首页 > 文献资料
-
生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测
近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜(BF)[1],关于生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的能力,探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。 材料与方法材料:抗菌药物:亚胺培南(美国默沙东公司)。试剂:2.5%戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等,均为国产分析醇。菌株:选取产β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌30株(中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离)。培养基:胰酶大豆肉汤(TSB,法国BioMerieux公司)。Nitrocefin (英国Oxiod公司)。器材:医用硅胶膜(北京医用硅胶研究所);扫描电镜(S-800 日本Hitachi公司);低温超速离心机(上海安亭公司);可见紫外分光光度计:日本岛津制作所MIB-2000型外接岛津超级恒温水浴槽。方法:(1) 生物被膜的建立:取30株肺炎克雷伯杆菌,经37 ℃孵育24 h,配制成0.5 mol/L菌悬液,将每株菌菌悬液3等份分为3组,A组为浮游克雷伯杆菌,B组及C组菌以硅胶膜为载体,用改进的平板培养法[2]建立生物被膜,标本经固定、脱水、置换、干燥、枸橼酸铅染色等处理后通过扫描电镜观察鉴定[3]。(2) 诱导β-内酰胺酶产生:亚胺培南低抑菌浓度(MIC)的测定,采用标准微量稀释法,其MIC值介于0.07~0.5 mg/L,将1/2 MIC亚胺培南加入C组菌悬液中孵育。(3) β-内酰胺酶粗酶提取液的制备:A、B、C 3组菌孵育至第3天,将细菌硅胶膜及胰酶大豆肉汤在超声水浴震荡(120 W,15 min)。提取的菌悬液于4 ℃ 6 000 r/min离心30 min,弃去上清液,以0.05 mol/L,pH 7.0磷酸钾缓冲液洗涤两次后,将收获的菌体悬浮在同样适量的缓冲液中,用冻融法[4]使细菌菌体破坏,然后以低温2 000 r/min离心60 min,上清液即为粗酶提取液。(4) β-内酰胺酶定性:用Nitrocefin纸片测定。(5) β-内酰胺酶活性测定:以Nitrocefin为底物,在紫外分光光度计波长482 nm处进行时间扫描测定酶活性。(6) 统计分析:对A组和B组、A组和C组、B组和C组数据进行配对t检验,分析差异的显著性。
-
艾滋病脑病一例
患者男,48岁,海员.因"反应迟钝2个月,昏迷3 h"于2006年1月10日入院.平时性格孤僻.体检:体温 39.8℃,呼吸 20次/min,脉搏 96次/min,BP 118/70 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa).神清、不语,呈缄默状,反应极为迟钝,四肢肌张力不对称性增高,时有肌阵挛,全身多处皮肤有水疱,5~9 cm2大小,不规则形,多数已溃破,表面发红,其余体检基本正常.入院后持续不规则发热,体温36.8~41.3℃,但5次查血WBC总数均不高,为(4.0~8.1)×109/L,中性0.70~0.86.脑脊液检查:压力15 cm H2O(1cm H2O=0.098 kPa),外观呈红色,离心后上清液透明无色,红细胞10 400×106/L,WBC 28×106/L,中性0.60,淋巴0.40(考虑与穿刺损伤有关),糖 4.27 mmol/L,蛋白质 0.84 g/L,Cl-124.8 mmol/L.心肌酶谱全面异常,肌酸激酶12 800 U/L,肌酸激酶MB同工酶 300 U/L,α羟丁酸脱氢酶 711 U/L.肝、肾功能异常,总胆红素48.9 μmol/L,间接胆红素 35.0 μmol/L,ALT 146 U/L,AST 271 U/L,肌酐 146.3 μmol/L,尿素氮 38.9 mmol/L.腹部B超(-),脑CT示双基底节区、脑室体旁、半卵圆中心密度稍减低.HIV抗体初筛, ELISA、明胶颗粒凝集试验检测均为强阳性.
-
白细胞介素-17在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达
白细胞介素-17(IL-17)在一些自身免疫性疾病如移植肾排斥反应、类风湿关节炎等存在表达和分泌异常,但在系统性红斑狼疮(SLE)患者中,其表达及分泌是否异常,尚不清楚[1].我们通过测定SLE患者血浆,无刺激或加不同刺激培养外周血单个核细胞(PBMC)上清液IL-17蛋白水平和其PBMC内IL-17 mRNA水平的表达量,了解SLE患者PBMC表达、分泌IL-17有无异常及其与SLE疾病活动性的关系.
-
重组诱导型一氧化氮合酶在V79细胞中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨成纤维细胞基因转染后产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入V79成纤维细胞中,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量.将含有一氧化氮的细胞转染上清液加到培养的血管平滑肌细胞中,观察对平滑肌细胞生长状态的影响,用流式细胞仪分析细胞周期的变化.
-
exosome与肿瘤免疫治疗的研究进展
exosome是由细胞内多泡体(muhivesicularbody,MVB)与细胞膜融合后,释放到细胞外基质中的一种膜性囊泡,它可从一种细胞到达另一种细胞,在细胞问传递多种分子,具有与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)相似的功能,能诱发和增强机体的免疫反应.exosome由Johnstone等[1]初报道,他们在研究网织红细胞向成熟红细胞转变过程中,从体外培养羊网织红细胞的上清液中分离纯化了这种囊泡状沉淀物.后来,exosome又从其他类型的造血和非造血细胞的培养基中被分离出来,如肥大细胞[2]、血小板[3]以及多种肿瘤细胞[4-6].不同细胞来源的exosome所含的蛋白质不同,其生物学功能也有差异.
-
产房器械及物体乙型肝炎病毒表面抗原污染调查
对产房接生器械及物体表面消毒灭菌方法进行改进,并对其乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)进行监测、分析.1 资料与方法对接生所用止血钳、脐带剪、橡胶手套、床面、水池,经上述方法消毒后分别 进行HBsAg监测,每种物品各抽检60次.用无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水在取样物品上来回擦拭后,将棉球投入含有2 ml生理盐水的无菌试管内,经离心后取上清液采用酶联免疫吸附法检测.
-
妊娠期辅助T细胞功能变化及其与细胞凋亡的关系
妊娠时,母体不排斥半同种异体胎儿,是极其复杂的免疫学现象.大量动物实验已经证明,妊娠期Ⅱ型辅助T细胞(Th2)分泌的细胞因子增多,Ⅰ型辅助T细胞(Th1)分泌的细胞因子减少.近年来,Fas抗原诱导的细胞凋亡与辅助T细胞(Th)功能的关系,已成为研究的热点之一.本研究通过对孕妇外周血中单个核细胞进行诱生培养,测定上清液中Th1、Th2型代表因子--白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素4(IL-4)的含量,并检测Th细胞表面Fas抗原的表达,旨在观察妊娠期Th1、Th2型细胞因子的变化及其与Fas抗原诱导Th细胞凋亡的关系,进一步探讨母体不排斥胎儿的妊娠免疫耐受理论.
-
胎盘绒毛缺氧与中性粒细胞功能关系的实验研究
近年研究发现,妊高征发病与内皮细胞功能失调明显相关,而胎盘缺血缺氧被认为是内皮细胞功能紊乱的起因[1].中性粒细胞激活后能释放多种蛋白酶,并引起过氧化反应产生超氧自由基,是循环中过氧化产物的重要来源,其粘附于血管内皮能造成细胞损伤.许多研究已证明,妊高征患者循环中的中性粒细胞活性较正常孕妇显著增高,但其机理目前尚不清楚.本研究在缺氧条件下培养胎盘绒毛,观察缺氧上清液对中性粒细胞表达CD11b、CD18的影响.
-
149 软骨细胞培养及其调控因素研究进展
软骨细胞培养是软骨组织工程的第一环节,掌握软骨细胞培养及调控技术对软骨组织工程具有重要意义。本文就软骨细胞的分离培养、生物学特性及生长因子、血小板上清液、甲状腺激素等因素对软骨细胞的影响作一简介。
-
冷水游泳对小鼠2′,5′—寡腺苷酸合成酶的影响
干扰素是重要的体液免疫调节因子,测定2′,5′—寡腺苷酸合成酶可以反映体内干扰素的水平,进一步了解机体免疫功能状况。本实验旨在观察长期冷水(4℃和10℃)和温水(25℃)游泳后,小鼠免疫功能的变化,以探讨冬泳对人机体的影响。1 材料和方法1.1 材料:将体重15~22g的48只小鼠随机分成4组,即对照组、4℃游泳组、10℃游泳组、25℃游泳组,每组12只。1.2 方法 分别将各实验水温组的小鼠在相应温度的水中游泳,1次/日,1min/次,持续3个月后,于静息状态眼眶取血(肝素抗凝)300μl,加入含有100μl ATP、100μl缓冲液和20μl上清液,点样于DE—81离子交换纤维纸,在0.4M碳酸氢胺溶液中层析3h,根据紫外吸收点剪下,在紫外分光光度计读A260 OD值,以OD值作为2′,5′—寡腺苷酸合成酶的活性单位。
-
肝素钠乳膏鉴别(1)的改进
<国家食品药品监督管理局国家药品标准>WSi-(X-027)-2003Z肝素钠乳膏的鉴别(1)取本品2g,加水5ml振摇溶解离心,取上清液作为供试品溶液;另取肝素钠标准品适量,加水制成每1ml含100单位的溶液作为标准溶液.吸取上述溶液各4μl,照电泳法(中国药典2000年版二部附录V F第三法)试验,供试品与对照品所显斑点的迁移距离的比值为0.9~1.1.
-
对马来酸氯苯那敏片含量测定中过滤方法的探讨
马来酸氯苯那敏片又名扑尔敏片,它是临床上常用的抗组胺药物。《中国药典》2000年版二部在含量测定项下文字叙述为:“……稀释至刻度,摇匀,静置,滤过,取续滤液照分光光度法……。”没有规定静置时间,但在实际操作中发现,用滤纸滤过,虽均为澄明的滤液,但静置时间的长短对本品含量测定结果影响较大。甚至有的误差能达到10%左右。本文对此进行了考查,从不同的静置时间实验中得出:摇匀后,需要静置60分钟,取上清液滤过,测得的结果才能接近真实值,不然结果会有不同程度的偏高。……
-
2000年版中国药典中糊精溶液配制的讨论
在银量法中,常采用吸附指示剂法,用硝酸银为标准液,以吸附指示剂指示终点,测定卤化物的含量。为了使终点颜色变化明显,应尽可能使卤化银沉淀呈胶体状态,且有较大的表面。为此,在滴定前应将溶液稀释并加入糊精、淀粉等亲水性高分子化合物以形成保护胶体。而按《中国药典》2000年版糊精溶液(1→50)配制发现,每当室温下降至15℃以下时,糊精溶液的上清液便有乳浊现象,从而影响实验结果。
-
离心弃沉淀处理对药品微生物限度检查结果影响的考察
目的:通过对供试液经500r/min离心5min后,考察细菌、霉菌和酵母菌在上清液及沉淀中的分配情况及对药品微生物限度检查结果的影响.方法:采用药用淀粉为供试品制备供试液,分别加入各验证菌,将其离心后对上清液和沉淀物分别进行细菌、霉菌和酵母菌的计数并与未经离心处理的供试液进行对比.结果:离心后分布在上清液中的细菌、霉菌和酵母菌数少于沉淀物中,细菌的回收率小于40%,霉菌和酵母菌回收率小于5%.结论:供试液经500r/min离心5min后取上清液弃沉淀的处理方式影响药物菌落计数的准确性,使结果明显偏低,是一种需改进的方法.
关键词: 离心 细菌、霉菌和酵母菌计数 上清液 回收率 -
干扰素在血液系统疾病中的临床应用
干扰素(1nterferon,IFN)是一种天然存在的高活性糖蛋白.由机体生物细胞在诱导剂的诱导下产生的,对热和pH值相对稳定,分子量在12000-10000道尔顿之间.IFN初发现于病毒感染细胞的上清液中,因其能干扰其他病毒对细胞的重复感染,因此得名.1977年,美国学者用DNA重组技术于大肠杆菌生产IFN获得成功,称为基因重组IFN.
-
精液中炎性细胞对精子运动功能的影响
材料与方法:人精液标本6份,总活率大于50%,a级+b级精子≥38%.过氧化物酶甲苯胺蓝法证实白细胞总数小于106 ml-1.1∶2(体积比)加入孵育液,300×g离心15 min,弃上清,重复操作操作3次.调节细胞浓度至20×106个/ml.取24孔板每孔加入0.5 ml,实验组加入L-NAME,终浓度为1 mmol.L-1,37 ℃孵育.不同时间观察精子活动率的变化.孵育结束后Gresis试剂测定上清液中NO的生成.
-
2种白细胞滤器对红细胞储存期末溶血率的比较
红细胞溶解是明显的红细胞保存损伤现象[1].悬浮红细胞上清液中存在白细胞分泌或者细胞死亡崩解后释放的生物活性分子,可能导致输血不良反应.白细胞过滤技术的应用和推广使采集的血液经过滤后白细胞被有效滤除.但是在制备去白细胞悬浮红细胞的过程中,红细胞会受到过滤操作的机械作用,在保存期间是否会增加溶血的程度有待研究.我们于2012年1~12月对悬浮红细胞和去白细胞悬浮红细胞的储存期末溶血率进行分析,比较2种白细胞滤器过滤后的储存期末溶血率,报告如下.
-
组织胃泌素含量对胃黏膜病理变化的影响研究
1 材料和方法1.1 选择门诊常规胃镜检查病人,发现病变后在局部取两块组织,一块送病理检查,另一块送放免室测量组织胃泌素含量,并把病人分成凹陷性胃病、平坦性胃病及隆起性病变3组。组织胃泌素含量过低者淘汰。1.2 组织胃泌素含量测定1.2.1 前处理 取样本后新鲜状态下置分析天平称重,放入试管后加生理盐水2 ml,捣碎,沸水煮30 min,离心,取上清液后视质量大小做50~100倍稀释。1.2.2 测定 用3V公司提供的Gastrin RNA测定药盒,按说明操作。1.3 统计学处理 t检验2 结 果2.1 三种类型病变例数及组织胃泌素含量结果,见表1。
-
苯丙酮尿症的临床研究进展
PKU是挪威科学家Folling发现的,当时命名为苯丙酮尿性智力发育不全,1937年Quastel和Pen-rose将其命名为PKU,Jevis对苯丙酮尿症患者进行相关苯丙氨酸试验时发现,正常人肝脏组织的上清液可将苯丙氨酸转变为酪氨酸,但PKU患者无此功能,证实PKU患者发病与肝脏内苯丙氨酸代谢发生障碍有关[1],Guthrie及Susi首次应用半定量微生物学方法对高苯丙氨酸血症进行诊断,德国人Bickel首次报道应用低苯丙氨酸治疗PKU并获得成功.
-
成人急性白血病患者输注洗涤红细胞和血小板
输注去白细胞血小板或者ABO血型相同的去白细胞血小板,可以减少恶性血液系统疾病患者输注血小板治疗中输血无效和输血反应的发生,改善患者的预后和减少细菌感染的发生.对供体血浆抗原的异源免疫是导致血小板输注无效的重要原因,因此除去血浆上清液可以减少输注反应的发生,然而这一处理将损失大约20%的血小板.目前还没有临床试验比较洗涤和未洗涤血小板在避免出血的有效性和安全性方面的差异.