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乙型肝炎病毒感染定量检测方法学研究进展及临床意义
通常判断乙型肝炎病毒(HBV)感染及其状况的指标为对HBV血清学标志物的定性检测和HBV DNA测定.随着新方法的建立和免疫检测的自动化,对HBV血清学标志物的检测,由原来的定性检测发展到定量检测,提高了实验结果的精确度和准确性.
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短程免疫方案制备抗血清的效价观察
通过一定程序注射颗粒性抗原或可溶性抗原免疫家兔,是实验室制备多克隆抗血清的常用方法,制备的抗血清可用于实验条件下病原体的诊断以及免疫检测[1].虽然依据常规免疫方案可以制备出效价高、亲和力强的抗血清,但整个常规方案耗时近1个多月,也容易受到免疫动物健康状况的影响和饲养成本的限制.本试验分别以伤寒沙门菌O901诊断菌液、伤寒沙门菌H901诊断菌液作为免疫原,在不影响抗血清特异性和保证实验必需效价的基础上,缩短免疫注射周期,对家兔进行短程快速免疫,并对该方案制备的抗血清几何平均滴度进行观察,以探讨短程快速免疫方案的实效性.
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ELISA法检测血清HBsAg前带现象的探讨
HBV表面抗原免疫检测的方法主要有凝聚试验、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫测定(ELA)、免疫层析测定以及化学发光免疫测定(TRFLA)等,国内检测HBV血清学指标的方法大多是ELISA法[1].ELISA和RPHA是HBsAg筛选常用的方法,ELISA法具有灵敏度较高的优点,被普遍应用于临床及预防等领域[2];RPHA法检测血清HBsAg作为一种较传统和经济的方法,在本市一些单位一直延用,在检测工作中,常出现病人不知以何家结果为准的困惑.为了解两法在检出率、特异性、假阳性、假阴性方面的差异,本实验室对809例血清标本分别用ELISA法和RPHA法进行检测,结果如下.
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卡式法血型鉴定、交叉配血的注意事项
卡式法血型鉴定、交叉配血是近几年来逐渐兴起的一项利用免疫检测的新方法,也就是利用生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫学抗原抗体特异性反应相结合的产物.
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对硫磷人工抗原合成及其鉴定
目的制备对硫磷人工抗原和抗血清,为建立酶联免疫吸附法提供技术储备.方法还原对硫磷硝基成为氨基,合成半抗原氨基对硫磷;重氮化偶联大分子载体牛血清白蛋白制备人工抗原;免疫新西兰白兔,进行多抗制备.结果合成的半抗原核磁共振图谱鉴定结果为δ:6.9~7(m,2H,CH 2)6.4~6.5(m,2H,CH 2)4.1~4.2(q,4H,-CH 2)3.4(s,2H,NH 2)1.3~1.4(t,6H,CH 3);氨基对硫磷与牛血清白蛋白的结合比为35~36∶1;抗血清经间接酶联免疫吸附法检测,效价达1∶128 000,双向免疫扩散实验测得抗血清与人工抗原形成沉淀;间接竞争酶联免疫吸附法测得抗血清对对硫磷低抑制浓度为0.16 ng/mL;经间接酶联免疫吸附法检测人工抗原与羊抗人血清、兔抗人血清、正常兔血清无交叉反应.结论合成对硫磷半抗原及人工抗原纯度高、结合比高,具有较好的免疫原性.
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肾移植受者移植前免疫细胞亚群的检测及意义
背景:对肾移植受者免疫细胞的研究一直是移植外科的研究热点,但国内外缺少对肾移植受者术前全面、系统的免疫检测研究。目的:探讨肾移植受者术前免疫细胞亚群的比例分布。方法:纳入准备接受初次活体肾移植受者共15例作实验组;以18-40岁健康志愿者15人作对照组,分别抽取外周静脉血进行流式细胞检测。结果与结论:T细胞亚群:肾移植受者CD4+CD25+T细胞占外周血淋巴细胞的比例、CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例均低于健康人群,差异有显著性意义(P <0.05),其余细胞亚群比例差异无显著性意义。B细胞亚群:肾移植受者CD19+/淋巴细胞、CD19+CD5+/淋巴细胞、CD19+CD27+/淋巴细胞均低于健康者,而CD38+IgD-/CD19+高于健康者,差异有显著性意义(P<0.05),其他B细胞亚群比较差异无显著性意义。NK及NKT细胞亚群的比较:肾移植受者NKG2A/NK细胞、NKG2A/NKG2D均低于健康者、而NKG2D/细胞显著高于健康者(P<0.05),NK/淋巴细胞、NKT/淋巴细胞差异无显著性意义。说明肾移植受者移植前进行免疫细胞亚群流式分析,可以了解受者移植前免疫状态,对移植后免疫监测起基础对照作用。
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T细胞免疫检测在肺结核鉴别诊断中的应用
目的 评估结核感染T细胞免疫检测(IGRA/ELISA法)用于在肺部感染患者中鉴别诊断结核病的效能.方法 选取肺部感染患者106例,根据结核诊断标准确诊30例为结核感染,76例为非结核感染.用IGRA/ELISA法检测患者血液中经结核特异性抗原刺激后的淋巴细胞释放的IFN-γ含量,比较两组IFN-γ含量的差异;绘制ROC曲线并分析AUC和佳截断值及佳界点处的敏感度、特异度和约登指数.结果 结核组IFN-γ浓度均值为(329.72±31.03) pg/mL,非肺结核组为(52.77±12.08) pg/mL,t=8.318,P<0.001.ROC曲线下面积AUC=0.934 (95%CI,0.890~0.978),当界点为59.70 pg/mL时, 灵敏度为100.0%,特异度为78.9%,约登指数为0.789;当界点为108.25 pg/mL时,灵敏度为90.0%,特异度为84.2%,约登指数为0.742;当界点为404.00 pg/mL时,灵敏度为33.3%,特异度为100.0%,约登指数为0.333.结论 以IGRA/ELISA法检测IFN-γ浓度,以59.70 pg/mL,108.25 pg/mL,404.00 pg/mL三个界点辅助临床对肺部感染鉴别诊断结核病有较好应用价值.
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结合病毒分离与免疫检测的巨细胞病毒快速分离法
巨细胞病毒(CMV)在自然界中普遍存在,属于疱疹病毒科,分为人类巨细胞病毒(HCMV)和鼠类巨细胞病毒,对宿主的感染有种属特异性.
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血小板配型:微柱凝胶免疫检测
临床血小板输血前进行的配型试验是检测病人血清中抗体与供者血小板抗原的相容性,筛选与病人血型相容的血小板.血小板细胞膜有3类同种异体抗原:ABO抗原、HLA-I类和血小板特异性抗原;ABO血型的相容性可由检测红细胞确定,检测HLA和血小板血型的方法都比较复杂,如血小板免疫荧光检测、ELISA、混合红细胞粘附分析,特异性单克隆抗体血小板抗原固定检测等.因为缺少简单、快速、准确的检测方法,临床常规至今不能进行血小板的HLA和血小板血型配型检测.与血小板血型有关的临床上较常见的疾病和征状:血小板输血无效症、胎儿和新生儿同种免疫血小板减少症、输血后血小板减少性紫癜等,对这些疾病预防、诊断和治疗都迫切需要能用于常规的血小板血型检测方法.应用本室创建的微柱凝胶免疫检测技术创新建立了简单、快速、可靠的血小板配型试验方法.
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增强化学发光法检测手术及输血感染标志物的临床应用
目的:对增强化学发光法检测感染性标志物进行临床应用评价。方法采用美国强生增强化学发光技术检测系统及配套试剂对乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)进行初筛检测,阳性标本立即重新复查一次,仍为阳性者判断为初筛试验阳性。对于 HBsAg、抗-HCV 初筛阳性标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA 法)进行确证;抗-HIV 初筛阳性者送 HIV确诊实验室进行确诊、抗-TP 初筛阳性者采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证。结果增强化学发光法检测 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP 的阳性检出率分别是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%,阳性检出率均高于各检测项目的复检确认方法的阳性率。41123例术前检查患者血清标本中,应用增强化学发光法共筛查出2399例HBsAg 阳性标本、308例抗-HCV 阳性标本、19例抗-HIV 阳性标本、1123例抗-TP 阳性标本。筛查的阳性标本经各项目的复检确认方法进行复检确认后,共确认出2325例 HBsAg 阳性标本、299例抗-HCV 阳性标本、17例抗-HIV 为阳性标本、1054例抗-TP 阳性标本。应用增强化学发光法检测 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP 的 S/CO 值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时,经复检后各检测项目均呈现100%的阳性。结论增强化学发光法 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP 的检测特异性大于99%,检测阳性预测值完全能够满足临床诊疗需求,检测过程和工作效率都优于常规免疫标记技术,值得临床推广应用。
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肿瘤标志物CEA、CA19-9、CA12-5和铁蛋白联合检测的临床应用
肿瘤标志物可作为肿瘤的辅助诊断、预后判断、疗效观察、检测和复发的指标.但目前为止,并未发现一种标志物为癌细胞所特有,肿瘤诊断的可靠手段仍是病理学诊断.为了提高肿瘤标志物对肿瘤诊断的灵敏度和特异性,许多学者提倡用多种肿瘤标志物进行联合检测.癌胚抗原(cEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原12-5(CA12-5)及铁蛋白(FERR)是在消化道的肿瘤检测中应用多的四种标志物,本文应用化学发光免疫检测技术检测了上述肿瘤标志物在血清中的浓度,分析它们在消化道恶性肿瘤临床诊断中的主要价值,现报告如下.
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老年高血压脑出血患者早期应用血栓通注射液对超敏C反应蛋白及肿瘤坏死因子-α的影响
目的观察老年高血压脑出血患者早期应用血栓通注射液对其体内超敏 C 反应蛋白( hs-CRP)及肿瘤坏死因子( TNF)-α产生的影响。方法86例高血压脑出血的老年患者随机分成治疗组和对照组。对照组常规性治疗,治疗组则同时使用血栓通注射液。测量 hs-CRP 采用免疫比浊法;测量 TNF-α使用放免法。结果两组 hs-CRP 及 TNF-α治疗后总阳性率下降,治疗组治疗后 hs-CRP 及 TNF-α总阳性率相比对照组下降明显。血清中 hs-CRP 及 TNF-α含量两组在治疗前无明显差别,疗程结束后治疗组比对照组血清中 hs-CRP 及 TNF-α含量明显降低。治疗后两组神经功能缺损评分(CCS)都呈减少趋势,其中治疗组减少更为明显;两组巴氏指数( BI)呈增高的趋势,其中治疗组增高的程度更为显著。结论hs-CRP及 TNF-α参与高血压脑出血进程,使用血栓通注射液能有效降低病患血清中 hs-CRP 及 TNF-α含量,获得较好预后。
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脂肪酸结合蛋白免疫检测技术研究进展
脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding protein,FABP)是一组小分子的细胞质蛋白质,相对分子质量约为15 000,存在于机体多种组织细胞的胞浆中,表现为9种不同的亚型[1].组织损伤后,细胞蛋白质会从血浆中释放出来.
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26例脾虚泄泻患者的免疫学检测及乙状结肠粘膜病理变化
我们于1997年8月~12月对26例脾虚泄泻患者作了免疫学检测及乙状结肠粘膜病理组织学检查,现将结果报道如下.
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生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备
目的 制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定.方法 复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记.结果 制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1∶256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09.结论 成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础.
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同种异体双前臂移植的个案护理
我们于2002年11月13日实施了世界上第1例同种异体双前臂移植手术.同种异体双前臂移植手术病人的护理与其他手术有所不同,在心理上、功能锻炼、免疫检测方面都有其特殊性.我们通过精心细致的护理,积累了一定的经验,现报告如下.
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胶体金免疫层析法与酶免疫法对比检测HBSAg和HBSAb的分析
乙型肝炎病毒(HBV)是严重危害人类健康的传染病病原体之一,我国是HBV感染的高发区,约有1亿人为乙肝病毒表面抗原携带者[1].HBV感染,不仅引起急性、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生密切相关.目前临床领域用于免疫检测的方法主要有凝集实验、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫测定(ELISA)、免疫层析测定等手段.
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临床实验室仪器的发展趋势
临床实验室技术逐渐改变了传统的检验方法,新的检验技术为疾病的诊断分析提供了更为快捷、更为精确的方法.临床实验室仪器的设计更加注重人性化、低成本和利于环保.
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正常孕龄妇女月经周期血清CA125、CA15-3和CA19-9的变化
本文采用电化学发光免疫检测对正常月经周期女性CA125、CA15-3、CA19-9的变化进行观察,现报道如下.1 对象和方法1.1 对象随机抽取本院2009年8月~2011年8月健康体检育龄妇女按月经周期分为行经期(第1d~4d)11例、月经中期(10d~14d)24例、月经前期(25d~28d)21例,三组总共56名,年龄(21~50)岁,月经周期正常.1.2 方法将三组实验对象分别采血3ml,分离血清后,立即检测,采用罗氏E170电化学发光免疫测定分析仪,进行CA125、CA15-3、CA19-9的定量检测.配套瑞士罗氏公司原装进口试剂.1.3 统计学处理采用计算机SPSS13.0软件进行分析,三组之间比较采用方差分析.
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淋病奈瑟菌孔蛋白PorB的原核表达及其在疫苗血清学检测中的初步应用
目的 克隆并表达淋病奈瑟菌孔蛋白PorB,以重组蛋白为抗原,间接ELISA检测免疫血清的抗体水平.方法 利用PCR从淋病奈瑟菌WHO株基因组中扩增出PorB的基因,克隆入原核表达载体pET-30a中,构建出重组表达质粒pE'T30a-PorB,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.表达的蛋白进行SDS-PAGE分析,Western blot检测其反应原性.以纯化的重组蛋白rPorB作为检测抗原建立间接ELISA方法,用于检测淋病疫苗pVAX1-PorB免疫小鼠后的血清抗体水平.结果 PCR扩增得到淋病奈瑟菌孔蛋白PorB基因,表达的重组蛋白rPorB相对分子质量约40 kD,经Ni-NTA亲和层析纯化后的rPorB在SDS-PAGE中显示单一条带,Western blot证明纯化后的rPorB可与淋病奈瑟菌免疫血清特异性结合,具有良好的免疫反应性.间接ELISA结果表明,淋病疫苗pVAX1-PorB免疫小鼠血清PorB特异性抗体滴度为1∶200.结论 成功构建了重组原核表达质粒pET30a-PorB,PorB在大肠杆菌中获得表达.以纯化的rPorB为检测抗原,间接ELISA可以用于淋病疫苗免疫效果的评价.该研究为淋病奈瑟菌感染诊断、疫苗的研究奠定了基础.