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用重组大肠杆菌生产rhG-CSF高密度发酵的方法
目的:优化重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF) 的生产工艺,了解菌体生长和产物合成规律,为rhG-CSF的工业化生产提供依据. 方法: 以摇瓶发酵的研究结果为基础,在5 L发酵罐中,测定工程菌rhG-CSF的生长曲线,根据在不同pH值、溶氧和诱导时机时工程菌生长的情况,研究重组大肠杆菌DH5(/pBV220生产rhG-CSF分批补料培养的工艺条件,确定5 L发酵罐稳定的发酵工艺参数.结果: 培养工程菌的优化条件为: 发酵前期流加2 mol/L的氢氧化钠控制pH值为7.2,当开始诱导表达时,控制pH为6.8;溶氧水平控制在50%以上;选择菌体在对数生长中期A600 nm值为12.0进行诱导表达. 在此优化的培养条件下,菌体A600 nm值达到(21.3±0.9),细胞干质量可达(12.3±0.7) g/L,细胞湿体积质量为(43.8±0.9) g/L,rhG-CSF的表达量为(41.9±1.6)%. 结论: pH值、溶氧和诱导时机等培养条件对工程菌生长和表达有显著影响.
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利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组肿瘤导向多肽LTL-TNF
目的探讨重组肿瘤导向多肽LTL-TNF工程菌的大规模培养与表达方法以获取重组LTLTNF. 方法首先在试管和三角瓶中探讨工程菌的生长和表达规律,筛选其适宿主菌、佳培养及诱导表达条件,然后在5 L自控发酵罐中进行分批补料培养. 结果保持培养过程中30%～40%的溶解氧和限制性流加葡萄糖,工程菌DH5α/pBV-LTLTNF在5L发酵罐中培养至终密度A600 nm 40～50时,目的蛋白的表达高,可达菌体总蛋白的50%,LTL-TNF的含量达到5.12 g*L-1, 发酵总时间在12 h左右. 结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺,为重组肿瘤导向多肽LTLTNF工程菌的工业化生产奠定了基础.
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毕赤酵母表达外源基因研究进展
毕赤酵母表达系统作为一种新型酵母表达系统,它既有原核生物的特点,又有真核生物的特性,可以对目的蛋白质进行糖基化、二硫键形成等翻译后修饰.在过去的20年中已经有200多种不同蛋白在毕赤酵母中实现了成功表达[1],其中许多已被广泛应用于临床诊断治疗或科研工作中.随着一系列新型酵母表达载体及菌株的构建及发酵技术的不断提高,毕赤酵母越来越吸引着科学家的关注,毕赤酵母己被发展成为一种细胞生物学研究及基因工程生产的模式真核生物.本文总结了毕赤酵母的载体与菌株构建及发酵技术和糖基化等方面近年的主要研究进展.
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肺炎克雷伯杆菌疫苗中试生产中细菌培养工艺的改进及优化
目的：中试生产中对肺炎克雷伯杆菌培养工艺进行改进及优化。方法采用液体综合培养基代替半综合培养基在10 L和100 L中国丽生物反应器中对肺炎克雷伯杆菌进行培养，在10 L中国丽生物反应器探讨不同的培养基配方、pH值、培养温度、搅拌转速、溶氧，工艺参数稳定后，扩大培养到100 L中国丽生物反应器，并探讨培养过程中补加葡萄糖的浓度及补加方式等对细菌浓度及荚膜多糖含量的影响。结果肺炎克雷伯杆菌液体综合培养基可代替半综合培养基用于该菌的培养，培养过程中维持pH值7．2、温度37℃、通气60 L/h、搅拌转速250 r/min、培养到2 h时开始以恒速补加30 mL/L 40％葡萄糖溶液、培养时间为5 h，细菌长势好，收获的荚膜多糖含量高。结论肺炎克雷伯杆菌的培养工艺放大到100 L中国丽生物反应器中，经过多次试验初步建立了稳定的肺炎克雷伯杆菌中试培养工艺。
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肺炎链球菌发酵过程中质控方法的应用
目的建立肺炎链球菌发酵过程中的质控方法。方法应用革兰染色镜检与荚膜肿胀试验监测菌种的退化及发酵罐染菌情况，或用于退化菌种的复壮；应用发酵过程中测定培养液光密度（ A600）的方法监测发酵状况、确定培养液初始浓度以及收获时间；应用血糖仪测定发酵过程中的葡萄糖含量，保证发酵过程中碳源的及时补充；应用渗透压仪检测发酵过程中培养液渗透压的变化，确定补料策略。结果确立了细菌革兰染色、荚膜肿胀试验、葡萄糖含量、渗透压、光密度（ A600）等作为肺炎链球菌发酵过程中的质控方法。结论实验研究中建立的肺炎链球菌发酵过程质控方法能够较好地监测和评价肺炎链球菌的发酵过程。
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α2a型基因工程干扰素发酵工艺的研究
对干扰素工程菌PBV320/7118-α2a型发酵工艺,由批式培养改为反馈式流加培养[1]可显著提高工程菌PBV320/7118-α2a在40L发酵罐中的菌体产量及干扰素的表达水平.
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重组人干扰素β ser17工程菌发酵培养条件的优化研究
实验对重组人干扰素β ser17(rhIFN-β ser17)工程菌的发酵培养条件进行了研究,通过实验优化确定了适宜rhIFN-β ser17表达的培养基、诱导剂使用浓度、诱导时期和诱导后的收获时间等,建立了发酵培养工艺,并在50L发酵罐进行了中试发酵,菌体收获量湿重达13.08g/L,rhIFN-β ser17表达量占菌体总蛋白的20.2%,纯化后比活性达2×107IU/mg蛋白以上,为进一步的下游开发奠定了基础.
关键词： 重组人干扰素β ser17 发酵 表达 -
低氧耐受动物细胞的耐低氧策略
一些脊椎动物通过进化可以耐受长期低氧,龟作为一种所谓的兼性耐低氧生物(facultative anaerobes)能通过多种机制对低氧适应.其中为重要的是急剧下调能量转换和上调ATP生成通路的能效[1],后一机制是在低氧条件下从每摩尔Q2大限度地获取ATP,而在无氧条件下,则通过无氧代谢通路,从发酵形成的每摩尔H+大限度地获取ATP[2-9].主要根据近年对龟的神经元与肝细胞的研究,可以列出以下的几种策略或机制.
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发酵中药复方水剂化糖酶对链脲佐菌素所致糖尿病小鼠的作用
目的 探究发酵中药复方水剂化糖酶对糖尿病小鼠血糖的影响.方法 取雄性昆明种小鼠,体质量(22.0±2.0)g,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病小鼠模型,1 w后根据空腹血糖结果随机分为模型组、二甲双胍组、化糖酶低、高剂量组并予以相应药物,每天1次,5 w后测定小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、血清胰岛素、糖耐量(OGTT).结果 STZ注射后1 w,小鼠血糖值变化明显且稳定,综合体质量变化及饮水、尿量等情况,模型成功纳入64只.与模型组小鼠比较,化糖酶低、高剂量组小鼠体质量减轻;药物干预4 w后,与模型组小鼠比较,化糖酶低、高剂量组小鼠饮水量减少,差异有统计学意义(P＜0.05);第3 w开始,与模型组小鼠比较,化糖酶低、高剂量组小鼠空腹血糖降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组小鼠比较,化糖酶高剂量组小鼠血清胰岛素水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组小鼠比较,化糖酶低、高剂量组小鼠口服葡萄糖后4个时间点的血糖降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 发酵中药复方水剂化糖酶对STZ所致糖尿病小鼠的血糖有较好的调节作用.
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蜡状芽孢杆菌(B.cereus)对血红蛋白(Hb)降解特性研究
蜡状芽孢杆菌(B.cereus)在偏酸性(pH6.5),发酵温度在30～40℃之间的环境中生长;Ca2+及司班20对其蛋白酶的合成有促进作用,从单菌株连续发酵、单菌株多次培养发酵、多菌株混合发酵及诱变菌株对Hb降解进行分析测定.结果表明:蜡状芽孢杆菌(B.cereus)单菌株连续发酵到第三天,Hb降解速率快,其变化率为42.60%;经多次培养可提高该菌株对Hb降解能力;多菌株混合发酵比单菌株发酵产蛋白酶活力强,Hb降解率高;随诱变代数的增加,所获得的诱变菌株降解Hb能力不断增强.
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掺假原料乳对酸奶发酵的影响
酸奶在日常生产过程中会出现许多问题,其中原料乳掺假导致发酵受影响较为普遍.目前尽管我们已采用了多种掺假的检测方法,但各种方法均是在一定含量范围内适用,当掺假物质低于检测范围时却无法检测出,然而对酸奶的发酵仍有影响.本文以洗衣膏和NaHCO3两种掺假物质进行研究.
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食用自制豆豉致肉毒杆菌食物中毒7例报道
本院收治因食用自制豆豉致肉毒杆菌食物中毒患者7例,现报道如下.1豆豉制作方法新豆收获后选精豆煮熟,发酵晾干备用.待大白菜收获后,将大白菜洗净切成条块状,加豆豉豆、调均匀后密封于坛中,放置于较暖、阴暗处发酵,1个月左右食用.2临床资料2.1一般资料男2例,女5例,年龄13～46岁;潜伏期30～48小时.潜伏期长短与食用豆豉多少呈正相关,食用多者,潜伏期短,反之,潜伏期长.2.2临床表现轻者头晕、乏力、恶心、呕吐、腹胀,重者视物模糊、复视,声音嘶哑,逐渐出现呼吸困难,流涎,吞咽困难,眼睑下垂,瞳孔散大,肌张力减低,肌力Ⅰ～Ⅲ级不等,肌腱反射减弱,深浅感觉正常,未引出病理反射,神志清,无发热.心、肝、肾无异常.病情轻重与食用豆豉多少密切相关.多食者临床表现重,3例死亡者均食用较多,存活者均食用较少.
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中药发酵技术研究进展
现代生物技术与中药传统发酵制药技术的有机结合为中药发酵技术的迅速发展提供了广阔的空间,与传统发酵工艺技术相比,现代中药发酵技术有了长足的进步.对现代中药发酵技术进行初步概述、总结,着重介绍当前发酵技术中的热点--药用真菌双向性固体发酵技术,而后对现代中药发酵技术的优势及前景进行探讨,为进一步的探索研究奠定基础.
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基因重组大肠杆菌表达截短型pZP3β的发酵条件优化
目的:对已构建好的表达pZP3β蛋白(pZP130)工程菌的培养条件进行优化,通过在5 L罐中发酵和Ni柱纯化,以期获取较大量目的产物.方法:在摇瓶中改变不同的培养及诱导条件,比较工程菌的生长和目的蛋白的表达,优化发酵条件;并在5 L发酵罐中进行发酵,获得菌体,破碎后进行Ni柱纯化.结果:优化的发酵条件是:10%的接种量,加入2%甘油的培养基培养菌体3 h后加入0.5 mmol/L IPTG,诱导4 h后收样.在5 L发酵罐中发酵,获得菌体量36g/L,经Ni柱纯化,获得蛋白粗制品33 mg/L发酵液.结论:截短型pZP3β蛋白可以在E coli中获得较高表达,并且可以通过发酵和Ni柱纯化得到较大量的蛋白,这有助于pZP的深入研究和应用.
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流加对前体物发酵法合成15N-L-色氨酸的影响
以经过诱变和5-甲基色氨酸处理的假丝酵母突变株AS60为出发菌株,研究了在发酵过程中分别流加葡萄糖、15N-硫酸铵以及前体物15N-邻氨基苯甲酸对合成15N-L-色氨酸的影响.结果表明:在发酵36 h后,分别流加1.5 g/L 的15N-邻氨基的苯甲酸、2.1 g/L的15N-硫酸铵以及50 g/L葡萄糖时,发酵液中15N-L-色氨酸的产量可达到3.073 g/L.
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三七发酵过程中人参皂苷Rh1的含量变化研究
目的 将发酵的三七药材每隔几天取出一部分测定其人参皂苷Rh1的含量变化.方法 每隔几天取出部分发酵产物测定其人参皂苷Rh1的含量,并和人参皂苷Rh1对照品及药材中含有的人参皂苷Rh1的含量进行比较.结果 三七发酵后人参皂苷Rh1的含量明显增多.结论 人参皂苷Rh1的含量随着发酵时间变化而变化,在发酵120h时人参皂苷Rh1的含量多,在发酵288h时含量少.
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从前有个巧克力
关于一颗可可豆的故事大家好!我叫可可豆,在热带地区长大.当我成熟后,人们就会从可可树果实中将我挖出来.经过发酵、干燥、烘焙等一系列工序,我就会成为色香味俱全的巧克力!制作巧克力,重要的原料就是由可可豆制成的“可可浆”,它可以分离出可可脂和可可粉.按不同比例混合两者,加以精制便可成为风味各异的美味.
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茶文化(二)茶叶的种类与成分
我国产茶历史悠久,品种也很多,根据茶叶的制法和品质及销售习惯的不同,一般可分为五大类.即:红茶、绿茶、乌龙茶、花茶和茶砖.1.红茶是经过完全发酵的茶,成品细嫩,冲泡后汤色红艳鲜亮,香味芬芳浓纯,滋味甘醇.主要品种有安徽的祁红,云南的闽红,湖北的宜红,江西的宁红,浙江的越红等.以祁红和宜红质量为佳.
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防性侵教育,永远都不嫌多
事件回顾8月12日晚,南京南站候车室里,一名年轻的小伙在众目睽睽之下,将女孩抱在怀里教她玩手机,同时手伸进女孩的裙子内实施猥亵行为,女孩一副习以为常的样子,而他们的父母就坐在旁边视而不见.经警方调查,女孩是嫌疑人段某某父母的“养女”.目前受害人已随养父回家,警方称哥哥段某某已承认违法行为,案件造成的社会影响依然在发酵中.
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妈妈厨房
萌兔面包食材:高筋粉200g,酵母粉29,白砂糖259,盐29,鸡蛋1个,奶粉109,清水759,黄油209,豆沙馅适量,蛋液少许.制作:1把所有材料(除黄油外)混合在一起揉成面团,揉至面团光滑.然后加入黄油继续揉面至扩展阶段,温暖处发酵1个小时.发酵好的面团拿出,压扁后排气.2将面团分割成55克每份的6个面团,滚圆,松弛15分钟.
