正相关(r=0.29).结论 乳腺浸润性导管癌中Caspase-3、OPN、Ezrin 3种蛋白的异常表达在其发生、发展中可能起着重要的作用.
关键词： 乳腺肿瘤 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 骨桥蛋白 埃兹蛋白 -
MPA与DDP联用对卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP体外侵袭作用的影响
目的 探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)与顺铂(DDP)联用对人卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP体外侵袭能力的影响及其机制.方法 CoC1/cDDP细胞分别加入不同浓度的DDP、MPA及MPA+DDP培养,Borden小室检测CoC1/cDDP侵袭能力;流式细胞仪检测G1期细胞及凋亡细胞,半定量RT-PCR法检测CoC1/cDDP细胞生存素(survivin)-ΔEx3mRNA及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA表达.结果 经10μg/ml的DDP作用48 h,CoC1/cDDP细胞的侵袭能力、凋亡率、survivin-ΔEx3 mRNA及Caspase-3 mRNA表达较对照组均无明显变化(P＞0.05);增加DDP浓度至20μg/ml或加用MPA后,细胞侵袭能力明显受到抑制、凋亡率增加、survivin-ΔEx3 mRNA表达下降(P＜0.05),而Caspase-3 mRNA表达增加(P＜0.01),这些变化与MPA呈剂量效应关系(P＜0.05).结论 MPA具有较强的逆转CoCL/cDDP细胞对DDP的耐药作用,CoC1/cDDP的体外侵袭作用受抑制的机理与survivin-ΔEx3 mRNA下调及Caspase-3 mRNA上调有关.
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甘草酸对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制探讨
目的 观察甘草酸对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及甘草酸低、中、高剂量组5组,各10只.后四组制备缺血/再灌注大鼠模型,假手术组只穿线不结扎左冠状动脉降支,甘草酸低、中、高剂量组在缺血前半小时分别于股静脉注射30、60、90 mg/kg的甘草酸,假手术组与模型组注射同体积生理盐水.取各组心肌组织,采用TUNEL染色法测算心肌细胞凋亡率,Westernblotting法检测MKK/JNK信号通路蛋白[丝分裂原活化蛋白激酶4/7(MKK4/7)、c-Jun氨基末端激酶1/2/3(JNK1/2/3)、磷酸化MKK4/7(p-MKK4/7)、磷酸化JNK1/2/3(p-JNK1/2/3)]及凋亡相关蛋白[天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)8、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3]的表达,同时观察心肌组织病理改变情况.结果 与假手术组相比,模型组细胞凋亡率高,p-MKK4/7、p-JNK1/2/3、Caspase-8、Bax、Caspase-3表达高而Bcl-2表达低(P均＜0.05).与模型组相比,甘草酸中剂量组及甘草酸高剂量组细胞凋亡率低,p-MKK4/7、pqNK1/2/3、Caspase-8、Bax、Caspase-3表达低而Bcl-2表达高(P均＜0.05).模型组较假手术组大鼠心肌组织中出现较多变性坏死心肌细胞,有较多炎性细胞浸润;甘草酸低、中、高剂量组较模型组心肌细胞水肿程度轻且炎性细胞少.结论 甘草酸可减少缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织损伤;其机制可能为抑制MKK/JNK信号通路中MKK4/7和JNK1/2/3磷酸化,降低Caspase-8、Bax、Caspase-3表达,升高Bcl-2表达.
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番茄红素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及脑组织 caspase-3表达的影响
目的：观察番茄红素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及脑组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）-3表达的影响。方法选择雄性SD大鼠36只，利用线栓法制备SD大鼠大脑中动脉缺血模型，模型制备成功后随机分为3组各12只，对照组以羧甲基纤维素钠溶液灌胃，番茄红素组以40 mg/kg番茄红素（羧甲基纤维素钠悬溶）灌胃，银杏叶片组以40 mg/kg银杏叶片（羧甲基纤维素钠悬溶）灌胃，共14 d。按照Bederson6级5分评分标准评估各组大鼠神经行为学，显微镜下观察大鼠脑组织形态结构，Western blotting法检测脑组织caspase-3。结果番茄红素组、银杏叶片组、对照组干预14 d神经功能缺损程度评分分别为（2．25±0．17）、（2．04±0．28）、（3．76±0．42）分，番茄红素组、银杏叶片组与对照组比较，P均＜0．05。对照组神经组织大片坏死，周围残存组织结构不完整，神经细胞水肿明显，大量空泡形成；番茄红素组与银杏叶片组神经组织结构明显改善、坏死区域缩小，梗死灶周围残存组织较多。番茄红素组、银杏叶片组、对照组caspase-3相对表达值分别为0．2、0．15、1，番茄红素组、银杏叶片组与对照组比较，P均＜0．05。结论番茄红素对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用，且能引起脑组织caspase-3表达下调。
关键词： 番茄红素 脑缺血再灌注损伤 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -
天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活化在喜树碱诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用
目的:探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)活化,在DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡中的作用.方法:将体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CPT处理,用流式细胞仪检测处理前及处理后24、36、48h等不同时段细胞凋亡的变化,用蛋白免疫印迹方法检测CPT处理后不同时间段caspase-9和caspase-3活性的改变.结果:CPT处理膀胱RT4和MGH细胞后,细胞凋亡率明显上升,且CPT诱导的膀胱癌凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性.同时还可以观察到凋亡执行蛋白caspase-9和caspase-3的活化.结论:CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡,其中caspase-9启动的凋亡内源性途径即线粒体途径可能参与了CPT诱导的膀胱癌细胞的凋亡.
关键词： 喜树碱 膀胱肿瘤 细胞凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -
大黄素对急性胰腺炎大鼠中性粒细胞凋亡的影响
目的 探讨大黄素对不同类型急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠中性粒细胞(polymorphonu-clear neutrophil,PMN)凋亡的影响及其可能机制.方法 制作大鼠急性水肿型胰腺炎(acute edematous Pancreatitis,AEP)与急性坏死型胰腺炎(acute necrotic pancreatitis,ANP)模型,使用大黄素进行治疗.采用流式细胞仪检测,蛋白质免疫印迹法等技术,观察各型AP大鼠模型PMN凋亡率及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3、capase-8)表达水平变化情况.结果 大黄素治疗组PMN凋亡率及PMN表达caspase-3、caspase-8水平较同型AP组明显增加(P均＜0.05);各AP组PMN凋亡率与capase-3、capase-8表达变化呈显著正相关(P＜0.05).结论 大黄素可能通过caspase途径来诱导AP中性细胞凋亡.
关键词： 急性胰腺炎 大黄素 凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -
内质网应激凋亡相关基因 mRNA 在矽肺患者肺泡巨噬细胞表达研究
目的：探讨矽肺患者肺泡巨噬细胞（ AM）中内质网应激（ ERS）凋亡相关基因的表达规律和意义。方法采用单纯随机抽样方法，选择矽肺壹期、贰期和叁期男性患者23、25、24例分别设为矽肺壹期、贰期、叁期组，以8例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照组，收集研究对象的支气管肺泡灌洗液，分离、纯化和培养AM后，提取RNA，采用实时定量荧光聚合酶链式反应分析AM中葡萄糖调节蛋白78（ GRP78）、CAAT区／增强子结合蛋白同源蛋白（ CHOP）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（ Caspase）－4和Caspase－3的mRNA表达水平。结果矽肺壹期、贰期和叁期组患者AM中GRP78、CHOP、Caspase－4和Caspase－3的mRNA相对表达水平均高于对照组（P＜0．05），矽肺贰期组GRP78 mRNA相对表达水平分别高于矽肺壹期和叁期组（P＜0．05），矽肺贰期和叁期组患者AM中的CHOP、Caspase－4和Caspase－3的mRNA相对表达水平均高于矽肺壹期组（ P＜0．05）。多重逐步线性回归分析结果显示，矽肺患者AM中GRP78、CHOP、Caspase－4和Caspase－3的mRNA相对表达水平均与矽肺期别呈正相关（ P＜0．05）。结论 ERS在矽肺患者AM凋亡的发生与发展中可能发挥重要作用。
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TRAIL 及其受体对煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡调控作用
目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ TRAIL）及其受体（ TRAILR）信号转导通路在煤工尘肺（ CWP ）患者肺泡巨噬细胞（ AM）凋亡中的作用机制。方法以接触煤尘及煤矽尘的24例观察对象和CWP壹期、贰期患者各22例为研究对象，收集大容量肺灌洗回收液，分离、纯化AM后，分为对照组、超氧化物歧化酶（ SOD ）组、TRAIL组、抗-TRAIL抗体组、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（ Caspase ）-8抑制组、核转录因子（ NF ）-κB抑制剂组，给予相应处理后进行培养。收获细胞后，检测细胞凋亡情况，并提取蛋白采用免疫印迹法检测TRAIL／TRAILR信号转导通路Caspase-3、Caspase-8和死亡受体5（DR5）蛋白相对表达水平。结果5个处理组AM凋亡指数均低于对照组（P＜0.05），TRAIL组AM凋亡指数分别高于SOD组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组（P＜0.05）；CWP壹期和贰期患者AM凋亡指数均高于观察对象（P＜0.05），CWP贰期患者AM凋亡指数高于CWP壹期患者（P＜0.05）；不同处理和不同程度患者AM凋亡指数的交互作用有统计学意义（P＜0．01）。5个处理组Caspase-3、Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平分别低于对照组（P＜0.05），TRAIL组Caspase-3和Caspase-8的蛋白相对表达水平分别高于SOD组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组（ P＜0.05），SOD组DR5蛋白相对表达水平分别低于TRAIL组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组（ P＜0.05）；CWP 壹期和贰期患者Caspase-3、Caspase-8和 DR5的蛋白相对表达水平均高于观察对象（ P ＜0.05）；不同处理和不同程度患者Caspase-3的蛋白相对表达水平的交互作用有统计学意义（ P＜0．01），不同处理和不同程度患者Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平的交互作用均无统计学意义（ P＞0.05）。结论 TRAIL／TRAILR信号转导通路介导的AM凋亡可能在CWP发病中发挥一定作用；在不同环节对TRAIL／TRAILR信号转导通路进行抑制或阻断，可有效抑制CWP患者AM凋亡的发生。
