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用薄层层析法分离菠菜中的色素
薄层层析法是一种常用的化学分析方法,用以往的薄层层析法分离菠菜中的5种色素(叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素和姜黄素),存在着提取不完全、分离效果差、展开剂毒性大等问题[1～4],不适合在教学中使用.本实验改进了传统的菠菜色素的提取和分离方法,采用丙酮-石油醚体系为提取剂,选择乙酸乙酯-石油醚-丙酮体系作展开剂,不但有效地提取分离了菠菜中5种色素,而且所用试剂毒性小,适于化学实验教学中使用.
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分离大鼠大脑皮质神经元长时程单细胞内Ca2+的测定
采用酶解结合机械分离方法,急性分离生后6～7 d的SD大鼠的大脑皮质神经元;用Fura -2作为钙离子指示剂,用M40 钙离子测量系统(PTI)长时程测量单个细胞内钙离子浓度的变化.以激发光波长340 nm和380 nm时510 nm处的荧光发射强度比率(340/380)显示胞内C a2+ 浓度的动态变化.用高K+ (60 mmoL/L)、低K+(1 mmol/L)、氨甲酰胆碱(Carbachol, 108～107 mmol/L)作为刺激物,观察胞内Ca2+浓度的变化.结果发现,高K+ 引起去极化刺激,导致Ca2+浓度迅速增加,在去除刺激后自动恢复正常;低K+和 Carbachol能诱发自发钙震荡;且63个细胞中37个有自发Ca2+浓度震荡现象,震荡的频率和幅度不尽相同.结果提示,急性分离的单个神经元可用于Ca2+浓度测定,神经元在无突触联系存在的情况下可诱发或自发钙震荡.
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粉螨分离方法的比较研究
目的为筛选适宜粉螨分离的方法.方法笔者采用直接镜检、振筛分离、电热集螨三种方法分离地脚粉中孳生的粉螨.结果不同方法所获粉螨数量不同.除直接镜检法外,振筛分离法检出率高于电热集螨法,经统计学处理差别有高度显著性(P＜0.01).结论分离地脚粉类样本中孳生的粉螨,适宜采用振筛分离法.
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骨髓间充质干细胞在细胞治疗中的若干问题
骨髓间充质干细胞是骨髓造血微环境的重要组分,其首要作用在于支持造血,此外它还具有干细胞的特性,即自我更新和多向分化的潜能.因此,这种细胞将有可能用于联合造血干细胞移植以提高造血干细胞移植成功率和作为组织工程学的种子用于修复受损或有遗传缺陷的组织和器官,如骨发育不全和心肌梗死后的心肌等.然而,其分离方法很粗糙,还没有一个令人满意的分离和鉴定的方法,这是制约其用于细胞和基因治疗的重要因素.另外,弄清在分化过程中基因表达的调节机制,有利于体外控制这种干细胞的定向分化.后,间充质干细胞回巢到骨髓或其他组织是成功进行细胞治疗的关键所在.
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小鼠髓源性内皮祖细胞体外培养的两种不同分离方法的比较
目的 比较密度梯度离心和红细胞裂解法分离体外培养小鼠髓源性内皮祖细胞(BM-EPCs)的优缺点.方法 选用4周龄的C57BL/6小鼠,密度梯度离心和红细胞裂解法分离小鼠骨髓细胞,进行细胞计数、检测细胞活率,差速贴壁纯化BM-EPCs,定期镜下观察细胞的形态.培养7 d后,流式细胞仪检测细胞表面CD34、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)、CD31的表达;1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiL-acLDL)摄取和异硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素1(FITC-UEA-1)结合能力经双染后激光共聚焦显微镜拍照进行检测;培养14 d进行免疫荧光检测CD31的表达.结果 密度梯度离心和红细胞裂解法提取两种方法均能分离BM-EPCs进行体外培养,与密度梯度离心方法比较,红细胞裂解法操作更为简便,获得的细胞数量较多[(1.90 ±0.55)×107比(0.72 ±0.42)×107](P <0.05),细胞存活率较高[(95.25 ±1.03)%比(83.75 ± 1.93)%](P<0.01),细胞表面CD34、VEGFR-2表达、Dil-acLDL和FITC-UEA-1双染阳性的细胞比例低于密度梯度离心分离法[(30.03 ±2.40)%比(46.93 ±2.89)%,(28.70 ±6.51)%比(43.97 ±1.39)%,(78.30 ±4.27)%比(89.20 ±2.65)%],培养14 d后的CD31阳性细胞比例低于密度梯度离心分离法[(84.10 ±3.86)%比(93.57 ± 4.27)](P<0.05).结论 两种分离方法均能分离BM-EPCs进行体外培养,提取方法各有利弊,可结合研究方案进行选择.
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天然黄酮类化合物分离方法研究进展
黄酮类化合物因具有多种生理活性被广泛应用,从植物中提取和分离得到黄酮类化合物的方法也经过不断改进和完善.为了更好地运用传统分离方法以及新方法对黄酮类化合物的研究,现将近些年来有关黄酮类化合物的分离方法进行综述,为黄酮类化合物的研究、开发和应用提供借鉴和参考.
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探讨手工制备浓缩血小板的影响因素
目的 探讨手工制备浓缩血小板的影响因素,确保血小板的质量,提高临床输注效果.方法 随机选择献血者且献血前72小时内未服用过阿斯匹林类药物,外周血小板计数≥150×109/L,采血顺畅,观察血液不同离心条件相同的分离方法(富含血小板血浆法)、相同的离心条件不同的分离方法,对收集血小板的影响.结果 ①离心力480g,15min,22℃离心所制备浓缩血小板收集效果好;②分浆夹式比悬挂式分离手工制备浓缩血小板效果好.血小板计数、红细胞混入量、白细胞混入量,经统计学分析P＜0.05,均具有显著性意义.结论 不同的离心条件相同的分离方法(富含血小板血浆法)、相同的离心条件不同的分离方法,对收集血小板均有影响.
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循环内皮细胞的研究及进展
1965年以来Bouvier及Hladovec等人先后在高血压、急性心肌梗死、肿瘤、血栓性疾病患者及高胆固醇饮食动物、内毒素血症动物的外周血中观察到一种非血液细胞,其形态类似于血管内皮细胞,Gaynor首先将其命名为循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CECs).
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植物降糖多肽的提取及其降糖作用的实验研究
苦瓜是葫芦科苦瓜属植物苦瓜的果实,具有消暑涤热、明目解毒的作用.1981年,印度学者Khanna采用有机酸、醇提取,薄层层析方法从苦瓜果实中分离出一种多肽,并证实该多肽有降低血糖的作用.自此,国内外学者即开始了这方面的大量研究.目前,业已证明苦瓜降糖多肽具有166个氨基酸残基,相对分子量约为11,000.同时,学者们也基本建立了有机酸、醇,薄层层析,凝胶过滤,高效液相色谱技术,这一程序化的实验室分离方法 [1].然而,这种分离方法在很大程度上不能够满足大量制备降糖多肽而使其得到广泛应用的需要.经过多年的研究与改进,我们建立了有机酸、醇提取,盐析,离子交换层析的纯化苦瓜降糖多肽的方法,并对其降糖作用加以分析.
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生物材料中甲基汞的顶空分析法
生物材料中甲基汞的测定方法,有比色法、TLC法、原子吸收法、极谱法、GC法等,这些方法都需先将甲基汞从样品中分离出来,分离方法有半胱氨酸萃取法及巯基棉吸附法等,其操作非常复杂.
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无毒棉花籽中黄酮苷化学成分的研究
无毒棉花籽为农作物棉花(锦葵科Malvaceae,棉属Cossypium L.)经选育得到的含低量棉酚的变种棉花的种子[1].文献曾报道无毒棉花子的水提物有较强的5HT受体结合活性[2].为寻找生物活性成分,笔者对无毒棉花籽进行了化学成分的研究.采用聚酰胺色谱技术的分离方法,从中分得4个黄酮苷,经光谱数据鉴定,分别为山柰酚-3-O-β-D-芹菜糖-(1→2)-[α-L-鼠李糖(1→6)]-β-D-葡糖苷(Ⅰ)、槲皮素-3-O-β-D-芹菜糖-(1→2)-[α-L-鼠李糖(1→6)]-β-D-葡糖苷(Ⅱ)、山柰酚-3-O-β-D-芹菜糖-(1→2)-[α-L-鼠李糖(1→6)]-β-D-葡糖苷(Ⅲ)及槲皮素-3-O-β-芹菜糖-(1→2)-β-D-葡糖苷(Ⅳ).其中化合物Ⅲ为山柰酚型黄酮苷,为首次从该属植物中分得.
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均匀设计优化半仿生提取葛根芩连汤的工艺研究
葛根芩连汤由葛根、黄芩、黄连、甘草4味中药组成,具有解肌清热、止泻止痢的功效,临床上主要用于泻泄痢疾、身热烦渴、下利臭秽等证.近年来,在中医药配伍研究、工艺优化、药物筛选和药理作用等方面的研究中,均匀设计法运用越来越广泛."半仿生提取法"是近几年提出的新方法,它是从生物药剂学的角度将整体药物研究法与分子药物研究法相结合,模拟口服药物经胃肠道转运吸收的环境,采用活性指导下的导向分离方法,是为经消化道口服给药的制剂设计的一种新的提取工艺.因此本实验采用半仿生提取法对葛根芩连汤的工艺进行了筛选.
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兔胎盘源性间充质干祖细胞的分离方法比较
目的 探讨几种酶消化方法对兔胎盘源性间充质干细胞(rPDMSCs)的分离效果.方法 采用孕兔剖宫产取其胎盘,用Ⅱ型和Ⅳ型胶原酶、分散酶、Dnase Ⅰ组合成3组混合消化液:Ⅳ型胶原酶、Dnase Ⅰ与分散酶组(A组);Ⅳ型胶原酶与Dnase Ⅰ组(B组);Ⅱ型胶原酶与DN8se Ⅰ组(C组),分别对兔胎盘进行消化.分离间充质干细胞(MSCs)后经原代及传代培养,倒置显微镜逐日观察、HE及碱性磷酸酶染色、苔盼蓝拒染法计数胎盘源性细胞数目及倍增时间,流式细胞仪检测细胞表面标志.结果 分步分离法对细胞的活力影响较小.C组分离的MSCs较其他两组细胞的数量多、活力好,细胞倍增时间约28～56 h,组间差异有统计学意义(P＜0.05);C组细胞形态规则,不表达碱性磷酸酶,诱导培养后可形成钙结节,流式细胞仪示CD105阳性率为91.9%,CD29阳性率89.1%,CD44阳性率93.6%,CD45阳性率3.2%.结论 Ⅱ型胶原酶与Dnase Ⅰ混合消化液、分步分离法可以较好地从兔胎盘中提取MSCs.
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浅谈中药提取分离方法与发展趋势
目的 对中药提取分离方法 进行概述性探讨,试图为中药现代化、国际化研究方向提供参考.方法 对近几年来各种刊物上发表的有关中药提取分离方法 技术进行概述,从逻辑到内容进行比较研究观点.结果 我国正在逐步落实中药现代化的实现措施,而中药有效群体和有效成分的提取分离方法 研究和应用亦是中药在制剂现代化过程中不可缺少的环节,另外,中药的研究又离不开提取分离技术,而提取分离技术又对中药的开发及现代化起着至关重要的作用.结论 让传统的中药适应世界医药生产的发展趋势,把中药引向未来,使得传统中药领域向现代化、科学化、产业化、精细化、标准化的方向迈进,以实现我国中药产业跨越式发展.
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血浆置换治疗重型肝炎并发症分析
血浆置换(plasma exchnge,PE)是目前国内外应用广泛的治疗重型肝炎的非生物型人工肝支持方法,具有操作简单、易行、有效等特点[1].它是将病人的血液引出体外,经膜式血浆分离方法将病人的血浆从全血中分离出来弃去,然后补充等量新鲜冷冻血浆或人血清蛋白等置换液,这样便可以清除病人体内的各种代谢毒素和致病因子,从而达到治疗目的[2].由于重型肝炎病人病情重,发病机制复杂,在应用血浆置换治疗中出现的并发症也由于病情而不同.现对我院46例病人共85例次血浆置换过程中出现的并发症进行分析.
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天然黄酮类化合物的药理活性及分离提取
黄酮类化合物是自然界广泛存在的一类化合物，在高等植物体内分布较多。本文对黄酮类化合物的结构与药理活性、提取分离方法等研究进展进行了综述，并对该领域的研究热点进行了展望。
1黄酮类化合物结构特点及分布
黄酮类化合物是一类自然界中广泛分布的多酚类物质。现泛指具有15个碳原子的多元酚类化合物，其中2个芳环（A环、B环）之间以一个三碳链（C3）相连，其骨架可用C6-C3-C6表示。
由于分子中有一个酮式羰基，故第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，天然黄酮类化合物母核上常含有羟基、甲氧基、异戊烯氧基等取代基。这些助色团的存在，使该类化合物多显黄色，故称黄酮或黄碱素［1］。
根据三碳链结构的氧化程度以及B环的连接位置等特点，黄酮类化合物可分为：黄酮和黄酮醇；异黄酮；异黄烷酮（又称二氢异黄酮）；黄烷酮（又称二氢黄酮）和黄烷醇（又称二氢黄酮醇）；橙酮（又称澳咔）；查耳酮；二氢查耳酮；黄烷和黄烷醇；黄烷二醇（3，4）（又称白花色苷元）［2］。黄酮类在植物体内大部分与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用［3］。主要存在于桦木科、芸香科、樟科、唇形科、石楠科、玄参科、豆科、苦苣苔科、杜鹃科和菊科等高等植物中［4］。 -
北虫草中腺苷和虫草素的分离纯化和鉴定
本文旨在寻找合适的从北虫草中纯化出虫草素和腺苷的提取分离方法,从而为开发北虫草提供依据.
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北虫草中腺苷和虫草素的分离纯化和鉴定
本文旨在寻找合适的从北虫草中纯化出虫草素和腺苷的提取分离方法,从而为开发北虫草提供依据.
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珍珠母贝中糖胺聚糖的提取分离纯化
目的：对马氏珍珠母贝中提取、分离得到的糖胺聚糖（glycosam inog lycans， GAG）进行化学组分研究。方法：样品经还原、水解和乙酰化，采用气相色谱-质谱法定性测定。结果：测定出马氏珍珠母贝中经提取、分离得到的GAG中的3种主要成分，其骨架结构分别与（硫酸乙酰）肝素、（硫酸）软骨素和透明质酸相符。结论：马氏珍珠母贝中提取分离的糖胺聚糖中含有肝素、软骨素和透明质酸。
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乳腺癌干细胞分离及耐药蛋白分析
背景：乳腺癌干细胞是人体内相对比较特殊的细胞，该细胞具有自我更新以及多向分化能力，能够促进肿瘤的形成和发展，并且长期维持肿瘤生长。因此，分析并研究乳腺癌干细胞耐药蛋白的表达具有重要的意义。目的：从人乳腺癌原代组织中分离乳腺癌干细胞，观察其分化及形态学特点，分析乳腺癌干细胞相关耐药蛋白的表达及意义。
方法：选取30例乳腺浸润性导管癌肿瘤组织标本，采用机械分离方法制作成不同的单细胞悬液，用免疫磁珠两步法分离出乳腺癌干细胞和乳腺癌分化细胞，采用免疫细胞化学二步法检测细胞耐药性蛋白的表达。
结果与结论：乳腺癌干细胞比例与患者的年龄、肿瘤的长径、淋巴结转移及组织学分级等差异不显著(P >0.05)；乳腺癌干细胞P-gp、GST-π阳性表达率显著高于乳腺癌分化细胞(P <0.05)；乳腺癌干细胞TopoⅡ、LRP阳性表达率显著低于乳腺癌分化细胞(P <0.05)，与乳腺癌分化细胞相比，乳腺癌干细胞可通过高表达P-gp，GST-π，低表达TopoⅡ，LRP而具有更强的耐药性，可能是乳腺癌化疗耐药的关键原因。
