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人急性白血病细胞株HL-60细胞培养上清液对人脐静脉内皮细胞血管形成能力的影响
目的 研究人急性白血病细胞株(HL-60)上清液对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)血管形成能力的影响.方法 以单独培养HUVECs为对照组,以HUVECs加HL-60细胞培养上清为实验组.采用MTT比色法分别在24h、48h、72h检测两组中HUVECs的吸光值;采用RT-PCR技术检测两组中HUVECs周期蛋白E(cyclinE )mRNA及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况.结果 实验组与对照组相比HUVECs增殖速度加快,72小时后差异有显著性意义(p〈0.05).72小时后,实验组中HUVECs CyclinE mRNA及VEGFmRNA表达明显增加,与对照组相比差异具有显著性意义(p〈0.01).结论 HL-60细胞培养上清液能够增强HUVECs的血管形成能力.
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气相色谱法测定冰硼含片中冰片的含量
冰硼含片是在传统方剂冰硼散的基础上研制的中药新剂型。由冰片、硼砂等4味中药组成。为探索该新制剂的质量标准，我们用气相色谱法对方中冰片的含量进行了测定。1 样品试剂与仪器 冰硼含片：自制。冰片对照品：购自中国药品生物制品检定所。萘、丙酮为分析纯。 GC-9A气相色谱仪、岛津C-R2AX数据处理机、FID(火焰离子)检测器，色谱柱3．2 mm×2．1 m玻璃柱以10％PEG20M为填料，以ChromosorbWAW-DMCS为载体，载气流速N2=5 mL／min、PH2=59 kPa、P空气=49 kPa，检测器温度200℃，进样器温度200℃，柱温130℃。2 方法与结果2.1 标准曲线的绘制：精密称定冰片对照品50mg，用丙酮溶解并转移至25 mL的容量瓶中，用丙酮稀释至刻度摇匀，分取1，1．5，2，2．5，3μL注入气相色谱仪，测定其吸光度，其回归方程A=107 643M+98 192．6，相关系数r=0．999。2.2 校正因子的测定：取内标物萘250 mg，精密称定，加丙酮溶解并稀释至25 mL，摇匀，另取冰片对照品50 mg，精密称定，用丙酮溶解并稀释至25mL，摇匀，精密吸取上述内标物萘液1 mL及冰片对照品液5 mL置10 mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度，摇匀，取1μL注入气相色谱仪，计算校正因子，结果为1．33，RSD=0．30％(n=6)。2.3 样品的含量测定：取样品研细，精密称定1 g，加丙酮4 mL，用涡流混合器混合，离心，取上清液于10 mL的容量瓶中，残渣再分别加入丙酮3，2 mL，按上法重复操作两次，取上清液，并入同一容量瓶中，精密加入内标物溶液1 mL，用丙酮稀释至刻度，摇匀，取1μL注入气相色谱仪，测定，计算即得。其结果见表1。
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正交试验优选絮凝法处理甘草酸废水的研究
甘草酸广泛应用于食品、医药、化妆品、烟草等工业.甘草酸废水是在工业提取甘草中甘草酸时酸沉后产生的上清液.废水具有强酸性,而且在废水中含有大量氨基酸和黄酮类物质,其采用重铬酸钾作为氧化剂测定出的化学耗氧量(CODcr)在15 000mg/L左右,电导率为15 000 us/cm,色度在1 000倍左右.
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急性白血病患者血清白细胞介素-6水平的测定及意义
为探讨白细胞介素6(IL-6)在急性白血病发病中的作用,我们应用夹心酶联免疫吸附法(ELISA)对1996～1999年我院收治的急性白血病患者外周血上清液中IL-6水平进行了检测,结果如下.
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新鲜冷冻血浆的上清液治疗复发性血栓性血小板减少性紫癜一例
患者,男,45岁.因发热,面黄10余天,伴意识障碍1 d,于1999年10月10日入院.患者入院前10天无诱因出现低热、头痛、口唇及右上肢麻木,排浓茶样尿.入院前1天出现烦躁,意识恍惚,右侧肢体活动障碍就诊.
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345卡瓦胡椒水提取物不影响大鼠的肝功能
为研究卡瓦胡椒Piper methysticum Forst.f.水提取物对肝功能的影响,作者进行了以下试验.将干燥卡瓦胡椒根于水中超声提取2次,每次20 min.提取液离心,上清液冷冻,制成干粉备用.雄性SD大鼠随机分为6组,4个给药组分别给予卡瓦内酯类200mg/(kg·d)(2或4周)和500 mg/(kg·d)(2或4周);2个安慰剂组给予等量的生理盐水(2或4周).
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肝癌细胞及其上清液体外培养多房棘球蚴的实验研究
[目的]利用肝癌细胞(Bel-7404)及其培养细胞的上清液,在体外对多房棘球蚴进行培养,观察其在体外的生长、发育过程.[方法]培养肝癌细胞(Bel7404),留取细胞上清液,分别取培养细胞及其上清液与多房棘球蚴囊液进行共培养38d.实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡大、小直径,绘制生长曲线,培养结束后,取所培养囊泡壁及其囊液分别进行DNA鉴定和蛋白定量.[结果]多房棘球蚴在肝癌细胞(Bel-7404)及其上清液中均能生长,呈出芽生殖方式,囊泡直径1.0～ 5.0 mm;囊液蛋白含量分别为:肝癌细胞,3.8 mg/ml;肝癌细胞上清液,1.1 mg/ml;多房棘球蚴在体外培养初期呈较快速性生长(1～15 d);生长中期可见一平台期(15～26 d);后期保持一个较稳定囊泡数量.并对所培养的多房棘球蚴囊壁DNA经PCR扩增出Em特异性200 bp条带.SDS-PAGE观察体内外培养囊液中蛋白在14、47-66kd处有相似条带.[结论]多房棘球蚴体外生长因素不依赖培养细胞本身,利用肝癌细胞上清液建立多房棘球蚴体外培养模型具有一定的可行性,由于肝癌细胞(Bel-7404)与其培养细胞的上清液所含成分可能不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白定量有所差异.
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大肠癌细胞及其上清液体外培养泡球蚴的实验研究
[目的]利用大肠癌细胞(Caco-2)及其培养上述细胞的上清液,在体外对泡球蚴进行培养,建立稳定的体外培养模型,观察泡球蚴的在体外的生长、发育过程.[方法]培养大肠癌细胞(Caco-2),留取细胞上清液.取泡球蚴组织,分别与大肠癌细胞及其细胞培养上清的DMEM完全培养基于37℃5％ CO2培养箱中培养38 d.实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡大、小直径,绘制生长曲线.培养结束后,取培养囊泡囊液进行蛋白定量.[结果]泡球蚴与大肠癌细胞及其上清液中均能共同生长,呈出芽生殖方式,囊泡直径0.5～5.0mm;囊液蛋白含量分别为:大肠癌细胞,3.2mg/ml；大肠癌细胞上清液,1.2mg/ml.泡球蚴在体外培养初期呈较快速性生长(1～ 15 d)；生长中期可见一平台期(15 ～ 26 d);后期表现为逐渐减少.[结论]多房棘球蚴体外生长因素不依赖培养细胞本身,利用大肠癌细胞上清液建立多房棘球蚴体外培养模型具有一定的可行性,由于大肠癌细胞(Caco-2)与其培养细胞的上清液所含成分可能不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白定量有所差异.
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树叶的药用
1.杏叶杏叶味苦、涩,性温,有健脾止泻、疏风止痒之功能.杏叶15克,大枣6枚,生姜10克,水煎服,适用于脾胃虚弱引起的腹泻.2.石榴叶石榴叶味酸、涩,性温,有收敛、止泻、杀虫之功能.①治风火赤眼:鲜石榴嫩叶30克,加水1碗,煎至半碗,过滤,去渣,取上清液,用滴管或洗眼杯洗之.②治跌打损伤:鲜石榴叶适量,洗净,捣烂敷患处.
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超声诊断胎儿浆膜腔积液1例
患者女,28岁.孕2产1,孕32周,自感胎动消失近1个月而就诊.产科检查胎心消失.超声检查:子宫增大,耻骨上方可见"叠瓦"状胎头光环,双顶径 8.6 cm,胎心搏动停止,全身皮肤水肿增厚,约 0.8～1.0 cm,脊柱四肢无畸形,胸、腹腔内均见大片状液性无回声区(图1),羊水深度 4.0 cm,胎盘附于子宫前壁,厚 3.2 cm ,Ⅰ级成熟.超声诊断:晚孕,单死胎,头位,胎儿浆膜腔积液.尸检:女婴,身长 50.0 cm, 头围 32.0 cm,腹围 38.0 cm,全身皮肤水肿增厚,约 0.8 cm,头皮腱膜下间隙有少许血性积液,脑脊液血性.胸腔、心包腔及腹腔均见血性积液,双侧膝关节腔亦见少许血性积液.心、肺、肝、脾、肾、胃肠各脏器均无异常.血性积液化验:外观红色混悬液,有凝块,反复离心后上清液仍为血性,涂片镜检偶见细胞碎片,潘氏蛋白试验(++++).ABO血型鉴定女婴脐血为B型,孕妇为O型.
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常见外科疾病中医自我防治(之二)
蛇串疮是以皮肤上出现成簇水疱、呈带状分布、痛如火燎为主要表现的急性疱疹性皮肤病,相当于西医的带状疱疹.多见于成年人,好发于春秋季节.[简易疗法]1.初起用玉露膏外敷,或外搽三黄洗剂,清凉乳剂(麻油加饱和石灰水上清液充分搅拌成乳状)外涂,或鲜马齿苋、野菊花叶、玉簪花叶捣烂外敷.2.针灸疗法:取穴内关、阳陵泉、足三里.局部周围卧针平刺,留针30分钟.
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内皮素与心脑血管疾病
内皮素(endothelin,ET)早在1988年由日本学者Yanagisawa等[1]从培养的猪主动脉内皮细胞上清液中分离和纯化而得到,故被称为猪内皮素(porcineendothelin).随着研究的逐渐深入,人们发现人主动脉内皮细胞分泌的内皮素与猪内皮素的结构完全一致,遂又将其称之为猪或人内皮素[2].ET具有促进细胞增殖和调节体内有关活性物质释放等一系列复杂的生物学特性[3].ET作为一种生长因子、激素调节肽、神经肽,在心脑血管类疾病的发病过程中,有着重要的病理生理作用.本文就ET与心脑血管类疾病的相关性研究作一综述.
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骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制
目的 观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制.方法 建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组.模型制作24 h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU) 标记处于增殖状态的神经前体细胞,应用免疫组织化学染色检测缺血后7 d脑组织BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数.结果 脑梗死后7 d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数开始增多,上清液高浓度组的上述阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性神经前体细胞的增殖、分化.
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脑外伤急性期血浆ET-1变化与脑损伤程度和近期预后的研究
内皮素(ET)[1]是1988年由日本学者Yanagisawa等从猪的主动脉内皮细胞上清液中分离出的一种含有21个氨基酸残基的多肽.目前发现的内皮素有3种:ET-1、ET-2、ET-3.ET-1是已知强大的缩血管物质.在正常生理状态下,用放射免疫法测定,健康人血浆ET为1.0μg/L,血浆半衰期仅为2 min[2].
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应用流式细胞术分析去白细胞悬浮红细胞上清液不同存储期内微粒数量的变化
保存时间是库存血液制品的一个标签，也是输血领域里持续争论的热点问题。根据美国卫生与人类服务部（US DHHS）2011年发布的国家血液采集和使用调查报告（The 2009 National Blood Collection and Utilization Survey Report）[1]，在美国境内输注的红细胞平均储存期为18.2 d。医院临床上给患者输注的红细胞保存时间一般在14 d以上。Tinmouth等[2]报道指出，输注了保存时间超过14 d的库存红细胞的患者出现并发症的概率明显比输注保存时间短（少于7 d）的红细胞的患者高。 Purdy等[3]的研究报道，在31个重症监护患者中，存活的12个患者输注过的红细胞平均保存时间为17 d，而死亡的19个患者输注过的红细胞平均保存时间为23 d。Koch等[4]发现输注保存超过2周的红细胞会明显增加术后并发症的发生概率，并提出将保存超过14 d的血液划分为旧血。在通常情况下，库存红细胞在储存过程中会发生一系列生物化学与结构上的改变，且随着储存时间的延长变化更加显著，这些改变通常被统称为红细胞的储存损伤[5]。细胞破损后而产生的细胞碎片及微粒会被释放到红细胞悬液的上清液中。据报道，这些细胞碎片及微粒具有免疫调节作用，与输血相关不良反应（炎症、血栓等）的发生密切相关[6，7]。因此，这些保存时间较长的红细胞，更容易引起输血相关不良反应的发生。为了解库存去白悬浮红的溶血情况及其溶血产物状态随存储时间的变化，我们在标准的血站采集、制备、运输和保存条件下，对不同保存期的库存去白悬浮红进行溶血情况及其溶血产物方面的系统研究。本文主要采用了流式细胞术来对库存去白悬浮红上清液中微粒数量进行检测，观察红细胞老化与溶血、细胞碎片生成等一系列变化。
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肾综合征出血热疫苗病毒培养工艺的改进
肾综合征出血热(以下简称出血热)细胞培养疫苗生产流程中要求收获时将上清液部分收获后,留少许培养液与细胞同时冻化,再与上清液混合.这一步骤在生产过程中比较繁琐,需要大容积的低温冰柜,又增加了操作中染菌机会;限制了原液的产量,提高了疫苗成本.为此,作者进行了即便于生产又经济高效的疫苗原液生产工艺的改进.报告如下.
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快速纯化甲型肝炎病毒及相关性状的检测
甲型肝炎病毒(HAV)在宿主细胞的胞浆内增殖,很少释放到细胞培养的上清液中,因此,给病毒的纯化带来一定困难.本实验室针对制备甲肝诊断试剂盒所需大量病毒抗原问题,对提高抗原的收获率、浓度和纯度等方法进行改良,建立了以冻融、超声,聚乙二醇(PEG)浓缩,蔗糖/甘油不连续密度梯度离心为主要步骤的快速纯化HAV的方法,并对得到的纯化病毒样品进行相关的性状检测.现将结果报告如下.
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HPLC色谱法测定面粉类过氧化苯甲酰
采用高效液相(HPLC)色谱法测定过氧化苯甲酰应将过氧化苯甲酰转化为苯甲酸方可检测.但因氧化还原在中性条件下反应进行很慢,待反应完全,需放置较长时间.本文探讨用乙醇溶解,碱性加热分解过氧化苯甲酰,使之生成苯甲酸钠.过量的碱用乙酸锌中和,并沉淀被溶出的脂肪等杂质,取上清液进液相测定,得到较满意的结果.
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脂肪间充质干细胞上清液对小鼠皮肤创伤的作用及可能机制
目的 观察小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)上清液经尾静脉注射治疗小鼠皮肤创伤的效果并探讨其作用机制.方法 无菌条件下分离培养正常小鼠的ADSCs取3-5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标记物CD34、CD45、CD90、CD105的表达.建立小鼠全皮层皮肤创伤模型并随机分为2组,注射生理盐水的对照组和注射上清液的实验组,分别于伤后7天,14天观察创面愈合情况.分离小鼠成纤维细胞(Fibroblast,Fb),将小鼠ADSCs上清液作用于Fb不同时间后,应用WST法和Transwell迁移实验检测Fb细胞增殖和迁移情况,应用real-time PCR和Western blot检测Fb中碱性成纤维细胞生长因子(basci fibroblast growth factor,bFGF)在转录和蛋白水平的表达.结果 小鼠ADSCs表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45.ADSCs上清液注射组于创伤后第7天,14天的伤口愈合率分别为(65％±3.4％),(95.6％±5.2％),均显著高于7天、14天生理盐水对照组的(55％±4.4％),(77.1％±3.1％).ADSCs上清液作用于Fb后,能促进Fb的增殖和迁移以及上调生长因子bFGF在转录和蛋白水平的表达.结论 小鼠ADSCs上清液促进小鼠皮肤创面愈合可能与上调bFGF表达相关.
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长期培养人急性髓系白血病骨髓基质上清液对早幼粒白血病细胞的影响
目的:通过观察长期培养的白血病骨髓基质上清液对早幼粒白血病细胞体外的作用,寻求一种体外净化辅助方法.方法:实验于2002-04/2003-12在大连医科大学附属第二医院血液内科实验室完成.20例急性髓细胞白血病为初诊或复发病例.男11例,女9例,19～55岁,平均36.8岁,由大连医科大学附属第二医院血液内科、大连市友谊医院血液内科、铁路医院血液科、大连大学附属医院血液科提供.患者知情同意并签署知情同意书.诊断均符合张之南主编的"血液病诊断及疗效标准",其中M12例,M2 8例,M34例,M42例,M54例.常规分离培养人骨髓基质细胞,收集14,28,35 d的上清分别与早幼粒白血病细胞共孵育,以不加入急性髓细胞白血病基质上清液的早幼粒白血病细胞的培养体系作为阴性对照,通过形态、流式细胞术、DNA电泳来观察早幼粒白血病细胞有无分化及凋亡表现.结果:20例患者均进入结果分析.①急性髓细胞白血病骨髓基质细胞是由网状细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、脂肪细胞组成.②Wright-Giemsa染色可见阴性对照早幼粒白血病细胞为悬浮生长,胞体内含颗粒,增殖旺盛,镜下常见核分裂、增殖状态的早幼粒白血病细胞;14 d及28 d培养的急性髓细胞白血病基质上清液作用的早幼粒白血病细胞,形态未见明显变化,35 d培养的急性髓细胞白血病基质上清液作用的早幼粒白血病细胞出现细胞变形,细胞核出现改变,部分细胞核仁减少或消失.NBT还原实验发现部分早幼粒白血病细胞胞奖内出现紫蓝色颗粒,并见到核碎解成染色质小体(凋亡小体).③35 d时相上清液孵育的早幼粒白血病细胞部分出现分化现象,部分出现凋亡小体,DNA电泳见梯形带,流式细胞术检测出凋亡峰.④培养35 d的急性髓细胞白血病基质上清液对早幼粒白血病细胞的诱导分化及促凋亡作用明显强于培养14,28 d的急性髓细胞白血病基质上清液及阴性对照组[分化细胞数:1.5±1.8,2.1±1.5,17.3±3.0,41.0±11.1;凋亡细胞数:5.2±1.7,7.3±1.9,10.1±2.2,35.2±13.9,P＜0.05],其他组间差异不显著.结论:培养35 d的白血病骨髓基质上清液对早幼粒白血病细胞具有诱导分化、促进凋亡的作用.可能为白血病体外净化提供一种辅助方法.
