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奈韦拉平引起药疹一例报告
目前艾滋病有效的治疗方法是高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antiretroviral Therapy,HAART),奈韦拉平是国家免费提供的抗病毒药物一线治疗方案中常用药之一[1].现报道一例服用奈韦拉平后引起的全身性药疹,旨在使防治艾滋病的临床医生和公共卫生医生能够增加对服用奈韦拉平引起药疹的了解,提高临床用药的安全性.
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艾滋病与HIV的职业暴露后防护
艾滋病病即获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)引起的一种严重的传染病.HIV病毒是一种RNA(核糖核酸)逆转录病毒,属慢病毒(Lentivirinae).HIV主要型别为HIV-1和HIV-2,我国艾滋病大多由HIV-1引起.
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采供血中预防和控制血源性HIV传播浅析
人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiencyvirus,HIV)是一种逆转录病毒,具有极强的迅速变异能力,目前,预防和控制HIV的血源性传播不容忽视,现将采供血中如何预防和控制HIV传播浅述如下.
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艾滋病合并结核病的研究现况
艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症(AIDS),是一种由逆转录病毒(人类免疫缺陷病毒HIV病毒)以侵犯CD4+细胞使T淋巴细胞系统受损为主要特征的细胞免疫功能不全性疾病.结核病是常见和早发生的机会性感染(占20~50%).AIDS病人结核病的发生率是正常人的30-50倍,HIV感染可使结核病的发病率增加30倍.AIDS与结核病的双重感染是一个相互促进病变进展、恶化、迅速导致死亡的伴发病.
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Fr.MuLV小鼠红白血病模型的建立及叠氮胸苷抗病毒作用的研究
目的 应用Friend 鼠白血病病毒(Friend murine leukemia virus,Fr.MuLV)建立小鼠红白血病模型,并在此模型上观察抗逆转录病毒药物叠氮胸苷(Zidovudine,AZT)的治疗作用.方法 用Fr.MuLV感染BALB/c小鼠.以RT-PCR 法测定脾脏病毒载量;血常规分析白细胞(WBC)、血红蛋白(Hbg)及血小板(PLT)变化;镜检计数外周血及骨髓有核细胞.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠脾脏病毒载量、WBC和Hbg明显升高;外周血及骨髓中红系和非红系均出现大量原始和幼稚细胞,骨髓中非红系原始细胞(NEC)计数≥ 0.30,有核红细胞≥ 0.50;AZT治疗组上述指标明显改善.结论 用Fr.MuLV感染BALB/c小鼠成功建立小鼠红白血病模型,AZT在此模型上显示出良好的抗病毒作用.
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BDNF基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H2O2损伤的影响
目的研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H2O2损伤的影响.方法采用LipofectAMINE将重组大鼠BDNF cDNA导入PA317细胞,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞,流式细胞仪(FCM)和免疫组化检测BDNF的表达,MTT法检测PC12细胞增殖,PI染色流式细胞仪(FCM)检测PC12细胞凋亡.结果 BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞高表达BDNF蛋白,其培养上清可促进PC12细胞增殖并能抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡.结论 BDNF基因修饰淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的BDNF.
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基于实时荧光定量监测逆转录病毒MuLV/Friend感染方法的建立与评价
目的 建立基于实时荧光定量PCR的病毒复制检测方法,监测MuLV/Friend急性感染小鼠病毒复制动力学.方法 提取MuLV/Friend病毒基因组RNA,逆转录为cDNA,扩增病毒gag片段,连接入PMD-19T载体,构建标准品,并合成特异性荧光探针,建立病毒复制定量的标准曲线;BALB/c小鼠腹腔接种MuLV/Friend病毒,在急性感染不同时期,实时监测小鼠组织内病毒复制动力学.结果 成功构建基于实时荧光定量PCR的MuLV/Friend复制检测方法,可分析小鼠各组织内病毒复制动力学,为利用MuLV/Friend小鼠感染模型研究抗病毒策略或宿主免疫等,提供了一种有效、快速、灵敏的实时监测病毒复制的手段.结论 该实时荧光定量PCR的病毒复制检测方法具有较高的灵敏度,改善了之前利用脾肿大指数检测病毒体内复制的传统方法.
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人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)的研究进展
人类嗜T淋巴细胞病毒(Human T-cell Lymphotropic Virus,HTLV)是由1980年美国学者Gallo首次分离出的,在病毒分类中归属于逆转录病毒科肿瘤病毒亚科哺乳类C型病毒.随着病毒检测方法的进步,人们对HTLV的研究也不断深入.本文对HTLV的流行、传播、相关疾病及检测方法等的研究进展作如下综述.
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加亚嘉西科病毒Env基因导致人支气管上皮细胞的致瘤信号转导机制
人的细支气管-肺泡癌(bronchiolo-alveolar carcinoma,BAC)在WHO分类中,将其作为肺腺癌的一个亚型;近30年国内外报道肺腺癌的发病率明显提高,究其主要原因是细支气管肺泡腺癌的发病率的迅速提高.绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)是绵羊的一种慢性、进行性、接触性传染的肺脏肿瘤性疾病.由于绵羊肺腺瘤病与人的细支气管-肺泡癌在临床症状、病理组织学特征及超微病变方面极为相似和二者之间所共有的特征,国际上许多研究者把羊肺腺瘤病的病羊作为是一种理想的、唯一的动物模型,来进一步深入地研究人的细支气管肺泡腺癌.羊肺腺瘤病主要是由一种加亚嘉西科逆转录病毒(jaagsiekte retrovirus)引起的.在绵羊体内的加亚嘉西科逆转录病毒的env基因编码的囊膜蛋白能引起人的细支气管肺泡癌.env基因编码的囊膜蛋白,可以与肺泡上皮细胞表面的受体相互作用,引起肺泡上皮细胞的增生癌变.加亚嘉西科逆转录病毒的受体是由HYAL2基因编码的一种糖基化磷脂酰肌醇相关细胞表面蛋白,位于人的第三染色体上,当细胞发生癌变时,HYAL2基因常发生突变.本文作者通过体外细胞转化实验,发现和阐述加亚嘉西科逆转录病毒致瘤的分子机制模式.
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人B7.1基因cDNA的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建
目的克隆人B7.1全长cDNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。方法应用逆转录多聚酶链反应从人B淋巴瘤细胞系Raji中克隆B7.1全长cDNA,再将cDNA插入到质粒pBluescript中,经自动荧光测序证实无误后,再通过定向克隆构建相应的逆转录病毒表达载体PLXSNhB7。结果逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的889 bp一致;用M13正、反向引物进行荧光测序证实,克隆出的序列与GenBank的B7.1 cDNA序列完全一致;人B7.1全长cDNA被成功地插入到质粒PLXSN中。结论人B7.1全长cDNA的克隆及相应逆转录病毒表达载体的构建为今后应用B7.1进行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。
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iNOS基因重组逆转录病毒的包装及高滴度病毒液的制备
目的 利用逆转录病毒载体PLXSN介导iNOS基因转染,为逆转录病毒介导的iNOS转基因防治血管移植术后再狭窄的研究奠定实验基础. 方法 采用QIAGEN plasmid Maxi Kit纯化PLXSN-iNOS;通过脂质体介导的DNA转染法将PLXSN-iNOS导入包装细胞PA317中;经G418筛选获得抗性克隆,命名为PA317/iNOS;提取抗性克隆细胞基因组DNA,用PCR进行鉴定;用NIH3T3细胞测定病毒上清滴度. 结果 PA317/iNOS细胞能稳定合成和分泌重组逆转录病毒颗粒,并在约142 bp处扩增出特异的片段;PLXSN-iNOS病毒上清的高滴度为1.6×106CFU/mL. 结论 逆转录病毒载体PLXSN能有效介导iNOS基因的转染.
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Akt/PKB信号通路与胃癌的相关研究进展
初自AKR小鼠胸腺瘤细胞株中分离出一株具有转化能力的逆转录病毒AKT8,并将病毒基因组中非病毒序列定义为病毒癌基因v-akt.而后病毒癌基因akt及人类同源物AKT1、AKT2被分子克隆,同时检测到一例原发性胃癌AKT1扩增20倍[1].v-akt及其人类同源物编码的蛋白激酶与蛋白激酶C、蛋白激酶A相似,又被称为蛋白激酶B(PKB).Akt/PKB作为磷酸肌醇3激酶(P13K)的下游效应器参与调节细胞生理活动,如细胞生存与凋亡、增殖和代谢等.信号通路中的成员出现异常时.如P13K或Akt基因扩增、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)突变或杂合子丢失等,可促进肿瘤的发生发展.近年Akt/PKB信号通路正逐渐成为肿瘤发生机制及治疗的研究热点,其中也包括胃癌.
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逆转录病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞的杀伤作用研究
目的观察逆转录病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞的杀伤作用,探讨淋巴瘤的基因治疗方法.方法在脂质体的介导下将含有双自杀基因的逆转录病毒载体pWZLneoCDglytk导入包装细胞PA317,经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317/CD+tk细胞株,收集病毒上清,浓缩后转染Raji淋巴瘤细胞,再次经G418筛选,获得稳定表达双自杀基因的Raji/CD+tk细胞株.采用RT-PCR法检测双自杀基因的表达.MTT法测定转基因组及未转基因组Raji细胞的存活率.结果双自杀基因在Raji细胞中可稳定表达,联合使用5-氟胞嘧啶(5-FC)和无环鸟苷(GCV)对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应高于单独使用5-FC或GCV.结论逆转录病毒介导双自杀基因较单一自杀基因具有更强的杀伤作用.
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逆转录病毒Pmscv/Hyg介导的RNA干扰表达载体的构建与鉴定
目的 构建逆转录病毒Pmscv/Hyg介导的RNA干扰表达载体,并在HEK293细胞株中观察其基因沉默效果.方法 PCR方法扩增人U6启动子,下游引入核酸内切酶位点BamHI、SalI,反向插入质粒Pmscv/Hyg的3′端LTR上游.扩增EGFP基因,插入载体Pmscv/Hyg的多克隆位点.合成干扰P53基因表达的寡核苷酸序列,退火复性后插入U6启动子下游BamHI、SalI酶切位点间.重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转染病毒包装细胞PT67,产生具有一次感染能力的病毒颗粒.病毒上清感染靶细胞HEK293,经潮霉素筛选,RT-PCR和western blot检测靶基因P53表达情况.结果 质粒酶切及DNA测序表明成功构建重组病毒载体,并在PT67细胞中包装成具有一次感染能力的逆转录病毒.经Hygromycin筛选,HEK293细胞中P53蛋白和mRNA表达显著下调.结论 成功构建以Pmscv/Hyg为基础的RNA干扰表达载体,重组载体包装出的逆转录病毒可有效介导基因沉默.
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人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为角膜缘干细胞的研究
目的 探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cells,HBMSCs)分化为角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的可行性.方法 用密度梯度离心法体外分离HBMSCs,用消化后组织块培养法分离培养LSCs,培养传代后用流式细胞仪检测细胞的相关抗原.将第4次传代的HBMSCs分成2组:实验组细胞与第2次传代的LSCs共培养于Transwell培养板,加入条件培养基;对照组不加任何诱导剂,以原HBMSCs培养基培养.培养10 d,在相差显微镜下进行形态学观察.结果 实验组共同培养72 h后,贴壁HBMSCs部分呈椭圆形、圆形改变.在体外微环境中诱导10 d后大部分细胞呈多边形、圆形、椭圆形,少部分细胞呈梭形.实验组P63弱阳性(7.16±0.56)%,对照组P63阴性(0.74±0.49)%.结论 在体外特殊的微环境下,HBMSCs可被其诱导分化为LSCs细胞.
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hTERT基因启动子调控表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及在人宫颈癌Hela细胞中的表达
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reserved transeriptase,hTERT)基因启动子调控表达增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescence protein,EGFP)的逆转录病毒载体的构建及其在人宫颈癌Hela细胞中的表达.方法 经SacI/BglⅡ双酶切phTERT-luc质粒,获得hTERT启动子的基因片段;定向连接到被Sael/BamHI双酶切的pEGFP-N2质粒上,获得phTERT-EGFP-N2,并以其为模板,利用PCR技术,克隆出hTERT启动子和EGFP基因片段;再经EcoRI/BamHI双酶切,定向插入到逆转录病毒plxsn的多克隆位点,再获得目的 重组载体plxsn-hTERT-EGFP,并进行酶切鉴定,并将重组质粒转染人宫颈癌Hela细胞36 h后观察荧光表达情况.结果 phTERT-EGFP-N2的构建与鉴定结果显示,phTERT-EGFP-N2构建成功.plxsn-hTER-T-EGFP的构建与鉴定结果显示,阳性重组质粒plxsll-hTERT-EGFP(7 023 bp)经EcoRI/BamHI双酶切,获得1 165、5 858 bp 2片段;阴性重组质粒plxsn(5 874 bp)经EcoRI/BamHI双酶切,获得16、5 858 bp 2片段;证实plxs-n-hTERT-EGFP构建成功.倒置荧光显微镜下观察结果显示,plxsn空载体及重组质粒plxsn-hTERT-EGFP转染Hela细胞,经plxsn空载体转染的Hela细胞不能观察到任何荧光;而经plxsn-hTERT-EGFP转染的Hela细胞可见到绿色荧光蛋白的表达.结论 成功构建了hTERT基因启动子调控的表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体并获得表达.
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双自杀基因CD+TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响
目的 探讨逆转录病毒介导的双自杀基因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法.方法 通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体MMLV-CD+TK导入包装细胞PA317,经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317/CD+TK细胞株,收集病毒上清液,浓缩后转染胰腺癌BxPC-3细胞系,再次经G418筛选,获得稳定表达双自杀基因的BxPC-3/CD+TK细胞株.用RT-PCR检测双自杀基因的表达.给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-flourocytosine,5-FC)和(或)无环鸟苷(Ganciciovir,GCV)后,MTT法测定转基因组及未转基因组胰腺癌BxPC-3系细胞的存活率.结果 双自杀基因在胰腺癌BxPC-3系细胞中可稳定表达,联合使用5-FC和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果明显.结论 逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死胰腺癌Bx-PC-3系细胞,双自杀基因具有更强的抗肿瘤作用.
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盐城市义务献血员中嗜人T淋巴细胞病毒感染状况调查
嗜人T淋巴细胞病毒(HTLV)是第1个被发现的人类逆转录病毒.现已证实HTLV-I型可引起成人T淋巴细胞白血病、热带痉挛性下肢偏瘫、HTLV相关性脊髓病(TSP/HAM)、HTLV相关性关节炎(HAAP)、部分皮肤T淋巴瘤(CTCL)、淋巴结炎等相关疾病.HTLV-I在全球广泛存在,在我国东南沿海和一些内陆地区均有小的HTLV流行或病例报道.
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影响血液安全的新发现传染病
现在减少包括肝炎和逆转录病毒在内的重要输血感染的措施已经非常成功,使得残余风险水平一般在每百万单位输血1例以下.至少,这是我们增加对新发现的传染病及其对血液安全的威胁关注的部分原因.然而,在过去的15年左右,也确实出现了新的输血传染病的爆发,包括变异性克雅病、西尼罗病毒和登革热病毒.本文将讨论与输血医学相关的新发现传染病,现将它们作一综述.
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新型非核苷类逆转录酶抑制药——依曲韦林
依曲韦林,商品名为"Intelence'',由Janssen-Ortho强生公司子公司Tibotec公司提出上市申请,于2008年1月18日通过优先审批程序获得FDA批准,用于联用其他抗逆转录病毒药物治疗已经接受抗逆转录病毒疗法治疗,且具病毒复制,病毒株已对一种非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)或其他抗逆病毒药物耐药的成人艾滋病毒感染患者[1].