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抑癌基因PTEN/MMAC1的研究新进展
在肿瘤的进展期,由于基因组的不稳定性,常出现各种基因的变异,基因的杂合性丢失(LOH)是常见的一种.近来的研究发现,很多肿瘤有染色体10q23的杂合性丢失,这种改变常发生于恶性的胶质母细胞瘤和晚期前列腺癌,然而在低度恶性胶质细胞瘤及早期前列腺癌中却罕见.1997年,美国3个实验室先后在该位点发现了一个肿瘤抑制基因,分别命名为PTEN[1]、MMAC1 [2]和TEP1[3].实际上,这3个基因是同一个基因,定位于10q23,该基因有抑制酪氨酸的磷酸化,对细胞的增殖起负调节,因此该基因被人们归入抑癌基因的行列[4].
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石仙桃多糖对哮喘大鼠肺部炎症、细胞外信号调节酶和蛋白激酶B表达水平的影响
目的 探讨石仙桃多糖(PCLP)对哮喘大鼠肺部炎症细胞外信号调节酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白表达水平的影响.方法 将48只大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组、PCLP组各12只.除正常组外,其他3组建立哮喘大鼠模型.建模第16天,地塞米松组、PCLP组分别给予地塞米松及PCLP灌胃,正常组、哮喘模型组给予生理盐水灌胃,干预28 d后取4组大鼠肺泡灌洗液进行细胞分类及计数,观察大鼠肺组织病理情况,比较4组大鼠ERK1/2、 磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平.结果 其他3组大鼠肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数均高于正常组(均P<0.05).地塞米松组和PCLP组的肺泡灌洗液中白细胞数和嗜酸性粒细胞数低于哮喘模型组(均P<0.05).地塞米松组和PCLP组大鼠肺组织炎症症状轻于哮喘模型组.PCLP组和地塞米松组肺组织中ERK1/2和p-Akt蛋白表达水平均低于哮喘模型组(均P<0.05).结论 PCLP可以减轻哮喘大鼠肺部炎症,机制可能是其抑制ERK1/2的磷酸化和降低p-Akt蛋白表达从而抑制气道平滑肌细胞增殖.
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慢性粒细胞白血病的治疗现状及进展
慢性粒细胞白血病(CML)是发生于造血干细胞的克隆性恶性肿瘤.在1960年,Nowell和Hungerford首先发现CML病人具有获得性的染色体异常,名之为费城染色体(Philadelphia,Ph).1973年,Rowley发现它是9号和22号染色体长臂间交互易位的结果,即t(9;22)(q34;q11).1983年以后,证实了9号染色体上c-abl与22号染色体上bcr基因交互易位,在22号染色体上所形成的BCR-ABL融合基因,表达P210bcr/abl融合蛋白,有很强的酪氨酸激酶活性,可使一系列信号蛋白发生持续性的磷酸化,导致白血病的发生.CML病人经历慢性期、加速期、急变期三个阶段,各自的中位数时间分别为3～4年;6～9个月;3～6个月.CML治疗不能满足于完全血液学缓解(CHR),还要达到完全细胞遗传学缓解(CCR),进而提高CML分子学缓解率达到治愈的目的.
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阿尔茨海默氏症中tau蛋白磷酸化与去磷酸化
阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)是一种中枢神经系统退行性病变,是老年痴呆常见的类型.其特征性的病理变化之一为脑神经元内因为异常过度磷酸化的tau蛋白聚集而形成的神经元纤维缠结(neuro fibrillary tangle,NFT),并且临床痴呆症状的严重程度与神经原纤维缠结的多少有关[1].异常过度磷酸化的tau蛋白易在退变神经元的胞体聚集成双螺旋丝(paired helical filamend,PHF)结构导致NFT的形成而失去了其生物学功能,变成具有细胞毒性的分子猎获神经元中正常的微管相关蛋白,使微管的正常结构崩解,进一步引发脑神经元退行性改变[2,3].因此,tau蛋白的异常过度磷酸化被广泛认为是AD致病过程中的早期关键事件.tau蛋白磷酸化的水平受催化tau蛋白磷酸化的蛋白激酶与催化tau蛋白去磷酸化的磷酸酯酶的相对活性所控制.本文就AD病中tau蛋白的磷酸化与去磷酸化综述如下.
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G蛋白偶联受体激酶与细胞信号调控
G蛋白偶联受体激酶(GRK)属丝氨酸/苏氨酸激酶家族,通过磷酸化快速“去敏”激动剂引发的G蛋白偶联受体(GPCR)的信号转导,新近研究揭示GRK还能够磷酸化非GPCR分子以及以非磷酸化作用参与细胞内多种重要信号通路的调控,是细胞信号转导研究的前沿领域.现就GRK的生化特性、胞膜定位机制、病理生物学功能、非激酶样作用及对非GPCR的磷酸化作用等新研究成果做一综述.
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子研究进展
细胞周期与细胞癌变的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一.细胞周期是细胞生命活动的基本过程,正常情况下,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态.如果细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,如细胞转化、癌变.参与细胞周期调控的因子主要有:细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(Cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI).Cyclin目前发现有8个成员,分别命名为Cyclin A、B、C、D、E、F、G、H.CDK目前发现7个成员,分别命名为CDK1-7.CKI为新发现的一类蛋白,通过与CDK、cyclin或cyclin-cdk复合物的结合,抑制CDK的激酶活性,从而调节细胞周期正常、有序地进行.目前CKI分为两大家族:①Ink4(Inhibitor of cdk 4):包括P16ink4a、P15ink4b、P18ink4c、P19ink4d,其蛋白质结构与功能具有高度相似性,特异性抑制cdk4·cyclin D1、cdk6·cyclin D1的磷酸化激酶活性.②Kip(Kinase inhibition protein):包括P21cip1 (cyclin inhibition protein 1)、P27kip1(kinase inhibition protein 1)、P57kip2,它们在N-末端具有高度的结构和功能相似性,抑制现已知的大多数cdk、cyclin的磷酶化激酶活性.
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昼夜节律基因PER家族与肿瘤研究
昼夜节律(24 h)存在于所有的原核和真核生物中,在哺乳动物中,这一系统的中央起搏点位于下丘脑前部的视交叉上(suprachiasmatic nucleus,SCN).目前,昼夜节律的产生机制已成为生命科学研究的一个热点和前沿性问题.许多研究表明,昼夜节律与失眠症、内分泌代谢性疾病、肿瘤等都具有一定的相关性.近年来,节律失调与肿瘤的关系越来越受到关注,现综述如下.
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磷酸化蛋白质组学的研究策略
蛋白质磷酸化和去磷酸化是蛋白质翻译后修饰中普遍、重要的形式.它参与了生物细胞信号转导、细胞分化和细胞生长等重要过程,并与许多疾病发生密切相关.随着蛋白质组学技术的不断发展和完善,磷酸化蛋白质的分析成为可能.现就磷酸化蛋白质的研究策略进行探讨.
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蛋白激酶CK2与补体系统
蛋白激酶CK2是一种高度保守的、在真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.它由两个催化亚基(α和/或α′)和两个调节亚基β组成,参与了一系列细胞生理功能的过程.CK2与补体系统中的某些成分C1r、C3、C9有着密切的关系,从而影响补体系统在杀灭、溶解细胞以及吸引吞噬细胞、调节吞噬作用等方面的生理功能.该文就近年来有关CK2对补体系统成分进行磷酸化的作用及其对补体生理功能方面影响的研究作一综述.
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红细胞膜带3蛋白酪氨酸磷酸化的研究进展
生理红细胞膜带3蛋白磷酸酪氨酸因受PTKs及PTPs作用而处于低水平,体外某些因素通过作用于PTKs及PTPs来改变酪氨酸的磷酸化状态,而酪氨酸磷酸化的增强是细胞膜骨架、形态、代谢乃至带3蛋白阴离子转运功能改变的重要机制.
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曲古抑菌素A对甲状腺鳞癌细胞中Cyclin D1、CDK4、pRB表达的影响
目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺鳞癌(SW579)细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、视网膜母细胞瘤基因(RB)的蛋白产物(pRB)表达的影响.方法:体外培养SW579细胞,以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组,另设空白对照(未作任何处理)组,观察50、100、200、400 nmol·L-1 TSA对SW579细胞生长抑制率的影响,及细胞中Cyclin D1、CDK4、RB基因和蛋白的表达情况.结果:与溶剂对照组和空白对照组比较,各剂量TSA作用后SW579细胞的细胞生长抑制率明显升高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.与空白对照组比较,各剂量TSA作用后SW579细胞中Cyclin D1 mRNA表达明显降低(P＜0.01),且随剂量增加表达降低,但CDK4、RB mRNA表达和溶剂对照组中这2个基因的表达均无明显变化(P＞0.05);与空白对照组比较,各剂量TSA作用后细胞中CyclinD1和pRB蛋白表达明显降低(P＜0.01),且随剂量增加表达降低,但CDK4蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论:TSA能明显抑制SW579细胞的生长,且呈剂量依赖性;其机制可能与CyclinD1基因和蛋白、pRB蛋白的表达有关.
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替米沙坦对大鼠心肌肥厚组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响
目的:观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响.方法:清洁级健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组3组,每组10只.模型组和干预组给予异丙肾上腺素皮下注射,干预组在给予异丙肾上腺素注射同时灌胃应用替米沙坦,对照组给予生理盐水皮下注射.进行心肌相关指数、病理学检测,并采用RT-PCR方法检测大鼠左心室心肌心房钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)表达,检测模型建立成功情况;模型建立成功后,各组大鼠取左心室心肌组织采用免疫组化检测磷酸化Raf(phosphorylation of Raf,p-Raf)和磷酸化细胞外调节激酶1/2 (phosphorylation of extracellu-lar regulated protein kinase 1/2,p-ERK 1/2)表达.结果:模型组p-Raf阳性区域平均积分光密度明显高于对照组(P=0.000),干预组介于模型组与对照组之间(P=0.041,P=0.031);模型组p-ERK1/2阳性区域平均积分光密度明显高于对照组(P=0.000),干预组介于模型组与对照组之间(P=0.0039,P=0.023).结论:替米沙坦可能抑制p-Raf、p-ERK1/2蛋白表达而抑制Raf/MEK/ERK信号通路激活,具有抗心肌肥厚的作用.
关键词： 心肌肥厚 替米沙坦 磷酸化 磷酸化细胞外调节激酶1/2 -
肝癌细胞中CDK2调控宿主限制性因子SAMHD1的磷酸化机制研究
目的:主要研究乙肝病毒 (hepatitis B virus, HBV) 感染肝细胞后, 细胞周期激酶2 (cyclin-dependent kinase 2, CDK2) 调控宿主限制性因子SAMHD1 (sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1) 磷酸化的分子机制.方法:利用si RNA干扰技术, 特异性处理肝癌细胞Huh7.0的对照组、干扰CDK1组和干扰CDK2组, 分别用Southern blot检测这3组中乙肝病毒复制的变化, Western blot检测这3组中SAMHD1磷酸化水平的变化, 流式细胞仪检测这3组中细胞周期的变化;进一步通过免疫共沉淀技术鉴定肝癌细胞中CDK2激酶和SAMHD1的相互作用.结果:在肝癌细胞Huh7.0中, 与对照组相比, 干扰CDK1组和干扰CDK2组的细胞周期明显有差异, 分别停滞在G2期 (P=0.001) 或G1期 (P=0.001) .Western blot结果表明, 干扰CDK2后, 宿主限制性因子SAMHD1磷酸化水平下降48％, Southern blot结果表明病毒复制水平降低57％ (P=0.003) , 而干扰CDK1后病毒复制水平没有明显变化 (P=0.325) 进一步通过免疫共沉淀发现在肝癌细胞Huh7.0中, CDK2激酶可与SAMHD1发生相互作用, 并且相互作用发生在细胞核内.结论:HBV感染肝细胞后, 募集CDK2调控宿主限制性因子SAMHD1的磷酸化, 拮抗其抗病毒作用.
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电磁辐射对原代培养的皮层神经元中tau蛋白磷酸化的影响
目的 研究电磁辐射对原代培养皮层神经元tau蛋白磷酸化的影响.方法 原代培养大鼠皮层神经元分为假辐照组和辐照组,辐照组采用平均功率密度为90 mW/cm2的电磁波辐照10 min,分别于辐照后0、1、3、6、12 h取材.采用CCK-8检测电磁辐射辐照后神经元活性,Western blot检测tau蛋白磷酸化位点ser199/202、ser396、ser404磷酸化变化,同时观察细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5,CDK5)抑制剂Roscovitine、糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)抑制剂氯化锂(LiCl)和钙激活蛋白酶(calpain)抑制剂PD150606对电磁辐射暴露后tau蛋白磷酸化水平的影响.结果 电磁辐射辐照后6h和12 h,原代培养大鼠皮层神经元细胞活性明显降低[与假辐照组比较,分别下降19％ (P ＜0.05)和30％ (P ＜0.01)].电磁辐射辐照后1h和3h,原代培养大鼠皮层神经元tau蛋白ser404位点磷酸化程度一过性增强[与假辐照组比较,分别升高89％(P＜0.01)和46％(P＜0.05)],而ser199/202、ser396位点磷酸化程度变化不明显(P＞0.05).Roscovitine、LiCl和PD150606对电磁辐射引起的tau蛋白ser404位点过度磷酸化有显著抑制作用(P＜0.01).结论 电磁辐射可引起原代培养的皮层神经元tau蛋白ser404位点过度磷酸化,CDK5、GSK-3β和calpain参与其中.
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Ⅱ型登革病毒感染对细胞波形蛋白表达及磷酸化水平调控的实验研究
目的 研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点( Ser71)磷酸化水平的变化.方法 使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的表达和Ser71磷酸化水平.结果 DV2感染的ECV304细胞中波形蛋白表达较对照组没有显著差异(P＞0.05),而波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平较对照组有显著差异:DV2在进入ECV304细胞第30分钟时波形蛋白Ser71磷酸化水平显著增高,达到对照组的176.3％ (P＜0.01)；而在感染后第8小时,Ser71位点磷酸化水平再次显著增高,达到对照组的333.2％(P＜0.01),感染后第12小时降低至对照组的203.5％ (P ＜0.05).结论 波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平变化与DV2在ECV304细胞中的感染与复制周期密切相关.
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严重烫伤大鼠海马NMDA受体活性变化的机制研究
目的研究严重创伤对海马NMDA受体(NR)活性的影响及其相关机制,为设法调节NR的活性从而控制创伤后HPA轴的过度兴奋提供实验依据.方法以大鼠背部30%TBSA Ⅲ度烫伤作为严重创伤过度应激模型,利用放射配基结合法检测烫伤后海马NR活性(大结合容量及亲和力)的变化;Western-blot+免疫共沉淀方法检测烫伤海马NR1、NR2A 、NR2B酪氨酸磷酸化的改变;高效液相色谱方法检测烫伤海马谷氨酸含量的变化.结果严重烫伤后0.5、1、2、4、8、24、48 h海马NR的亲和力显著增加,尤以烫伤后2 h为明显,大结合量从1 h起亦显著增加;各时相点海马酪氨酸磷酸化NR1、磷酸化NR2A及磷酸化NR2B蛋白水平皆显著增高;烫伤后0.5、1、2、4 h,海马内谷氨酸释放量增加非常明显,伤后24 h及48 h无明显变化.结论严重烫伤导致海马NR持续过度激活;NR酪氨酸磷酸化水平的增加是其过度激活的重要原因,谷氨酸释放量的变化可能不是其持续激活的主要因素.
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LPS对小鼠肺组织及RAW264.7细胞Akt蛋白表达及磷酸化的调控
目的 探讨脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)在体内外对Akt蛋白表达和磷酸化水平的影响.方法 用不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,检测不同时相点细胞Akt蛋白表达和磷酸化水平.小鼠腹腔注射LPS 6 h 后检测肺组织Akt蛋白表达和磷酸化水平.结果 不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,细胞Akt蛋白表达没有显著差异(P>0.05),磷酸化水平增加.而内毒素血症小鼠肺组织Akt蛋白表达没有显著变化(P>0.05),磷酸化水平减低.结论 LPS在体内外对Akt蛋白磷酸化作用不同,体外Akt蛋白磷酸化水平增高,但在内毒素血症小鼠体内出现Akt蛋白磷酸化水平异常减低.
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缺氧对大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位磷酸化的影响
目的 观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化.方法 成年大鼠置于模拟海拔5 500 m高度的低压氧舱内,每天缺氧8 h,分别缺氧3、7、14 d和21 d.采用免疫组化、Western blot+免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸磷酸化的变化.结果 免疫组化显示缺氧皮层、海马NR1表达都明显高于对照组(P《0.01).Western blot检测进一步证明NR1的表达显著高于对照组(P《0.01),且随着缺氧时间的延长而增加.缺氧各组酪氨酸磷酸化水平亦显著高于对照组(P《0.01),缺氧14 d后酪氨酸磷酸化达到高峰,而后开始下降,21 d时仍显著高于对照组(P《0.01).结论 高原缺氧条件下大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位表达及酪氨酸磷酸化水平显著增加,酪氨酸磷酸化的变化可能是影响NMDA受体功能的主要原因.
关键词： 缺氧 皮层 海马 NMDA受体NR1亚单位 磷酸化 -
CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症中的作用
目的 评价CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症(detrusor overactivity,DO)中的作用,并初步探讨PP1和PP2A对CX43蛋白磷酸化修饰状态的影响.方法 建立大鼠DO模型作为实验组,假手术组作为对照组,Western blot检测CX43蛋白磷酸化水平、PP1及PP2A的表达变化,免疫荧光双染对CX43与PP1、PP2A的定位及表达变化进行检测,荧光漂白恢复实验(FRAP)比较正常组、DO组、DO+碱性磷酸酶(AP)组的细胞间通讯功能(gap junction intercellular communication,GJIC)的差异.结果 与正常组相比,DO组膀胱中的CX43蛋白的不同磷酸化修饰状态(P0、P1、P2)的表达水平均明显升高(P＜0.05),PP2A的表达明显降低(P＜0.05),PP1的表达未发现明显改变(P＞0.05).DO组的GJIC较正常组明显增加(P＜0.05),DO+ AP组的GJIC较正常组和DO组明显降低(P＜0.05).结论 CX43蛋白的磷酸化水平上调可能在DO的发病过程中发挥着重要的作用,这种磷酸化水平的上调可能与PP2A的表达减少相关.
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下调PTEN基因对慢性偏头痛大鼠NR2B亚基酪氨酸磷酸化和一氧化氮的影响
目的 利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的表达,探讨PTEN基因对慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基酪氨酸磷酸化(NR2B-pTyr)蛋白表达水平和一氧化氮(NO)含量的影响.方法 将SD雄性大鼠分为对照组、对照干预组、模型组和模型干预组.硬脑膜滴注炎性汤(IS)建立慢性偏头痛大鼠模型,TNC注射AdR-siPTEN,7d后观察大鼠行为学改变,检测大鼠TNC内PTEN、NR2B-pTyr和NO含量.结果 AdR-siPTEN可下调慢性偏头痛大鼠模型TNC中PTEN的表达;与模型组比较,IS干预慢性偏头痛大鼠的行为学症状明显缓解,大鼠的TNC内NR2B-pTyr表达水平及NO水平明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PTEN参与调节慢性偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可缓解IS谤导的慢性偏头痛大鼠的疼痛行为学,其机制可能与下调PTEN引起NR2B-pTyr表达量及NO水平降低有关.
