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颅脑损伤
一、概述 颅脑损伤分为闭合性脑损伤与开放性脑损伤，包括头皮损伤、颅骨骨折、脑损伤及颅内血肿，按脑损伤的病理改变，又可分为原发性和继发性脑损伤。原发性脑损伤包括脑震荡、脑挫裂伤、弥漫性轴索损伤和脑干损伤；继发性脑损伤主要为缺血、缺氧、脑水肿、颅内出血及脑疝引起。 二、发病机制 1．直接暴力头部受外力直接作用，可分为加速性、减速性、挤压性及旋转性四种方式。 2．间接暴力外力作用于身体其他部位再传导至头部，可分颅颈连接处、挥鞭样及胸部挤压伤三种。 3．继发性脑损伤的生物化学改变。 (1)兴奋性氨基酸毒性作用动物实验证明，脑损伤可引起大量兴奋性氨基酸，主要为谷氨酸(Glu)、天门氨酸产生等。近年临床上用脑微量透析法，发现严重脑损伤的脑组织中Glu增高数倍至数十倍，脑损伤越重，Glu越高，故认为Glu增加可损害神经元。动物实验显示应用NMDA受体拮抗剂，如镁离子、东莨菪碱、或亚胺马来酸盐(MK-801)等可减轻Glu增高的损害反应。 (2)钙超载脑损伤时NMDA受体开放Ca2＋通道，Ca2＋大量流入细胞内致钙超载。钙超载使磷酸脂酶(PLC)、蛋白激酶和一氧化氮合成等活性增高。PLC活性增高使细胞膜磷脂分解为花生四烯酸，则细胞膜的血脑屏障破坏而发生脑水肿。花生四烯酸再降解成血栓素、前列环素及白三烯，使血管收缩和血小板凝集、导致局部脑微循环障碍而缺血和脑水肿加重。蛋白激酶活性过高，则影响三磷酸腺苷的产生和细胞能量代谢。一氧化氮合成活性增高使NO产生增加，并扩散至邻近神经细胞和胶质细胞，使DNA断裂或合成抑制。因此，钙超载导致神经细胞功能障碍和凋亡。应用尼莫地平、丹参等钙通道阻滞剂可以减少Ca2＋内流，减轻脑血管痉挛，增加脑血流。
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大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的动态变化及其与caspase-3基因表达的关系
目的 探讨创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡的变化规律及其与caspase-3基因表达的关系.方法 成年健康封闭群SD大鼠120只,随机分为对照组8只、损伤组和抑制物组各56只.Feeney法致伤,抑制物组伤后脑内注射5μg caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk.分别在伤后1,6,24,48 h和3,7,14 d处死取材(每个分析时相点8只大鼠),采集伤灶中心皮质、皮层下白质、海马、齿状回,以及对侧相应部位脑组织,应用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测神经细胞凋亡的变化;免疫组化法、蛋白印迹(western blot)和半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测caspase-3蛋白和mRNA的表达;并借助荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化.所得数据采用SIDSS 10.1统计软件包进行Sprarman等级相关分析和方差分析(sNK-α检验).结果 伤后伤侧各脑区神经细胞凋亡指数(AI)和细胞凋亡百分率(AP)迅速增高,24～48 h达峰值,随后逐渐下降,但伤后14 d仍高于正常(P＜0.01).伤后caspase-3蛋白和mRNA的表达明显增加,caspase-3活性迅速上升,峰值在24～48 h.其中伤后24 h伤侧海马区caspase-3蛋白谱密度与对照组相比增加1484%,caspase-3 mRNA的表达量增加1043%,caspase-3活性增加148%;伤后48h伤灶皮层下白质caspase-3蛋白谱密度增加1690%,caspase-3 mRNA的表达量增加1181%,caspase-3活性增加183%.Western blot显示,伤后caspase-3原酶及p17活性亚单位的表达均增强.抑制物组caspase-3蛋白和mRNA的表达均明显下降,caspase-3活性明显降低;同时,AI值和AP值也明显降低.统计学相关分析发现.伤后神经细胞凋亡与caspase-3 mRNA和蛋白的表达间呈正相关(r=0.821和r:0.638,P＜0.01),伤后caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达间呈正相关(r=0.945,P＜0.01).结论 急性TBI后神经细胞凋亡的发生与caspase-3的激活有关;神经细胞凋亡与其调节基因caspase-3的表达间具有一致性,TBI对caspase-3的调节发生在转录水平前的某一环节.caspase-3抑制剂能有效地阻断TBI后的神经细胞凋亡.
关键词： 脑损伤 神经细胞 凋亡 Caspase-3 z-DEVD-fmk -
Gαi2对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡的影响
目的 探讨分析抑制性G蛋白α2亚单位(Gαi2)在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型海马中的表达及其对神经细胞内钙离子浓度和凋亡的影响.方法 将90只SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(SS组,n=30)、脑缺血-再灌注损伤组(IR组,n=30).脑缺血-再灌注且脑室内微量灌注Gαi2活性抑制剂百日咳毒素(PT)组(PT组,n=30)；用免疫组化、Western blotting分别测定大鼠脑缺血-再灌注后6h、12 h、24 h各组中海马神经内Gαi2的表达,采用流式细胞术测定各组中海马细胞内游离Ca2+浓度的平均荧光值,TUNEL法检测神经元细胞的凋亡.结果 不同时间点,IR组Gαi2含量和Ca2+浓度较SS组明显增高(P＜0.01),PT组Ca2+浓度较IR组升高(P＜0.01),PT组神经细胞凋亡率较IR组升高(P＜0.05).结论 Gαi2在大鼠脑缺血-再灌注损伤中表达明显增高,并可降低缺血神经细胞内的钙离子浓度,减少神经细胞的凋亡,对缺血神经细胞具有保护作用.
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心搏骤停后脑缺血缺氧损害与脑复苏
心搏骤停是全脑缺血缺氧性损害为重要的原因.心搏骤停及心肺复苏后的一系列病理生理过程可触发易损区域(海马、皮层、丘脑等)神经细胞的缺血缺氧性损害.大量的神经细胞坏死和凋亡后引起相应的神经功能障碍,包括顺行性记忆缺失,学习困难,情绪和社会行为改变,抑郁,严重的出现昏迷、持续植物状态直至死亡.
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右美托咪定对化学性低氧环境下神经细胞的保护作用研究
目的：探讨右美托咪定（ Dex）在中枢神经细胞对抗化学性低氧环境损伤中的保护机制。方法建立化学性低氧环境的神经细胞模型，选取PC12细胞，采用右美托咪定及氯化钴（ CoCl2）的共同作用24 h。C组为空白对照组；Co组仅添加600μmol/L氯化钴；Dex组仅添加400μmol/L右美托咪定；CD组添加400μmol/L右美托咪定及600μmol/L氯化钴共同作用。采用Western blot法检测p38MAPK通路蛋白水平，采用MTT检测细胞存活率，采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，采用荧光光度法检测活性氧水平及线粒体膜电位水平。结果 Co组p38MAPK蛋白表达水平较C组明显上升，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组蛋白表达水平较Co组明显下降，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组对蛋白表达水平无影响，与C组比较差异无显著性（ P ﹥0.05）。Co组较C组细胞存活率明显降低、凋亡率明显提高，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组较Co组细胞存活率得到明显的提升、凋亡率降低，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组细胞存活率、凋亡率较C组无明显差异（ P ﹥0.05）。Co组较C组细胞活性氧水平明显提高、线粒体膜电位水平下降，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组较Co组细胞活性氧水平明显降低、线粒体膜电位水平提高，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组细胞活性氧水平及线粒体膜电位较C组无明显差异（ P ﹥0.05）。结论右美托咪定对化学性低氧环境引发的神经细胞损伤的保护作用确切，其保护机制可能与抑制p38MAPK通路、活性氧生成有关。
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HSP70的表达在不同预处理下星形孢菌素诱导的大鼠神经细胞毒性应激损伤模型中的意义
目的评估不同预处理对抑制星形孢菌素（STS）诱导的神经细胞毒性应激损伤的作用。方法选取 SD大鼠乳鼠120只，分为对照组（n =20）、STS 模型组（n =20）、姜黄素组（n =20）、槲皮素+ STS 模型组（n =20）、姜黄素+STS 预处理组（n =20）、姜黄素+槲皮素+ STS 处理组（n =20）6个组。取乳鼠海马神经细胞，利用 STS 诱导建立神经细胞毒性应激损伤模型。对照组研究期间不作任何特殊处理，STS 模型组、槲皮素+ STS 模型组、姜黄素+ STS 预处理组、姜黄素+槲皮素+ STS 处理组、姜黄素组分别加入终浓度为20μmol/ L 的 STS、终浓度为10μmol/ L 槲皮素+20μmol/ L ；STS、终浓度为20μmol/ L 的姜黄素和槲皮素、终浓度为10μmol/ L 的槲皮素+20μmol/ L 的姜黄素和槲皮素、终浓度为20μmol/ L 的姜黄素。利用噻唑蓝（MTT）法、乳酸脱氢酶（LDH）释放率和 WesternBlot 法分别测定各组细胞存活率、细胞毒性损伤程度和 HSP70表达量。结果姜黄素+ STS 预处理组、姜黄素组细胞存活率明显高于 STS 模型组，差异具有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 预处理组和姜黄素组神经细胞毒性率明显低于 STS 模型组，差异有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 预处理组 HSP70表达量高于 STS 模型组和姜黄素组，差异有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 模型组神经元存活率高于槲皮素+ STS 预处理组、姜黄素+槲皮素+ STS 预处理组和 STS 模型组，差异具有统计学意义（ P ＜0.05）。结论姜黄素能增强 HSP70的表达并抑制 STS 诱导的 SD 乳鼠神经元细胞毒性损伤，而槲皮素通过阻断 HSP70表达使姜黄素的抑制作用被抵消。
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血清胆碱脂酶测定对肝病诊疗价值的探讨
现有的肝脏功能测定项目中,多选择肝细胞破坏后所释放出的酶以及对胆汁代谢有关的一些项目,对反映肝脏合成功能方面的酶试验重视不够.胆碱脂酶(chE)由真胆碱脂酶(AchE)和拟胆碱脂酶(PchE)两部分组成,二者均能催化乙酰胆碱水解,生成胆碱和乙酸[1].血清中的chE以来源于肝脏的PchE为主,而来源于神经细胞和新生红细胞的AchE含量甚微[2],PchE由肝脏生成入血液,是反映肝实质合成功能的主要酶类.为此,我们对50例正常人及209例肝脏患者进行chE测定,并同时测定了丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),γ-谷氨酰转移酶(γ-GT),蛋白质及白球蛋白比值.现将结果报告如下.
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β-淀粉样蛋白在阿尔茨海默病中的病因学作用
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是由巴伐利亚的神经病理学家阿尔茨海默(Alois Alzheimer)于1907年首先发现,并以其名字而命名,这是一种渐进性的神经变性性疾病,这种疾病表现为全面的认知障碍,包括:记忆、定位、判断和推理.其临床特点是隐袭起病,逐渐出现记忆力减退、认知功能障碍、行为异常和社交障碍.通常病情呈进行性加重,逐渐丧失独立生活能力,发病后l0～20年因并发症而死亡.在病理方面,该症有三大特征:大脑皮层及海马区的β淀粉样蛋白(Amyloid β-peptide,Aβ)在胞外积累并形成老年斑(senile plaque,SP)、脑神经细胞内tau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT)、神经元突触功能异常及锥体神经细胞丢失;此外,还有下列病理特征:氧化应激增强、小胶质细胞增生、脑组织中胆固醇含量升高、血脑屏障损伤和一些蛋白(包括apoE, cathepthin D和 SOD)免疫反应性提高[1].
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参松养心胶囊在老年人失眠治疗中的应用
睡眠是人类生存的必要条件,人的一生中有1/3的时间是在睡眠中度过的,通过睡眠,使疲劳的神经细胞恢复正常的生理功能,精神和体力得到恢复.睡眠时垂体前叶生长激素分泌明显增高,有利于促进机体生长,并使核蛋白合成增加,有利于记忆的储存.睡眠直接关系脑的健康,促进脑功能的发育,睡眠还与人体免疫力有关.据近一期全球睡眠中国区调查结果显示,中国存在失眠的人群高达42.5%,且此状况有上升的趋势.睡眠研究专家称失眠为"悄然扩展的流行病".失眠在各年龄组均常见,老年人尤其常见.
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脑血循环的解剖、生理和病理
脑能量需求为器官之首.几乎无氧及无葡萄糖贮备,由循环血流供应,成人脑重1500克,占体重2%.每分750～1000cc血流经脑占总量20%,平均脑血流量50±5ml/100克脑重/分.静止时灰质76±10ml/100克脑重/分.白质20±4ml/100克脑重/分.中央区138±12ml/100克脑重/分.由颈总动脉到静脉窦血流时间4～8秒(平均6秒).脑耗氧量42～53ml/分,灰∶白＝3～5∶1.需能量8卡/100克脑重/分.葡萄糖脑耗量占17%.4～8克葡萄糖需量/小时,24小时115克.血供完全中断,8～12秒氧耗尽,ATP CPK2～3分耗竭,5分钟神经细胞开始缺血坏死.
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中枢神经细胞培养中电刺激的实验研究
目的了解电针刺激对神经细胞的影响.方法 1日龄Wistar大鼠脑神经细胞体外原代培养4天,第5日起分为4组:第1组为空白对照组,第2组为放置电极对照组,第3组为低电量刺激组(脉冲幅度:连续波形80mA,频率20Hz),第4组为中电量刺激组(脉冲幅度:连续波形120mA,频率20Hz).每天电刺激2次,每次30分钟,共7天.第10天开始显微镜下观察其与对照组在神经细胞形态上的变化.结果电刺激可以使神经细胞的突起有趋向性延长和连接.结论在神经细胞的培养过程中,电刺激对神经细胞生长具有一定影响.
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莫诺苷对SH-SY5Y神经细胞生长的影响及对过氧化氢诱导损伤的保护
目的 研究从中药山茱萸分离提取的有效成分莫诺苷对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响及对H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用.方法 对培养的SH-SY5Y细胞加入不同浓度的莫诺苷,以MTT代谢率为指标确定无毒范围以及莫诺苷促进神经细胞生长的佳有效浓度;对培养的SH-SY5Y细胞加入佳有效浓度的莫诺苷,观察MTT代谢率、细胞轴突长度及胞体面积、细胞计数的改变;H2O2 500 μmol/L诱导SH-SY5Y细胞损伤,加入不同浓度的莫诺苷及维生素E,以Western Blotting检测神经生长因子(NGF)的表达.结果 莫诺苷在10～100 μmol/L浓度范围内均可增加SH-SY5Y细胞的存活率;培养的SH-SY5Y细胞分别加入10 μmol/L莫诺苷,与正常对照组相比,莫诺苷组组MTT代谢率升高(P＜0.05),细胞轴突长度显著增长(P＜0.001),胞体面积明显增加(P＜0.01),细胞计数增加(P＜0.05);H2O2损伤后,莫诺苷组NGF的表达明显高于对照组(P＜0.01).结论 莫诺苷对SH-SY5Y细胞的生长有促进作用,并对H2O2诱导的损伤有神经保护作用.
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壳聚糖-碱性成纤维细胞生长因子载体诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化
目的探索壳聚糖-碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)载体对骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的诱导作用.方法免疫组织化学、Western blot检测MSCs诱导分化为神经细胞,MTT检测诱导后细胞的活性.结果 MSCs经壳聚糖-bFGF载体诱导后,表达神经干细胞的标记物Nestin以及神经细胞的标记物β-tubulinⅢ和MAP-2,比例高达83.54%.结论壳聚糖-bF-GF载体可以诱导MSCs高比例向神经细胞分化.
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莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤
目的 研究莫诺苷对H2O2诱导的神经细胞氧化损伤的影响.方法 培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷(1、10、100 μmol/L)预孵育24 h,加入H2O2 500 μmol/L作用18 h诱导产生氧化损伤,测定细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果 莫诺苷(10、100 μmol/L)使活性氧的释放分别降低了37%(P＜0.01)、27%(P＜0.05),NO的释放分别降低了31%(P＜0.05)、53%(P＜0.01),莫诺苷(1、10、100 μmol/L)有明显抑制GSH的降低的作用.结论 莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,有神经保护作用.
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人参皂甙Rb1抗新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡研究
目的探讨人参皂甙Rb1对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机理.方法应用"Neurobasal 加 B27 Supplement"体外培养大鼠大脑皮层神经细胞,并在缺氧条件下使用台盼蓝拒染法、Hoechst 33342荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察人参皂甙Rb1对原代神经细胞的抗凋亡保护作用.结果在10-100 μg/ml的浓度范围內,人参皂甙Rb1能降低缺氧诱导的神经细胞凋亡率(100 μg/ml组, P<0.05),增加缺氧神经细胞Bcl-2蛋白的表达(50-100 μg/ml组, P<0.05),同时减少Bax蛋白的表达(50-100 μg/ml组, P<0.05- P<0.001),提高Bcl-2/Bax比值(50-100 μg/ml组, P<0.05).结论在50-100 μg/ml的浓度范围內,人参皂甙Rb1通过上调缺氧神经细胞Bcl-2表达和下调Bax表达,避免缺氧神经细胞凋亡.
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人羊膜组织细胞神经生物学特性形态学研究
目的:利用神经干细胞特异性标志蛋白,鉴定人羊膜组织中神经细胞的存在,从组织和细胞形态学角度探讨羊膜组织细胞的神经生物学特性.方法:利用TH、AchT、NeuN、MAP2、CNPase、MBP和GFAP单克隆抗体,通过免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光细胞化学技术方法,检测羊膜组织细胞中的多巴胺能神经元、胆碱能神经元、神经元、少突胶质细胞和胶质细胞.结果:羊膜组织细胞中存在TH、AchT、NeuN、MAP2、CNPase、MBP和GFAP等神经细胞特异性标记蛋白表达阳性细胞.结论:实验结果提示羊膜组织细胞内可能存在多巴胺能神经元、胆碱能神经元少突胶质细胞和星形胶质细胞等.这对细胞移植治疗帕金森氏病、老年痴呆和多发性硬化等神经系统疑难疾病将具有一定的临床意义.
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电针抑制局灶性脑缺血损伤大鼠皮质细胞自噬的实验研究
目的:观察电针“曲池”、“足三里”穴对缺血再灌注(MCAO)大鼠皮质神经细胞PI3K-mTOR信号通路的影响.方法:参考Koizumi线栓法构建MCAO大鼠模型,电针“曲池”、“足三里”穴干预后,TTC染色观察梗死体积,采用Western blot检测细胞自噬标志蛋白Atg4、LC3B,以及自噬相关信号分子PI3K、mTOR蛋白的表达水平.结果:TTC染色显示电针减少了MCAO大鼠脑梗死体积;电针抑制了LC3B Ⅰ向LC3BⅡ的转化;与模型组相比,电针组Atg4表达下降,而PI3K和mTOR蛋白表达水平升高.结论:电针“曲池”、“足三里”治疗3天抑制细胞自噬相关分子,其可能机制电针激活了PI3K-mTOR信号分子.
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人脂肪组织来源的酪氨酸羟化酶、胆碱乙酰转移酶、谷氨酸脱羧酶的表达
目的:探讨人脂肪组织来源的基质细胞(ADSCs)分化为神经细胞的神经递质关键酶TH、CHAT、GAD的表达情况.方法:分离培养人ADSCs,采用神经诱导培养基(NIM)进行诱导培养,倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,免疫组化法和免疫荧光技术检测神经递质多巴胺(DA)、乙酰胆碱(Ach)和γ-氨基丁酸(GABA)合成过程中的关键酶--酪氨酸羟化酶(TH)、胆碱乙酰转移酶(CHAT)和谷氨酸脱羧酶(GAD)的表达情况.结果:①经NIM诱导后,ADSCs可分化为神经细胞.诱导分化后,1h、5h未见TH、CHAT和GAD阳性表达.1d、5d出现TH、CHAT和GAD阳性表达.②免疫荧光单标结果:诱导后的细胞内有TH、CHAT和GAD表达.免疫荧光双标结果:GAD与TH、CHAT与TH可同时表达于同一个诱导后的细胞内.结论:ADSCs可分化为神经细胞,分化后的神经细胞具有合成神经递质DA、Ach和GABA的功能.
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50Hz电磁场促进骨髓源神经祖细胞向神经元分化作用的研究
目的:通过分析50Hz电磁场干预骨髓源神经祖细胞向神经细胞分化前后相关神经细胞标志物mRNA表达水平,探讨低频电磁场对骨髓源神经祖细胞诱导分化的作用.方法:利用全骨髓培养法获取骨髓间充质干细胞,将第2代骨髓间充质干细胞在无血清神经干细胞培养环境中悬浮诱导,获取骨髓源神经祖细胞.将第3代骨髓源神经祖细胞分为2组贴壁培养:电磁场组与对照组.电磁场组干预方法为正弦波磁场、频率50Hz、强度5mT,60min/d,共15天,对照组置于无磁场干预的同等环境中.骨髓源神经祖细胞诱导后,采用免疫细胞荧光检测巢蛋白(Nestin)与微管蛋白抗体(Tuj-1)的表达变化;采用实时定量基因扩增荧光检测系统(Q-PCR)检测Nestin,唾液酸-神经细胞粘附分子(PSA-NCAM)和β-微管蛋白-Ⅲ(β-Ⅲ tubulin),乙酰胆碱酯酶(ACHE),5-羟色胺(5-HT),γ-氨基丁酸(GABA)mRNA表达水平变化.结果:骨髓间充质干细胞在无血清神经干细胞培养环境中可形成骨髓源神经祖细胞,表达Nestin阳性产物;两组诱导后的神经元样细胞免疫细胞荧光检测Tuj-1均呈阳性表达,Q-PCR结果示Nestin,PSA-NCAM,β-Ⅲ tubulin,ACHE,5-HT,GABA mRNA表达水平与诱导前比较显著下降(P＜0.01),电磁场组β-Ⅲtubulin mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05).结论:50Hz电磁场可以促进骨髓源神经祖细胞向神经元分化.
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体外培养人羊膜间充质细胞的神经生物学特点
目的:探讨体外培养人羊膜间充质细胞(hAMCs)的神经生物学特征.方法:应用MTS分析法、BrdU掺人法和增殖细胞核抗原(PCNA)的免疫荧光染色,探讨体外培养hAMCs的增殖活性.利用免疫细胞化学法检测hAMCs中间充质细胞标记(STRO-1、Vimentin)、神经干细胞标记蛋白(Nestin、PSA-NCAM)、神经细胞标记蛋白(β-tubulin-Ⅲ、TH)和神经分化相关蛋白(math-1、mash-1)的表达.结果:MTS分析法显示hAMCs在接种后第6-8天增殖速度快,第8-24天活细胞数基本保持稳定;BrdU和PCNA的免疫荧光染色结果显示体外培养hAMCs中具有大量BrdU和PCNA阳性细胞存在;体外培养的hAMCs表达间充质十细胞特异性标记物STRO-1和Vimentin,也表达神经干细胞标记物Nestin和PsA-NCAM,同时还可见神经元特异性标记物β-tubulin-Ⅲ和TH,以及神经元分化相关蛋白math-1和mash-1的表达;体外培养hAMCs中存在有TH/BrdU和β-tubulin-Ⅲ/BrdU双阳性细胞.结论:体外培养的hAMCs表达间充质干细胞、神经干细胞、神经元的特异性标记蛋白,同时具有增殖活性;hAMCs表达神经元分化相关蛋白,提示hAMCs具有向神经元分化的潜能.
