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受体结合型癌抗原在胃肠道肿瘤免疫逃逸中的作用
应用免疫组化方法检测受体结合型癌抗原(RCAS1)在胃癌和直肠癌中的表达,同时用原位末端标记法(TUNEL)分析胃癌组织和直肠癌组织中淋巴细胞凋亡情况,以探讨RCAS1与胃肠腺癌发生发展的关系.
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雌激素和雄激素受体在皮肤鳞状细胞癌中的表达
新的研究发现皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC,简称皮肤鳞癌)与雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)的高表达有关,本研究采用免疫组化方法检测皮肤鳞癌中雄激素受体和雌激素受体的表达,以探讨其与皮肤鳞癌发生和发展的相关性.1材料和方法1.1样本的收集 收集新乡医学院第三附属医院皮肤性病科、病理科1996-2010年存档的鳞癌石蜡包埋组织100例.其中皮肤鳞癌40例,癌旁组织30例,40例皮肤鳞癌中,发病年龄28~85岁,平均55.16±17.11岁;病理分级:高分化鳞癌14例,中分化鳞癌21例,低分化鳞癌5例,另外选正常组织30名作为对照.
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CD44V9基因在胃癌组织中的表达
研究表明,变异型黏附分子CD44V中的CD44V3、V6参与了许多恶性肿瘤的侵袭转移过程,但有关CD44V9与肿瘤的关系研究较少.2001年1月至2002年7月,我们采用免疫组化方法检测了60例胃癌患者癌组织中CD44V9的表达,并与12例胃良性肿瘤及20例正常胃黏膜组织进行了比较,旨在探讨CD44V9与胃癌发生发展、侵袭转移的关系.
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去卵巢、去松果体对大鼠齿状回突触泡膜素表达的影响
衰老及阿尔茨海默病(Alzheimer's,AD)多发于老年,主要为记忆障碍;受损脑区主要为联合皮质区、海马结构等;突触丢失是衰老尤其AD病理特征之一.研究显示突触丢失在记忆障碍中起重要的作用[1],然而突触丢失的原因及机制至今不是很清楚.老年期雌激素(E)、褪黑素(MT)水平同时大幅下调,有些实验显示E、MT水平能影响突触的可塑性[2~3],但是E、MT单独及联合缺乏影响突触的可塑性的能力比较至今未见研究报道.突触泡膜素(SYN)是突触前膜上的特异性蛋白,可用来反应突触的可塑性.因为E、MT分别主要在卵巢、松果体产生,故我们拟设计在去卵巢(OVX)、去松果体 (PX)后,E、MT缺乏状态下用免疫组化方法检测齿状回(Dentate gyrus,DG)分子层SYN免疫活性,以探讨E、MT单独及联合缺乏与突触的可塑性变化的关系.
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shRNA 干扰肾癌786-O 细胞株中 HIF-2α的表达对 VEGF 的影响
我们应用免疫组化方法检测肾癌标本中 HIF-2α和VEGF 蛋白的表达,构建 HIF-2α shRNA 真核表达载体质粒,测序鉴定,转染细胞。探讨低氧环境下 HIF-2α和 VEGF的表达及相关性。
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三七皂甙Rg1、Rb1对大鼠脑缺血、缺氧损害的保护及机理研究
目的: 本文研究缺血再灌流时大鼠脑损害及脑细胞凋亡规律以及与转录因子的关系,探讨三七皂甙Rg1、Rb1对脑缺血、缺氧损伤的保护作用及作用机理.方法:(1)动物模型复制及实验分组: Wistar大鼠随机分为5组:模型组、Rg1组、Rb1组、正常对照组和假手术组.模型组采用大脑中动脉闭塞/再灌流模型, 采用线栓法制成.大鼠麻醉后仰卧固定,取颈正中切口,分离左侧颈总动脉,颈内动脉、颈外动脉.结扎并剪断颈外动脉,剪口将尼龙线栓经颈内动脉插入颅到大脑前动脉起始处,阻断自颈内动脉和大脑前动脉流向大脑中动脉的血流. Rg1组、Rb1组分别于手术后立即腹腔注射Rg1、Rb1.(2)标本收集及检测指标:采集大脑标本及血清标本,Tunel原位杂交和免疫组化方法检测细胞凋亡、测定TNFα、sPLA2、cPL A2 、PGE2及c-fos、c-jun表达的变化以及Rg1、Rb1对其影响.结果: (1) 正常组及假手术组仅偶见Tunnel阳性细胞.缺血再灌24-48 h凋亡细胞数位于高峰,再灌60 h,可见凋亡细胞数量下降.(2) 正常及假手术组未见明显的c-fos、c-jun阳性细胞,缺血再灌0.5 h 在大脑皮层、海马可见阳性细胞,24 h达高峰,Rg1、Rb1明显抑制缺血再灌后c-fos、c -jun的蛋白表达.(3) 大鼠血清TNFα、sPLA2在缺血再灌12 h达高峰,PGE2呈双相变化,峰值分别在0.5 h和12 h,此后处于平台期.Rg1、Rb1明显抑制血清TNFα、s PLA2、PGE2水平.(4) Rg1、Rb1对sPLA2蛋白表达的影响:正常组及假手术组大脑切片可见有少量sPLA2蛋白表达,缺血再灌12 h sPLA2表达达高峰.Rg1、Rb1组sPLA2蛋白表达明显减少,Rg1、Rb1可抑制sPLA2的蛋白表达.讨论和结论: Rg1、Rb1对缺血再灌注引起的大脑皮层、海马细胞的凋亡和脑损害, 其机理在于:(1)抑制c-fos、c-jun的蛋白表达,阻断刺激信息的传递;(2)抑制PLA 2基因的表达;(3)抑制TNFα水平,阻止TNFα诱导脑神经细胞凋亡及阻止TNFα参与众多的细胞因子形成的网络系统;(4)抑制sPLA2活性及蛋白表达,sPLA2直接或通过脂类介质参与脑细胞凋亡与坏死过程,是神经元损伤的重要原因.
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心血管组织糖基化终产物的形成与其受体表达的关系
晚期糖基化终产物(advanced glycation end products, AGEs)的形成是糖尿病血管并发症病理变化的一个特征.AGEs与其受体(receptor for AGEs, RAGE)结合引起细胞内信号转导的变化,激活核转录因子引起靶基因的一系列反应,是导致糖尿病血管并发症的关键途径.目的:本实验探讨了AGEs在糖尿病大鼠心血管组织内的形成量与RAGE基因表达的关系.方法:雄性Wistar大鼠分为:1:对照组(8只);2:糖尿病4周组(6只);3:糖尿病12周组(8只);4:糖尿病4周氨基胍(AG)治疗组(6只)和5:糖尿病12周AG治疗组(8只).大鼠禁食12 h后腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型.参照Monnier的方法用荧光法检测主动脉及心肌组织的AGEs含量;取主动脉和心脏组织进行组织匀浆和冰冻切片分别用RT-PCR及原位杂交方法检测RAGE基因的表达.培养人脐静脉内皮细胞,用免疫组化方法检测在糖基化蛋白(参照Lander的方法在体外制备)刺激下内皮细胞NF-κB的激活变化.结果:糖尿病大鼠血糖明显高于对照组(P<0.01);糖尿病12周模型鼠主动脉和心肌组织AGEs含量明显高于其他4组大鼠(P<0.01),血管内皮细胞RAGE表达明显增强(P<0.01);用AG治疗可明显降低AGEs形成和RAGE基因的表达;AGEs含量与RAGE表达呈明显正相关,相关系数为0.97 (P<0.01).免疫组化结果表明,在糖基化蛋白的刺激下血管内皮细胞核呈棕褐色,表明有NF-κB激活后向核内转位的变化.结论:随着糖尿病病程的延长,AGEs在心血管组织内的含量明显增加,RAGE主要在糖尿病大鼠血管内皮细胞表达,其表达量与AGEs含量明显相关;用AG治疗可降低AGEs的形成.提示AGEs与RAGE相互作用,可能通过激活NF-κB诱导RAGE基因自身的表达,而RAGE的持续表达是引起糖尿病慢性血管内皮细胞功能紊乱和损伤的关键环节.
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ZBTB20参与腺垂体发育和催乳素细胞终末分化
目的:探讨转录因子ZBTB20在小鼠腺垂体发育中的作用。方法:利用Zbtb20基因全身敲除( Zbtb20-/-)小鼠模型,观察腺垂体及其靶腺发育;应用RT-PCR、Western blot和ELISA方法分析腺垂体组织中6种促激素的表达分泌;应用免疫组化方法检测腺垂体5种内分泌细胞的数量和分布,并进一步通过多重免疫组化标记方法分析ZBTB20在催乳素细胞群分化发育中的作用。结果:(1)Zbtb20-/-小鼠腺垂体体积明显小于正常对照,同时肝脏及血清IGF-1水平下降,乳腺和性腺发育障碍。(2) Zbtb20-/-小鼠腺垂体催乳素细胞群出生后缺失,生长激素细胞群增殖减少,催乳素( PRL)和生长激素( GH)的mRNA和蛋白水平不同程度减少。(3)Zbtb20-/-小鼠胚胎期垂体中存在PRL/GH双阳性前体细胞,而出生4 d后PRL阳性细胞完全缺失。结论:(1)Zbtb20基因敲除可导致严重的小鼠垂体发育不全。(2)ZBTB20参与小鼠腺垂体催乳素细胞的终末分化过程。(3) Zbtb20基因敲除可使腺垂体生长激素细胞增殖障碍,从而减少GH的表达分泌。
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大鼠急性心肌梗死心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、FAS的表达
目的观察大鼠急性心肌梗死(AMI)时心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达.材料与方法结扎SD大鼠左冠前降支建立AMI模型,SD大鼠随机分为7组:正常对照、AMI 2 h、AMI 4 h、AMI 6 h、AMI 24 h、AMI 48 h及AMI 7 d.心肌标本的处理:实验结束时取出心脏,用于病理检查者10%中性福尔马林固定,石蜡包埋;用于DNA Ladder检测者,液氮冻存待测.用TUNEL及DNA Ladder检测心肌细胞凋亡;采用免疫组化方法检测Bcl-2、Bax、FAS的表达.
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p16、 cyclin D1在结直肠癌中的表达及其临床意义
p16和 cyclin D1是调控 G1→ S检查点 (checkpoint)的两个重要基因。研究表明, p16基因失表达与 cyclin D1过表达与多种肿瘤的发生发展有关。本文应用免疫组化方法检测 67例结直肠癌中 p16、 cyclin D1的表达,旨在探讨它们在结直肠癌发生发展中的作用以及两者之间的相互关系。
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核因子κB p65、一氧化氮合酶及血管内皮生长因子在原发性膜性肾病肾小球内的表达变化及意义
为探讨核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(NOS)及血管内皮生长因子(VEGF)在特发性膜性肾病(IMN)中的作用,我们用免疫组化方法检测了38例IMN患者肾小球内NF-κB p65、NOS(iNOS、eNOS、nNOS)及VEGF蛋白的表达变化及研究其对IMN患者的影响.
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环孢嘌呤A影响大鼠心脏移植中fractalkine表达的免疫组化研究
目的研究大鼠心脏移植中fractalkine的表达以及环孢嘌呤A抗免疫排斥的作用,并探讨该作用的可能机制.材料和方法 1.动物:成年雄性SD大鼠和Wistar大鼠, 体重约200克/只.2.大鼠同种异体心脏移植模型:取供者SD大鼠心脏,结扎上腔静脉和肺静脉.打开受者Wistar大鼠腹腔,结扎腰动脉以及下腔静脉的分支.分别将供者主动脉与受者腹主动脉、供者肺动脉与受者下腔静脉做端侧吻合,并于术后分为三组:Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(CsA7.5mg/KgB.W.)和Ⅲ组(CsA 15mg/Kg B.W.).每组样本7例(n=7),分别于1d、3d、7d和11d取移植心脏以及供者主动脉,脱水包埋或液氮冻存.3.H.E染色及排异分析:石蜡切片,常规H.E染色,依据国际心肺移植组织(ISHLT)1990年心脏急性排异反应分级标准进行排异反应分析.4.免疫组织化学染色:石蜡或冰冻切片,常规免疫组化方法检测ICAM-1 的表达:fractalkine一抗(羊抗鼠),二抗(驴抗羊),ABC试剂盒(均为Sa ntaCrus公司产品).先以3%H2O2、柠檬酸钠微波抗原修复后,PBS洗三次,加1.5%驴血清封闭,分别加一抗、生物素化二抗、亲合素-生物素化酶试剂DA B显色.以PBS及fractalkine的同型抗体作阴性对照.结果心脏移植后1和 3天,供者心脏和主动脉出现轻度炎性浸润,排异反应为1A或1B级;11天和12天时出现弥漫性炎性浸润和心肌坏死,并伴明显水肿、出血以及血管炎,排斥级别达3B或4 级.CsA治疗可使移植排异降低1~2.5级.移植后,血管内皮细胞和外膜浸润淋巴细胞的fractalkine表达显著升高,并有血管平滑肌细胞和间质成纤维细胞出现较强阳性反应.CsA治疗可明显抑制移植的心脏及主动脉的fractalkine表达. 该抑制作用在1至3天内,呈CsA剂量依赖性,而在7至11天与剂量无关.结论 Cs A治疗是下调淋巴细胞迁移和浸润、减弱移植排斥反应的有效手段,其机理可能与降低趋化蛋白表达有关.
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淫羊藿苷防治血管性痴呆的实验研究
目的:观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆的保护作用,探讨ICA防治VD的作用机制.方法:采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法(2-VO法)以及脑缺血再灌注方法(I10-R10-I10)制作VD大鼠模型,利用Morris水迷宫检测ICA对大鼠空间辨别学习记忆能力的影响;用光化学法检测大脑皮层及海马组织中SOD活性、MDA和AChE含量,并检测大鼠血清中AChE的含量;用免疫组化方法检测海马内AChE及ChAT的水平,并通过图象处理软件进行定量分析;HE染色切片光镜下观察海马神经元形态变化;电镜下观察海马神经元超微结构的改变;经原位末端标记法(TUNEL)观察ICA对神经细胞凋亡的影响.
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survivin和bFGF在肺癌中的表达及其相关性分析
生存素(survivin)是凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族的新成员.survivin 定位于人17q25染色体,仅表达于人类胚胎发育组织和绝大多数肿瘤组织,除睾丸、胸腺和胎盘外,在分化的正常组织中不表达[1],因此survivin在肿瘤的诊断和治疗中具有重要价值.本实验通过免疫组化方法检测肺癌中survivin和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastic growth factor,bFGF)的表达情况,探讨它们在肺癌发生、发展中的作用以及相互关系.
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环氧化酶-2在涎腺腺样囊性癌中的表达及其意义
环氧化酶(cyclooxygenase COX)是催化前列腺素样物质合成的关键酶,有2种亚型(COX-1和COX-2).近年来的研究表明,COX-2与肿瘤的发生发展有关,在胃癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌等组织中均过高表达.国内有关COX-2在涎腺腺样囊性癌中的表达未见报道.我们应用免疫组化方法检测了38例涎腺腺样囊性癌组织中COX-2的表达,并探讨其临床病理联系.
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血管内皮生长因子在口腔鳞状细胞癌中的表达
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的发生中起着重要作用.本研究采用免疫组化方法检测了VEGF在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carci-noma,OSCC)组织中的表达,并且采用RT-PCR方法检测人舌癌细胞系Tca8113中VEGF mRNA的表达,探讨VEGF在口腔鳞癌生长中的作用.
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垂体腺瘤p16蛋白表达的临床意义
[刘飞,章翔,曹卫东,梁景文,易声禹. 中国肿瘤临床, 2000;27] 目的探讨垂体腺瘤侵袭及复发与抑癌基因p16蛋白表达的关系. 方法通过免疫组化方法检测57例垂体腺瘤中p16蛋白的表达水平,并对患者进行5 a随访对比研究. 结果垂体腺瘤组织中p16蛋白阳性率为31.6%,侵袭性组p16蛋白阳性率显著低于非侵袭性组(P<0.01). 11例复发组p16蛋白阳性率为0,显著低于41例未复发组p16蛋白阳性率36.6%(P<0.01). 不同激素分泌功能垂体腺瘤p16蛋白表达率无显著差异. 结论 p16蛋白表达水平可作为临床评价垂体腺瘤侵袭性和预测患者复发的指标. (王小仲)
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大鼠脑挫伤后下丘脑c-fos蛋白表达与局部脑血流变化相关性
过去,人们一直认为血管运动中枢只在延髓.而近年越来越多的研究表明,大脑血管调节中枢广泛存在于下丘脑、中脑和延髓[1].吴思荣等[1]分别电解毁损家兔双侧下丘脑背内侧核、中脑网状结构和延髓网状结构, 发现颅内压和局部脑血流(rCBF)有明显改变.但在脑外伤情况下下丘脑各神经核团对rCBF的调节尚未见文献报道.笔者用免疫组化方法检测下丘脑各神经核团的C-Fos蛋白表达,了解不同神经核团反应性与血流变化的关系,分析C-Fos表达与rCBF的相关性.
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转化生长因子β1诱导兔颌骨成骨中微血管的发生
外伤、肿瘤、牙缺失等均可造成颌骨牙槽突骨质缺损、吸收,严重影响种植义齿的修复和成功率.为修复种植体周围骨缺损,学者们进行了大量的基础与临床研究.虽然自体骨是理想的材料,但因来源有限且增加手术创口,使其临床应用受限.目前国内外资料显示,利用生长因子与多种材料复合,可发挥各自的优越性,如转化生长因子β1(TGF-β1 )复合材料即是其中的一类.在TGF-β1 诱导形成新骨的过程中,微血管的形成具有重要意义,它是骨形成分化和维持的重要组成部分.微血管形成的快慢与多少,直接影响到新骨的形成.笔者利用免疫组化方法检测TGF-β1在诱导兔下颌骨再生过程中不同时期的微血管发生情况,探寻TGF-β1成骨中微血管发生与成骨间的关系.