维生素E琥珀酸酯诱导人白血病细胞凋亡的发生

本研究选择两株人白血病细胞Raji(人单核细胞白血病细胞株)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞株),体外比较观察了VE和VES对细胞的生长抑制作用及其与诱发细胞凋亡的关系.检测指标及结果如下:(1)维生素E和VES诱导细胞凋亡的形态学观察.倒置显微镜下观察维生素E和VES作用72 h后的Raji细胞;制备单细胞层涂片,4℃固定、Hoechst 33258避光染色后,荧光显微镜观察.倒置显微镜下,VES组细胞透亮性下降,并见颗粒、碎片,台盼蓝染色大多为阳性.荧光显微镜下,对照培养细胞的胞核大多数大小一致、染色均匀,VES处理组细胞可见随作用剂量增加而逐渐增多的凋亡细胞核.维生素E处理组的上述改变较相同剂量VES组轻.(2)维生素E和VES对细胞的生长抑制作用.Raji.jurkat细胞分装于24孔培养板,设维生素E组(5、10、20μg/mL)、VES组(5、10、20μg/mL),空白对照组、乙醇对照组、丁二酸组,台盼蓝排除法5 d计数.维生素E和VES对Raji、Jurkat细胞的生长均具有程度不一的抑制作用,维生素E对Jurkat细胞的抑制作用较弱,而Raji细胞对维生素E和VES的反应更为敏感,20μg/mL的VES在24h的抑制率达到30%,72 h抑制率为100%,并表现出时间效应和剂量效应的关系.(3)流式细胞仪检测维生素E和VES诱导细胞凋亡.

928合成航空润滑油急性毒性评价/抗氧化剂对气体培养细胞的超微弱自主发光/舰艇用木质建材释放物毒性比较/舰艇用防火漆热解气急性吸入毒性试验/两种舰船饮水舱涂料的卫生鉴定及毒性评价

菠菜可以用来做心脏组织?

为了解决捐助器官长期的短缺问题,科学家一直致力于在实验室里培养各种组织甚至整个器官.但是培养细胞只是解决方案的一部分,如果没有恒定的血液供应,他们根本就不会茁壮成长.构建可以工作的精细血管(也称为脉管系统)网络是非常困难的,特别是毛细血管,只有5到10微米宽.

常吃菠菜健脑又明目

美国专家研究发现,菠菜有助于防止大脑的老化.研究者对老鼠进行了为期8个月的饮食控制试验后发现,老鼠的神经细胞通讯传递有了明显的增强,而这种通讯传递对于运动、学习和自控十分重要.同样,每天让老年人吃一定数量的菠菜和草莓的试验观察也证明,多食菠菜有助于减少老年人常见的记忆力减退现象,研究认为,菠菜中含有大量的抗氧化剂,具有抗衰老,促进培养细胞增殖作用,既能激活大脑功能又可增强青春活力.

体外诱导的皮肤源性神经干细胞在大鼠受损伤脊髓内的存活和分化

为寻找新的神经干细胞来源用于治疗急性脊髓损伤的实验研究,本实验采用绿色荧光大鼠(GFP转基因鼠)有毛皮肤在体外经剪碎,胰酶消化,过滤细胞,无血清培养液培养分离细胞,用表皮生长因子和成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,去除生长因子后用含血清培养液培养细胞等过程,采用神经上皮于细胞蛋白(nestin)、微管相关蛋白(MAP2)、神经丝蛋白(NF-200)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫细胞化学染色法对培养细胞的分化状况进行鉴定.

我国建起了细胞培养细胞库--基础性科技工作建设项目

细胞是一切有机体的基本生命单位,是一切生命科学研究的基础材料.体外培养细胞要求绝对无菌等苛刻的条件,否则容易引起支原体感染或变异,使科研数据不够准确或难以重复. 长期以来我国在此领域仅有零星尝试,由于缺乏可靠的细胞来源和培养材料,常常难以使体外细胞长期健康成活和传代.一些珍贵的科研成果如单克隆抗体或传染特定基因的细胞株常因传代保存不善而造成损失.为了取得令国际同行信服的科研数据,国内很多实验室都在国外购买标准细胞.没有我国自己的符合国际标准的细胞培养细胞库,已成为我国科技发展的瓶颈.1999年启动国家细胞库建设项目.2000年10月,中国医科院基础医学细胞中心成立.与国内有关单位一起研制生产了大型液氮冻存设备 ,完成了原保存的100余株、系细胞的整理和登记,扩容入库细胞60株、系,同时建立健全了各种规章制度,制定了符合国标标准的操作规程,并开始对外提供细胞等服务.中科院上海生化细胞所1991年就建成中科院细胞库,这次改建了生物防护实验室,对外服务细胞千余种.科技部、卫生部专家希望这两个细胞库加速基地建设和国际化进程,继续为国家重要科研项目提供标准的细胞株,并在今后基因组计划、干细胞的深入研究中,发挥优质技术平台作用 .引自<健康报>

用改良地高辛标记原位杂交方法检测Ly49CmRNA表达

由Ly49C在细胞免疫调节中传导抑制性信号,推测该分子与移植免疫耐受有关.国内外大多数的研究是用单克隆抗体方法检测该分子的膜表达,但是试剂价格昂贵,且需要特殊实验设备(如免疫荧光显微镜、流式细胞仪等),不利于推广应用.我们根据核酸杂交原理,从减少组织细胞的破坏、降低成本两方面,对地高辛标记原位杂交方法进行了改良,并应用改良后的原位杂交方法在培养细胞的甩片上检测Ly49CmRNA的表达,具有特异、清晰、低成本、简单等特点[1].介绍如下.

培养细胞切片匀浆液在Her-2免疫组化检测中的应用

免疫组化在病理工作中应用十分广泛,但让医师担心的是由于各种原因引起的假阴性、假阳性,在无内对照的情况下极易引起误诊,导致临床手术或治疗方案的不恰当,造成无法挽回的损失,特别是直接用于临床治疗的指标(如Her-2),解决这个问题好的方法是另设阳性和阴性对照.但由于现有的阳性对照方法都因为加样时费时、费力、步骤烦琐,在许多实验室都没有很好的普及应用.因此,找出一种快捷、方便、容易制备的阳性、阴性对照方法,是解决这个问题的关键.我们通过反复研究,终于找到了解决的办法,现介绍如下.

MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察

目的观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化,确定培养细胞发生转化进而增殖的佳诱导时间. 方法将23～28 d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液,接种于小盖玻片上,培养于含20%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中.将接种培养第4、5、6、7、8 d的细胞分别设为5个实验组及其相应的对照组.实验组用含终浓度为3 μg/ml MNNG的常规培养基处理48 h,对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间,嗣后换用常规培养基培养4周,再改用含5%小牛血清的培养基继续培养.MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样,每组随机取3张小盖玻片进行电镜扫描观察,连续取样11周. 结果经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构,既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞,也有表面光滑如玻璃珠状的细胞,还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞;实验1组培养至第5周即出现大量分裂细胞. 结论 MNNG诱导培养第4 d的日本血吸虫成虫细胞培养至第5周可发生转化而出现分裂、增殖.

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞SDH的影响

目的以琥珀酸脱氢酶(SDH)为指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对日本血吸虫成虫培养细胞生长代谢的影响. 方法将24 d龄的日本血吸虫成虫用冷消化法制成细胞悬液,联合法将细胞接种于小盖玻片上培养.培养至第4 d,一部分细胞用含Spd终浓度分别为0(对照)、25、50、75、80、90、100、150、200 μmol/L的无血清培养基处理24 h,另一部分细胞用终浓度为75 μmol/L的Spd分别处理0(对照)、12、24、36、48、60、72 h.然后用PBS清洗3次,再换用常规培养基继续培养.至第8 d,对处理过的培养细胞进行SDH细胞化学染色,Olympus-BH2显微镜下观察、拍照,并将结果输入HPIAS-2000图像分析仪进行图像分析. 结果用Spd作用24 h,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随Spd浓度的升高逐渐增强,75 μmol/L时达到高,>75 μmol/L,SDH活性逐渐减弱.当Spd作用浓度为75 μmol/L时,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随着Spd作用时间的延长逐渐增强,48 h时达到高,然后逐渐减弱.统计学分析显示,Spd处理后的实验组培养细胞,其SDH活性与对照组细胞比较差异具有显著性(P<0.05);用终浓度为75 μmol/L的Spd处理培养细胞48 h,培养细胞的SDH活性显著强于其余各组(P<0.01). 结论 Spd可显著增强日本血吸虫培养细胞的生长代谢活性;用终浓度为75 μmol/L的Spd处理48 h,培养细胞的SDH活性强.

双嗜性逆转录病毒感染日本血吸虫细胞的生物学理论与可行性探讨

目的 探讨用双嗜性逆转录病毒载体将外源基因导入日本血吸虫(Sj)细胞的生物学理论与实验依据. 方法 用生物信息学方法对双嗜性逆转录病毒rRam-1受体同源性分布、结构与功能作系统的分析与比较;利用携带外源E77.43基因的双嗜性逆转录病毒感染Sj童虫培养细胞,经PCR和RT-PCR检测感染细胞目的 基因(E77.43)的整合与表达. 结果 根据生物信息学分析结果推断,Sj细胞膜上存在的SiCHGC09605和SjCHGC05362两种蛋白为非分泌性跨膜蛋白,可能具有细胞膜离子转运通道或受体蛋白的功能及双嗜性逆转录病毒感染的膜受体样作用,可能参与病毒对细胞的吸附和穿入过程;利用携带外源E77.43基因的双嗜性逆转录病毒感染Sj童虫培养细胞后.用PCR及RT-PCR检测到目的 基因整合与表达,扩增的目的 片段大小为330 bp,与理论值相符. 结论 用载有E77.43基因的双嗜性逆转录病毒感染Sj童虫细胞获得成功,推测SiCHGC09605和SjCHGC05362两种与rRam-1受体同源的蛋白可能是Sj感染过程中起作用的分子.研究结果为下一步用双嗜性逆转录病毒载体转导永生化基因到Sj细胞提供了生物学理论与实验依据.

增加洗肾液对纯化地鼠肾细胞狂犬病疫苗收获率影响的分析

在纯化地鼠肾细胞狂犬病疫苗生产操作过程中解剖取肾对原倍疫苗的收获率起着很重要的影响.因此,我们在解剖取肾消化培养细胞过程中做了大量试验,观察和比较后发现,在其他条件一致的情况下,增加洗肾液(由8L灭菌Hank's液增加至12L)与不增加(8L灭菌Hank's液)两者相比,对原倍疫苗收获率的影响很大.

培养细胞污染支原体的PCR检测方法的建立及应用

在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色;用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等[1].然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量.污染细胞常见的支原体包括:发醉支原体（M.fementans）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）、口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginina）、梨支原体（M.pirum）、唾液支原体（M.salivarium）和人型支原体(M.hominis)[2-3].被这些支原体污染的细胞常常不引起明显的细胞病变,也不导致培养液浑浊,难以凭肉眼发现,因此,建立一种高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要.

培养细胞免疫细胞化学技术的特点与临床应用

培养细胞免疫化学技术作为一种跨领域的研究手段,是将免疫细胞化学技术与细胞培养技术密切结合的技术,可获得单纯从体内实验难以达到的效果.培养细胞免疫组织化学技术与组织切片的免疫组织化学技术基本原理和操作是相同的,但又有许多要特别注意的细节.

体外培养细胞工作中支原体污染及对策

一、细胞培养中常见的污染问题由不同细胞、不同组织器官构成的哺乳动物,其细胞在整体存活时,互相调节、互相依赖,有很好的内环境平衡稳定系统,有特化的应对外来微生物感染、致病因子作用的免疫系统.细胞生活在温度、pH、离子强度、营养成分等相对稳定的状态下.哺乳类细胞在体外培养成活本身就是一项研究.科学家模仿并尽可能创造接近体内的环境,成功地在实验室中培养了各种哺乳类细胞,是20世纪很重要的成就.

还原型谷胱甘肽对肺泡巨噬细胞凋亡的影响

肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage, AM）是肺部防御病原微生物和肺损伤的第一道防线，AM凋亡的异常可影响肺免疫防御的完整性。中性粒细胞（PMN）肺内聚集是导致肺损伤的重要因素，PMN释放介质对AM有一定的影响。我们采用体外培养细胞方法原代培养大鼠AM，分离并激活PMN，收集上清液与AM共同孵育，观察AM的形态变化，测定培养上清液中LDH和NO的释放情况，并以原位凋亡检测法和免疫组化测定Fas等反映AM凋亡的变化，以期研究还原型谷胱甘肽（R-GSH）对AM凋亡的影响。

肺炎衣原体蛋白酶样活性因子在急性感染期的表达和分泌

肺炎衣原体(Chlamydia pneumonia, C.pn)是一类专性的细胞内革兰阴性菌,可在真核细胞的胞浆内复制并生存很长时间[1].C.pn在人群感染率很高,20岁以上的人群感染率高达50%以上,在某些个体还存在持续的慢性感染,可引起肺炎、咽炎和支气管炎,并且可能导致哮喘、动脉粥样硬化.C.pn的致病机理,尤其是其导致宿主持续感染的机制至今仍不清楚.钟光明等[2]首次克隆并鉴定了一个由C.pn基因编码的衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF),是目前发现的惟一由C.pn合成并分泌至宿主细胞的蛋白,是C.pn和宿主之间相互作用的途径之一,在C.pn的致病中可能发挥了重要作用.本实验分别观察C.pn感染培养细胞和小鼠肺组织后CPAF合成分泌的动态变化,对我们了解CPAF的调节作用有重要意义.

丙型肝炎病毒JFH-1株在细胞培养中的复制

1989年确认丙型肝炎病毒(HCV)为丙型肝炎病原体后,因其宿主范围仅限于黑猩猩和人,一直不能在常规培养细胞中复制,1999年Lohmann等[1]开发出HCV复制子技术,使HCV非结构区亚基因组RNA在Huh-7细胞中能够复制,成为研究HCV复制机制的有力工具.

当前临床流式细胞分析的发展趋势

流式细胞分析,又称流式细胞术(Flow cytometry,FCM),是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它具有如下几个特点:①标本只要是单细胞即可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等,实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能分析,因此,实际上所有组织细胞均可用于分析.②极短时间内可分析大量细胞,只要标本中的细胞数量足够,流式细胞仪(Flow cytometer)可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量,测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个.③可同时分析单个细胞的多种特征,当同时用多种分子探针,如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色,通过流式细胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数更为准确.④定性或定量分析细胞:通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度等均可进行单细胞水平的定性与定量分析.

介绍一种高压离体细胞培养装置

高血压病主要的临床特点是全身动脉血压升高,并伴有脉压差的变化.在高血压的病理状态下动脉内皮细胞、血管平滑肌细胞、肾小球毛细血管内皮细胞及肾系膜细胞所承受的机械力都发生了变化,从而使这些细胞的形态、功能都发生变化进而使靶器官(心、脑、肾)功能改变.为了研究机械力学对细胞功能的影响,我们在原有的工作基础上设计了一套高压培养细胞装置,模拟细胞在高血压病理状态下所承受的机械力学的变化.