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全结肠巨结肠肠壁内神经标志物表达及神经支配的研究
目的 通过免疫组织化学染色研究不同神经标志物在全结肠型无神经节细胞症(TCA)和常见型巨结肠(HD)肠壁内表达的差异.方法 复旦大学附属儿科医院1996年1月~2005年12月间收治TCA确诊病例18例,收集结肠、回肠全层标本.对照组为常见型HD及肛门直肠畸形各10例.采用免疫组织化学染色技术对肠壁内神经标记物:S-100蛋白、外周蛋白、蛋白基因产物9.5(PGP 9.5、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的不同程度的表达进行比较.数据采用t检验分析.结果 PGP9.5、S-100蛋白、NSE和外周蛋白在对照组和TCA组、HD组近端肠壁内表达差异无统计学意义(P>0.05);移行段内可见少数成熟和不成熟神经节细胞,神经标志物表达低于HD组(P<0.01);18例TCA远端肠壁内均无神经节细胞,粗大的神经干较HD少见,神经标志物表达明显低于HD组(P<0.01),以PGP9.5明显.结论 研究表明TCA和常见型HD病变肠段中存在明显的神经标记物阳性表达差异,提示全结肠巨结肠肠壁内神经支配异常不同与常见型巨结肠.
关键词: 结肠性神经节细胞缺失症 基因产物 蛋白质 S-100蛋白类 -
脊髓小脑性共济失调与细胞特异性
脊髓小脑性共济失调(SCAs)是一大类以累及脊髓、小脑及脑干等部位为主的神经系统遗传变性疾病,临床上以不同程度的小脑性共济失调为主,同时合并锥体外系和(或)锥体束受损等.其遗传方式可呈常染色体显性(AD)和常染色体隐性(AR)遗传等多种类型,其中部分AD遗传的SCAs亚型,目前已经证实其发病是由于疾病基因编码区内编码谷氨酰胺(glutamine)的三核苷酸CAG重复序列异常扩增导致编码的多聚谷氨酸酰胺链(polyglutamines,PolyQ)的构象异常,使得基因产物异常聚积,从而对神经元产生毒性作用而发病.目前,该亚型包括SCA1、SCA2、SCA3/MJD、SCA6、SCA7、和齿状核红核苍白球路易体萎缩(DRPLA)等,近年来发现的SCA17[1]也属于该类.此外,亨廷顿病(HD)和脊髓延髓肌肉萎缩(Spinal bular muscular atrophy,SBMA)的发病也是由于PolyQ异常扩增引起,因此,该类疾病也统称多聚谷氨酰胺病(Ployglutamines Disease,PolyQ病).
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喉鳞癌p21和p53蛋白表达及临床意义
本研究采用免疫组化法, 观察p21和p53癌基因产物在不同部位、不同临床分期和不同细胞分化及有随访资料的喉鳞癌(LSC)中的表达情况, 以探讨LSC发生过程中癌基因的表达规律及与预后的关系.
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人源受体相关蛋白在大肠杆菌中表达的优化及纯化
目的获得人源受体相关蛋白(RAP),对表达条件进行优化.方法 RAP cDNA被插入到原核表达质粒pT7-PL和pET-28a(+)中,分别构建成RAP重组表达载体,转化两种BL21菌株后,转化菌用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,选择pT7-PL-RAP质粒进行表达条件的优化,采用镍离子亲和层析纯化所获得的RAP,通过检测与巨噬细胞的结合能力评估其生物活性.结果两个重组质粒均获得了RAP的高表达,对于pT7-PL-RAP质粒,RAP在BL21(DE3,plysS)菌株中的表达显著高于在BL21(DE3)菌株的表达; 有氯霉素存在时表达高于无氯霉素时;诱导表达的RAP大部分为可溶性的;镍离子亲和层析树脂纯化所获得的RAP,可与富含低密度脂蛋白受体(LDLR)家族受体的小鼠巨噬细胞系RAW264.7结合.结论本实验获得了有生物学功能的RAP,为进一步开发生产此蛋白打下良好的基础.
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天然与人工合成化合物的延缓衰老作用
衰老又称老化, 是指生物发育成熟后, 在正常状况下随年龄增加机能减退及结构与组分逐步退行性变化并终走向衰老的过程. 生物衰老是一个极其复杂的过程, 是一系列基因的激活与阻遏、基因产物的相互作用以及内外环境交互影响的结果[1]. 近年来, 衰老的分子机制, 尤其在衰老基因表达与调控方面取得了可喜的进展[2][3], 使人们有充分的理由相信, 通过一些天然与人工合成化合物调控衰老的可能性. 本文综述了一些天然与人工合成化合物对生物整体或体外培养细胞衰老的影响, 并探讨了其影响衰老的可能机制.
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甲状腺癌K-ras、P53蛋白表达及与预后关系的研究
为探讨甲状腺癌各组织学类型中K-ras、P53蛋白表达及与预后的关系,利用免疫组化SP法测定K-ras、P53蛋白在甲状腺癌中的表达状况.结果显示,K-ras蛋白在甲状腺乳头状癌表达阳性率为65.0%,明显高于在滤泡状癌、髓样癌、未分化癌表达阳性率(分别为33.3%、6.7%、0),差异有显著性(P<0.05);P53蛋白在未分化癌表达阳性率为66.7%,明显高于在乳头状癌、滤泡状癌、髓样癌表达阳性率(分别为30.0%、6.7%、20.6%),差异有显著性(P<0.05).
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TAT修饰的LIM矿化蛋白3的制备和入胞转导活性的研究
目的 构建pET43.1a-TAT-LMP-3重组蛋白,观察表达目的融合蛋白TAT- LMP-3对人真皮成纤维细胞目的转导活性.方法 构建hLMP-3和TAT49-57目的融合基因,插入载体pET43.1a,组成pET43.1a-TAT-LMP-3重组表达转化大肠杆菌,IPTG诱导TAT-LMP-3融合蛋白表达,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,将融合蛋白加入培养目的人真皮成纤维细胞共孵育,观察蛋白转导进入细胞目的情况.结果 成功地构建了pET43.1a-TAT-LMP-3重组基因原核表达载体,表达和纯化了融合蛋白TAT-LMP-3,在体外培养目的人真皮成纤维细胞中证实TAT-LMP-3融合蛋白目的穿膜转导具有浓度和时间依赖性.结论 成功进行了TAT-LMP-3融合蛋白目的原核表达、纯化和鉴定,初步验证了TAT-LMP-3目的穿膜转导能力,为应用TAT-LMP-3融合蛋白治疗脊柱融合目的实验研究奠定了基础.
关键词: 基因产物 TAT 膜蛋白质类/生物合成 -
动脉粥样硬化基因治疗研究的回顾与展望
基因治疗是指通过纠正遗传缺陷、表达治疗性基因产物或灭活致病基因而治疗疾病.心血管由于相对易于进入而被认为是基因治疗的佳靶器官,而且仅需目的基因的暂时性表达,即可获得一定的治疗效应.有鉴于此,基因治疗已成为心血管疾病治疗中很有希望的一个领域.动脉粥样硬化作为心血管疾病的主要病理基础,有关基因防治的研究显得十分活跃.本文就此领域作一简要回顾与展望.
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受血及献血者HIV-1外膜蛋白ENV基因序列分析
目的了解在广东省受血及献血者中发现的HIV-1亚型的流行规律及其与国际参考株的同源性.方法应用套式聚合酶链反应(PCR)对14例采自于广东省HIV-1抗体阳性的受血者或献血者淋巴细胞富集液的核酸样品进行扩增,并使用AB1377型测序仪对扩增产物测序后,对其ENV基因C2-V3段的核酸序列进行比较分析.结果14份血样中,7份为泰国B'亚型,与国际参考株RL42的距离近,基因离散率为(6.082±2.607)%,组内离散率为(5.963±2.383)%;4份为AE重组亚型,与国际参考株TH.90.CM240近,基因离散率为(8.900±1.830)%,组内离散率为(13.810±1.317)%;2份为07-BC重组亚型,与国际参考株CN.97C54A近,基因离散率为(4.155±1.223)%,组内基因距离为6.36%;1份为08-BC重组亚型,与国际参考株97CNGX-9F近,基因距离为0.97%.结论本次检测的广东省受血及献血者HIV-1以泰国B'亚型为主,也存在主要在性途径感染人群中流行的AE重组亚型和吸毒者中流行的07-BC、08-BC重组亚型.
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肿瘤分子靶向治疗
分子靶向治疗是现代肿瘤治疗领域的突破性进展,代表了肿瘤生物治疗目前的新发展方向.靶向治疗分为三个层次,即器官靶向、细胞靶向和分子靶向.分子靶向是靶向治疗中特异性高的层次,它是针对肿瘤细胞内某一蛋白质的分子,某一核苷酸的片段,或者某一基因产物进行的治疗.
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DNA甲基化在胃癌早期诊断中的价值
虽然胃癌的发病率和病死率在某些国家近年来稳步下降,但在世界范围内,胃癌仍然是常见的恶性肿瘤.在肿瘤的研究和临床实践中,早期发现、早期诊断和早期治疗是获得良好预后的关键.随着分子生物学技术的发展,从分子水平发现基因结构或功能的改变以及具有一定生物学功能的基因产物的非正常表达均与肿瘤的发生、发展密切相关,且往往先于肿瘤的发生,所以测定癌基因、抑癌基因及其产物可能成为早期诊断和控制胃癌的有效措施.
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鼻咽癌组织p21WAF1和p73的表达及意义
本研究应用免疫组化法,检测鼻咽癌中p21WAF1和p73蛋白的表达,旨在探讨p21WAF1和p73在鼻咽癌发生发展中的作用,以及p21WAF1与p73的相互关系.
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鼻咽癌组织p21WAF1和p73的表达及意义
本研究应用免疫组化法,检测鼻咽癌中p21WAF1和p73蛋白的表达,旨在探讨p21WAF1和p73在鼻咽癌发生发展中的作用,以及p21WAF1与p73的相互关系.
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MicroRNAs在p53信号通路中的调节作用
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的具有调控功能的非编码小RNAs,其大小为20~25个核苷酸.编码miRNAs的基因是一类进化上高度保守的基因家族,各种属间具有很高的保守性.根据生物信息学研究预测,大约30%的人类蛋白编码基因直接受到miRNAs的调控[1].目前已发现了1 000多种人类miRNAs,它们参与调节大约92%的人类基因,被认为是重要的调节分子之一.p53作为重要的抑癌基因,其在恶性肿瘤的发生和发展过程中起着关键性的作用.p53信号通路包含上百种基因和基因产物.当DNA损伤时,p53蛋白表达量增加,进而调节靶基因,以发挥阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定和抑制肿瘤血管生成等作用[2].近年来的研究表明,p53与miRNAs具有紧密联系.一方面,p53可以调节miRNAs的转录;另一方面,miRNAs也可以直接抑制p53或p53上下游基因的表达.miRNAs调控p53的系列研究揭示了一批新的受p53调节的基因.大量研究资料表明,p53信号通路的众多基因已成为miRNAs的重要调节靶点.
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p16基因甲基化及其与肿瘤发病的关系
肿瘤的发生是一个多基因参与的复杂过程,三类基因的突变或者失活会促进肿瘤在人体内形成:癌基因、抑癌基因和参与DNA损伤修复过程的基因.其中抑癌基因作用很可能是负调控癌基因、细胞周期检验点或者在没有胁迫情况下提供合适的营养物或者组分以高保真地完成细胞周期分裂过程的基因产物[1].所以抑癌基因变异或者失活的结果 是细胞失去控制, 进入旺盛的增殖转化过程,从而引发一系列特定肿瘤.
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β-干扰素的特性与临床研究
目前认为干扰素是由特定的诱导物(包括病毒与非病毒)作用下,由细胞基因编码产生的一种或多种蛋白质,这种蛋白质并非直接作用于病毒,其活性又受另一组细胞基因组的调控,即干扰素作用于细胞时,又诱生另一类基因产物(AVP).由于这类基因产物,引起细胞具有广泛的抗病毒活性,抑制细胞分裂和肿瘤细胞增殖,以及细胞免疫系统功能的活性,这是一个系统,故称为干扰素系统(IFNS).基因研究表明,β-干扰素与a-干扰素有80%的序列相同,具有许多相似的生物学及生化特性,所以,在干扰素分类学上将β-干扰素归属于Ⅰ型干扰素[1],而β-干扰素与Ⅱ型的γ-干扰素的许多特性则不同.
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EB病毒潜伏膜蛋白1的研究进展
EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)是一类全球性分布、人群感染率较高的单纯疱疹病毒家族成员之一,是一种线状双链DNA病毒,感染者体内终生潜伏存在,有致瘤性.编码LMP1的基因位于EB病毒基因组U5-TR区的BNLF-1基因,为BamHI Nhet区域,由ED-L1和L1-TR激活子所控制.LMP1是由386个氨基酸残基组成的跨膜蛋白,分子大小为62kd,由3种不同的结构域组成.氨基端功能区与LMP1在胞膜上的定位和聚合作用相关.六个跨膜区在胞膜上能寡聚化,启动LMP1信号传导.LMP1是被确证具有瘤基因编码蛋白特性的重要EB病毒基因产物.其信号传导途径和生物学功能等方面成为EBV的分子生物学研究的热点.
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GAS6与血液系统疾病关系的研究进展
生长停滞特异性基因产物6( growth arrest-specific gene 6,GAS6)属于维生素K依赖蛋白,也是TAM受体( Axl、Ty-ro3、Mer)的配体,TAM受体是受体酪氨酸激酶( receptor tyro-sine kinases)家族成员之一. 大量研究表明,GAS6广泛参与炎症、实体肿瘤的发生发展,而且在血液系统疾病中也有重要意义. 本文拟就GAS6及其受体的结构及生物学特点,及其与血液疾病发生发展关系的研究现状作一综述.
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伊马替尼联合 P27基因克隆对慢性粒细胞白血病 K562细胞的作用
目的:探讨伊马替尼和 P27基因克隆联合作用对 K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用.方法:RT- PCR扩增 P27基因,胶纯化回收后连接到 T载体测序,序列正确后构建 P27- pcDNA3.1载体,将 P27- pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入 P27基因缺失的 K562细胞,经筛选得到 G418抗性的 K562细胞株,Western blot证实转染后有 P27蛋白表达,MTT法检测细胞生长指数和细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果:表达外源性 P27蛋白的 P27- pcDNA3.1- K562细胞株生长速度明显慢于对照 K562细胞株,流式细胞仪显示 G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少,P27- pcDNA3.1- K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升,MTT法显示细胞存活率较 P27- K562细胞组及伊马替尼-K562细胞组均明显下降(P< 0.01 vs P27- K562 细胞组,P< 0.05 vs 伊马替尼-K562 细胞组 ).结论:表达外源 P27蛋白联合应用伊马替尼对抑制 K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用.
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脂联素与糖尿病肾病
脂联素(adiponectin),也称Acrp30,它是apM1.基因产物,是一种脂肪细胞特异性高表达的蛋白质.研究发现脂联素有增强胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等作用.已知脂联素与糖尿病关系密切,低水平脂联素人群是高水平脂联索人群糖尿病发病率的9.3倍.进一步研究发现血浆脂联素浓度与糖尿病慢性并发症之一--糖尿病肾病关系密切.