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骨连接蛋白在正常牙髓和修复性牙本质形成中的基因表达
骨连结蛋白(osteonectin,ON)是一种重要的非胶原糖蛋白,可能参与了牙本质的生物矿化过程[1]。我们利用原位杂交技术,观察ON在正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征,探讨ON在修复性牙本质形成中的作用。 1.材料与方法:分别在Wistar大白鼠(体重150~250 g)的上下颌第一磨牙近中面制备单面洞,术后第3及15天处死动物。迅速分离上下颌骨,4%多聚甲醛4℃下固定,10%EDTA脱钙,系列乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,5 μm连续切片,4℃下保存备用。实验中所有试剂均由含DEPC水配制以消除RNA酶的作用。利用T7 RNA多聚酶(Boehringer Mannheim公司)体外转录体系合成ON单链RNA探针,地高辛标记RNA检测试剂盒(Promega公司)标记。根据Holland等[2]的方法将标本与已标记探针进行原位杂交。DAB显色,苏木素淡复染。光镜下检查呈棕色的阳性杂交信号。 2.结果:正常对照的大鼠第二磨牙,杂交信号主要表达于成牙本质细胞层内,成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达,但信号强度低于成牙本质细胞。固有牙髓内的牙髓细胞信号较微弱或不表达。术后3 d组标本可见窝洞下方的成牙本质细胞表达呈强阳性,成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达。固有牙髓内的牙髓细胞也呈阳性表达。前期牙本质和牙本质内表达阴性。15 d组标本,可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的细胞无极化,缺乏典型的成牙本质细胞表型,为成牙本质细胞样细胞。在成牙本质细胞样细胞内,ON表达阳性,染色均匀。可见扩张的牙髓毛细血管内皮细胞也表达阳性。
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大肠癌细胞凋亡与5-Fu辅助化疗研究现状
1 概述细胞凋亡(apoptosis)或程序化细胞死亡(programmed cell death,PCD)是多细胞有机体为调控机体发育,维护内环境稳定,由基因控制的细胞主动死亡的过程.近年来肿瘤学家们注意到肿瘤的发生和发展与细胞凋亡密切相关,认为肿瘤细胞不仅可以看作是一种细胞--较其来源组织生长更快;也可看作是一种细胞--凋亡率相对较少.目前已经证明大肠癌细胞凋亡是受多种基因控制的,研究较多的基因是bcl-2\,p53基因.Tannapfel[1]报道大肠癌术前放、化疗可以使大肠癌细胞凋亡明显增加,增殖活性明显下降,同时伴随着Bax基因表达的增加;Bax基因表达阳性、p53基因表达阴性者凋亡增加更加明显,显示大肠癌细胞凋亡与凋亡相关基因之间是相互影响的.Sugamura[2]发现肿瘤细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)与大肠癌的分期、分化程度及预后密切相关,认为AI可以看作是判断大肠癌预后有用的指标.
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利妥昔单抗治疗血液系统恶性肿瘤相关进展
利妥昔是一种针对CD20抗原的人鼠嵌合单克隆抗体,已被批准用于临床治疗惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤.首次使用是在美国用于治疗低分化、滤泡型或易复发、侵袭性CD20表达阳性的B细胞非霍奇金淋巴瘤[1].之后,便在欧洲用于临床治疗Ⅲ/Ⅳ期的滤泡型非霍奇金淋巴瘤,入选的病人或已对化疗产生耐药,或已处于接受化疗后的复发阶段.基于两项多中心临床试验结果,在欧洲利妥昔单抗被批准与环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松(CHOP)方案联用治疗侵袭性CD20表达阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤;在日本经临床Ⅱ期试验验证,利妥昔单抗被批准用于治疗惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤和套细胞淋巴瘤[2].现今,利妥昔单抗已在全球50多个国家被批准用于临床,而一项深入广泛的临床评估项目也正在展开,该项目研究包括惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤、侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤和B细胞慢性淋巴细胞白血病在内的多种B细胞来源淋巴系恶性肿瘤.
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CD20阳性儿童前B急性淋巴细胞白血病临床特点与预后分析
急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童常见的恶性肿瘤,其中多数为前B-ALL(PreB-ALL).在这部分患儿中,CD20表达阳性是否与患者治疗反应和预后相关,国外仅有个别文献报道,国内也只有成人病例报道,提示CD20表达对预后无显著影响[1].我们回顾性分析了CD20表达阳性的PreBALL患儿的临床特点,并探讨其与治疗反应和预后的关系.
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急性白血病患者WT1基因异构体的研究
WT1基因是Wilms瘤的候选基因.近年来研究发现它在白血病中有异常的高表达,提示WT1与造血系统恶性疾病有密切的关系.为了研究在白血病中WT1 四种异构体相对比例的改变对造血系统疾病发生和预后的意义,我们使用RT-PCR方法联合核酸扫描定量技术,对46例WT1表达阳性白血病患者骨髓细胞进行了分析研究.
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三氧化二砷对K562及其多药耐药细胞系K562/A02细胞的诱导凋亡研究
P170表达阳性的白血病细胞往往对多种不同化学结构和作用靶点的药物同时发生耐药.我们观察了三氧化二砷(As2O3)对体外培养的人急性红白血病细胞系K562及其多药耐药细胞系K562/A02细胞的凋亡诱导作用,以探讨As2O3对多药耐药白血病细胞的作用.
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Evi-1反义寡核苷酸对人红白血病细胞系HEL的抑制作用
Evi-1 (ecotropic virus integration site 1) 定位于染色体3q26,为一原癌基因,与髓系恶性肿瘤的发生密切相关[1].Evi-1基因编码含两个锌指区的蛋白,能特异地结合基因启动子DNA 序列,发挥转录调节作用[2].正常人骨髓和外周血细胞Evi-1 mRNA表达阴性[1].我们的初步研究结果表明,近50%的骨髓增生异常综合征(MDS)患者Evi-1基因表达阳性,Evi-1的表达水平与MDS向急性髓系白血病(AML)演变有关[3,4].为进一步探讨Evi-1在AML 发生和发展中可能的作用,我们观察了Evi-1反义寡核苷酸(Evi-1-AS)对人红白血病细胞系HEL增殖的抑制作用.
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35例甲状腺肿瘤PTC癌基因表达的观察
越来越多的事实证明,肿瘤的发生、演进是一系列基因的改变所致,这些基因的改变影响和破坏了细胞增生的正常调控机制.对于甲状腺癌分子发生机制的研究文献报道较少,近国外研究表明,甲状腺乳头状癌中经常出现ret癌基因,一种新的活化形式-PTC癌基因,PTC癌基因表达阳性证明肿瘤中存在ret癌基因的活化,目前国内尚未见有关文献报道.
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胃肠道间质瘤发生的分子机制
胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是一类特殊的以CD117蛋白表达阳性为特征的胃肠道常见的间叶源性肿瘤.其来源于Cajal 细胞(ICC)或具有向ICC分化功能的未分化细胞(干细胞)[1].现就GIST基因突变有关分子机制的研究进展进行综述.
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CD163在皮肤梭形细胞肿瘤中的诊断价值
皮肤恶性梭形细胞肿瘤种类较多,如非典型纤维黄色瘤(AFX)、梭形细胞鳞状细胞癌(SCC)、梭形细胞/促纤维增生性恶性黑色素瘤、皮肤隆突性纤维肉瘤(DFSP)和平滑肌肉瘤等,这些恶性梭形细胞肿瘤的形态学诊断有时比较困难.一般来说,AFX是一个排除性诊断,是根据免疫标记CK和S-100蛋白表达阴性,而组织细胞标记物CD68表达阳性而做出的诊断.
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非小细胞肺癌伴神经内分泌化合并肺毛霉病12例临床分析
目的:探讨非小细胞肺癌伴神经内分泌化患者肺毛霉病的临床症状、诊断、治疗及预后。方法采用病例回顾收集非小细胞肺癌伴神经内分泌化患者肺毛霉病的临床症状及体征、实验室检查、影像学资料,以及治疗方案、预后转归等。结果临床症状体征:12例患者均有不同程度的发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难,开始多为黄色黏痰,后期痰呈灰褐色;8例有咯血;5例有胸痛。肺部听诊仅有湿性啰音的3例,干、湿性啰音均有7例,其中可闻及明显哮鸣音的4例。12例患者均有呼吸困难及明显低氧血症,人院时PaO261.3~71.5 mm Hg (1mm Hg=0.133 kPa),平均66.7 mmHg;氧饱和度80.1%~91.3%,平均86.9%,无CO2潴留。12例患者胸部X 线片及CT新发病灶(原发病以外病灶)种类有团块影8例、空洞7例、大片云絮状阴影7例、小斑片状阴影或结节样密度增高影6例、双侧肺炎7例、单侧肺炎5例。12例患者均通过纤维支气管镜活检行组织病理学检查发现毛霉菌丝。12例患者经两性霉素B脂质体治疗,8例治愈,9例CgA和SYN表达阳性,阳性表达未超过均++;4例死于大咯血,4例死亡患者SYN强表达( ++ + ~ ++ ++),CgA表达阳性(均为+)。结论非小细胞肺癌伴神经内分泌化患者合并肺毛霉菌感染,临床特征及影像学表现无特异性,肺部新发病变,尤其是结节、空洞、渗出病变者,有呼吸困难、低氧血症者,要注意本病;SYN表达越强,死亡率越高。
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非小细胞肺癌Bcl-2基因蛋白表达及其与细胞凋亡和增殖的关系
目的 探讨非小细胞肺癌Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡和增殖的关系.方法 采用SAB免疫组化法检测43例非小细胞肺癌及20例癌旁正常肺组织石蜡包埋标本Bcl-2蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)表达;用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 肺癌组织Bcl-2蛋白的表达显著高于癌旁肺组织,P<0.05;肺癌组织中凋亡指数和增殖指数均明显高于癌旁正常肺组织,P<0.01,Bcl-2表达阳性的肺癌组织细胞凋亡指数明显低于Bcl-2表达阴性组,P<0.05;高细胞凋亡、增殖指数提示肺癌预后不良,P<0.05.结论 肺癌存在Bcl-2表达上调,Bcl-2异常表达在肺癌发生过程中可能起重要作用.
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胃肠道间质瘤的临床分析
胃肠道间质瘤(Gastrointestinal Stromal Tumors,GIST)是一类起源于胃肠道间叶组织的肿瘤,占消化道间叶肿瘤的大部分.Mazur 等于1983 年首次提出了胃肠道间质肿瘤这个概念,GIST与胃肠道肌间神经丛周围的Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)细胞相似,均有c-kit基因、CD117(酪氨激酶受体)、CD34(骨髓干细胞抗原)表达阳性.
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流行型牛白血病肿瘤组织中降钙素的表达检测及其意义
目的:探讨降钙素( calcitonin, CT)在流行型牛白血病( enzootic bovine leukosis,EBL)肿瘤组织中的表达、分布及其意义。方法:本研究采用免疫组织化学S-P方法首次对14例牛EBL肿瘤组织及瘤旁组织中CT的表达、分布进行了观察与检测。结果:CT蛋白表达阳性信号为棕黄色颗粒,位于细胞质内。肿瘤组织中,可见阳性细胞呈圆形或椭圆形、多形性。阳性细胞呈弥散性或灶状分布。在EBL淋巴结肿瘤组织可见肿瘤细胞自分泌CT阳性物质,阳性表达率为85.7%,并见多数肿瘤细胞呈强阳性表达,明显高于相应瘤旁组织(27.3%),二者比较差异极显著(P<0.01)。心脏肿瘤组织中CT阳性表达率为80%,可见肿瘤细胞分泌并呈较强的CT阳性表达,相应瘤旁组织中未见CT阳性表达,二者比较,差异极显著( P<0.01)。结论:EBL病牛肿瘤细胞可自分泌大量的CT异位激素,表明CT参与了EBL肿瘤的形成过程,对肿瘤细胞的生长、分化异常可能起重要作用。提示EBL肿瘤组织中CT水平可作为EBL诊断指标之一。
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吻合术后动脉弹性蛋白原的表达
采用寡核苷酸探针原位杂交的方法了解吻合动脉的弹性蛋白原mRNA表达的变化.Wist ar大鼠60只,手术显微镜下,常规消毒铺单将大鼠右股动脉剪开并重新端端吻合,术后分笼标记饲养.实验动物分成6个时相点组和未吻合侧为对照组.于吻合后3,7,14,2 1,28,90天,切取吻合动脉和对侧动脉,冰冻切片后,以地高辛标记的寡核苷酸探针作原位杂交.根据大鼠tropoelastin cDNA序列设计出长度为26bp的反义寡核苷酸5′-GGC TCT CGG TGG TAT TGG TGG CAT CG-3′,经同源性查询,该序列与大鼠血管平滑肌细胞tropoelastin cDNA同源性高.采用MAS图像分析系统,检验各组原位杂交切片比面积,在吻合后3天的标本中可见有蓝紫色的细胞,细胞分布在吻合口周围,吻合后7天的标本可见篮紫色的细胞较多,靠近内膜,吻合14天组、21天组、30天组均可见篮紫色的细胞.吻合90天组为阴性,从统计分析可知股动脉吻合术后3d、7d、14d、21d、30d弹性蛋白原m RNA表达阳性细胞数量与正常对照组相比较(p<0.01)相差非常显著,90d组与正常对照组比较弹性蛋白原mRNA表达阳性细胞数量并无显著的升高(p<0.05).阳性细胞表达数量的高峰期在3~7d,从7d开始表达阳性细胞数量逐渐减少,在90d组与正常对照组无显著性差异.实验证明肌性动脉与弹性动脉一样,在损伤后也有tropo elastin-mRNA的表达,表达的高峰在损伤后3-7天,在30-90天后逐渐减少到不可检出的水平.此基因表达时间的长短与血管损伤的严重程度及内膜增生的程度有无相关性,目前并不清楚.血管损伤及血管手术造成了内皮细胞及中膜平滑肌细胞的损伤, 血管对损伤的后果是平滑肌细胞的移行、增殖、分泌、结果是产生血管内膜增生.从实验中可知血管平滑肌细胞具有产生tropoelastin的能力.新生内膜一方面可以重建并修复血管,另一方面它也是造成血管移植及管吻合后影响血管通畅的重要因素.弹性蛋白等基质蛋白的表达在内膜增生中起着重要的作用.
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端粒酶与恶性肿瘤
端粒酶的发现和它的RNA依赖性是肿瘤生物学上的一个重要突破,研究表明,85%的恶性肿瘤端粒酶表达阳性,生殖细胞和永生化细胞中端粒酶表达亦呈阳性,而在良性肿瘤和正常体细胞中未发现端粒酶活性,这种显著的相关性提示着端粒酶在肿瘤细胞恶性状态的形成和发展中,可能起关键的作用.
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孤立型纤维性肿瘤的CT表现
孤立型纤维性肿瘤(solitary fibrous tumor,SFT)为少见的梭形细胞肿瘤,初由Klemperer 和Rabin于1931年报道[1],SFT 是一种相当少见间质源性肿瘤[2],其发病年龄无特异性,男女差别不大.其肿瘤的发病部位广泛,以胸膜较多见,其他部位如纵隔、肺、肝、肾、眼眶、脑膜等均有报道.SFT因其形态学变异,在诊断和鉴别诊断时往往不易察觉.近年来很多学者认为SFT 可能起源于CD34 阳性的树突状细胞,其免疫组织化学Vimentin,bcl2 亦表达阳性.
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胃癌术后脑转移磁共振检查阴性一例
1临床资料患者男,55岁.因间歇性中上腹痛5个月于2010年7月12日收治入院.胃镜检查提示胃窦癌;上腹部CT检查提示胃窦癌性病变,胃后壁数枚肿大淋巴结,周围大血管未受侵犯,无肝脏及结肠转移.患者于2010年7月20日行胃癌D2根治术,术中探及肿瘤已侵犯浆膜层,第1组及第2组数枚肿大淋巴结部分融合,予以清扫.术后病理检查结果示:胃低分化腺癌,浸润胃壁全层;第3、4d、4sb、5、6、7、8a、9、12a组淋巴结癌转移.免疫组织化学染色结果:p53、CK20、上皮膜抗原、绒毛蛋白、多药耐药基因及CEA表达阳性,CerbB-2表达由阴性至弱阳性,CK7表达阴性,约90%的Ki-67表达阳性(图1,2).