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抗原修复技术研究进展
自从应用抗原修复技术的文章于1991年发表后[1],抗原修复技术(煮沸石蜡切片于水溶液中)迅速、广泛应用于常规甲醛固定、石蜡包埋组织切片的免疫组织化学染色,从而打开了从传统形态学迈向分子形态学的大门.抗原修复技术被誉为免疫组织化学技术的革命性突破[2].
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钙视网膜蛋白在先天性巨结肠不同肠段的表达差异及其临床意义
先天性巨结肠是以远端肠道神经节细胞完全缺如为特征的先天性畸形,结肠黏膜病理活检是术前确诊先天性巨结肠的重要的手段。钙视网膜蛋白( calretinin,CR)是一种重要的钙结合蛋白, CR参与神经细胞胞内的调节。国外文献报道[1-2],CR在先天性巨结肠不同肠段的表达模式存在差异,提示CR免疫组织化学染色可能作为临床诊断先天性巨结肠的一种新的手段。国内马能强[3]及张艳[4]等使用数字分析软件发现先天性巨结肠肠管痉挛段和扩张段黏膜下层及肌间区CR存在差异。我们拟使用免疫组织化学技术对含节细胞及无节细胞的肠管进行CR染色,并分析其染色模式,了解CR在先天性巨结肠患儿切除肠段中的表达,为临床使用CR免疫组织化学染色诊断先天性巨结肠打下基础。
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乳腺癌个体化治疗相关标志物规范化检测体系的建立
乳腺癌的个体化治疗主要是在结合患者临床信息的基础上,再依据其肿瘤组织的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2的表达状态来制定相应的治疗方案,预测治疗效果和评估预后.因此,乳腺癌个体化治疗相关标志物-ER、PR和HER2的规范化检测体系的建立和应用是乳腺癌个体化治疗重要的基础.ER、PR和HER2检测的常用方法是免疫组织化学技术和原位杂交技术,其检测结果受到诸多因素的影响,包括标本的前期处理、固定,检测方法及实验室质量控制,检测结果的判读和病理报告的规范化等.由于在临床实践中还存在相当数量检测结果的不确定性或不可重复性,常导致乳腺癌临床治疗方面的困惑,临床医师难以准确制定治疗方案而可能造成误诊误治,甚至引起医疗纠纷.
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浙江省三级医院免疫组织化学单项质量控制与评价
随着免疫组织化学技术持续快速的发展,该技术已日益成为现代病理常规诊断中必不可少的辅助手段。尤其近十年来,一类隶属于美国食品药品监督管理局( FDA)《免疫组织化学试剂重新分类标准》的Ⅱ类抗体,例如雌激素受体( ER)、孕激素受体( PR)、HER2等检测已成为重要的预后指标,以及临床药物治疗的预测标志。免疫组织化学实验结果的准确性、重复性以及实验室之间的交流愈来愈受到重视。针对 HER2的检测标准化问题,继美国临床肿瘤协会(ASCO)和美国病理学家学院(CAP)联合发布的2007年HER2检测指南之后,我国也于2009发布了新版HER2检测指南,其质量控制的重要性已经得到了临床和病理医师的广泛认同。我国各个实验室间的质量控制有开展但仍不够完善,2012年8月浙江省临床病理质量控制中心在2005、2006年二级和三级医院免疫组织化学专项质评的基础上,实施了新一轮的免疫组织化学单项( HER2、PR )质评(共73家)。作为省级免疫组织化学技术质量控制工作,具有鲜明的特征和示范性。因此对此次测评的亮点和问题做一综述和讨论。
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免疫组织化学展望
尽管免疫组织化学技术发明于20世纪40年代,但用于甲醛固定石蜡包埋组织切片的历史仅有30余年.一系列的技术发明,包括在酶标记抗体的基础上开发各种高敏感性检测系统(如PAP,ABc等),单克隆抗体的问世以及蛋白酶消化修复部分抗原等,为免疫组织化学技术用于石蜡切片提供了有利条件.
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重视免疫组织化学的质量控制和标准化
免疫组织化学技术作为病理诊断的辅助技术,已成为目前临床组织病理诊断不可或缺的手段之一.免疫组织化学技术的应用大大提高了病理诊断的水平,使原来很多很难诊断的疾病,通过免疫组织化学技术的发展而得以解决.如对于形态上不典型,又无色素的恶性黑色素瘤,HMB45和Melan A或S-100的免疫组织化学技术染色,可很容易帮助病理医生确定诊断.很多软组织肉瘤,没有免疫组织化学技术的辅助则很难确定其来源或分化方向.恶性淋巴瘤的诊断更是随着免疫组织化学技术的开展和不断进展而不断的改进分类、认识其本质、确定病理类型和标准.新的WHO肿瘤分类的一个重要特点是将分子遗传学整合到肿瘤的分类中去,部分分子遗传学改变是可以通过免疫组织化学染色显示的,例如滤泡性淋巴瘤t(14;18)所引起的bcl-2在肿瘤性滤泡中高表达,故可以通过免疫组织化学染色显示.细胞核和细胞质均呈ALK免疫组织化学染色阳性,提示该间变性大细胞性淋巴瘤有由t(2;5)导致的NPM-ALK融合基因的存在.免疫组织化学染色还可协助疾病的预后判断和具有指导临床治疗的作用.例如c-erbB-2 强阳性,提示肿瘤的预后差,发生转移的几率大,亦可提示临床使用Herceptin进行治疗.因此可以说目前的临床病理诊断已离不开免疫组织化学技术,而没有免疫组织化学技术亦很难说有现代的临床诊断病理学.
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重视病理医生在免疫组织化学应用中的主导作用
免疫组织化学技术的出现和发展给传统病理学带来了一场革命,使纯形态的病理学发展成为了形态与免疫信号相结合的现代病理学.其技术应用20多年来对临床病理诊断产生了深刻的影响,目前已成为了病理诊断中不可缺少的、重要的辅助手段.然而,由于其具有的复杂性,在技术应用过程中仍然存在不少问题,直接或间接地影响了终的病理诊断.从表面来看,做免疫组织化学染色只是病理技术员的事情,因此常常简单地把免疫组织化学中出现的问题归结到技术员身上.然而,纵观免疫组织化学应用的全过程,病理医生的确起着重要的主导作用,应予以重视.只有充分认识病理医生在免疫组织化学应用中的主导作用、发挥主导作用,才能从总体上保证免疫组织化学的质量,才能充分有效地利用好免疫组织化学这一有力的工具.病理医生在以下八个方面发挥着重要作用.
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人肝癌裸鼠模型的超声造影峰值强度与血管生成关系的研究
目的 探讨彩色多普勒检测人肝癌裸鼠移植瘤的血流、超声造影评价其血流灌注与肿瘤血管生成的相关性.方法 建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型12只,随机分为2组:生理盐水组、盐酸博安霉素组,瘤结周围皮下注射相应药物,于治疗后24 d采用iU22超声诊断仪进行检查,并对其进行实时超声造影,利用时间-强度曲线(TIC)进行定量分析,得出两组人肝癌裸鼠移植瘤的血流灌注参数峰值强度(peak intensity,PI),评价肿瘤内血流灌注情况.免疫组织化学技术分析肿瘤组织的微血管密度(MVD),探讨PI与MVD表达的关系.结果 生理盐水组和盐酸博安霉素组的PI分别为(15.33±1.10)、(8.84±1.82) db,生理盐水组和盐酸博安霉素组的MVD计数分别为(11.83±0.75)、(4.83±0.98)条/400倍视野,生理盐水组PI、MVD计数高于盐酸博安霉素组(P<0.01).生理盐水组和盐酸博安霉素组PI与MVD之间呈正相关(r=0.962,P<0.01).结论 人肝癌裸鼠移植瘤超声造影PI可作为评估其内肿瘤血管生成的指标,为无创监测肿瘤抗血管生成治疗疗效提供了新的影像学方法.
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胃癌巨噬细胞浸润和微血管密度与侵袭转移的关系
目的:探讨胃癌组织中浸润巨噬细胞与微血管密度的相关性及其在胃癌侵袭转移中的作用.方法:应用免疫组化SP法,用抗CD68和抗CD34单克隆抗体对102例胃癌组织进行标记分析,并应用计算机辅助图像分析系统对血管新生的面积进行定量分析.结果:巨噬细胞浸润与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关,且有显著性差异(p<0.01,p<0.05,p<0.05,p<0.05).MVD与分化程度、浸润深度、淋巴结转移,TNM分期相关,且有显著性差异(p<0.01).巨噬细胞计数与MVD呈正相关(r=0.961,p<0.01).结论:联合检测巨噬细胞浸润度及MVD定量分析可提供胃癌恶性转归更有价值的指标.
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食管鳞癌组织中S100A4和MMP2蛋白表达与临床病理学特征的关系
目的:探讨食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中S100A4和MMP2的表达及其与食管鳞癌临床病理因素之间的关系.方法:应用SP免疫组织化学技术检测100例食管鳞癌及其癌旁正常黏膜组织中S100A4和MMP2蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中S100A4和MMP2蛋白阳性率分别为52.00%和67.00%,明显高于癌旁正常黏膜组织26.00%和31.00%(P<0.01).二者在食管鳞癌中的表达呈正相关,且与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05).结论:S100A4可能通过对MMP-2蛋白的调控在食管鳞癌的发生、发展及食管鳞癌的早期侵袭转移中起关键作用,有望成为评估食管癌预后的一个新的标志物.
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结直肠癌组织中转化生长因子β表达的意义
目的:探讨结直肠癌组织中转化生长因子(Transforming growth factor,TGF)-β1,2和3的表达及其与临床生物学行为的关系.方法:采用免疫组织化学技术SP法检测67例结直肠癌组织和10例正常黏膜中TGF-β1,2和3的表达.结果:TGF-β1和TGF-β2在结直肠癌组织中的表达明显高于正常黏膜(P<0.05);结直肠癌中TGF-β1的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期呈正相关(P<0.05),TGFβ-2仅与肿瘤的Dukes分期有关(P<0.05),而与肿瘤的浸润深度和淋巴结转移无关(P>0.05),TGF-β3与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期无相关性(P>0.05).结论:TGF-β1和TGF-β2可能在结直肠癌的发生中起着重要作用,可反映为结直肠癌的临床生物学行为.
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结肠癌患者癌组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达及血清中HA和Ⅳ型胶原的定量检测
目的:探讨结肠癌组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达以及血清中透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原的浓度在结肠癌预后判断中的作用.方法:采用免疫组织化学技术,检测60例结肠癌组织以及10名正常组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达,同时采用放射免疫技术检测上述60例结肠癌及10名正常人血清中透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原的含量.结果:结肠癌组织中CD44v6阳性率为75%,明显高于癌旁对照及正常结肠组织,有淋巴结转移组的结肠癌组织中CD44v6的表达明显高于无转移组(70.9%vs33.3%,P<0.01),DukeA和DukeB期明显低于DukeC和DukeD期(30.3%,36.4%vs 62.5%,66.7%,P<0.01);而Ⅳ型胶原在结肠癌组织中均有不同程度的减少,其中高分化组结肠癌组织中明显高于中、低分化组(61.1%vs29.0%,18.1%,P<0.01),有淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组(20.8%vs58.3%,P<0.01),Dukes A和DukeB期明显高Duke C和Duke D期(70.0%,54.5%vs31.3%,16.6%,P<0.01),结肠癌患者血清中HA和Ⅳ型胶原含量明显高于正常对照组(200±160 μg/L,125±42 μg/Lvs61±14 μg/L,60±15 μg/L,P<0.01),且与有无淋巴结转移和Dukes分期相关,随着组织中CD44v6和Ⅳ型胶原表达逐渐增加,血清中HA亦逐渐增加,而Ⅳ型胶原则逐渐减少.结论:组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达及血清中HA和Ⅳ型胶原的含量对判断结肠癌患者的预后有重要意义.
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水通道蛋白1 在肺组织中的表达
肺泡腔和血管腔间水的快速转运有极其重要的生理功能。水的转运障碍将会使肺水稳态失衡,导致肺水肿等液体代谢紊乱性疾病。然而,肺泡毛细血管屏障转运水的机制尚不清楚。90年代初水通道蛋白(AQPs)的发现,使水代谢的研究有了一个飞跃。有关AQP1在肺组织的表达位置及数量,国内外研究尚无定论。本研究采用免疫组织化学技术及免疫电镜方法检测AQP1在肺组织中的表达,为探究肺水代谢机制提供实验及理论依据。 一、 材料与方法 1.肺组织标本留取:将30只体重为200~250 g SD大鼠(中国医科大学实验动物部)随机分成2组,每组15只,麻醉、放血后冲洗肺血管床。一组大鼠气管内灌流4%多聚甲醛并浸泡24 h以上,在每只大鼠左肺上叶取一小块肺组织及下段气管0.5 cm长。常规脱水、包埋制成蜡块,用于免疫组化染色。另一组大鼠气管内灌流0.5%戊二醛和2%多聚甲醛固定2 h,再浸泡于2%多聚甲醛中固定过夜,在每只大鼠左肺上叶取一小块肺组织,用于免疫电镜检查。
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脾窦岸细胞血管瘤的研究进展
脾窦岸细胞血管瘤(littotal cell angioma,LCA)是一种原发性脾脏血管性肿瘤,早是由Falk~([1])在1991年报道并命名的,因其同时表达内皮细胞和组织细胞标记,并经免疫组织化学技术和电镜证实,被认为是起源于脾脏红髓的窦岸细胞(littoal cell),故称之为脾窦岸细胞血管瘤.
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MMP-1,MMP-3及其特异性抑制剂TIMP-1,TIMP-3在门静脉高压症脾静脉中的表达
门静脉高压症内脏血管存在着广泛的形态和功能方面的病变.基质金属蛋白酶(MMPs)及其特异性抑制剂基质金属蛋白酶抑制因子(TIMPs)在细胞迁移、组织形态发生和生长等结缔组织重塑过程中起重要作用.我们拟通过免疫组织化学技术和原位杂交的方法了解MMPs及TIMPs在门静脉高压症脾静脉中的表达和作用.
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多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达的检测在原发性肝细胞癌中的临床意义
化疗在原发性肝癌以手术为主的综合治疗中发挥着重要作用,而多药耐药的产生可能是其临床化疗失败的原因之一.近来研究提示MRP基因过表达参与了癌细胞多药耐药的发生[1],检测其表达可能具有重要的临床意义.本研究运用RT-PCR和免疫组织化学技术,检测原发性肝细胞癌组织中MRP的表达,结合临床病理资料,探讨MRP基因表达在原发性肝细胞癌中的临床意义.
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大肠癌中RAB5A及CD44V6的表达
我们采用免疫组织化学技术,观察大肠癌组织切片中RAB5A和CD44V6的表达,旨在探讨其与大肠癌临床病理因素的关系.
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大肠癌p16蛋白和基因突变与临床病理因素关系的探讨
本实验应用聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR-SSCP)和S-P免疫组织化学技术在基因水平和蛋白质水平分别检测同一病例p16的基因缺失及蛋白表达情况,以判定大肠癌p16基因的变异率、p16蛋白表达与临床病理的关系。
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采用组织芯片技术检测乳腺癌中泛素、S期激酶相关蛋白2、细胞周期调控因子p27的表达
组织芯片(组织微阵列)一般是指将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.我们采用组织芯片技术制作乳腺癌的组织芯片,并用免疫组织化学技术进行泛素(Ubiquitin)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2, Skp2)、细胞周期调控因子p27的检测,探讨乳腺癌组织中Ubiquitin、Skp2和p27表达的意义.
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上皮钙黏蛋白与食管鳞癌侵袭转移关系的研究
我们采用免疫组织化学技术,对食管癌组织中钙黏蛋白(E-cadherin)进行检测,探讨其与食管癌临床病理指标的关系.材料和方法收集2000年1月至2003年1月间山东大学齐鲁医院手术切除术前未行放、化疗的46例病人食管鳞癌标本及癌旁正常组织标本.