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HCV IRES特异性抑制性RNA结构模拟及在体外对病毒翻译启动的抑制作用
[摘要]目的 计算机模拟IRNA二级结构,研究HCV IRES特异性抑制性RNA对HCVIRES介导蛋白翻译的体外抑制作用.方法 应用计算机软件模拟IRNA二级结构;体外化学合成IRNA及其互补体的cDNA,以AatⅡ和Xba Ⅰ双酶切后克隆入具有自剪切作用的顺式核酸载体pGEMRz中;应用酶切方法、PCR方法和测序法对重组载体进行三重鉴定.
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IRES特异性IRNA在丙型肝炎抗病毒治疗中作用
丙型肝炎基因治疗是目前研究的热点,HCVIRES是丙肝病毒核酸复制和蛋白翻译的关键结构.目前针对IRES结构的治疗策略主要包括反义核酸、核酶、抑制性RNA等.现就抑制性RNA在HCV感染基因治疗中作用研究进展作简要综述.
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IRES特异性IRNA对HCV IRES启动蛋白翻译细胞内抑制作用
目的:研究核糖体内部进入位点(internal ribosome entry site,IRES)特异性抑制性RNA(inhibitor RNA,IRNA)细胞内对丙型肝炎病毒(HCV)IRES介导蛋白翻译的抑制作用.方法:体外应用脂质体细胞转染法,将IRNA及其突变体mIRNA真核表达载体pcRz-IRNA/pcRz-mIRNA转染人肝癌细胞株(HHCC),经G418筛选4 wk后建立IRNA及mRRNA表达株;以相同的方法构建pcHCVcluc转染株;以脂质体介导细胞转染法将pCMVNCRLuc转染IRNA及mIRNA细胞株,于转染后48 h检测荧光素酶表达量;将IRNA及mIRNA真核表达体转染pcHCVcLuc表达株,于转染后不同时间检测荧光素酶表达量.结果:HCVIRES介导蛋白翻译在IRNA表达株明显受到抑制,同样IRNA对HCV翻译复制子的蛋白翻译作用有明显抑制性;突变体mIRNA表达株和空载体对照株中未见相似的抑制性.结论:pcHCVcluc在HHCC细胞中获得有效表达;IRES特异性IRNA能有效的抑制HCVIRES介导细胞内蛋白翻译作用.
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ATP结合盒蛋白E1在真核生物中的作用
ATP结合盒(ATP-binding cassette,ABC)蛋白超家族是真核生物进化过程中为保守的一类蛋白.ABCE1是ABC超家族中E亚家族的唯一成员,除可抑制哺乳动物核糖核酸酶L外,还参与真核生物蛋白合成的翻译起始、终止及核糖体循环,并有可能成为新的抗肿瘤靶点.本文对ABCE1的基本生物学特性及其生物学作用作一介绍.
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有关干扰素治疗慢性乙型肝炎的推荐意见解读
目前国内外用于抗乙肝病毒的干扰素主要为α亚型,其作用机制除通过诱导一些抗病毒蛋白(例如2,5-寡腺苷酸合成酶可降解病毒mRNA,蛋白激酶K可阻断病毒蛋白翻译)而起到直接抗病毒作用外,还可通过免疫调节(例如促进受感染的肝细胞表达HLA-I类抗原、增加NK细胞活性等)间接起到抗病毒作用.
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组织型转谷氨酰胺酶与肾间质纤维化的研究现状
业已证实,肾间质纤维化(RIF)是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾衰竭的共同病变过程,且其对肾功能的影响较肾小球病变更为重要.对于细胞外基质(ECM)合成和降解失衡导致RIF这一共识问题,既往大量工作着重于降解ECM成分的主要蛋白酶-基质金属蛋白酶的调控研究,近年来,ECM蛋白翻译后被绞联修饰,从而抵抗蛋白酶降解,造成ECM过度沉积这一现象已引起重视[1].
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MicroRNAs在肾脏纤维化中的研究进展
MicroRNAs( miRNAs),即微小RNA,是一种内源性的非编码小分子RNA(约20~22个核苷酸),具有高度保守性,广泛存在于植物和哺乳动物中。miRNAs通过抑制蛋白翻译或沉默相应信使RNA调控着特定基因的表达,在细胞分化、增殖、发育和功能调节方面有着重要的作用并参与机体的生理病理过程。相关研究表明,约有1000种人属miRNAs负责调控着大约60%的基因[1~3]。因此,miRNAs的失调不可避免会导致细胞功能的损害和相关疾病的发生,且miRNAs在组织中表达各异,这些miRNAs的表达差异和诸多疾病的发生发展有着密切的关系,如肿瘤,糖尿病等。近年越来越多的研究表明miRNAs对于肾组织发育、内环境及肾功能稳定也不可或缺[4,5],许多特定的miRNAs可通过多种途径使肾脏病变加重而导致肾功能恶化。
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MicroRNA在调控胶质瘤干细胞自我更新中作用
MicroRNA是重要的内源性小RNA,长度约21~23个核苷酸序列,参与包括翻译抑制,mRNA降解和脱腺苷作用等多种细胞内基因靶向沉默过程.近来发现将近半数以上的miRNA定位于癌基因相关区域[1],miRNA生成需经过许多步骤:首先编码miRNA的基因在RNA聚合酶Ⅱ的作用下生成pri-miRNA,随后pri-miRNA经RNA核酸内切酶ⅢDrosha剪切生成miRNA中间产物pre-miRNA[2],pre-miRNA 被Exportin-5从核内运输到胞质内终形成成熟的miRNA.成熟的miRNA作用于mRNA的3’非翻译区(3'untranslated region,3'UTR),从而影响基因表达和蛋白翻译,发挥生物学作用.miRNA目前被认为是细胞自身信息有目的性沉默的主要RNA,除了能调节正常细胞功能之外,miRNA还能在许多病理过程中例如肿瘤发挥重要作用.miRNA表达的上调或下调可能起到抑癌或促癌作用,其基因丢失或扩增与肿瘤的发生有密切关系.
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热休克蛋白与神经保护
对脑中风患者,治疗时给予神经保护剂能挽救半暗带(penumbra),改善患者预后.缺血区ATP匮乏是脑损伤的始动因素,而神经元内蛋白质翻译停滞是脑缺血引起迟发性神经元死亡的标志.研究认为Hsp70高表达处于神经保护通路的上游关口,可以对抗缺血区的两大变化:蛋白质翻译停滞和ATP供给匮乏,抑制细胞凋亡和坏死,其机制与Hsp70参与蛋白折叠,抑制异常蛋白聚集,减少细胞毒性相关.因此,研究诱导Hsp70蛋白表达的药物对脑缺血的保护作用、阐明Hsp70诱导剂保护神经元的机制是很有意义的.
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人类椎间盘退变与年龄的关系
人类椎间盘退变与年龄相关,并引起中老年患者的脊柱损伤甚至致残.脊柱强硬、颈部及腰背疼痛,其可能的原因是:椎间盘内营养物质的降低,盘内活性细胞数量减少或细胞外基质的敏感性丧失,盘内基质蛋白翻译后的修饰,降解基质翻译后的积累,基质疲劳等.其中重要的原因是椎间盘中央营养物质的降低,细胞代谢废物的堆积及降解的基质分子的积累,引起pH降低,并进而影响盘内细胞的功能甚至导致细胞死亡.因此随着年龄的增长,椎间盘退变是不可避免的.
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急、慢性缺氧对大鼠脑线粒体ATP合成酶、mtRNA转录和蛋白翻译活性的影响
目的:线粒体是一种半自主性细胞器,不仅含有自身的遗传信息(mtDNA),而且有一套相对独立的自身RNA转录和蛋白翻译体系.由于线粒体是消耗氧和产生能量(ATP)的主要场所,因此,线粒体能量合成与其半自主性有密切关系.脑组织是对缺氧敏感的组织,缺氧所致中枢神经系统功能障碍又是急性脑型高山病发生的直接原因.本文探讨缺氧时脑功能障碍的机制和线粒体半自主性与ATP合成的关系.方法:雄性Wistar系大鼠随机分为未缺氧(对照)组、急性缺氧组(模拟海拔4 000 m高源连续缺氧72 h)和慢性缺氧组(模拟海拔4 000 m高原连续缺氧40 d).断头处死并分离大鼠脑皮质线粒体,Clark氧电极测定线粒体呼吸功能以鉴定其质量.ATP合成酶(F0F1-ATP酶,即复合体V)活性采用寡霉素抑制-无机磷定量法测定,离体粒体的RNA转录和蛋白翻译活性分别采用[3H]-UTP和[3H]-Leucine掺入法.结果:正常情况下,线粒体体外RNA转录合成活性与ATP合成酶活性呈线形相关(P<0.05, r=0.97);急性缺氧使ATP合成酶活性由对照的22.413±2.964降低至13.237±1.968(P<0.01),慢性缺氧时酶活性则回升至16.133±2.329(P<0.01),但仍低于对照组(P>0.05);同时,急性缺氧使线粒体体外RNA转录合成能力下降40%(P<0.01),蛋白合成能力则降低60%(P<0.01);慢性缺氧时线粒体RNA和蛋白合成能力均有所恢复,分别为对照的72%和76%,但均未达平原对照水平.缺氧时ATP合成酶活性与线粒体转录及翻译活性变化趋势相一致.结论:缺氧对mtDNA编码呼吸链氧化磷酸化蛋白在转录和翻译水平表达的影响与缺氧时线粒体能量合成功能降低有关.
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miR-223与恶性肿瘤
microRNA是一类19~25个核苷酸组成的非编码的微小RNA,广泛存在于各种真核细胞中,参与调节细胞的生长、发育、分化和凋亡.microRNA是基因表达的重要调节因子,通过其"种子序列"与靶mRNA的不完全互补结合,导致mRNA降解或抑制蛋白翻译.研究发现[1],microRNA的异常表达与恶性肿瘤的发生有关.miR-223在骨髓中显著高表达并参与造血系统分化过程使其备受关注,其异常表达会导致血液系统恶性肿瘤的发生,进一步的研究发现miR-223也参与实体恶性肿瘤的发生.本文就 miR-223与恶性肿瘤关系的研究进展进行综述.
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miR-145与肿瘤相关性研究进展
微小RNA为一类长约19~25个核苷酸的内性非编码单链RNA,可抑制靶基因转录或蛋白翻译从而沉默靶基因的表达.大量研究表明,微小RNA作为原癌基因或抑癌基因在肿瘤的发生和发展过程中起重要作用.查阅国内外文献,近年来关于miR-145的研究更新较快,科研工作者进行了大量实验,提出了较多的新的观点,现就miR-145在肿瘤方面的研究进展作一综述.